Abstrakt

ObjektivFor å undersøke mekanismen til Cistanche fenyletanolglykosider (CPhGs) på medfødt immunfunksjon, tumorvekst og tumorcelleapoptose hos nakne mus som bærer medikamentresistent osteosarkom.MetoderHuman osteosarkom MG-63 medikamentresistent cellelinje ble etablert ved gradientkonsentrasjonsmetode, og en nakenmusemodell av medikamentresistent osteosarkom ble konstruert (36 mus totalt, 6 per gruppe). Modellgruppen ble gitt normalt saltvann ved sonde; metotreksat (MTX)-gruppen fikk intraperitoneal injeksjon av MTX (20 mg/kg) hver tredje dag; kombinasjonsgruppen mottok intraperitoneal injeksjon av MTX hver tredje dag kombinert med daglig sonde av middels dose CPhGs (250 mg/kg); høy-, middels- og lavdose CPhGs-gruppene ble gitt daglig sonde av CPhGs ved henholdsvis høye (500 mg/kg), middels (250 mg/kg) og lave (125 mg/kg) doser. Tumorstørrelsesendringer i nakne mus ble observert, kurver for gjennomsnittlig tumorvolum over tid ble plottet, og tumorinhiberingshastigheten ble beregnet; serumnivåer av IL-2 og TNF- i nakne mus ble påvist ved ELISA; tumorcelleapoptose ble målt ved flowcytometri; Western blot ble brukt for å påvise uttrykket av apoptose-relaterte proteiner Bcl-2, Bax og uttrykket av p-AKT, p-mTOR, p-PI3K i tumorvev.ResultaterSammenlignet med modellgruppen var tumorvolum og vekt i alle behandlingsgruppene signifikant redusert (P < 0,001); sammenlignet med modellgruppen og MTX-gruppen var serumnivåene av IL-2 og TNF- i nakne mus i alle CPhGs-gruppene og kombinasjonsgruppen signifikant økt (P < 0,01); sammenlignet med modellgruppen var Bax-ekspresjonen i alle behandlingsgruppene signifikant oppregulert (P < 0,001), og Bcl-2-ekspresjonen i høy- og mellomdose CPhGs-grupper og kombinasjonsgruppen var signifikant nedregulert (P < 0,001); sammenlignet med modellgruppen og MTX-gruppen var tumorapoptosefrekvensen i nakne mus i alle CPhGs-gruppene og kombinasjonsgruppen signifikant økt, mens nivåene av p-AKT, p-mTOR og p-PI3K ble signifikant redusert (P < 0,05).KonklusjonCPhG-er kan forbedre immunfunksjonen betydelig hos nakne mus som bærer medikamentresistent osteosarkom, og fremme tumorcelleapoptose ved å regulere PI3K/AKT/mTOR-signalveien og uttrykket av Bax og Bcl-2 apoptotiske proteiner, og dermed effektivt hemme tumorvekst.

Stikkordosteosarkom;Cistanche fenyletanolglykosider; MG-63; tumorceller; apoptose; virkningsmekanisme; PI3K/AKT/mTOR signalvei

 

CISTANCHE TUBULOSA FORDELER

 

 

 

 

 

 

Osteosarkom (OS)er en svært ondartet primær beinsvulst, med den høyeste forekomsten blant primære ondartede beinsvulster i ungdom, ledsaget av ekstremt høye uførhet og dødelighet. For tiden kan høydose metotreksat (MTX) alene eller kombinert med andre kjemoterapeutiske midler etter operasjon effektivt forbedre overlevelsesraten for OS-pasienter [1]. Noen OS-pasienter er imidlertid ufølsomme for kjemoterapi på grunn av medikamentresistens, noe som fører til tumorprogresjon. I tillegg er undergrupper av T-lymfocytter hos tumorpasienter ofte i en tilstand av immunubalanse, og kjemoterapi kan ytterligere forverre immunforstyrrelser og immunsuppresjon på kort sikt [2]. Studier har vist at forbedring av menneskelig immunrespons kan forbedre prognosen til OS-pasienter fra perspektivet av biologiske egenskaper ved OS [3]. Kjemoterapiresistens er et av de vanligste og mest vanskelige problemene som fører til behandlingssvikt hos OS-pasienter, og immunsuppresjon er også en av nøkkelfaktorene som forårsaker rask tumorprogresjon [4].

Fosfatidylinositol 3-kinase (PI3K)/proteinkinase B (AKT)/pattedyrmål for rapamycin (mTOR) signalveien regnes som en av de viktigste onkogene veiene i humane kreftformer. Denne veien er ofte overaktivert i OS, noe som kan drive OS-celleproliferasjon, invasjon, metastase og angiogenese, hemme apoptose og videre føre til OS-resistens mot kjemoterapeutiske legemidler [5]. Studier har bekreftet at Cistanche fenyletanolglykosider (CPhGs), hovedkomponenten iCistanche deserticola, kan forbedre immunfunksjonen og hemme tumorvekst hos hepatombærende mus [6].In vitrostudier har vist at CPhGs betydelig kan hemme spredningen av HepG2 hepatomceller og indusere deres apoptose [7]. Å indusere celleapoptose er hovedmekanismen til nåværende antitumormedisiner og også et forskningshotspot innen OS-behandling de siste årene. Nakne mus deler mange likheter med mennesker innen anatomi, fysiologi og biologi, og har høy akseptabilitet for transplanterte svulster, noe som tillater xenotransplantasjon av visse heterologe tumorceller, og blir dermed mye brukt i å etablere tumormodeller [8-9]. Denne studien har til hensikt å konstruere en naken musemodell av medikamentresistent osteosarkom, observere effekten av CPhGs på immunfunksjonen og PI3K/AKT/mTOR-veien i denne modellen, samt dens hemmende effekt på tumorvekst og farmakologisk mekanisme, for å gi referanser for å utvide kliniske behandlingsideer og grunnleggende forskning av OS.

 

CISTANCHE TUBULOSA FORDELER FOR BEINVEKST

 

CISTANCHE TIL SALG

Supportive Service Of Wecistanche - Den største cistanche-eksportøren i Kina:
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tlf:+86 15292862950

 

 

1 Materialer og metoder

1.1 Forsøksdyr

Trettiseks nakne mus av SPF-grad (6–8 uker gamle, veier 19–25 g) ble kjøpt fra Changzhou Cavens Laboratory Animal Co., Ltd., med dyresertifikat nr. 202367524. Dette eksperimentet ble godkjent av Laboratory Animal Ethics Committee ved Northwest Minzu University (Xbmu-3m-202306).

1.2 Cellelinje

MG-63 celler ble kjøpt fra Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences i Shanghai.

1.3 Legemidler og reagenser

Fetalt bovint serum, høyglukose-DMEM-medium, 0,25 % trypsin-EDTA, MTX (Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd., henholdsvis batchnummer PWL001, MA0212, MA0233-1, MB1156-1); CPhGs (Shaanxi Senyuan Biotechnology Co., Ltd., batchnummer SY20231212605); anti-p-mTOR-antistoff, anti-p-PI3K-antistoff, anti-p-AKT-antistoff, anti-Bcl-2-antistoff, anti-Bax-antistoff (Hangzhou Huaan Biotechnology Co., Ltd., batchnummer HA600094, HA721673, ET1607-73, ET1702-3, 3, 503, 3,603, 3,603, respektive-); ELISA-sett for TNF- og IL-2 (Hangzhou Lianke Biotechnology Co., Ltd., henholdsvis batchnummer EK282, EK202).

1.4 Instrumenter

CT14RD desktop høyhastighets nedkjølt sentrifuge (Shanghai Tianmei Biochemical Instrument Co., Ltd.); SW-CJ-1FD ren benk (Suzhou Purification Co., Ltd.); CO-5AC celleinkubator (Sanyo, Japan); AE31 fluorescens invertert mikroskop (Xiamen Motic Industrial Group Co., Ltd.); RT-6100 mikroplateleser (Shenzhen Rayto Life Sciences Co., Ltd.); PowerPoc gelelektroforesesystem, ChemiDoc™ gelbildeanalysator (Bio-Rad, USA).

 

1.5 Eksperimentelle metoder

1.5.1 Etablering av human osteosarkom MG-63 medikamentresistent cellelinje (MG-63/MTX)

MG-63 celler ble dyrket til logaritmisk vekstfase med 80 % cellekonfluens. Prepreparert cellekulturmedium inneholdende 100 ng/mL MTX ble tilsatt, og mediet ble skiftet etter 48 timer. Når cellene nådde 80 % konfluens igjen, ble den samme konsentrasjonen av MTX-holdig medium tilsatt. Trinnene ovenfor ble gjentatt for å gjøre det mulig for MG-63 osteosarkomceller å vokse stabilt i medium som inneholder 100 ng/ml MTX. Deretter ble konsentrasjonen av MTX i mediet gradvis økt ved samme metode, ved å bruke 200 ng/ml, 500 ng/ml, 1000 ng/ml, 2000 ng/ml, 5000 ng/ml og 10000 ng/ml i rekkefølge. Etter 5 måneders dyrking ble osteosarkom medikamentresistent cellelinje (MG-63/MTX) som vokste stabilt i 10000 ng/mL MTX valgt for påfølgende eksperimenter.

 

 

1.5.2 Etablering av nakenmusemodell som bærer medikamentresistent osteosarkom

Osteosarkom-dyremodellen ble etablert med henvisning til litteratur [10]. MG-63/MTX-celler ble preparert til en cellesuspensjon på 4×10⁶/100 μL, og 100 μL ble injisert subkutant i aksillen til nakne mus for å observere tumordannelse.

1.5.3 Dyregruppering og intervensjon

Tumorbærende nakne mus ble tilfeldig delt inn i modellgruppe, MTX-gruppe, MTX kombinert med CPhGs (MTX-CPhGs) gruppe, høydose CPhGs (CPhGs-H) gruppe, middels dose CPhGs (CPhGs-M) gruppe og lavdose CPhGs (CPhGs) gruppe i hver gruppe, CPhGs. Gavage ble startet på dag 6 etter modellering. Musene i modellgruppen ble gitt 10 μL/g normalt saltvann daglig ved sonde; MTX-gruppen fikk intraperitoneal injeksjon på 20 mg/kg MTX hver tredje dag; MTX-CPhGs-gruppen mottok daglig sonde på 250 mg/kg CPhGs kombinert med intraperitoneal injeksjon av 20 mg/kg MTX hver tredje dag; CPhGs-H-gruppen mottok daglig sonde på 500 mg/kg CPhGs; CPhGs-M-gruppen mottok daglig sonde på 250 mg/kg CPhGs; CPhGs-L-gruppen mottok daglig sonde på 125 mg/kg CPhGs. Alle nakne mus ble behandlet kontinuerlig i 15 dager.

1.5.4 Måling av tumorvolum og vekt hos nakne mus som bærer medikamentresistent osteosarkom

Tumorvolum av nakne mus i hver gruppe ble observert og registrert, og tumorvekstkurver ble plottet. 24 timer etter siste administrering ble mus avlivet ved cervikal dislokasjon, tumorer ble dissekert og veid, og tumorinhiberingshastigheten ble beregnet. Formlene er som følger: Tumorvolum=1/2 (lang tumordiameter × kort tumordiameter²) Tumorhemmingsrate=[(gjennomsnittlig tumorvekt for modellgruppen - gjennomsnittlig tumorvekt for behandlingsgruppen)/gjennomsnittlig tumorvekt for modellgruppen] × 100 %

1.5.5 Påvisning av serum IL-2 og TNF-nivåer ved ELISA

Serum ble ekstrahert fra nakne mus i hver gruppe, og serumnivåer av IL-2 og TNF- ble påvist med ELISA i henhold til produsentens instruksjoner.

1.5.6 Påvisning av tumorcelleapoptose ved flowcytometri

Tumorvev fra hver gruppe ble hakket, malt, filtrert, sentrifugert, og røde blodceller ble lysert for å fremstille enkeltcellesuspensjoner i sentrifugerør. Cellekonsentrasjonen ble justert til 1×10⁶/mL, cellene ble resuspendert i 100 μL Binding Buffer, tilsatt 5 μL AV-FITC og PI, inkubert i mørket i 15 minutter, sentrifugert, resuspendert og tilsatt 400 μL Binding Buffer. Etter blanding ble prøver påvist ved flowcytometri.

1.5.7 Påvisning av p-AKT, p-mTOR, p-PI3K og apoptotiske proteiner Bcl-2, Bax ved Western blot

Tumorvev fra hver gruppe ble hakket og plassert i en homogenisator, lysert med proteinlysebuffer og homogenisert. Etter lysering ble supernatanten samlet ved sentrifugering ved 12000 r/min. Elektroforetisk gel ble forberedt for proteinseparasjon, etterfulgt av membranoverføring og blokkering. Membraner ble inkubert med primære antistoffer ved 4 grader over natten, vasket og inkubert med sekundære antistoffer ved romtemperatur i 1 time. Etter vasking med TBST-buffer på en shaker, ble ECL luminescerende løsning tilsatt for utvikling. Etter fiksering ble gelbildeanalyse utført, og proteinbåndgråverdier ble analysert ved bruk av Image J-programvare.

1.6 Statistisk analyse

Statistisk analyse ble utført ved bruk av GraphPad Prism 7 og SPSS 25.0 programvare. Måledata ble uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik (x ± s). Enveis ANOVA ble brukt for sammenligning mellom grupper med normalfordeling og homogen varians, og ikke-parametrisk test ble brukt for ikke-normalfordelingsdata. Paret t-test ble brukt for å analysere tumorhemmingshastighet. P < 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.

 

 

Figur 1. Morfologisk sammenligning av MG-63- og MG-63/MTX-celler (×200)

2 resultater

2.1 Osteosarkom MG-63 medikamentresistent cellelinje (MG-63/MTX)

Opprinnelige MG-63-celler vokste adherent med middels størrelse, for det meste spindelformede, noen ganger uregelmessige, med store kjerner og klare nukleoler (Figur 1-A). MG-63/MTX-celler var forlengede, spindel eller uregelmessige, med tydelig pseudopodia (figur 1-B).

2.2 Sammenligning av tumorvekst hos mus i hver gruppe

Fra dag 6 av sondeernæring var tumorvolum i behandlingsgruppene signifikant mindre enn i modellgruppen. På dag 21 av sondeernæring ble svulster fra 3 nakne mus i hver gruppe sammenlignet (figur 2-A). Tumorvolum i alle behandlingsgruppene var mindre enn det i modellgruppen (P < 0,001). Tumorvolum i gruppene CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L og MTX-CPhGs var mindre enn det i MTX-gruppen (P < 0,001). Blant CPhGs-gruppene avtok tumorvolumet gradvis med økende legemiddelkonsentrasjon, og forskjellen fra modellgruppen ble mer signifikant (figur 2-B). Resultatene indikerte at CPhGs signifikant kunne hemme tumorvekst hos medikamentresistente tumorbærende mus, og den hemmende effekten var positivt korrelert med CPhGs-konsentrasjonen.

Sammenlignet med modellgruppen var gjennomsnittlig tumorvekt i gruppene MTX, CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L og MTX-CPhGs signifikant redusert (P < 0,001). Sammenlignet med MTX-gruppen var tumorhemmingshastigheten i CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L og MTX-CPhGs-gruppene betydelig økt, og i CPhGs-H, CPhGs-M og CPhGs-L-gruppene økte tumorhemmingsraten på en doseavhengig måte (T-avhengig måte med økende medikamentkonsentrasjon).

2.3 Effekter av CPhG på serum IL-2 og TNF-nivåer i legemiddelresistente svulstbærende nakne mus

Sammenlignet med modellgruppen var serum-TNF-nivået i MTX-gruppen signifikant økt (P < 0,05), og serum-TNF- og IL-2-nivåene i MTX-CPhGs-gruppen var signifikant økt (P < 0,01). I tillegg var serum-TNF-nivåene i CPhGs-H-, CPhGs-M- og CPhGs-L-gruppene signifikant høyere enn de i modellgruppen (P < 0,001), serum-IL-2-nivået i CPhGs-M-gruppen var økt (P < 0,01), og serum-IL-2-CPhG-nivåene i CPhGs-M-gruppene var signifikant økte i CPhGs-M-gruppene (P < 0,001). Sammenlignet med MTX-gruppen var serum-TNF- og IL-2-nivåene i CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L og MTX-CPhGs-gruppene signifikant økt (P < 0,001) (tabell 2). Dette antyder at CPhG-er kan forbedre medfødt immunfunksjon i medikamentresistente OS-tumorbærende mus ved å regulere uttrykket av TNF- og IL-2.

 

Figur 2. Sammenligning av tumorvolumer i nakne mus med svulster i hver gruppe etter intervensjon (x ± s, n=3, mm3)

Merk: Modellgruppe; MTX gruppe; CPhGs-L gruppe; lav dose Cistanche deserticola fenyletanol total glykosider gruppe; CPhGs-M gruppe; middels dose Cistanche deserticola fenyletanol total glykosider gruppe; CPhGs-H gruppe; høy dose Cistanche deserticola phenylethanol total glykosider gruppe; MTX-CPhGs gruppe; sammenlignet med modellgruppen, ***P<0.001; compared with the MTX group, ###P<0.001

Tabell 1. Effekt av Cistanche-fenyletanoidglykosider på svulstvekt hos svulstbærende nakne mus (n=3)

Gruppe	Gjennomsnittlig svulstvekt (g)	Inhiberingsrate (%)
Modell	0.79 ± 0.04	-
MTX	0.49 ± 0.03	35.73 ± 4.61
CPhGs–L	0.33 ± 0.01	58.55 ± 4.02
CPhGs–M	0.31 ± 0.02	60.50 ± 0.98
CPhGs–H	0.28 ± 0.01	64.58 ± 1.77
MTX–CPhGs	0.18 ± 0.01	75.77 ± 1.78

*Merk: "Modell"-gruppen har ingen hemningsfrekvens rapportert i kildetabellen (vist som em-strek). Hvis du vil, kan jeg også legge til signifikansmarkørene (f.eks. *, ## osv.) som fotnoter nøyaktig som i figuren.

2.4 Effekter av CPhGs på tumorcelleapoptose hos medikamentresistente tumorbærende nakne mus

Sammenlignet med modellgruppen var tumorapoptosefrekvensen i MTX- og CPhGs-L-gruppene signifikant økt (P < 0,05), og den i CPhGs-H-, CPhGs-M- og MTX-CPhGs-gruppene økte mer signifikant (P < 0,001). Sammenlignet med MTX-gruppen var tumorapoptosefrekvensen i CPhGs-H-, CPhGs-M- og MTX-CPhGs-gruppene økt (P < 0,001) (Figur 3, Tabell 3). Resultatene ovenfor viser at CPhGs kan fremme tumorcelleapoptose hos medikamentresistente tumorbærende nakne mus.

2.5 Effekter av CPhG-er på uttrykket av p-AKT, p-mTOR og p-PI3K i tumorvev av medikamentresistente tumorbærende nakne mus

Sammenlignet med modellgruppen var p-AKT-uttrykk i tumorvev fra medikamentresistente nakne mus i MTX-gruppen signifikant redusert (P < 0,001). Ekspresjonsnivåene av p-AKT, p-mTOR og p-PI3K i tumorvev fra nakne mus i MTX-CPhGs-, CPhGs-H- og CPhGs-M-gruppene ble signifikant redusert (P < 0,001), p-AKT-ekspresjonen i CPhGs-L-gruppen ble redusert (P < 0,01 og

 

Tabell 2. Serum-TNF- og IL-2-uttrykksnivåer i hver gruppe (n=3)

Gruppe	TNF- (pg/ml)	IL-2 (pg/ml)
Modell	79.90 ± 3.60	28.36 ± 2.35
MTX	93.71 ± 2.86*	28.87 ± 1.60
MTX–CPhGs	118.00 ± 3.78***###	40.92 ± 1.54***###
CPhGs–H	122.76 ± 2.97***###	45.03 ± 4.95***###
CPhGs–M	117.52 ± 3.60***###	41.44 ± 3.87***###
CPhGs–L	124.19 ± 8.37***###	44.77 ± 2.31***###

 

Merknader (som vist i figuren):Modell=modellgruppe; MTX=metotreksatgruppe; CPhGs–L/M/H=lav/middels/høy dose Cistanche fenyletanoid glykosider gruppe; MTX–CPhGs=kombinasjonsgruppe. Betydning vs. modell: * P<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

2.6 Effekter av CPhG-er på uttrykket av Bcl-2 og Bax i tumorvev av medikamentresistente tumorbærende nakne mus

Sammenlignet med modellgruppen var Bax-ekspresjonen i tumorvev fra medikamentresistente nakne mus i alle behandlingsgruppene signifikant økt (P < 0,001), Bcl-2-ekspresjonen i MTX-gruppen ble økt (P < 0,05), og Bcl-2-ekspresjonen i MTX-CPhGs, CPhGs-H og CPhGs-M-gruppene var signifikant redusert (<0). Sammenlignet med MTX-gruppen var Bcl-2-ekspresjon i tumorvev av CPhGs-H-, CPhGs-M-, CPhGs-L- og MTX-CPhGs-gruppene signifikant redusert (P < 0,001), og Bax-ekspresjonen i CPhGs-H- og CPhGs-M-gruppene var signifikant økt (P < 4)- 0,0000 (P < 4)- (Fi. 4-F). Det indikerer videre at CPhG-er kan fremme tumorcelleapoptose i medikamentresistente tumorbærende nakne mus ved å regulere uttrykket av Bcl-2 og Bax.

 

 

3 Diskusjon

Kjemoterapiresistens og immunsuppresjon hos OS-pasienter er flaskehalser i klinisk behandling av OS. For tiden er hovedmekanismen til antitumormedisiner å fremme tumorcelleapoptose, som direkte gjenspeiler effekten av kjemoterapi; på den annen side er kroppsimmunitet en sterk garanti for at pasienter tåler kjemoterapeutika. Derfor er det avgjørende å studere hvordan man effektivt kan fremme apoptose av medikamentresistente OS-celler og redusere kjemoterapi-indusert immunsvikt.

Figur 3. Apoptosehastigheten til tumorvevsceller i hver gruppe mus (n=3, %)

Merk: A. Modellgruppe; B. Metotreksat (MTX) gruppe; C. Metotreksat kombinert med Cistanche deserticola fenyletanol totalglykosider (MTX-CPhGs) gruppe; D. Høydose Cistanche deserticola phenylethanol total glykosider (CPhGs-H) gruppe; E. Medium-dose Cistanche deserticola fenyletanol total glykosider (CPhGs-M) gruppe; F. Lavdose Cistanche deserticola phenylethanol total glykosider (CPhGs-L) gruppe.

Tabell 3. Apoptosefrekvens for tumorvevsceller i hver gruppe (n=3)

Gruppe	Apoptoserate (%)
Modell	14.47 ± 1.10
MTX	19.77 ± 1.32*
MTX–CPhGs	29.21 ± 0.77***###
CPhGs–H	31.66 ± 1.93***###
CPhGs–M	30.13 ± 2.16***###
CPhGs–L	22.49 ± 3.02**

Merknader (som vist i figuren):Modell=modellgruppe; MTX=metotreksatgruppe; CPhGs–L/M/H=lav/middels/høy dose Cistanche fenyletanoid glykosider gruppe; MTX–CPhGs=kombinasjonsgruppe. Betydning vs. modell: * P<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

 

 

Cistanche deserticolahar farmakologiske effekter for å varme opp nyrene og fylle på essensen, fukte tarmene, antioksidasjon og forbedre immuniteten. Zhang et al. [11] rapporterte i 1988 at vandig ekstrakt avCistanche deserticolakan forbedre immunfunksjonen og stimulere utviklingen av immunorganer som thymus hos mus. Senerein vivostudier fant videre detCistanchepolysakkarider hadde anti-lungekreft og anti-sarkomeffekter [12]. Studier har vist at CPhGs, hovedkomponenten iCistanche deserticola, har farmakologiske effekter som antioksidasjon, antialdring, nevrobeskyttelse, immunforsterkning, leverbeskyttelse og behandling av spermatogene lidelser [13], og utøver også antitumor- og immunforsterkende effekter på ulike ondartede svulster inkludert leverkreft, lungekreft, brystkreft og eggstokkreft [14]. Vår forrige studie fant detCistanche deserticolakunne fremme apoptose av medikamentresistente OS-cellerin vitroved å redusere uttrykket av MRP1 og mutante P53-proteiner [15]. Denne studien fant at tumorvolum og vekt i behandlingsgruppene var mindre enn de i modellgruppen, og tumorvolum i forskjellige CPhGs-konsentrasjonsgrupper og MTX-CPhGs-gruppen var også mindre enn i MTX-gruppen, med økt tumorhemmingsrate. Dette indikerer at CPhGs betydelig kan hemme tumorvekst hos medikamentresistente OS-tumorbærende mus, og den hemmende effekten er positivt korrelert med CPhGs-konsentrasjonen, som i utgangspunktet er i samsvar med studien til Hou et al. [16] om den hemmende effekten av CPhGs på subkutane transplanterte svulster i H22-hepatombærende mus.

Immunfunksjon er nært knyttet til tumorforekomst og utvikling. IL-2 er en type cellevekstfaktor i immunsystemet, som kan forbedre kroppens immunfunksjon ved å fremme T-celleproliferasjon og differensiering, og produsere immunceller med antitumoraktivitet [17]. TNF- utøver antitumoreffekter ved å binde seg til reseptorer for å indusere tumorcelleapoptose, forbedre vertens immunfunksjon, virke på tumor vaskulære endotelceller, øke vaskulær permeabilitet, indusere programmert død, og deretter forårsake tumorblødning og nekrose [18]. Analyse av serum IL-2- og TNF-ekspresjon i mus fra hver gruppe viste at ekspresjonsnivåene av serum-TNF- og IL-2 i tumorbærende modellmus av forskjellige CPhGs-konsentrasjonsgrupper og MTX-CPhGs-gruppe var signifikant økt. Dette antyder at CPhG-er kan forbedre immunfunksjonen hos medikamentresistente OS-tumorbærende mus ved å regulere uttrykket av TNF- og IL-2, hemme spredningen av medikamentresistente osteosarkomceller og dermed utøve antitumoreffekter.

 

Figur 4. Elektroforeseresultatdiagram av p-mTOR-, p-PI3K-, p-AKT-, Bcl-2- og Bax-proteiner i tumorvev fra nakne mus (x ± s, n=3, mm3)

Merk: Modell, modellgruppe; MTX, metotreksatgruppe; MTX-CPhGs, metotreksat kombinert med Cistanche deserticola fenyletanol total glykosidegruppe; CPhGs-L, lavdose Cistanche deserticola phenylethanol total glykosider gruppe; CPhGs-M, middels dose Cistanche deserticola fenyletanol total glykosidegruppe; CPhGs-H, høydose Cistanche deserticola phenylethanol total glykosider gruppe; A. Western Blot-resultater av p-mTOR-, p-PI3K-, p-AKT-, Bcl-2- og Bax-proteiner; B. p-mTOR; C. p-PI3K; D. p-AKT; E. Bcl-2; F. Bax; Sammenlignet med modellgruppen, * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001; Sammenlignet med MTX-gruppen, # P < 0,05, ## P < 0,01, ### P < 0,001.

 

AKT-fosforylering i PI3K/AKT/mTOR-signalveien kan direkte eller indirekte regulere en rekke apoptoserelaterte faktorer som Bcl-2-familien, X-koblet inhibitor av apoptoseprotein (XIAP), musedobbelt minutt 2 (MDM-2) og Bcl-2-assosiert [X1-protein (Bax)]. Unormalt aktivert PI3K/AKT/mTOR-signalvei kan oppregulere uttrykket av membrantransportørene ABCB1 og ABCC1, og dermed redusere kjemoterapi-effekten og mediere OS-resistens mot kjemoterapeutiske legemidler [20]. En rekke tradisjonelle kinesiske medisinmonomerer kan fremme OS-celleapoptose ved å hemme PI3K/AKT/mTOR-signalveien, slik som procyanidin B2, quercetin, luteolin ogLactarius deliciosuspolysakkarider [21]. Denne studien fant at under enkelthandlingen til MTX, ble p-AKT-proteinekspresjonen betydelig redusert, mens p-mTOR- og p-PI3K-proteinekspresjonen ikke viste noen signifikant forskjell, noe som indikerer at MTX har liten effekt på PI3K/AKT/mTOR-signalveien i tumorvev fra medikamentresistente tumorbærende nakne mus. Imidlertid var uttrykket av p-AKT-, p-mTOR- og p-PI3K-proteiner i tumorvev fra medikamentresistente OS-svulstbærende nakne mus i forskjellige CPhGs-konsentrasjonsgrupper og MTX-CPhGs-gruppe lavere enn det i modellgruppen, og også betydelig lavere enn det i MTX-gruppen, noe som avslører at CPhGs har en signifikant hemmende/PITOR3-hemmende effekt på veien. medikamentresistente OS-celler. Flowcytometrideteksjon av tumorcelleapoptose viste at tumorapoptosefrekvensen i hver gruppe ble betydelig økt etter medikamentintervensjon. Påvisning av Bax- og Bcl-2-proteinekspresjon viste at Bax-ekspresjon i tumorvev av medikamentresistente OS-tumorbærende nakne mus i forskjellige CPhGs-konsentrasjonsgrupper og MTX-CPhGs-gruppe ble betydelig økt, mens Bcl-2-ekspresjon i tumorvev til modellmus i MTX-CPhGs, CPhGs-H og CPhGs-M-grupper ble betydelig redusert. Dette antyder at en viss konsentrasjon av CPhG kan fremme apoptose av medikamentresistente OS-cellerin vivoved å hemme PI3K/AKT/mTOR-signalveien, nedregulere Bcl-2-uttrykk og oppregulere Bax-uttrykk.

Avslutningsvis kan CPhG-er fremme apoptose av medikamentresistente OS-celler og hemme tumorvekstin vivo, og dens mekanisme kan oppnås ved å hemme PI3K/AKT/mTOR-signalveien og regulere uttrykket av Bcl-2 og Bax. I mellomtiden kan CPhG-er forbedre immunfunksjonen hos medikamentresistente OS-tumorbærende mus ved å oppregulere ekspresjonsnivåene av TNF- og IL-2, og dermed utøve synergistiske antitumoreffekter. Imidlertid trenger dets kliniske anvendelsespotensiale ytterligere utforskning og forskning.

 

Referanser

1 Zhang C, Hu J, Zhu K, et al. Overlevelse, komplikasjoner og funksjonelle utfall av sementerte megaproteser for høygradig osteosarkom rundt kneet[J]. Int Orthop, 2018, 42(4):927-938. DOI:10.1007/s00264-018-3770-9.2 Liu Q, Xu R, Xu X, et al. Karakteristikker og betydning av T-lymfocyttundergrupper i perifert blod fra osteosarkommus [J]. Transl Cancer Res, 2022, 11(6):1503-1509. DOI:10.21037/tcr22-264.3 Wu W, Jing DD, Cao L, et al. Nåværende status og utsikter for immunterapi for osteosarkom [J]. Cancer Research on Prevention and Treatment, 2022, 49(7):721-726. DOI:10.3971/j.issn.1000-8578.2022.21.1281.4 Wang CZ, Liu YF, Zhang XQ, et al. Forskningsfremgang på mekanismen for astragalosid Ⅳ som regulerer antitumorvirkningen til immunceller [J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2024, 42(11):145-149. DOI:10.13193/j.issn.1673-7717.2024.11.029.5 Zhang J, Yu XH, Yan YG, et al. PI3K/Akt-signalering ved osteosarkom[J]. Clin Chim Acta, 2015, 444:182-192. DOI:10.1016/j.cca.2014.12.041.6 Hu Q, You SP, Liu T, et al. En undersøkelse av anti-leverkrefteffekten av cistanche[J]. Carcinogenesis, Teratogenesis & Mutagenese, 2018, 30(3):194-199. DOI:10.3969/j.issn.1004-616x.2018.03.006.7 Qi XX, You SP, He ZX, et al. Effekt av Cistache deserticola fenyletanolglykosid på spredning og apoptose av HepG2-celler in vitro [J]. Journal of Xinjiang Medical University, 2021, 44(9):1041-1047. DOI:10.3639/j.issn.1009-5551.2021.09.012.8 Panaampon J, Sasamoto K, Kariya R, et al. Etablering av nakne mus som mangler NK-celler og deres anvendelse for humane tumor xenografter [J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2021, 22(4):1069-1074. DOI:10.31557/APJCP.2021.22.4.1069.9 Yu CB, Sun P, Zhang XW, et al. Dyremodellstudien av bukspyttkjertelkreft xenograft i nakne mus [J]. Progress in Modern Biomedicine, 2012, 12(9):1648-1650. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.10 Xu XR, Wang N, Sun MM, et al. Ulike effekter i osteosarkommodellmus med akupunktur ved enkeltpunkt og kompatibilitet av akupunkt [J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy, 2020, 35(5):2271-2276. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.11 Zhang HQ, Zhang AX, Du NS, et al. Effekter av Cistanche deserticola på immunfunksjonen til mus [J]. Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine, 1988, (12):736-737, 710. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZZXJ198812019.htm.12 Zhang HQ, Xu AH, Li DD. Farmakologiske effekter av Cistanche-polysakkarider på svulster og tumorbærende mus [J]. Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine, 1997, (S1):155-156, 294. https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=mg_qcPBBapnmsDqon66yc8-zI2VqwJgixywPNSnAl0qboPnZqB4FNuT0bsHSSvs0Dn72KZye9Q6SvxLic -S-Wcbp5ClislhRETaTYT6KGBMKP3_EreGXg3-BH52Itk0rqWiNksajNxzld06uvdfRzCDj-utLfgfANyySxJMHM-g==&uniplattform=}alder{164}NZKPT&lang. Xue HY, Jiao CY, Yao J. Nåværende status for farmakologiske effekter av glykosider av Cistanches Herba[J]. The Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2018, 34(4):486-488. DOI:10.13699/j.cnki.1001-6821.2018.04.026.14 Tang Y, Wu JQ. Antitumoreffekter av fenyletanoidglykosider fratatt Cistanche deserticola[J]. Current Biotechnology, 2023, 13(3):399-405. DOI:10.19586/j.2095-2341.2023.0040.15 Xu W, Ding JX, Xie XW, et al. Effekt av Cistanche deserticola på kjemoterapi-resistente osteosarkomceller og uttrykk for MRP1 og P53[J]. Journal of Li-shizhen Traditional Chinese Medicine, 2021, 32(3):551-554. DOI:10.3969/j.issn.1008-0805.2021.03.11.16 Hou XT, Liu T, Su DQ. Antitumoreffekt av fenyletanolglykosider fra Cistanche deserticola på H22-tumorbærende mus [J]. Journal of Toxicology, 2021, 35(3):231-235, 240. DOI:10.16421/j.cnki.1002-3127.2021.03.010.17 Zhang XY, Wang D, Fu CX, et al. Forskningsfremgang på behandling av svulster med interleukin-2[J]. Oncology Progress, 2024, 22(6):581-585, 618. DOI:10.11877/j.issn.1672-1535.2024.22.06.01.18 Gao SY, Li D. Forskningsfremskritt innen tumornekrosefaktor og kreft[J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2020, 36(9):1209-1213. DOI:10.3969/j.issn.1001-1978.2020.09.006.19 Zhou H, Hai GF, Zhang T, et al. Forskningsfremgang for PI3K/AKT/mTOR-veien og dens målrettede hemmere i kreftbehandling [J]. China Pharmaceuticals, 2023, 32(5):127-135. DOI:10.3969/j.issn.1006-4931.2023.05.030.20 Liu YJ, Cao YH, Kuang R. Forskning fremskritt for mekanismen for tumor-multimedikamentresistens og reversering av tradisjonell kinesisk medisin[J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2024, 59(7):561-570. DOI:10.11669/cpj.2024.07.001.21 Yang HD, Li N, Xie XW, et al. Kinesisk medisinmonomerer i behandling av osteosarkom ved å regulere PI3K/Akt/mTOR-signalveien: en gjennomgang[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2023, 29(3):254-262. DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.20221527.