Foreløpig undersøkelse av den fremmende effekten og mekanismen til polysakkarider fra Cistanche Deserticola på lymfocyttproliferasjon

Metoder

MTT-analyse ble brukt til å oppdage spredning av miltlymfocytter hos mus. Cyklofosfamid (Cy) ble brukt til å replikere dyremodeller av immunkompromitterte dyr, og milt- og thymusindeksene til normale og immunkompromitterte dyr ble målt. Aktiviteten til interleukin-2 (IL-2) ble målt med tymocyttproliferasjonsanalysen. Resultater: Cistanche deserticola polysaccharide fremmet signifikant spredningen av mitogen (ConA og LPS) aktiverte lymfocytter og ikke-aktiverte normale celler, og fremmet sekresjonen av IL-2 i lymfocytter. Intraperitoneal administrering viste at Cistanche deserticola polysakkarid signifikant økte miltindeksen til normale og immunkompromitterte mus, og hadde også en signifikant antagonistisk effekt på reduksjonen av tymusindeks forårsaket av Cy. Konklusjon: Cistanche deserticola-polysakkarid kan i betydelig grad fremme spredningen av miltlymfocytter hos mus, noe som kan være relatert til dets fremme av IL-2-sekresjon.

Ørken levende cistanche

[Stikkord]Cistanche deserticola polysakkarid; Milt indeks; Thymus indeks; Lymfocyttproliferasjon; Interleukin-2

Plantepolysakkarider har vakt stor oppmerksomhet på grunn av deres utbredte immunmodulerende effekter og relativt lave toksisitet [1]. Cistanche deserticola ma, kjent som "Desert Ginseng", er den skjellete, tørre, kjøttfulle stammen til Cistanche deserticola, en plante av Orobaceae, som har omfattende farmakologiske effekter. Vannavkoket kan øke den fagocytiske prosenten og den fagocytiske indeksen til makrofager betydelig. Ytterligere studier har vist at dets materielle grunnlag er det totale polysakkaridet av Cistanche deserticola [3]. Zeng Qunli et al. [4] har funnet at en enkelt komponent av Cistanche deserticola polysakkarid har en betydelig proliferativ effekt på musetymiske lymfocytter in vitro. Effekten av Cistanche deserticola polysakkarid på lymfocyttproliferasjon ble observert in vivo og in vitro.

Molekylformel for Cistanche deserticola

1 Materiale og metoder

1.1 Legemidler og reagenser

Polysakkaridet fra Cistanche deserticola er levert av plante- og kjemisk avdeling ved Institute of Medicine and Planting, Medical College. Det er ekstrahert fra Cistanche-ekstraktpulveret, og polysakkaridinnholdet er 87%.

Cistanche ekstrakt pulver

Før bruk av in vivo-eksperimenter, oppløses og fortynnes med fysiologisk saltvann til ønsket konsentrasjon, og kokes for sterilisering. Før bruk av in vitro-eksperimenter ble RPMI-1640-kulturmediet oppløst og fortynnet, og høytrykkssterilisering ble utført. Lipopolysakkarid (LPS), concanavalin (ConA), deksametason (DEX) og MTT er alle produkter fra Sigma Corporation. Cyclophosphamide, et kinesisk-amerikansk joint venture av Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd., føtalt bovint serum, RPMI1640 kulturmedium og trypsin er alle Gibco-produkter. Andre reagenser er innenlandske analytiske reagenser.

1.2 Dyr

BALB c unge mus (SPF-nivå) er levert av Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Beijing) 2002-2003]. Dyr av SPF-grad oppdras i et rom og får fritt mat og drikke.

1.3 Apparatur

Multikan Ascent enzymmarkør, et produkt fra Thermo Electron Company, USA. Leici PHS-3B Precision pH Meter, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., NAPCOo 5410 karbondioksidinkubator, NAPCO, USA. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Inverted Microscope, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.

1.4 Metode

1.4.1 Effekt på lymfocyttproliferasjon [5]:

Rutinemessig preparering av miltlymfocytter fra BALB/c-mus, ved å bruke RPMI-1640 for å justere cellekonsentrasjonen til 1 × 107 ml, inokulert på en 96-brønners kulturplate, med 100 cellesuspensjoner tilsatt til hver brønn μL-50. Den ble dyrket sammen med forskjellige konsentrasjoner av Cistanche deserticola polysakkarid (den endelige konsentrasjonen av Cistanche deserticola polysakkarid for spredning av ikke-aktiverte lymfocytter var 6,25, 12,5, 25, 50 og 100 mg/L i rekkefølge; den endelige konsentrasjonen av Cistanche deserticola-polysakkarid for proliferasjon av T-polysakkarid av proliferasjon av Cistanche deserticola var 6,25, 12,5, 25, 50 og 100 mg/L i rekkefølge; lymfocytter var 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 og 62,5 mg/L i rekkefølge, og den endelige konsentrasjonen av Cistanche deserticola polysakkarid for spredning av LPS-aktiverte B-lymfocytter var 1,56, 3,13, 6,25, 125, og LPS i rekkefølgen. RPMI-1640 medium ble brukt som kontroll. Det totale volumet av hvert hull er 200 μL. Ved tilsetning av mitogen ConA og LPS (kontrollen er RPMI-1640 som inneholder tilsvarende konsentrasjoner av ConA eller LPS), er sluttkonsentrasjonen av begge henholdsvis 2,5 mg/L og 10 mg/L. Det ble laget tre parallelle hull for ulike behandlinger. Plasser kulturplaten i en 37 graders, 5 % CO2 mettet fuktighetsinkubator i 68 timer, tilsett MTT og fortsett å dyrke i 4 timer. Mål A540 nm-verdien med en enzymmarkør ved å bruke MTT-metoden for å oppdage spredning. Når du sammenligner hver gruppe, konverter A540nm-verdien til lymfocyttproliferasjonshastighet i henhold til følgende formel:lymfocyttproliferasjonsrate=AA-prøve A-kontroll × 100 %.

Effekter av Cistanche - Forbedre immunitet

1.4.2 Effekt på vekten av immunorganer hos normale mus [6,7]:

Unge BALB c mus (hann, 4 uker gamle, med en kroppsvekt på 10-15 g) ble tilfeldig delt inn i en blindkontrollgruppe (saltvann) og forskjellige doseringsgrupper (125 mg (kg · kroppsvekt) og 250 mg (kg · kroppsvekt)), med 11 rotter i hver gruppe. Legemidlet ble administrert intraperitonealt en gang daglig i 7 påfølgende dager. Musene ble drept etter cervikal dislokasjon. Milten og thymus ble tatt, fett og fascievev ble fjernet, og overflatevæsken ble tørket med filterpapir. Etter veiing, miltindeksen=100 × miltvekt (mg) Kroppsvekt (mg); Hthymusindeksen=100 × Thymusvekt (mg) Kroppsvekt (mg). Beregn miltindeksen og thymusindeksen for henholdsvis hver 100 mg kroppsvekt.

1.4.3 Effekt på immunorganvekt hos immunkompromitterte mus [7,8]:

Unge BALB c-rotter (hann, 6 uker gamle, kroppsvekt 15-20 g) ble tilfeldig delt inn i 12 grupper etter kroppsvekt. Bortsett fra den normale kontrollgruppen (intraperitoneal injeksjon av et ekvivalent volum av fysiologisk saltvann), ble de andre gruppene injisert med Cy 50 mg (kg · kroppsvekt) daglig intraperitonealt, og testmedikamentoppløsningen ble administrert intraperitonealt [125 og 250 mg (kg · kroppsvekt)], den normale kontrollgruppen og modellgruppen ble gitt samme volum i 13 dager med samme fysiologiske dose i 13 dager. dag. Endringene i dyrevekt ble observert under forsøket. 24 timer etter siste administrering, milt- og thymusindeksene ble målt og beregnet ved bruk av samme metode som i 1.4.2.

1.4.4 Innvirkning på IL-2 aktivitet:

① Induksjon av IL-2 [9]: Tilsett 50 til hver brønn i en 96-brønns celleplate μ L Forskjellige konsentrasjoner av Cistanche deserticola polysakkarid (endelige konsentrasjoner i rekkefølge: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5 mg/0 brønn, 12, tilsett kontrollen i kontrollen L kulturmedium) og 50 μL ConA (sluttkonsentrasjon 5 mg/L), tilsett 1 til per brønn × 106 miltceller. Inkuber i en 37 graders, 5 % CO2 mettet fuktighetsinkubator i 24 timer, sentrifuger i 20 minutter ved 2500 r min., og ta cellesupernatanten og oppbevar den ved - 20 grader for standby. ② IL-2 aktivitetsdeteksjon [9,10]: Den grunnleggende metoden er basert på litteratur [9], og passende justeringer gjøres i henhold til litteraturen [10]. Konvensjonell tilberedning av BALB c musetymocytt-suspensjon, 96-brønners cellekulturplate, 1 inokulering per brønn × 106 tymocytter, mens du tilsetter 50 celler per brønn μL ConA (sluttkonsentrasjon 2,5 mg/L), og tilsett deretter den forberedte IL-2-supernatanten 50 μ L (tilsett L-kulturløsningen sammen i kuben 50), 54 timer, tilsett MTT, fortsett å inkubere i 4 timer, sentrifuger i 10 til 15 minutter ved 1000 r min., kast supernatanten og tilsett DMSO 100 per brønn μL, rist med en mikrooscillator i 8 minutter, og mål A540 nm-verdien med en enzymmarkør.

1.5 Statistisk analyse

Dataene ble uttrykt som gjennomsnitt og standardavvik (x ± s). Microsoft Excel-programvare ble brukt til å samle dataene, og en t-test ble utført. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. Resultater

2.1 Effekt på lymfocyttproliferasjon

Som det fremgår av tabell 1, kan tilsetning av Cistanche deserticola-polysakkarid til kulturmediet til musemiltlymfocytter dyrket in vitro ved en konsentrasjon over 25 mg/L i betydelig grad stimulere lymfocyttproliferasjon, noe som indikerer at Cistanche deserticola-polysakkarid i seg selv har en mitotisk effekt. Samtidig,det kan sees fra tabell 2 og tabell 3 at CDPS har en betydelig fremmende effekt på spredningen av ConA-induserte T-lymfocytter eller LPS-induserte B-lymfocytter.

Tab.1 Påvirkningen av Cistanche deserticola polysakkarid på spredningen av ikke-aktiverte lymfocytter (x ±s, n =3)

Ikke: sammenlignet med kontrollgruppen, ＊P<0.05.

Tab.2 Påvirkningen av Cistanche deserticola polysakkarid på proliferasjonen av T-lymfocytter indusert av ConA (x ±s, n =3)

 

Merk: sammenlignet med ConA-gruppen, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 Påvirkningen av Cistanche deserticola-polysakkarid på proliferasjonen av B-lymfocytter indusert av LPS (x ±s, n =3)

Merk: sammenlignet med LPS-gruppen, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

2.2 Effekt på vekten av immunorganer hos normale mus

Som det fremgår av tabell 4,Cistanche deserticola polysakkarid kan øke miltindeksen til normale BALB/cc unge rotter betydelig, men påvirker ikke thymuskjertelen.

2.3 Effekt på immunorganvekt hos immunkompromitterte mus

Fra tabell 5,det kan sees at milt- og thymusorganindeksene til mus i den Cy-immunsuppressive gruppen er lavere enn de i kontrollgruppen, og Cistanche deserticola-polysakkarid (125, 250 mg/kg) kan forbedre milt- og tymusindeksene betydelig.

2.4 Effekt på IL-2-aktivitet

Som det fremgår av tabell 6,når dosen av Cistanche deserticola polysakkarid når 7,82 mg/L, kan det øke frigjøringen av IL-2 betydelig fra miltceller fra mus.

Tab.4 Effekten av Cistanche deserticola polysakkarid på vekten av immunorganer hos normale mus (x ±s, n =11)

Merk: sammenlignet med kontrollgruppen, ＊＊P<0.01.

Tab.5 Effekten av Cistanche deserticola polysakkarid på vekten av immunorganer hos immundeprimerte mus (x ±s, n =12)

Merk: sammenlignet med kontrollgruppen, ## P < 0,01; sammenlignet med modellgruppen, ＊＊P<0.01.

Tab.6 Påvirkningen av Cistanche deserticola-polysakkarid på IL-2-produksjonen av miltlymfocytter hos mus( x ±s, n =3)

Merk: sammenlignet med kontrollgruppen, ＊＊P<0.01.

3. Diskusjon

ConA- og LPS-indusert splenisk lymfocyttproliferasjon hos mus er et in vitro-eksperiment for å oppdage funksjonen til T- og B-lymfocytter og er en viktig indikator på spesifikk immunevne. Studier har vist at når den endelige konsentrasjonen av Cistanche deserticola polysakkarid er over 25 mg/L, kan det fremme lymfocyttproliferasjon betydelig, noe som indikerer at det har en viss mitotisk effekt. I nærvær av mitogen (ConA eller LPS), kan en mindre dose av Cistanche deserticola polysakkarid forbedres hvis kroppen viser betydelig proliferativ aktivitet. Vi vet at ConA og LPS hovedsakelig induserer spredning av henholdsvis T-lymfocytter eller B-lymfocytter. Studier har vistcistanche pulver helsemessige fordeler: Cistanche deserticola polysakkarid kan fremme både T-lymfocyttproliferasjon og B-lymfocyttproliferasjon, men dets proliferative effekt på B-lymfocytter er betydelig sterkere enn på T-lymfocytter.

Cistanche pulver helsemessige fordeler-Improve immunitet

Klikk her for å se Cistanche Improve Immunity-produkter

【Be om mer】 E-post: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692

Thymus og milt er de viktigste immunorganene hos dyr. Immuncellene i milten er hovedsakelig modne B-lymfocytter, mens thymus hovedsakelig er umodne T-lymfocytter. Thymus- og miltindekser kan reflektere utviklingen av immunorganer og funksjonsstatusen til immunceller. Intraperitoneal injeksjon av Cistanche deserticola polysakkarid kan øke miltindeksen til normale og immunsupprimerte mus betydelig og har en betydelig antagonistisk effekt på tymisk atrofi indusert av Cy hos mus.

Cistanche deserticola-polysakkarid har ingen signifikant effekt på tymisk indeks hos normale dyr, noe som stemmer overens med resultatene fra in vitro-eksperimenter der Cistanche deserticola-polysakkarid fremmer spredningen av B-lymfocytter i stedet for T-lymfocytter.

Cistanche supplement nær meg-Forbedreimmunitet

IL-2 er et cytokin produsert av T-lymfocytter fra G1-fasen av cellesyklusen til S-fasen. Det er en viktig T-cellevekstfaktor som fungerer som en autokrin vekstfaktor. I tillegg kan IL-2 fremme B-celleproliferasjon og antistoffsyntese [11,12]. Cistanche deserticola-polysakkarid fremmer frigjøring av IL-2 fra lymfocytter, som åpenbart er relatert til Cistanche deserticola-polysakkarid som fremmer spredningen av miltlymfocytter.

Medisinsk forskning viser at Cistanche inneholder polysakkarider, Echinacosider og Acteoside, som kan aktivere lymfocytter og forbedre kroppen; de funksjonelle komponentene i cistanche Phenylethanoid Glycosides har en betydelig effekt på cellegjenoppretting etter 60 Co gammastråleskade, og kan også forbedre immunfunksjonen mot strålingsskader. Å ta Cistanche deserticola-tilskudd daglig kan oppnå effekten av å forbedre immuniteten.