Cistanche-glykosider demper prostatafibrose ved benign prostatahyperplasi ved å regulere MiRNA-483-3p

 

ABSTRAKT

Objektiv:For å undersøke de forbedrende effektene av cistanche-glykosider på prostatafibrose ved benign prostatahyperplasi (BPH) og mekanismen som involverer regulering av mikroRNA (miRNA)-483-3p.

Metoder:Hannmus ble tilfeldig tildelt fem grupper: normal kontroll, BPH-modellkontroll, finasterid, cistanche-glykosider og cistanche-glykosider + miRNA-483-3p-antagonist. BPH-modellen ble etablert ved bilateral orkiektomi etterfulgt av daglig subkutan injeksjon av testosteronpropionat. Etter 30 dager ble avsetning av kollagen i prostata evaluert ved hjelp av Massons trikrom og Sirius Red-farging, og innholdet av hydroksyprolin (Hyp) ble målt. Prostatiske mRNA-nivåer av transformerende vekstfaktor-1 (TGF-1), mitogenaktivert proteinkinase 2 (MK2) og mitogenaktivert proteinkinasekinase 6 (MKK6), samt miRNA-483-3p-nivåer, ble bestemt ved kvantitativ sanntids-PCR (qPCR). Prostataproteinnivåer av TGF-1, MK2, fosforylert MK2 (p-MK2), MKK6 og fosforylert MKK6 (p-MKK6) ble vurdert ved Western blotting. Den direkte bindingen av miRNA-483-3p til MK2 ble undersøkt ved hjelp av en luciferase-reporteranalyse.

Resultater:I forhold til den normale kontrollgruppen, viste BPH-modellkontrollgruppen signifikant økt prostatisk kollagenavsetning; forhøyede mRNA-nivåer av TGF-1, MK2 og MKK6; og høyere proteinnivåer av TGF-1, p-MK2 og p-MKK6 (alle P < 0,01), mens miRNA-483-3p-nivåer ble betydelig redusert (P < 0,01). Sammenlignet med BPH-modellkontrollgruppen, oppregulerte cistanche-glykosider miRNA-483-3p, reduserte mRNA-nivåene av TGF-1, MK2 og MKK6, senket proteinnivåene av TGF-1, p-MK2 og p-MKK6 og lindret prostatisk kollagenavsetning. Spesielt reduserte samtidig administrering av miRNA-483-3p antagomir med cistanche-glykosider signifikant miRNA-483-3p, økte kollagenavsetning og økte mRNA-nivåer av TGF-1, MK2 og MKK6 samt proteinnivåer av TGF-2-p-M, pKKM, og pKKM, sammenlignet med pKKM, cistanche-glykosider alene (alle P < 0,01). Luciferaseanalysen viste at miRNA-483-3p direkte retter seg mot MK2.

Konklusjon: Cistanche-glykosider demper prostatafibrose i BPH ved å regulere miRNA-483-3p og hemme MK2-signalering.

Nøkkelord: Cistanche glykosider; miRNA‑483‑3p; prostata;fibrose; godartet prostatahyperplasi

 

 

 

Toppkvalitets Cistanche Deserticola

Mer kunnskap om urter for BPH-behandling

 

Supportive Service Of Wecistanche - Den største cistanche-eksportøren i Kina:
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
 

 

Introduksjon

Benign prostatahyperplasi (BPH)er en vanlig tilstand hos middelaldrende og eldre menn, med prevalens økende med alderen. Rapporter indikerer at prevalensen av BPH overstiger 50 % blant menn over 50 år. BPH og de tilhørende symptomene i nedre urinveier (LUTS) legger betydelige byrder på livskvalitet og langsiktige helsekostnader. Klinisk er 5 -reduktasehemmere og ‑adrenerge reseptorblokkere anbefalte farmakoterapier. Blokkere reduserer imidlertid ikke prostatavolumet, og 25–30 % av pasientene viser ingen forbedring i LUTS med 5 -reduktasehemmere; dessuten kan 5–7 % til og med forverres. Selv om kirurgiske innovasjoner som thulium laser prostatektomi i økende grad benyttes sammenlignet med transuretral reseksjon av prostata, forekommer postoperative LUTS fortsatt med rater som overstiger 23 %.

Nåværende bevis tyder på tre hovedpatobiologiske prosesser i BPH: kjertelhyperplasi, sammentrekning av glatt muskel og prostatafibrose. Disse prosessene virker uavhengig eller synergistisk for å drive klinisk progresjon. BPH eksisterer ofte (men ikke alltid) samtidig med LUTS; fibrose, karakterisert ved overdreven ekstracellulær matriseavsetning, kompromitterer urethral fleksibilitet i prostata og bidrar til urinobstruksjon. Likevel er terapeutiske alternativer spesifikt rettet mot organfibrose fortsatt begrensede.

Cistanche (Cistanche spp.) er en tradisjonell medisinsk og næringsplante. Dens karakteristiske fenyletanoidglykosider (her samlet referert til som cistanche-glykosider, som echinacoside og acteosid) viser brede bioaktiviteter, inkludert antimikrobielle, hypolipidemiske, antiallergiske, kardiotoniske, antidiabetiske, antitumor-, nevrobeskyttende, antioksidanter og immunmodulerende effekter. Akkumulerende bevis indikerer anti-fibrotiske virkninger av disse glykosidene i organer som nyre, lunge, hjerte og lever. Imidlertid er deres effekter på prostatafibrose ikke rapportert. Denne studien undersøkte virkningen av cistanche-glykosider på prostatafibrose og utforsket de underliggende mekanismene, med fokus på miRNA-483-3p/MK2-aksen som er relevant for ombygging av ekstracellulær matrise.

Toppkvalitets Cistanche Deserticola

 

Materialer og metoder

Materialer

 

miRNA‑483‑3p antagomir (kjemisk modifisert): kjøpt fra Shanghai GenePharma Co., Ltd. (batchnr.: 12953).

Testosteronpropionatinjeksjon: Tianjin Jinyao Pharmaceutical Co., Ltd. (batchnr.: 150822).

Cistanche-glykosider: Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. (renhet større enn eller lik 98 %, batchnr.: M14062). Merknad for ernæringsmessige utviklere: materialet tilsvarer standardisert fenyletanoid glykosidfraksjon; sikre spesifikasjon av HPLC-innhold (f.eks. totale PEGL-er, echinakosid/akteosid).

Finasterid-tabletter: MSD (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. (batchnr.: U011856; 5 mg/tablett).

Luciferase reporter analysesett (batchnr.: E2920) og psiCHECK-2 vektor (batchnr.: C8021): Promega (USA).

qPCR-deteksjonssett: KAPA Biosystems (batchnr.: KM4101).

Hydroksyprolin (Hyp) analysesett: Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (batchnr.: 20190626).

Primere for TGF-1, MK2 og MKK6 ble syntetisert av Wuhan Tianyi Huiyuan Biotechnology Co., Ltd.

Toppkvalitets Cistanche Deserticola

 

Dyr

Syv uker gamle spesifikke patogenfrie (SPF) hannmus C57BL/6 (22–24 g) ble hentet fra Huazhong Agricultural University (Produksjonslisensnr.: SCXK Hubei 2015-0019). Dyrene ble holdt ved 23 ± 2 grader, 50 ± 5 % fuktighet, under en 12 timers lys/12 timers mørke syklus.

 

Utstyr

 

StepOnePlus sanntids PCR-system (Applied Biosystems, USA).

Luminoskan 5200110 mikroplateluminometer (Thermo Fisher Scientific, USA).

Eksperimentell design og BPH-modell
Etter 1 uke med akklimatisering ble mus tilfeldig fordelt (tilfeldig talltabell) i fem grupper (n=6 per gruppe): normal kontroll, BPH modellkontroll, finasterid, cistanche glykosider og cistanche glykosider + miRNA-483-3p antagomir. BPH-modellen ble indusert ved kirurgisk kastrering pluss daglig subkutan injeksjon av testosteronpropionat ved 7,5 mg·kg⁻1 i 30 dager. Finasteridgruppen fikk oralt finasterid 1 mg·kg⁻¹ daglig (oppløst i 0,5 % CMC‑Na). Cistanche-glykosider-gruppen mottok orale cistanche-glykosider 100 mg·kg⁻¹ daglig. Kombinasjonsgruppen mottok orale cistanche-glykosider 100 mg·kg⁻¹ daglig pluss haleveneinjeksjon av miRNA‑483‑3p-antagomir med 10 mg·kg⁻¹ hver 5. dag etter produsentens instruksjoner. Normal- og BPH-modellkontrollgruppene fikk et likt volum på 0,5 % CMC-Na oralt.

Etter 30 dager ble mus bedøvet ved intraperitoneal injeksjon av natriumpentobarbital (80 mg·kg-1) og avlivet ved cervikal dislokasjon. Prostata ble skåret ut; porsjoner ble fikset og innebygd for Massons trichrome og Sirius Red-farging, og ferskt vev ble behandlet for qPCR, Western blotting og biokjemiske analyser. Dyreprosedyrer var i samsvar med Hubei-provinsens forskrifter om forvaltning av laboratoriedyr (operatørkvalifikasjonsnr.: TY20190784).

Toppkvalitets Cistanche Deserticola

 

Vurdering av prostatafibrose

Kollagenavsetning ble evaluert ved Sirius Red og Massons trikromfarging. Hyp-innhold i prostatavev ble kvantifisert i henhold til instruksjoner for sett. For hvert lysbilde ble tre tilfeldige felt analysert med Image-Pro Plus 6.0 for å beregne prosentandelen av positivt farget område.

Evaluering av MK2 Pathway Activity

qPCR: Prostata mRNA-nivåer av MK2, TGF-1 og MKK6 ble målt. Primer-sekvenser:

MK2 (264 bp) fremover 5'-GGAAGTGCCTGCTGAT-3', revers 5'-AGTTGTGACTGGTGGTTT-3';

TGF-1 (153 bp) fremover 5'-AGGAGACGGAATACAGGG-3', revers 5'-ATGAGGAGCAGGAAGGG-3';

MKK6 (146 bp) fremover 5'-CCTCAGACCAGTTCCAC-3', bakover 5'-CGCATCTTCTCCACCA-3'.

Western blot: Proteinnivåer av TGF-1, MK2, p-MK2, MKK6 og p-MKK6 ble bestemt etter tidligere etablerte protokoller.

Måling av miRNA‑483‑3p
miRNA‑483‑3p primere: fremover 5'-GGGTCACTCCTCCCCT-3', revers 5'-AACTGGTGTCGTGGAGTCGGC-3'; RT-primer 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGAAGACGGG-3'. qPCR ble utført i henhold til kitinstruksjonene.

 

Luciferase Reporter Assay

MK2 3'UTR ble klonet inn i psiCHECK-2-vektoren for å konstruere villtype (WT) og mutant (MUT) reporterplasmider. HEK-293T-celler ble co-transfektert med miRNA-483-3p og reporterplasmidene ved bruk av Lipofectamine 3000; kontrollceller mottok tom vektor. Etter 24 timer ble luciferaseaktivitet målt i henhold til kitprotokollen.

Statistisk analyse
Data ble analysert med SPSS 17.0. Enveis ANOVA ble påført etter bekreftelse av normalitet og varianshomogenitet. Resultatene er uttrykt som gjennomsnitt ± SD. LSD post hoc-tester ble brukt for flere sammenligninger. Forskjeller ble ansett som statistisk signifikante ved P < 0,05.

 

Resultater

Sammenlignet med den normale kontrollgruppen, viste BPH-modellkontrollgruppen markerte økninger i prostatisk kollagenavsetning; forhøyede mRNA-uttrykk av TGF-1, MK2 og MKK6; og høyere proteinnivåer av TGF‑1, p‑MK2 og p‑MKK6 (alle P < 0,01). Nivåene av miRNA-483-3p ble betydelig redusert (P < 0,01).

I forhold til BPH-modellkontrollen oppregulerte cistanche-glykosider miRNA-483-3p betydelig, reduserte mRNA-nivåene av TGF-1, MK2 og MKK6, senket proteinnivåene av TGF-1, p-MK2 og p-MKK6, og reduserte kollagenavsetningen av prostaticum.

Sammenlignet med cistanche glykosider alene, reduserte kombinasjonen av cistanche glykosider med miRNA-483-3p antagomir signifikant miRNA-483-3p og økte kollagenavsetningen, pluss mRNA-nivåer av TGF-1, MK2 og MKK6 av TGF-1,-2 og proteinnivåer, samt proteinnivåer, p-MKK6 (alle P < 0,01).

Luciferase-reporteranalysen bekreftet at miRNA-483-3p retter seg direkte mot MK2.

 

Diskusjon (kort, ernæringsfokusert)

Denne studien indikerer at cistanche-glykosider demper prostatafibrose i en kastrasjons-/testosteronindusert BPH-modell ved å oppregulere miRNA-483-3p og undertrykke MK2-baneaktivitet nedstrøms for TGF-signalering. Gitt begrensningene til gjeldende BPH-farmakoterapier for å adressere fibrotisk ombygging, kan cistanche-glykosider representere en komplementær ernæringsstrategi rettet mot ekstracellulær matrisebalanse.

For utvikling av kosttilskudd inkluderer hensynene:

Standardisering: definer totale fenyletanoidglykosider og markørforbindelser (f.eks. echinakosid større enn eller lik 20 %, akteosid større enn eller lik 10 % ved HPLC).

Doseoversettelse: 100 mg·kg⁻¹ i mus tilnærmet 8–12 mg·kg⁻¹ humanekvivalentdose (HED) ved bruk av kroppsoverflatearealskalering, omtrent 500–800 mg/dag for en voksen på 60–70 kg; klinisk validering er nødvendig.

Kvalitet og sikkerhet: sikre identitet (botanisk kilde, forurensninger, tungmetaller, plantevernmidler), og vurder potensielle interaksjoner med -blokkere eller 5-reduktasehemmere.

Påstander: struktur/funksjonspåstander bør fokusere på å "støtte urinstrøm og prostatavevsbalanse" og unngå sykdomsbehandlingsspråk uten klinisk bevis.

 

Konklusjoner

Cistanche glykosiderlindre prostatafibrose i BPH ved å regulere miRNA‑483‑3p og hemme MK2-signalering. Disse funnene støtter videre translasjonsforskning på standardiserte cistancheekstrakter som tilleggsnæringsmidler for prostatahelse.

 

Anerkjennelser

Dette arbeidet ble støttet av National Natural Science Foundation of China (Grant No. 81703594).

Forfatterinformasjon
Yang Chuhao (1991–), kvinne, Wuhan, Hubei, klinisk farmasøyt, MS; hovedforskningsområde: klinisk farmasi. ORCID: 0000-0002-8921-5758; Tlf: +86-27-82440854.