1. Introduksjon

Å identifisere matingredienser med immunmodulerende egenskaper sammen med deres respektive molekylære mål har tiltrukket seg økt interesse de siste årene. På grunn av deres høye liganddiversitet, representerer den forbigående reseptorpotensialsuperfamilien av ionekanaler (TRP-kanaler) en veldig interessant klasse av potensielle målstrukturer.

TRP-kanalsuperfamilien hos pattedyr inkluderer seks beslektede proteinfamilier, nemlig ankyrin (TRPA), det kanoniske (TRPC), melastatin (TRPM), mucolipin (TRPML), polycystin (TRPP) og vanilloide (TRPV) familien, som alle vanligvis deler seks transmembrane segmenter som samles som tetrapermeable seleksjonsceller med tetrapermeable c[1]. TRPV1-kanalen kan være det desidert mest undersøkte medlemmet av TRP-superfamilien. TRPV1 ble opprinnelig identifisert som reseptoren for capsaicin, den skarpe komponenten i chilipepper.[2] Senere ble det også vist at de skarpe ingrediensene fra ingefær, gingerolene, aktiverer TRPV1.[3]

Den biologiske rollen til TRPV1 i ikke-nevronale celletyper er fortsatt under omfattende etterforskning, men de tilgjengelige resultatene innebærer funksjoner langt utover sensorisk og termisk persepsjon. For eksempel forhindret en 12-ukers intervensjon med en daglig dose på 0,15 mg av TRPV1-agonisten nonivamid, en strukturell capsaicin-analog, en diettindusert økning i kroppsfettmasse og økte plasmaserotoninnivåer hos friske overvektige personer.[4]

I 3T3-L1-adipocytter reduserte aktivering av TRPV1 av nonivamid lipidakkumulering under differensiering og modning ved å undertrykke PPAR𝛾-ekspresjon.[5] I makrofager svekket capsaicin og nonivamid en LPS-indusert frigjøring av pro-inflammatoriske cytokiner som IL6, CXCL8 og TNF-alfa, på en TRPV1-avhengig måte.[6] Likevel forblir de spesielle funksjonene til TRPV1 i humane blodleukocytter vage. I humane NK-celler induserte 10 og 50 μM capsaicin en økning i intracellulære Ca2+-konsentrasjoner, noe som indikerer en funksjonell TRPV1-kanal.[7]

Imidlertid var dempede NK-celle-effektorfunksjoner som cytotoksisk degranulering og cytokinsekresjon, indusert ved forbehandling av cellene med capsaicin i 1 time i et konsentrasjonsområde på 10–100 μM, stort sett TRPV1-uavhengige. [7] I T-celler ble TRPV1 dokumentert å være involvert i prosessene med T-cellereseptorsignalering, T-celleproliferasjon og -differensiering, samt cytokinproduksjon.[8] Tidligere arbeid fra vår gruppe demonstrerte også funksjonelt uttrykk av TRPV1 i humane primære T-celler.[9] Videre viste doseresponsanalyser i konsentrasjoner fra 0,03 til 300 μmol L−1 at [6]-gingerol hemmer cytokinsekresjon av primære humane leukocytter med en IC50-verdi på 82,2 μmol L−1.

Kvantifisering av [6]-gingerol i plasmaprøver fra friske forsøkspersoner viste imidlertid en gjennomsnittlig maksimal plasmakonsentrasjon på bare 42,0 ± 16,3 nmol L−1 etter inntak av 1 L ingefærte. Siden disse [6]- gingerolkonsentrasjonene ikke hadde noen signifikant innvirkning på cytokinsekresjonen i tidligere studier, [9] er det uklart om en kostholdsrelevant konsentrasjon på 50 nmol L−1, som nås i blodplasma etter inntak av 1 L ingefærte, er tilstrekkelig til å modulere cellulære immunresponser i andre humane primære leukocytter.

For humane nøytrofiler er kunnskapen om den funksjonelle rollen til TRPV1 begrenset. Mens Köse og Nazıroglu˘ [10] viste at Ca2+--flukser i nøytrofiler som respons på 10 μM capsaicin ble redusert av TRPV1-antagonisten capsazepin, viste andre resultater ikke at capsaicin induserte en Ca2+-tilstrømning når den ble testet i 1–100 konsentrasjoner på 1–11 μect. RNA-ekspresjon. [11]

Nøytrofiler er de hyppigst forekommende leukocyttene i humant blod, og utgjør 60–70 % av alle sirkulerende hvite blodceller. De er de første immuncellene som rekrutteres til infeksjonsstedene; de blir derfor ofte referert til som den første forsvarslinjen.[12] Rekruttering av nøytrofiler utløses av blant annet det bakterielle eller mitokondrie-avledede peptidet N-Formylmetionin-leucyl-fenylalanin (fMLF) eller kjemokiner som CXCL8 (IL-8).[13]

Forsvarsmekanismer for nøytrofiler inkluderer fagocytose,[14] frigjøring av antimikrobielle enzymer via degranulering,[15] generering av reaktive oksygenarter (ROS),[16] og dannelsen av nøytrofile ekstracellulære feller.[17] I tillegg til disse direkte forsvarsmekanismene, bidrar nøytrofiler ytterligere til påfølgende immunresponser via frigjøring av ulike cytokiner og kjemokiner. [18] Dessuten kan nøytrofiler gjennomgå en primingsprosess som gjør dem i stand til å reagere sterkere på påfølgende full aktivering.[16b]

I de senere årene har det vokst frem bevis for at ingredienser fra mat og eller medisinske planter kan modifisere en eller flere av de nevnte forsvarsresponsene til menneskelige nøytrofiler. Disse modifikasjonene inkluderer økt fagocytotisk aktivitet[19] og ROS-generering,[20] forsterket kjemotaksi mot fMLF,[21] og dannelse av nøytrofile ekstracellulære feller.[20] Imidlertid ble den eller de aktive forbindelsene ikke identifisert. Bestanddeler fra Ferula akitschkensis (𝛽-pinen, sabinen, 𝛾-terpinen, geranylaceton og isobornylacetat) desensibiliserte nøytrofiler til fMLF- og CXCL8-indusert Ca2+-tilstrømning og hemmet fMLF-indusert kjemotaksi-indusert effekt, TRPV1.[22]

Basert på de tilgjengelige dataene antok vi at ligandindusert aktivering av TRPV1 av [6]-gingerol kan påvirke generelle nøytrofile funksjoner, enten direkte eller via å forbedre responsen deres på aktiverende stimuli. Innenfor rammen av denne hypotesen tok vi spesielt sikte på å belyse om en verifisert ernæringsmessig relevant konsentrasjon er tilstrekkelig til å modulere cellulære immunresponser i humane primære nøytrofiler som en del av leukocyttpopulasjonen. '

Videre forsøkte vi å sammenligne RNA-ekspresjonsnivåene til alle medlemmer av pattedyr-TRP-superfamilien i fem av de mest fremtredende celletypene i humant blod for å få en kvalitativ og kvantitativt omfattende oversikt over TRP-kanaluttrykk i humane leukocytter.

2. Resultater

2.1. Overflod og relative transkripsjonsnivåer av TRP-kanaler i humane leukocytter

For å evaluere TRP-kanal-RNA-uttrykk i blodleukocytter, ble fem av de mest fremtredende leukocyttcelletypene isolert fra blodet til friske givere, og RNA-uttrykket av TRP-kanaler ble analysert via kvantitativ RT-PCR (Figur 1).

Spesifikke transkripsjoner av TRPV så vel som TRPM-familien ble oppdaget med høye frekvenser på 75–100 % i alle analyserte celletyper. Den gjennomsnittlige totale frekvensen tatt i betraktning alle celletyper var 96 % for TRPV-familien og 98 % for TRPM-familien. TRPC-spesifikke transkripsjoner var mye mindre rikelig, fra 0% i monocytter, NK-celler, T-celler og B-celler til 100% i NK-celler, og T-celler med en samlet gjennomsnittlig frekvens på bare 53% (Figur 1A). Det TRPC5-spesifikke transkriptet ble bare påvist i nøytrofiler, med en frekvens på 70 %.

Dessuten avslørte det TRPA1-spesifikke transkripsjonen generelt en ganske lav overflod i celletypene som ble analysert med en frekvens på 100 % i nøytrofiler, 25 % i monocytter, 80 % i NK-celler, 100 % i T-celler og 60 % i B-celler. På samme måte viste det TRPML3-spesifikke transkriptet en lav frekvens i nøytrofiler (50%), monocytter (25%), NK-celler (40%) og B-celler (20%), men en frekvens på 100% i T-celler. Det TRPV1-spesifikke transkriptet ble påvist i alle celletyper, og viste en frekvens på 100 % i monocytter, NK-celler og T-celler, og en frekvens på 90 % i nøytrofiler og 80 % i B-celler.

Når det gjelder relativ RNA-ekspresjon, sammenlignet med de respektive frekvensene, avslørte TRP-kanalene et mer celletypespesifikt uttrykksmønster, som tydelig ved sammenligning av de respektive Δct-verdiene i de forskjellige celletypene som ble analysert (Figur 1B). For eksempel ble TRPP3 påvist med en frekvens på 100 % i alle celletyper, men avslørte klart det høyeste ekspresjonsnivået i monocytter.

I motsetning til dette ble TRPV2-kanalen påvist i alle celletypene som ble undersøkt, med et sammenlignbart høyt RNA-ekspresjonsnivå så vel som en høy frekvens. På samme måte var transkripsjonsnivåer av TRPV1 like i alle celletyper som ble undersøkt (figur 1B).

2.2. TRPV1 overflateuttrykk på nøytrofiler

Den nåværende kunnskapen om funksjonen til TRPV1 i humane nøytrofiler er fortsatt uklar. For ytterligere å utforske rollene til TRPV1 i humane nøytrofiler, undersøkte vi deretter om TRPV1-kanalen kommer til uttrykk på overflaten av primære humane nøytrofiler ved bruk av levende cellestrømscytometri (figur 2).

De isolerte nøytrofilene ble farget for CD15 som en overflatemarkør for nøytrofiler (Figur 2A,B) og samtidig enten farget med et antistoff reist mot en epitop i den første ekstracellulære sløyfen til TRPV1-proteinet (Figur 2B) eller den respektive isotypekontrollen, sistnevnte fungerte som et surrogat for meas (Figure-binding). Innenfor CD15+-populasjonen ble fluorescensintensiteten for FITC analysert. Farging av nøytrofilene med TRPV1-antistoffet førte til et klart skillebart fluorescenssignal sammenlignet med isotypekontrollen, og bekreftet dermed overflateekspresjon av TRPV1 i primære humane nøytrofiler (figur 2C). Analyse av nøytrofiler fra fire individuelle givere avslørte et sammenlignbart overflateuttrykk av TRPV1 (figur 2D).

2.3. [6]-Gingerol-indusert økning i intracellulær Ca2+

Siden ligandindusert aktivering av TRPV1 vil resultere i en tilstrømning av Ca2+, ble [23] intracellulære Ca2+-konsentrasjoner av nøytrofiler bestemt via det Ca2+-sensitive fargestoffet Fura-2. Basert på våre tidligere funn [9] ble en konsentrasjon på 50 nM av den velkjente TRPV1-liganden [6]-gingerol og en inkubasjonstid på 2 timer valgt. Analysene viste at inkubasjon av nøytrofiler med 50 nM [6]-gingerol resulterte i økte intracellulære Ca2+-konsentrasjoner som i gjennomsnitt var 18,4 % ± 1,0 % av maksimalverdien, bestemt ved å bruke 1 μM av ionofor-ionomycinet. Økningen indusert av DMSO var på 4,7 % ± 1,2 % (figur 3).

2.4. Påvirkning av [6]-Gingerol på TRPV1-ekspresjon

Deretter tok vi sikte på å analysere virkningen av TRPV1-stimulering av [6]-gingerol på TRPV1-ekspresjon på transkripsjonsnivå via q-RTPCR så vel som på overflateproteinnivå via levende cellefarging. For dette formålet ble humane nøytrofiler inkubert med 50 nM [6]- gingerol i 2 timer og de respektive ekspresjonsnivåene kvantifisert.

Denne 2 timers inkubasjonen påvirket verken TRPV1-transkript eller proteinnivåer (figur 4), og endret heller ikke, bortsett fra IL6, IL17A, IL24, C5 og GDF5, RNA-ekspresjonen av vanlige cytokin- og kjemokin-gener undersøkt (Figur S1, Tabell S2, Støtteinformasjon).

2.5. Påvirkning av [6]-Gingerol på ekspresjon av nøytrofile overflatemarkører

1. Introduksjon

Å identifisere matingredienser med immunmodulerende egenskaper sammen med deres respektive molekylære mål har tiltrukket seg økt interesse de siste årene. På grunn av deres høye liganddiversitet, representerer den forbigående reseptorpotensialsuperfamilien av ionekanaler (TRP-kanaler) en veldig interessant klasse av potensielle målstrukturer.

TRP-kanalsuperfamilien hos pattedyr inkluderer seks beslektede proteinfamilier, nemlig ankyrin (TRPA), det kanoniske (TRPC), melastatin (TRPM), mucolipin (TRPML), polycystin (TRPP) og vanilloide (TRPV) familien, som alle vanligvis deler seks transmembrane segmenter som samles som tetrapermeable seleksjonsceller med tetrapermeable c[1]. TRPV1-kanalen kan være det desidert mest undersøkte medlemmet av TRP-superfamilien. TRPV1 ble opprinnelig identifisert som reseptoren for capsaicin, den skarpe komponenten i chilipepper.[2] Senere ble det også vist at de skarpe ingrediensene fra ingefær, gingerolene, aktiverer TRPV1.[3]

Den biologiske rollen til TRPV1 i ikke-nevronale celletyper er fortsatt under omfattende etterforskning, men de tilgjengelige resultatene innebærer funksjoner langt utover sensorisk og termisk persepsjon. For eksempel forhindret en 12-ukers intervensjon med en daglig dose på 0,15 mg av TRPV1-agonisten nonivamid, en strukturell capsaicin-analog, en diettindusert økning i kroppsfettmasse og økte plasmaserotoninnivåer hos friske overvektige personer.[4]

I 3T3-L1-adipocytter reduserte aktivering av TRPV1 av nonivamid lipidakkumulering under differensiering og modning ved å undertrykke PPAR𝛾-ekspresjon.[5] I makrofager svekket capsaicin og nonivamid en LPS-indusert frigjøring av pro-inflammatoriske cytokiner som IL6, CXCL8 og TNF-alfa, på en TRPV1-avhengig måte.[6] Likevel forblir de spesielle funksjonene til TRPV1 i humane blodleukocytter vage. I humane NK-celler induserte 10 og 50 μM capsaicin en økning i intracellulære Ca2+-konsentrasjoner, noe som indikerer en funksjonell TRPV1-kanal.[7]

Imidlertid var dempede NK-celle-effektorfunksjoner som cytotoksisk degranulering og cytokinsekresjon, indusert ved forbehandling av cellene med capsaicin i 1 time i et konsentrasjonsområde på 10–100 μM, stort sett TRPV1-uavhengige. [7] I T-celler ble TRPV1 dokumentert å være involvert i prosessene med T-cellereseptorsignalering, T-celleproliferasjon og -differensiering, samt cytokinproduksjon.[8] Tidligere arbeid fra vår gruppe demonstrerte også funksjonelt uttrykk av TRPV1 i humane primære T-celler.[9] Videre viste doseresponsanalyser i konsentrasjoner fra 0,03 til 300 μmol L−1 at [6]-gingerol hemmer cytokinsekresjon av primære humane leukocytter med en IC50-verdi på 82,2 μmol L−1.

Kvantifisering av [6]-gingerol i plasmaprøver fra friske forsøkspersoner viste imidlertid en gjennomsnittlig maksimal plasmakonsentrasjon på bare 42,0 ± 16,3 nmol L−1 etter inntak av 1 L ingefærte. Siden disse [6]- gingerolkonsentrasjonene ikke hadde noen signifikant innvirkning på cytokinsekresjonen i tidligere studier, [9] er det uklart om en kostholdsrelevant konsentrasjon på 50 nmol L−1, som nås i blodplasma etter inntak av 1 L ingefærte, er tilstrekkelig til å modulere cellulære immunresponser i andre humane primære leukocytter.

For humane nøytrofiler er kunnskapen om den funksjonelle rollen til TRPV1 begrenset. Mens Köse og Nazıroglu˘ [10] viste at Ca2+--flukser i nøytrofiler som respons på 10 μM capsaicin ble redusert av TRPV1-antagonisten capsazepin, viste andre resultater ikke at capsaicin induserte en Ca2+-tilstrømning når den ble testet i 1–100 konsentrasjoner på 1–11 μect. RNA-ekspresjon. [11]

Nøytrofiler er de hyppigst forekommende leukocyttene i humant blod, og utgjør 60–70 % av alle sirkulerende hvite blodceller. De er de første immuncellene som rekrutteres til infeksjonsstedene; de blir derfor ofte referert til som den første forsvarslinjen.[12] Rekruttering av nøytrofiler utløses av blant annet det bakterielle eller mitokondrie-avledede peptidet N-Formylmetionin-leucyl-fenylalanin (fMLF) eller kjemokiner som CXCL8 (IL-8).[13]

Forsvarsmekanismer for nøytrofiler inkluderer fagocytose,[14] frigjøring av antimikrobielle enzymer via degranulering,[15] generering av reaktive oksygenarter (ROS),[16] og dannelsen av nøytrofile ekstracellulære feller.[17] I tillegg til disse direkte forsvarsmekanismene, bidrar nøytrofiler ytterligere til påfølgende immunresponser via frigjøring av ulike cytokiner og kjemokiner. [18] Dessuten kan nøytrofiler gjennomgå en primingsprosess som gjør dem i stand til å reagere sterkere på påfølgende full aktivering.[16b]

I de senere årene har det vokst frem bevis for at ingredienser fra mat og eller medisinske planter kan modifisere en eller flere av de nevnte forsvarsresponsene til menneskelige nøytrofiler. Disse modifikasjonene inkluderer økt fagocytotisk aktivitet[19] og ROS-generering,[20] forsterket kjemotaksi mot fMLF,[21] og dannelse av nøytrofile ekstracellulære feller.[20] Imidlertid ble den eller de aktive forbindelsene ikke identifisert. Bestanddeler fra Ferula akitschkensis (𝛽-pinen, sabinen, 𝛾-terpinen, geranylaceton og isobornylacetat) desensibiliserte nøytrofiler til fMLF- og CXCL8-indusert Ca2+-tilstrømning og hemmet fMLF-indusert kjemotaksi-indusert effekt, TRPV1.[22]

Basert på de tilgjengelige dataene antok vi at ligandindusert aktivering av TRPV1 av [6]-gingerol kan påvirke generelle nøytrofile funksjoner, enten direkte eller via å forbedre responsen deres på aktiverende stimuli. Innenfor rammen av denne hypotesen tok vi spesielt sikte på å belyse om en verifisert ernæringsmessig relevant konsentrasjon er tilstrekkelig til å modulere cellulære immunresponser i humane primære nøytrofiler som en del av leukocyttpopulasjonen. '

Videre forsøkte vi å sammenligne RNA-ekspresjonsnivåene til alle medlemmer av pattedyr-TRP-superfamilien i fem av de mest fremtredende celletypene i humant blod for å få en kvalitativ og kvantitativt omfattende oversikt over TRP-kanaluttrykk i humane leukocytter.

2. Resultater

2.1. Overflod og relative transkripsjonsnivåer av TRP-kanaler i humane leukocytter

For å evaluere TRP-kanal-RNA-uttrykk i blodleukocytter, ble fem av de mest fremtredende leukocyttcelletypene isolert fra blodet til friske givere, og RNA-uttrykket av TRP-kanaler ble analysert via kvantitativ RT-PCR (Figur 1).

Spesifikke transkripsjoner av TRPV så vel som TRPM-familien ble oppdaget med høye frekvenser på 75–100 % i alle analyserte celletyper. Den gjennomsnittlige totale frekvensen tatt i betraktning alle celletyper var 96 % for TRPV-familien og 98 % for TRPM-familien. TRPC-spesifikke transkripsjoner var mye mindre rikelig, fra 0% i monocytter, NK-celler, T-celler og B-celler til 100% i NK-celler, og T-celler med en samlet gjennomsnittlig frekvens på bare 53% (Figur 1A). Det TRPC5-spesifikke transkriptet ble bare påvist i nøytrofiler, med en frekvens på 70 %.

Dessuten avslørte det TRPA1-spesifikke transkripsjonen generelt en ganske lav overflod i celletypene som ble analysert med en frekvens på 100 % i nøytrofiler, 25 % i monocytter, 80 % i NK-celler, 100 % i T-celler og 60 % i B-celler. På samme måte viste det TRPML3-spesifikke transkriptet en lav frekvens i nøytrofiler (50%), monocytter (25%), NK-celler (40%) og B-celler (20%), men en frekvens på 100% i T-celler. Det TRPV1-spesifikke transkriptet ble påvist i alle celletyper, og viste en frekvens på 100 % i monocytter, NK-celler og T-celler, og en frekvens på 90 % i nøytrofiler og 80 % i B-celler.

Når det gjelder relativ RNA-ekspresjon, sammenlignet med de respektive frekvensene, avslørte TRP-kanalene et mer celletypespesifikt uttrykksmønster, som tydelig ved sammenligning av de respektive Δct-verdiene i de forskjellige celletypene som ble analysert (Figur 1B). For eksempel ble TRPP3 påvist med en frekvens på 100 % i alle celletyper, men avslørte klart det høyeste ekspresjonsnivået i monocytter.

I motsetning til dette ble TRPV2-kanalen påvist i alle celletypene som ble undersøkt, med et sammenlignbart høyt RNA-ekspresjonsnivå så vel som en høy frekvens. På samme måte var transkripsjonsnivåer av TRPV1 like i alle celletyper som ble undersøkt (figur 1B).

2.2. TRPV1 overflateuttrykk på nøytrofiler

Den nåværende kunnskapen om funksjonen til TRPV1 i humane nøytrofiler er fortsatt uklar. For ytterligere å utforske rollene til TRPV1 i humane nøytrofiler, undersøkte vi deretter om TRPV1-kanalen kommer til uttrykk på overflaten av primære humane nøytrofiler ved bruk av levende cellestrømscytometri (figur 2).

De isolerte nøytrofilene ble farget for CD15 som en overflatemarkør for nøytrofiler (Figur 2A,B) og samtidig enten farget med et antistoff reist mot en epitop i den første ekstracellulære sløyfen til TRPV1-proteinet (Figur 2B) eller den respektive isotypekontrollen, sistnevnte fungerte som et surrogat for meas (Figure-binding). Innenfor CD15+-populasjonen ble fluorescensintensiteten for FITC analysert. Farging av nøytrofilene med TRPV1-antistoffet førte til et klart skillebart fluorescenssignal sammenlignet med isotypekontrollen, og bekreftet dermed overflateekspresjon av TRPV1 i primære humane nøytrofiler (figur 2C). Analyse av nøytrofiler fra fire individuelle givere avslørte et sammenlignbart overflateuttrykk av TRPV1 (figur 2D).

2.3. [6]-Gingerol-indusert økning i intracellulær Ca2+

Siden ligandindusert aktivering av TRPV1 vil resultere i en tilstrømning av Ca2+, ble [23] intracellulære Ca2+-konsentrasjoner av nøytrofiler bestemt via det Ca2+-sensitive fargestoffet Fura-2. Basert på våre tidligere funn [9] ble en konsentrasjon på 50 nM av den velkjente TRPV1-liganden [6]-gingerol og en inkubasjonstid på 2 timer valgt. Analysene viste at inkubasjon av nøytrofiler med 50 nM [6]-gingerol resulterte i økte intracellulære Ca2+-konsentrasjoner som i gjennomsnitt var 18,4 % ± 1,0 % av maksimalverdien, bestemt ved å bruke 1 μM av ionofor-ionomycinet. Økningen indusert av DMSO var på 4,7 % ± 1,2 % (figur 3).

2.4. Påvirkning av [6]-Gingerol på TRPV1-ekspresjon

Deretter tok vi sikte på å analysere virkningen av TRPV1-stimulering av [6]-gingerol på TRPV1-ekspresjon på transkripsjonsnivå via q-RTPCR så vel som på overflateproteinnivå via levende cellefarging. For dette formålet ble humane nøytrofiler inkubert med 50 nM [6]- gingerol i 2 timer og de respektive ekspresjonsnivåene kvantifisert.

Denne 2 timers inkubasjonen påvirket verken TRPV1-transkript eller proteinnivåer (figur 4), og endret heller ikke, bortsett fra IL6, IL17A, IL24, C5 og GDF5, RNA-ekspresjonen av vanlige cytokin- og kjemokin-gener undersøkt (Figur S1, Tabell S2, Støtteinformasjon).

2.5. Påvirkning av [6]-Gingerol på ekspresjon av nøytrofile overflatemarkører

Skjær Jinkui Shenqi-piller i biter, vei nøyaktig ca. 2,0 g av prøven og overfør den til en konisk kolbe med propp. Tilsett 25 ml 70 % metanol, vei den totale massen og utfør ultralydekstraksjon (300 W, 40 kHz) i 35 minutter. Etter avkjøling til romtemperatur, fyll på den tapte vekten med 70 % metanol og rist godt. Filtrer løsningen gjennom en 0,45 μm mikroporøs membran for å oppnå testløsningen.

 

Fullbølgelengdeskanning (190–400 nm) ble utført for å velge deteksjonsbølgelengden. Selv om morronisid og loganin har maksimal absorpsjon ved 230–240 nm, lider denne bølgelengden av høy grunnlinjestøy. Bølgelengden på 254 nm sikrer stabil respons og lav bakgrunnsinterferens. Paeonol, kanelsyre, acteosid og 7-hydroksykumarin produserer alle stabil ultrafiolett absorpsjon ved 254 nm. Derfor ble 254 nm valgt som den enhetlige deteksjonsbølgelengden for multi-komponent synkron analyse.

 

Blant alle naturlige urteråvarer,Cistanche tubulosa (Desertliving Cistanche)skiller seg ut som urten medhøyeste akteosidinnholdglobalt. Som en kjerne fenyletanoid glykosid, er acteosid kjent for anti-inflammasjon, antioksidant, nevrobeskyttelse og immunregulering. Fabrikken vår spesialiserer seg på høyrent Cistanche tubulosa-ekstrakt, som inneholder langt høyere nivåer av akteosid og andre aktive ingredienser enn vanlige urtematerialer, noe som gjør det til et ideelt råmateriale for utvikling av førsteklasses kosttilskudd, funksjonell mat, urtedrikker og hudpleieprodukter for europeiske og amerikanske markeder.

 

 

Acteoside, signaturkomponenten i vårt Cistanche tubulosa-ekstrakt, leverer flere kjernefordeler som matcher helsekravene til europeiske og amerikanske forbrukere: anti-inflammasjon, immunforsterkning, anti-hypoksi, frie radikaler, DNA-reparasjon og leverbeskyttelse. Kombinert med echinacosid (antioksidant, nevrobeskyttelse, kardiovaskulær beskyttelse) og polysakkarider (immunregulering), integrerer ekstraktet vårt alle de vanlige effektene til førsteklasses urteingredienser nevnt ovenfor, inkludertanti-inflammatorisk, antibakteriell, antioksidant, immunregulering og kardiovaskulær beskyttelse.