Anti-irriterende strategi mot retinol basert på den genetiske analysen av koreansk befolkning: en genetisk veiledet topp-ned-tilnærming

Nøkkelord: retinol; retinoid;kosmetikk; anti-irritasjon; genetisk tilpasset; enkeltnukleotidpolymorfismer

Klikk her for å få mer informasjon om Cistanche anti-aldringsbehandling

1. Introduksjon

Retinoider, en familie av forbindelser avledet fra vitamin A som inkluderer både syntetiske og naturlige forbindelser, har blitt intensivt studert og brukt i ulike biomedisinske applikasjoner som f.eks.kreftbehandling(akutt myeloid leukemi), cervikal neoplasi, oghudlidelseri de siste tiårene. Den brede anvendelsen av retinoider, spesielt retinsyre, er basert på det vitenskapelige premissetretinsyreer involvert i en rekke biologiske veier i naturen ved å utløse interaksjoner mellom nukleære reseptorer som kontrollerer genuttrykk [1–5]. En av de mest slående anvendelsene av retinoider er den dermatologiske tilnærmingen, sammen med farmasøytiske legemidler og kosmetiske produkter. Siden retinoider først ble brukt til behandling av akne på 1940-tallet, er dens terapeutiske effekt mot hudsykdommer som aktinisk keratose, psoriasis og iktyose rapportert [6]. Ettersom mange vitenskapelige studier og kliniske studier viste den terapeutiske effekten av tretinoin (all-trans retinsyre) på fotoaldring, ble utviklingen av retinoidderivater for bruk som kosmetiske ingredienser utløst. Kosmetiske retinoider, som inkluderer retinylpalmitat, retinylacetat, retinol og retinal, har blitt intensivt undersøkt i det kommersielle markedet siden retinsyre ble forbudt i kosmetiske produkter av globale forskrifter som vedlegg II 375 (EC 1223/2009). Noen studier har avslørt at disse kosmetiske retinoidene også er effektive for behandling av fotoaldring, hvis patologiske egenskaper involverer fine og grove rynker, ruhet i huden og unormal pigmentering, og til og med hevdet at de er potente som tretinoin [7].

Imidlertid forårsaker retinoider irritasjon og noen bivirkninger preget av erytem, ​​flassing, svie og kløe, som også kalles retinoid dermatitt [8]. Noen studier har undersøkt mekanismen for irritasjon, og det er antydet at ulike mekanismer er involvert i retinoid-indusert irritasjon, som inkluderer omfattende og gjennomgripende betennelse karakterisert ved frigjøring av cytokiner og infifiltrering av immunceller [9], og hudbarriereforstyrrelser karakterisert. ved genetisk ubalanse av de forhornede konvolutten (CE)-relaterte faktorer [10,11]. I tillegg har fototoksisiteten til retinoid og dets nedbrutte biprodukter på grunn av dets ustabilitet under UV og varme blitt antydet mye for å bidra til retinoid-indusert irritasjon [12]. Imidlertid er disse observasjonene utilstrekkelige til å forklare den retinoid-induserte irritasjonen grundig, og ingen klar konklusjon er nådd til dags dato. Av denne grunn har nåværende retinolbaserte produkter vanligvis en "kjedelige" anti-inflammatorisk formel, som generelt og universelt brukes i generelle kommersielle produkter. Derfor er det ennå ikke etablert en anti-irritasjonsstrategi mot retinol basert på en sterk vitenskapelig bakgrunn.

En genetisk tilnærming kan være en annen løsning for å etablere en anti-irritasjonsstrategi mot retinol. Genetiske variasjoner ble grundig studert for å oppdage gener assosiert med legemiddeleffektivitet og bivirkninger [13]. Nelson et al. viste at legemidler forutsagt av kjente genetiske assosiasjoner kun utgjør 2,0 prosent av legemidlene på det prekliniske stadiet, selv om andelen øker til 8,2 prosent i godkjente legemidler [14]. Dette innebærer at fokusering på mål oppdaget av genetiske studier vil dramatisk øke sjansen for vellykket utvikling av legemidler, som demonstrert med legemidler for kolesterol eller revmatoid artritt [15–18].

Retinolbehandling induserer endringer i uttrykket av transkripsjonsfaktorer relatert til cellulær vekst [19] og strukturelle proteiner [11]. Mer spesifikt var en rekke proteiner involvert i retinol-indusert irritasjon, som inkluderer betennelsesrelaterte cytokiner (MCP-1, TNF-a, interferoner og interleukiner) [9], retinsyrereseptor (RARG) [ 20], smertefølende kanal forbigående reseptorpotensial vanilloid 1 (TRPV1) [21], og mastcelleaktiverende GPCR (MRGPRX2) [22]. Imidlertid har de fleste genetiske studier vært begrenset til et enkelt gen eller bane, og den omfattende mekanismen for retinoid dermatitt gjenstår å bli belyst. Derfor ble en "kandidatgen"-analyse av retinoid-indusert irritasjon utført for å screene for anti-irritanter mot retinoid dermatitt, og resultatene av det samme vil legge til den nåværende poolen av målgener for å studere retinoid dermatitt.

2. Materialer og metoder

2.1. Studere design

Denne studien ble designet som vist i figur 1. Kort fortalt ble fenotyping for retinol-indusert irritasjon fra den første kliniske evalueringen av 173 koreanere utført. Gjennom genetisk analyse ble genetiske markører screenet, og anti-irritanter og formler ble undersøkt. Deretter ble det utført en småskala pilotstudie (n=7) og storskala klinisk evaluering (2., n=91) ​​for å bekrefte antiirritasjonseffekten til den nyutviklede formelen.

Figur 1. Studiedesign. Øvre diagram (flytskjema) viser den overordnede prosedyren for studien. Den nederste tabellen angir de tre hovedtestene på menneskelig basis. Retinol1IU refererer til 3×10−5 prosent m/vinformuleringen.(2500IU=0.075% w/Iu.075 prosent w/IU; w;5000IU=0,15 prosent w/w).

2.2. Fenotyping av retinol-indusert irritasjon

ble informert om ingrediensene i kremen før forsøket, og deltakerne som hadde opplevd hudirritasjon på noen av ingrediensene i kremen, bortsett fra retinol, ble ekskludert fra forsøket. Den detaljerte prosedyren er beskrevet i støtteinformasjonen.

2.3. Enkelt nukleotidpolymorfisme (SNP) mikroarray

Genomisk DNA ble ekstrahert fra spyttprøver ved å bruke QIAmp Mini Prep Kit (QIAGEN, Germantown, MD, USA). Genotyping ble utført ved bruk av Global Screening assay versjon 2-brikken i henhold til Illumina Infifinium High-Throughput Screening (HTS) analyseprotokoll (Illumina, San Diego, CA, USA). Perleintensitet ble oppnådd ved bruk av iScan®-instrumentet og deretter brukt til å gi genotypedata ved bruk av GenomeStudio®-programvare (Illumina, San Diego, CA, USA).

Kvalitetskontroll av genotypedataene ble fortrinnsvis utført under følgende forhold: Blant de genotypede prøvene ble individer med en genotypeanropsfrekvens lavere enn 98 prosent ekskludert. For genotypede varianter ble SNP-er med ringehastigheter lavere enn 98 prosent, mindre allelfrekvenser lavere enn 1 prosent, avvik fra Hardy-Weinberg-likevekt (HWE p-verdi <1 × 10-6), og de som hadde mer enn to alleler ekskludert. Blant de 173 genotypede individene besto 159 QC-kriteriene og ble valgt ut for videre analyse.

2.4. Vurdering av irritasjon

De to typene kremer, nemlig kontrollkremen med 5000 IE retinol, og den anti-irriterende formelen (AF)-basert krem ​​med 5000 IE retinol, ble administrert til syv individer (tre menn og fire kvinner) i pilotstudien. Personene påførte kremene i ansiktet før leggetid på følgende måte: en krem ​​på den ene halvdelen av ansiktet og en annen på den andre halvdelen av ansiktet. Testpersonene ble blindet for kremen som inneholdt den anti-irriterende formelen (enkeltblindet). Etter tre dagers søknad ble forsøkspersonene bedt om å avslutte søknaden i 4 dager. Rødhet i huden og transepidermalt vanntap (TEWL) ble målt ved hjelp av henholdsvis et kromameter (CR-400, Konica Minolta, Osaka, Japan) og Tewameter® (TM 300 E, Courage plus Khazaka electronic GmbH, Köln, Tyskland). For å måle smertetrykksterskelen (PPT) ble det produsert og brukt et algometer med en sondediameter på 1 mm kombinert med en sylinder. Før målingen ble ansiktene til forsøkspersonene rengjort og akklimatisert i 20 minutter i et luftkondisjonert rom (temperatur, 23 ± 2◦C; relativ fuktighet, 50 ± 10 prosent).

Tatt i betraktning at retinoid-indusert irritasjon utløser et ekstremt bredt spekter av irritasjonstyper og alvorlighetsgrad, ser det ut til at tradisjonelle irritasjonsmålingsretningslinjer hovedsakelig fokuserer på erytem foreslått av Frosh- og CTFA-retningslinjene [23] ikke effektivt kvalifiserer eller kvantifiserer disse irritasjonene. Derfor redesignet vi selvevalueringsretningslinjen for hudirritasjon, som vist i tabell S1 (se tilleggsmaterialer). Denne selvevalueringen ble utført i en liten pilotstudie og en 2. storskala klinisk evaluering.

2.5. Celleforberedelse og in vitro-eksperiment

Detaljert informasjon om celleforberedelse og in vitro eksperimentelle prosedyrer er gitt i tilleggsinformasjonen. Kort fortalt ble keratinocytter, fifibroblaster, mastceller og TRPV{{0}}overuttrykkende HEK-er dyrket ved å bruke deres egne kulturprotokoller og eksperimenter. RT-PCR, -heksosaminidasefrigjøring og kalsiumtilstrømning ble analysert. 2.6. Statistisk analyse Statistisk analyse ble utført ved bruk av SNP og Variation Suit (SVS) v8.9.0 (Golden Helix, Bozeman, MT, USA) og PLINK 1.90 (Cambridge, MA, USA) [24]. For kandidatgenanalyse ble SNP-er innenfor kandidatgenene (inkludert promoterregion -2 kb og nedstrømsregion 500 bp) ekstrahert. Den statistiske signifikansen av assosiasjonene og oddsratioene ble bestemt ved en genotype assosiasjonstest med en additiv modell. Før beregningen av den polygene risikoskåren ble koblingsulikevekt (LD) undersøkt, og SNP-er ble valgt ved bruk av Haploview 4.2 (Cambridge, MA, USA). [25]. Alleler som viste økt tendens til retinol-indusert irritasjon ble brukt til analysen. Den polygene risikoskåren ble beregnet som den vektede summen av oddsratioene for hver allel [26]. Forbehandling av inndatadata, generering av et tilfeldig delsett av deltakere for gjentatt validering og beregning av polygen risikoscore ble utført ved å bruke en spesialskrevet kode i R v.4.0.3. GraphPad Prism v7.04 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) ble brukt til datavisualisering. Feilstreker hvis verdier ble utledet ved å dele hvert standardavvik med kvadratroten av antall prøver, vises i fifigurene.

I analysen av forekomstfrekvensen av irritasjon basert på det dikotome spørsmålet (om retinolkrem er irriterende: J/N), ble kjikvadrattesten utført for å undersøke den statistiske signifikansen.

3. Resultater og diskusjon

3.1. Foreslår målgener for screening av anti-irritanter mot retinol-indusert irritasjon

3.1.1. 1. klinisk evaluering – aktuell anvendelse av retinol og analyse av dets irriterende egenskaper

Vi undersøkte de irriterende egenskapene til retinol og dets forhold til hudfølsomhet hos 173 koreanske individer. De brukte retinol i 3 dager, som ble fulgt av en hvile på 4 dager i uken i 3 uker, hvor hver konsentrasjon av retinol gradvis økte hver uke (2500 IE i første uke, 3300 IE i 2. uke og 5000 IE i den tredje uken). Deretter analyserte vi spørreskjemaet mottatt etter eksperimentet for å undersøke faktorene relatert til retinol-indusert irritasjon.

En høyere andel av deltakerne i den sensitive hudgruppen rapporterte at de opplevde irritasjon sammenlignet med den ikke-sensitive hudgruppen (Figur 2a). Det ble også vist at personer som tilhører den sensitive hudgruppen hadde omtrent tre ganger større sannsynlighet for å ha tidligere erfaring med å stoppe bruk av kosmetiske produkter på grunn av hudirritasjon (Figur 2b). Blant de med tidligere irritasjonserfaringer, svarte de fleste at grunnleggende kosmetikk utløste irritasjon, som ble fulgt av solkrem, rensemidler og kosmetiske produkter (figur 2c). En høyere andel individer som hadde hudirritasjon av retinolprodukter tidligere svarte at de hadde irritasjon i dette forsøket sammenlignet med de som ikke hadde opplevd irritasjon ved bruk av retinolprodukter tidligere (Figur 2d). Dette resultatet avslørte at retinol-indusert irritasjon har en tendens til å oppstå gjentatte ganger avhengig av individer, noe som støtter hypotesen om at genetiske faktorer kan påvirke følsomheten for retinol. Tidligere studier har vist at genetiske variasjoner påvirker biotilgjengeligheten av retinol og retinoid signifikant, noe som støtter at genetiske faktorer også kan styre retinol-indusert irritasjon [27,28].

Typen irritasjon indusert av retinolbruk varierer sterkt mellom individer. Imidlertid var stikkende mest vanlig, som utgjorde omtrent tre fjerdedeler av irritasjonene og ble etterfulgt av svie, kløe og erytem (Figur 2e).

(c) Andelen individer som opplever irritasjon ved bruk av grunnleggende kosmetiske produkter. (d) Andelen individer med tidligere erfaring med irritasjon til produkter som inneholder retinol. (e) typer irritasjon som individer har opplevd under bruk av retinolholdige topiske produkter; * p-verdi < 0.05; *** p-verdi < 0,001; ns, ikke vesentlig.

3.1.2. Kandidatgenanalyse for retinol-indusert irritasjon

For å oppdage genetiske varianter assosiert med hudfølsomhet for retinol, valgte vi 14 kandidatgener som er kjent for sine funksjoner i retinoidmetabolisme og hudfølsomhet (tabell S2). Vi refererte til tidligere transkriptomisk analyse av den 3D-rekonstituerte huden under behandling av sensibilisatorer [29].

Totalt 319 SNP-er lokalisert i kandidatgenene ble valgt og brukt til assosiasjonsanalysen ved bruk av additivmodellen. Tretti SNP-er var signifikant assosiert med retinol-indusert irritasjon, hvorav ingen tidligere har blitt rapportert (p < 0.05; Tabell 1). I detalj ble totalt 12 SNP-er funnet i RARB, tre i EGFR, tre i CD44, to i IL18, to i IL4R og fire i BCL2. De andre fire genene, CD86, RXRB, MMP10 og COL6A2, inkluderte enkelt SNP-er. De oppdagede SNP-ene tilhørte 10 gener, hvorav to var retinol-relaterte gener, og de resterende åtte var relatert til generell hudfølsomhet ifølge tidligere studier. Blant de 10 genene valgte vi de tre viktigste genene når det gjelder hudirritasjon: COL6A2, EGFR og IL-4R.

COL6A2, som koder for en av de tre alfakjedene av type VI kollagen som finnes i de fleste bindevev, har vist seg å regulere dermal matrisesamling og fifibroblastmotilitet [30], og det bidrar til vevsremodellering og sårheling [31,32]. Denne defekten fører til keloiddannelse [33] og unormale hudfenotyper [34]. Epidermal vekstfaktorreseptor (EGFR) er en viktig regulator av epidermal barrierefunksjon. EGFR-signalering har vist seg å hemme kompetansen til den forhornede konvolutten og forstyrre tight junction-barrierefunksjonen i epidermale keratinocytter [35,36]. I tillegg til EGFR-signalering, antas også et annet bredt spekter av faktorer som ADAM17 (et disintegrin og metalloproteinase 17) [37] og TRP-kanal [38] å påvirke den epidermale barrierefunksjonen systematisk assosiert med EGFR.

I løpet av de siste tiårene har funksjonene og rollene til interleukin 4 (IL-4) og dets reseptor, IL-4R, blitt grundig undersøkt. Som en nøkkelregulator i det humorale og adaptive immunsystemet, induserer IL-4, som primært skilles ut fra mastceller og Th2-celler, differensiering av Th2-celler og stimulerer B-celler. Selv om dens rolle ikke er klart forstått, har mange studier påpekt at IL-4 kan drive omfattende pro- og betennelsesprosesser, mens dens defekt ble vist å drive allergisk sykdom, Alzheimers sykdom og svulster [39]. Langs den samme aksen for den IL-4-relaterte immunresponsen, uttrykkes IL-4R allestedsnærværende på ulike immunceller i både det medfødte og adaptive immunsystemet. IL-4R er en vanlig reseptor for både IL-4 og IL-13 [40]. I motsetning til IL-4, som direkte påvirker Th2-differensiering, er IL-13 også ansvarlig for å aktivere mastceller, som kontrollerer eosinofilfunksjonen, og den har immunsuppressive og anti-inflammatoriske effekter på makrofager ved å undertrykke pro-inflammatoriske cytokiner og kjemokiner [41].

3.2. Topp-ned-tilnærming: Screening av anti-irritanter in vitro

3.2.1. Vevsreparasjonsrelaterte gener, COL6A2 og EGFR

Basert på de utvalgte genene, screenet vi for anti-irritanter som kunne modulere molekylær patogenese, for eksempel å kontrollere uttrykket av målgenene.

Tidligere rapporter avslørte at retinoider induserer fysiologiske og morfologiske endringer i hudbarrieren [8,42,43]. Det ble observert at behandling av hudvev med retinsyre ex vivo og in vivo øker transepidermalt vanntap (TEWL), og flere studier har avslørt at denne forstyrrelsen av hudbarrierefunksjonen er mediert av et ubalansert uttrykksmønster av den forhornede konvolutten og tett. koblingsrelaterte gener. Nedreguleringen av filaggrin (FLG), loricrin og CLDN1, og oppreguleringen av CLDN2, CLDN4 og et signifikant forskjellig uttrykk for gener i serpinfamilien ble observert i en tidligere studie, som antas å være hovedårsaken til retinoid-indusert irritasjon [10,11]. \Vi antok at individer med genetiske variasjoner i COL6A2 og EGFR har en tendens til å være utsatt for svekkelse av hudbarrierefunksjonen av retinol, noe som fører til retinol-indusert irritasjon (Figur 3a). Vi vurderte også at bortsett fra kollagen VI, er kollagen IV også en viktig faktor i den epidermale basalmembranen og sårhelingsprosessen, selv om dens nøyaktige rolle i hudvevet fortsatt er uklar [44]. Vi antok at en mangel eller abnormitet av kollagen VI og IV fører til mottakelighet for retinol-indusert irritasjon, og overekspresjonen av begge typer kollagen kan svekke den retinol-induserte svekkelsen av hudbarrieren. Blant de ulike stoffene observerte vi at glukosamin økte ekspresjonen av COL6A2 og COL4A2 med henholdsvis 1.5- ganger og 1.7- ganger (Figur 3a, midtpanel). Den modulerende rollen til glukosamin på COL6A2 og COL4A2 har ikke blitt rapportert før, noe som innebærer at disse observasjonene er vitenskapelig viktige.

Når det gjelder EGFR, vurderte vi nøye tidligere forskning som indikerer at retinsyre induserer overekspresjon av aquaporin 3 (AQP3) gjennom EGFR/ERK-banen i humane keratinocytter [45]. I den første rapporten observerte vi at ikke bare retinsyre, men også retinol induserte AQP3-ekspresjonen med omtrent to ganger i fibroblaster (Figur 3a høyre panel). Dempningseffekten av AQP3-overuttrykk av niacinamid (nikotinamid) er lik den som ble funnet i en tidligere studie. Blant de forskjellige stoffene svekket trehalose og eupatilin retinol-indusert AQP3-overekspresjon. Eupatilin (5,7-dihydroksy-3',4',6-trimetoksyflavon), en type flavonoid som finnes i Artemisa asiatica, ble rapportert å forbedre hudbarrierefunksjonen under patologiske forhold in vivo [46].

I tillegg undersøkte vi uttrykket av FLG, som er en viktig indikator på hudbarrierefunksjon. I likhet med tidligere in vivo-studier [47], observerte vi at retinol signifikant reduserte uttrykket av FLG med omtrent 45 prosent, og denne nedgangen ble reversert av niacinamid, glukosamin og sukralfat (figur S1a, se tilleggsmaterialer).

Samlet kan glukosamin, trehalose og sukralfat lindre retinol-indusert hudbarriereforstyrrelse ved å modulere uttrykket av COL6A2, AQP3 og FLG.

3.2.2. Inflammatorisk gen: IL-4R

Deretter prøvde vi å identifisere anti-irritanter relatert til inflammatoriske gener. Basert på resultatene av genetisk analyse har det blitt vist at individer som er utsatt for retinol-indusert irritasjon har en tendens til å ha SNP-markører for IL-4R, men ikke IL-4. Først undersøkte vi om behandling med retinol modulerer uttrykket av IL-4 eller IL-4R i mastceller, som også er en primær driver av IL-4-relatert inflammasjon. Retinol induserte overekspresjonen av IL-4R 1.74-fold. Selv om retinol ikke induserte overekspresjonen av IL-4 (figur S1b, se tilleggsmaterialer), ble det observert at ektoin effektivt reduserer ekspresjonen av IL-4 i mastcellen, noe som er sammenfallende med tidligere studier som argumenterte for de antiinflammatoriske effektene av ektoin i noen sykdomsmodeller som IBD (inflammatorisk tarmsykdom) og allergisk luftveissykdom [48,49]. Mer spesifikt, tidligere studier viste at ektoin kunne normalisere uttrykket av IL-4 i CNP (karbonnanopartikkel)-indusert lungebetennelse i en in vivo-modell, noe som støtter våre eksperimentelle resultater [50].

Crocin, glukosamin og ektoin lindret den retinol-provoserte overekspresjonen av IL-4R i mastceller, med en nedgang på henholdsvis 37,03 prosent, 41,97 prosent og 82,59 prosent. Ektoin (1,4,5,6-tetrahydro-2-metyl-4-pyrimidinkarboksylsyre), en naturlig forbindelse som finnes i flere halofile bakterier, ble vist å modulere mange cytokiner og kjemokiner under inflammatoriske tilstander, selv om ektoins rolle i å forbedre uttrykket av IL-4R ennå ikke er klarlagt. Våre observasjoner gir ny innsikt i funksjonen til ektoin. Tidligere studie av vår gruppe viste at ektoin ved en optimal konsentrasjon på 100 ppm viste den høyeste antiinflammatoriske effekten mot effekten av retinoider og ubetydelig cytotoksisitet i det cellebaserte in vitro-eksperimentet (data ikke vist). Vi målte også -heksosaminidase-frigjøringshastigheten til mastceller, som er en indikator på mastcelledegranulering (figur 3b, høyre panel). Ektoin reduserte ikke retinol-indusert -heksosaminidase-frigjøring i 400 ppm retinol, selv om det reduserte retinol-indusert -heksosaminidase-frigjøring i 200 ppm retinol. Samlet kan det konkluderes med at ektoin kan lindre IL-4 og IL-4R-relatert betennelse indusert av retinol. Tatt i betraktning den tidligere forskningen om at ektoin intervenerer i aktiveringen av EGFR i CNP-indusert lungebetennelse [50], ser ektoin også ut til å være fordelaktig for forstyrrelse av hudbarriere indusert av retinol.

3.2.3. Nevrogen betennelse, Adiponectin og TRPV1

Et karakteristisk trekk ved retinol-indusert irritasjon hos ekstremt retinoid-sensitive pasienter er allergilignende reaksjoner som rask brennende og sviefølelse, kløe, raskt diffust ødem og utslett. En studie viste at retinoider, inkludert retinol og retinsyre, aktiverer TRPV1 [21]. Derfor antar vi at retinol-indusert irritasjon, spesielt som oppstår umiddelbart innen noen få minutter, formidles av aktiveringen av TRPV1 av retinol.

Figur 3. Analysen for mRNA-ekspresjon for å screene anti-irritanter som kan modulere irritasjonsassosiert molekylærpatogenese. (a) Undersøkelse for hudbarriereforstyrrelser assosiert molekylær patogenese Skjematisk diagram for tilnærmingen for genetisk modulering for retinol (ROL-indusert hudbarriereforstyrrelse. (venstre) Det relative mRNA-uttrykket av COL4A2 og COL6A2 når fifibroblaster ble behandlet med glukosamin (midt og) relativ mRNA-ekspresjon av AQP3 (keratinocytt, høyre). (b) Undersøkelse for inflammasjon (mastcelledrevet)-assosiert molekylær patogenese. Relativ mRNA-ekspresjon av IL-4R når RBL-2H3 ble behandlet med 1 0 µM retinol og ulike kandidater. (c) Nevrogen betennelse mediert med TRPV1 indusert av retinol og antagonistisk effekt av 4-t-butylcykloheksanol og omega-9; Tre betingelser for kombinasjon: (1) 4-t-butylcykloheksanol 25 µM og omega-9 5 µM, (2) 4-t-butylcykloheksanol 50 µM og omega-9 10 µM, og (3) 4- t-butylcykloheksanol 100 µM og omega-9 20 µM, BC, 4-t-butylcykloheksanol, OA, omega-9 oljesyre, En 50 µm skala (hvit) ble vist; * p < 0,05; ns, ikke signifikant; feillinjen ble vist; ppm, deler per million.

TRPV1, en ikke-selektiv kation aktivert av forskjellige fysisk-kjemiske stimuli, har blitt mye studert, spesielt dens rolle i huden. [51–54] Selv om TRPV1 ikke dukket opp i den forrige genetiske analysen, bør det bemerkes at adiponectin (ADIPQ) dukket opp i noen analysemodeller med lav til moderat statistisk signifikans. En tidligere studie av den koreanske befolkningen viste at den "sensitive" hudfenotypen ser ut til å være relatert til adiponektinmangel, som følgelig bidrar til oppregulering av TRPV1 [55]. TRPV1-overuttrykkende HEK293-celler ble behandlet med retinol, og aktiveringen av TRPV1 ble bekreftet ved å avbilde kalsiumtilstrømning. Vi observerte at retinol kunne aktivere TRPV1 på en doseavhengig måte (figur S1c, se tilleggsmaterialer). Ved konsentrasjoner over 50 µM syntes den agonistiske effekten på TRPV1 å nå et platå. Basert på en tidligere studie undersøkte vi om 4-t-butylcykloheksanol og omega-9 oljesyre kan motvirke TRPV1-aktivering indusert av retinol. Som forventet kan begge stoffene motvirke TRPV1, mens ved lav dosering var omega-9 oljesyre kraftigere enn 4-t-butylcykloheksanol (figur S1d, se tilleggsmaterialer). Kombinasjonen av disse to materialene viste en svak synergistisk effekt på inhiberingen av TRPV1 av retinol. Tre forskjellige konsentrasjoner av kombinasjonen av 4-t-butylcykloheksanol og omega-9 viste redusert aktivering av TRPV1 indusert av retinol, henholdsvis 28,25 prosent, 43,73 prosent og 68,50 prosent. Kalsiumtilstrømning inn i celler mediert av aktivering av TRPV1 ble observert under flfluorescerende mikroskopi (figur 3c). Avslutningsvis bekreftet vi at retinol-indusert irritasjon også kan være relatert til nevrogen betennelse mediert av TRPV1-aktivering i en in vitro-modell, og 4-t-butylcykloheksanol og omega-9-oljesyre kan brukes til å dempe nevrogen betennelse ved å antagonisere TRPV1.

E-post:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp pluss 86 15292862950