Mekanistisk studie om forbedring av kronisk prostatitt med Cistanche-tabletter via STAT3/HIF-1 /glykolyseaksen

 

Abstrakt

Denne studien undersøker den terapeutiske mekanismen tilCistanche-tabletter (CT)i behandling av kronisk prostatitt gjennomSTAT3/HIF-1 /glykolysesignalakse. En rottemodell for eksperimentell autoimmun prostatitt (EAP) ble etablert for å evaluere effekten av Cistanche-tabletter. Wistar-hannrotter ble tilfeldig delt inn i seks grupper (n=7 per gruppe): kontroll-, modell-, lav-, middels- og høydose CT-grupper (henholdsvis 197,2, 591,5 og 1774,4 mg/kg/dag), og en positiv kontrollgruppe (Pusitai, 34,2 mg/kg/dag). Etter modellinduksjon ble alle behandlinger administrert i fire påfølgende uker.

Histologisk analyse ved bruk av hematoksylin og eosin (HE)-farging vurderte prostatabetennelse og kjertelskade. Serumnivåer av interleukin-8 (IL-8), interleukin-1 (IL-1) og immunglobulin G (IgG) ble målt via ELISA. Proteinekspresjon av fosforylert STAT3 (p-STAT3), HIF-1, multippel inositol polyfosfatfosfatase 1 (MINPP1) og heksokinase (HK) i prostatavev ble evaluert gjennom Western blotting og immunhistokjemi. Umålrettet metabolomikk ble brukt for å identifisere differensielle metabolitter og assosierte metabolske veier.

Resultatene viste at CT signifikant lindret patologisk skade i prostata. ELISA viste reduserte serumnivåer av IL-8, IL-1 og IgG. Western blot og immunhistokjemi demonstrerte at CT nedregulerte p-STAT3, HIF-1 og HK, mens den oppregulerte MINPP1. Metabolomics identifiserte 96 differensielle metabolitter og avslørte at CT kan utøve sin terapeutiske effekt ved å modulere glykolyse og arakidonsyremetabolisme.

Konklusjon:Cistanche-tabletter kan lindre betennelse og hemme progresjonen av kronisk prostatitt ved å målrette STAT3, undertrykke HIF-1-signalering og regulere glykolytisk metabolisme.

Nøkkelord: Cistanche tabletter; ckronisk prostatitt; metabolomics; HIF-1 signalvei; glykolyse

Cistanche Fordeler for prostata og nyre

 

 

 

Legg cistanche-piller i handlekurven

 

 

Supportive Service Of Wecistanche - Den største cistanche-eksportøren i Kina:
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
eller

 

 

Introduksjon

Kronisk prostatitt er en vanlig urologisk tilstand hos menn, preget av urindysfunksjon, smertefull vannlating, haster og ubehag i perinealt. Det er den mest utbredte typen prostatitt, og påvirker pasientenes livskvalitet betydelig. Studier rapporterer en prevalens på 6,0 %–32,9 % hos kinesiske menn og 2,0 %–16,0 % internasjonalt. Nåværende vestlige behandlinger er avhengige av antibiotika og NSAIDs, men langvarig bruk fører ofte til gastrointestinale bivirkninger.

Etiologien og patogenesen til kronisk prostatitt er kompleks, og involverer immundysregulering, nevroendokrin ubalanse og livsstilsfaktorer. Immunologiske abnormiteter og metabolsk dysfunksjon anses som sentrale bekymringsområder.

Fra perspektivet til tradisjonell kinesisk medisin (TCM), er kronisk prostatitt assosiert med nyre-qi-mangel, fuktig varmeakkumulering og blodstase.Cistanche tabletter, avledet fra en tradisjonell in-hospital formulering [Godkjenning nr. Z04000524], er basert på den klassiske formelen "Cheng's Bi Xie Fen Qing Yin" kombinert med "Cuscuta Pill". Denne formelen inneholder ti urter som f.eksCistanche deserticola, Dioscorea, ogPolyporus umbellatus, og brukes tradisjonelt til å tonifisere nyrene, sikre essens, fremme vannlating og eliminere turbiditet.

Kliniske studier har bekreftet at Cistanche-tabletter effektivt reduserer symptomer på prostatitt og forbedrer livskvaliteten med en god sikkerhetsprofil. Imidlertid fokuserer mest eksisterende forskning på kliniske observasjoner, og de nøyaktige terapeutiske mekanismene er fortsatt uklare.

Nyere bevis tyder på at kronisk prostatitt involverer unormal glykolyse og overekspresjon av hypoksi-induserbar faktor 1 (HIF-1), noe som gjør den til et potensielt mål for behandling. Dessuten har regulering av STAT3-banen dukket opp som en ny strategi for å kontrollere kronisk betennelse og autoimmune responser. Denne studien utforsker den terapeutiske mekanismen til Cistanche-tabletter basert på in vivo-eksperimenter og metabolomikk, med sikte på å gi nye bevis for bruk av urteformuleringer ved kronisk prostatitt.

 

Materialer og metoder

1. Materialer

Dyr:42 Wistar-hannrotter av SPF-grad (190–210 g) ble kjøpt fra Suzhou SPF Biotechnology Co., Ltd. Dyrene ble holdt under standardforhold (20±3 grader, 55 %±5 % fuktighet, 12-timers lys/mørke-syklus) og forsynt med mat og vann ad libitum. Studien ble godkjent av Institutional Animal Ethics Committee (godkjenningsnr.. 2023112001).

Legemidler og reagenser:

Cistanche tabletter

Pusitai-tabletter (positiv kontroll)

Saltvann, PBS-buffer, Freunds komplette adjuvans

ELISA-sett for IL-8, IL-1 og IgG

Antistoffer: p-STAT3, HIF-1, MINPP1, HK

Sekundære antistoffer og immunhistokjemiske reagenser

Instrumenter:

LC-MS-systemer (Triple TOF 6600, Agilent 1290 Infinity LC)

Høyhastighets sentrifuge, homogenisator, mikroplateleser og presisjonsbalanse

---

2. Metoder

2.1 In vivo-studie

2.1.1 Modell for kronisk prostatitt

En eksperimentell autoimmun prostatitt (EAP) modell ble indusert ved bruk av homogenisert prostatavev emulgert med komplett Freunds adjuvans. Rotter fikk subkutane injeksjoner på dag 1 og 28 på flere steder (nakke, lyske og bakpoter). Kontrollrotter fikk saltvannsinjeksjoner. Modellsuksess ble bekreftet av atferdstegn og histopatologi.

2.1.2 Gruppering og behandling

Etter modellbekreftelse ble rottene tilfeldig delt inn i seks grupper: kontroll-, modell-, lav-, middels-, høydose-CT og Pusitai-gruppen. CT medium dose ble satt i henhold til klinisk ekvivalent dosering. Behandlinger ble gitt oralt én gang daglig i 28 dager.

2.1.3 Prøveinnsamling

På den siste dagen ble 24-timers urin- og vanninntak registrert. Etter eutanasi ble blod- og prostatavev samlet inn. Prostataindeks (prostatavekt/kroppsvekt) ble beregnet. Vev ble enten fiksert i formalin eller frosset i flytende nitrogen for videre analyse.

2.1.4 Generelle observasjoner

Gjennom modellering og behandling ble rottene overvåket for oppførsel, pelstilstand og generell helse.

2.1.5 ELISA for serumcytokiner

Serum IL-8, IL-1 og IgG-nivåer ble målt ved hjelp av ELISA etter produsentens instruksjoner.

2.1.6 Histopatologi (HE-farging)

Formalinfiksert prostatavev ble parafininnstøpt og seksjonert for HE-farging. Betennelse og vevsskade ble observert under et mikroskop.

2.1.7 Immunhistokjemi for MINPP1 og HK

Standard IHC-prosedyrer ble fulgt, inkludert avparafinisering, antigeninnhenting, blokkering, primær og sekundær antistoffinkubasjon, DAB-farging og hematoxylin-motfarging. ImageJ-programvare ble brukt til å kvantifisere positiv farging.

2.1.8 Western Blot for p-STAT3 og HIF-1

Frosset prostatavev ble lysert og proteinkonsentrasjoner bestemt. SDS-PAGE og PVDF-membranoverføring ble fulgt av blokkering, primær/sekundær antistoffinkubasjon, ECL-utvikling og densitometri ved bruk av ImageJ.

2.1.9 Statistisk analyse

Data ble analysert med GraphPad Prism 9.5.1. Resultatene ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Enveis ANOVA etterfulgt av LSD post hoc test ble brukt. P<0.05 was considered statistically significant.

 

2.2 Serummetabolomikk

2.2.1 Prøveforberedelse

Serum fra kontroll-, modell- og CT-grupper med middels dose ble tint, blandet med kaldt metanol-acetonitril-vann, sonikert og sentrifugert. Supernatanter ble tørket og rekonstituert for LC-MS-analyse.

2.2.2 LC-MS-betingelser

Metabolitter ble separert ved å bruke en UPLC BEH Amide-kolonne, med en spesifikk gradientelueringsprofil. Data ble innhentet i både positive og negative ionemoduser ved bruk av høysensitiv IDA-modus.

2.2.3 Databehandling

Raw data were converted to .mzML format, processed using XCMS for peak identification, alignment, and normalization. Metabolites with >50% missing values were removed. PCA and PLS-DA were used for multivariate analysis. Significant metabolites were filtered based on VIP >1.0 og s<0.05, and KEGG pathway enrichment was performed.

 

Resultater og diskusjon

Cistanche-tabletter forbedret signifikant prostatahistopatologiske endringer, reduserte inflammatoriske cytokiner og regulerte nøkkelproteinuttrykk i STAT3/HIF-1/glykolyseaksen. Metabolomikk avslørte modulering av glykolyse og arakidonsyremetabolisme, noe som tyder på både antiinflammatoriske og metabolske reguleringsmekanismer.

Disse funnene støtter utviklingen avCistanche-baserte urtetilskuddsom en lovende naturlig terapi for kronisk prostatitt, som tilbyr multi-target regulering med god sikkerhet.