Carvedilol, en adrenerg blokker, undertrykker melaninsyntese ved å hemme CAMP/CREB-signalveien i humane melanocytter og ex vivo human hudkultur

Ta kontakt med:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Myoung Eun Choi 1,†, Hanju Yoo 1,2,†, Ha-Ri Lee 2,3, Ik Joon Moon 1, Woo Jin Lee 1,Youngsup Song 3,*,‡ og Sung Eun Chang 1

Abstrakt:Katekolaminer fungerer via G-proteinkoblede reseptorer, og utløser en økning i intracellulære nivåer på 30, 50-syklisk adenosinmonofosfat (cAMP) i forskjellige celler. Katekolaminbiosyntese og den -adrenerge reseptoren finnes imelanocytter; katekolaminer kan derfor spille en kritisk rolle i hudpigmentering. Imidlertid har deres virkning og mekanismer som medierer melanogenese umenneskelig hud ennå ikke blitt undersøkt. Derfor undersøkte vi den potensielle anti-melanogenetiske effekten av carvedilol, en ikke-selektiv blokker med svake 1-blokkerende aktiviteter. Karvedilolredusert melanininnhold og cellulær tyrosinaseaktivitet uten å kompromittere cellulær levedyktighet hos normale menneskermelanocytterså vel som i Mel-Ab udødeliggjorte musemelanocytter. Karvedilolnedregulert mikroftalmiassosiert transkripsjonsfaktor (MITF), tyrosinase, tyrosinase-relatert protein (TRP)-1 og TRP-2. Carvedilol-behandling førte til nedregulering av fosfor-cAMP-respons element-bindende protein (CREB). Dessuten reverserte økningen i cAMP-nivåer ved behandling med forskolin den anti-melanogene virkningen av karvedilol. I tillegg reduserte karvedilol bemerkelsesverdig melaninindeksen i ultrafiolettbestrålte humane hudkulturer. Til sammen indikerer resultatene våre at karvedilol effektivt undertrykker melanogenese hos menneskermelanocytterog ex vivohuman hud ved å hemme cAMP/proteinkinase A/CREB-signalering. De anti-melanogene effektene av karvedilol har potensiell betydning for hudenblekingagenter.

Nøkkelord:karvedilol; adrenerg blokker;melanin syntese; cAMP/CREB-signalering

Cistancheer i stand til å hemme melaninsyntesen

1. Introduksjon

Et bredt spekter av pigmentære hudsykdommer har en betydelig psykologisk og sosial innvirkning på pasienter. Ulike behandlingsmodaliteter, inkludert systemiske og aktuelle midler samt laserterapi, er utviklet [1–3]. Resultatene er imidlertid ofte utilfredsstillende og bivirkninger, som postinflammatorisk hyperpigmentering (PIH) og hypopigmentering, fra behandling er vanlige. I tillegg er behandlingen dyr og tidkrevende [4–6].

Katekolaminer, som inkluderer dopamin, epinefrin og noradrenalin, er signalmolekyler som fungerer som nevrotransmittere og endokrine hormoner. I huden skjer biosyntesen og nedbrytningen av katekolaminer i humane keratinocytter, men katekolaminsyntesen i melanocytter er noe annerledes [7–9]. Katekolaminer fungerer via G-proteinkoblede reseptorer (GPCR). Bindingen av katekolaminer til GPCR-ene utløser aktivering av intracellulær adenylatcyklase, som syntetiserer 30, 50-syklisk adenosinmonofosfat (cAMP) fra ATP [10]. Secondmessenger cAMP utøver sin aktivitet ved å binde R-subenheten til proteinkinase A (PKA), noe som resulterer i fosforylering av cAMP respons element-bindende protein (CREB). GPCR er aktivert av aminer og peptider, inkludert glukagon, parathyroidhormon, sekretin og kalsitonin [10].

Adrenerge reseptorantagonister inkluderer -reseptor- og -reseptorantagonister. – Reseptorantagonister er underkategorisert i ikke-selektive, 1-selektive og 2-selektive midler, mens -reseptorantagonister er underklassifisert som ikke-selektive, 1-selektive og 2-selektive agenter basert på deres selektive blokkeringsaktiviteter. I motsetning til førstegenerasjons ikke-selektive reseptorantagonister, som propranolol, timolol og nadolol, er karvedilol en tredjegenerasjons ikke-selektiv blokker som viser vasodilaterende virkninger ved å blokkere 1-adrenoreseptorer (1-AR) [11]. Derfor er karvedilol en ikke-selektiv blokker med svake 1-blokkerende aktiviteter [12]. Det brukes hovedsakelig som en oral medisin for å kontrollere høyt blodtrykk og kongestiv hjertesykdom, på samme måte som andre blokkere [12]. Tredjegenerasjonsblokkere viser imidlertid angiogene, antioksidant-, anti-proliferative, anti-hypertrofiske og anti-apoptotiske aktiviteter som krever ytterligere belysning [11]. På det dermatologiske feltet, på grunn av dets antioksidant og anti-inflammatoriske virkninger, brukes karvedilol ofte i orale formuleringer for å behandle rytematotelangiektatisk rosacea [13,14]. Dessuten resulterer antioksidantaktiviteten til karvedilol i forebygging av ultrafiolett (UV)-indusert hudkarsinogenese, noe som gjør det til et attraktivt middel for behandling av UV-assosierte hudsykdommer [15–18]. Imidlertid er de kjemopreventive effektene av carvedilolare ikke mediert direkte gjennom AR. [19] Selv om den eksakte mekanismen er relativt ukjent, kan cAMP/PKA- og PKC-δ-signalveien være relatert til egenskapene til karvedilol mot hudmetastaser [20].

I de tidlige stadiene av å undersøke pigmentering, menneskemelanocytterble funnet å uttrykke -1-AR-signalering etter ekstracellulær induksjon med noradrenalin. Imidlertid ble ikke -AR-er funnet etter stimulering med adrenerg signaleringmelanocytter[8]. Omvendt har Cillbro et al. Demonstrerte senere at et spesifikt funksjonelt 2-AR-signal eksisterer i humane melanocytter og at 2-AR-stimulering fører til pigmentering gjennom 2-AR/cAMP-banen [7]. Derfor ble katekolaminenes rolle i kontroll av pigmentering foreslått, og cAMP regnes som hovedaksen for katekolaminkontroll av melanogenese.

Melanogenese er en kompleks prosess som involverer mange veier. Tyrosinase, tyrosinase-relatert protein 1 (TRP-1) og TRP-2, også kalt dopakrom tautomerase (DCT), er de tre viktigste melanocyttspesifikke enzymene som er involvert imelanin syntese[21]. Melanogenese induseres eller hemmes av en rekke faktorer, inkludert hormoner, cytokiner, nevrotransmittere, vekstfaktorer og mikromolekyler [21–23].

Den viktigste positive regulatoren er melanokortin-1-reseptoren og dens ligander, melanokortiner og adrenokortikotropt hormon [23]. Imidlertid er forskjellige faktorer involvert i melanogenese -endorfin, østrogener, androgener, vitamin D3 og katekolaminer [23]. Kumulativt bevis har antydet at L-tyrosin og L-DOPA, som er substrater og mellomprodukter av melanogenese, virker som indusere og positive regulatorer av den melanogene veien, i tillegg til regulatorer av andre cellulære funksjoner [24]. Dessuten har Jeff Howe et al. antydet at induksjon og regulering av melanogenese av L-tyrosin er mediert av direkte aktivering av adrenerge reseptorer av L-tyrosin, snarere enn forårsaket av dets metabolske produkter som katekolaminer [25]. I deres studier stimulerte noradrenalin og epinefrin tyrosinaseaktivitet, men deres induktive effekt påmelanin syntesevar relativt lavere enn L-tyrosin [25].

Katekolaminer kan spille viktige roller i hudpigmenteringssystemet; deres effekt på melanogenese med hensyn til virkningen av tredjegenerasjons ikke-selektive blokkerer er ennå ikke undersøkt. Derfor, i denne studien, hadde vi som mål å undersøke om karvedilol påvirker melanogenese og utforsket dens virkningsmekanismer hos menneskermelanocytterog ex vivo menneskelig hud og dens potensielle bruk som enblekingprodukt.

hemme melanindannelsen medherba cistanches

2. Resultater

2.1. Carvedilol undertrykker melanogenese

Cytotoksisiteten til karvedilol mot normalt menneskemelanocytter(NHMs) og Mel-ab-celler ble vurdert ved en WST-celleproliferasjonsanalyse. En karvedilolkonsentrasjon på 10 µM begynte å vise cytotoksisitet mot både NHM-er og Mel-ab-celler (figur 1A, B). Derfor brukte vi i videre vurderinger 8 µM karvedilol, som ikke er cytotoksisk for NHM.

Behandling med karvedilol reduserte melanininnholdet på en doseavhengig måte uten å påvirke levedyktigheten til NHM (Figur 1C). Melanininnholdet ble redusert med 28,36 prosent etter 96 hof 8 µM karvedilolbehandling (figur 1C). Tilsetning av 100 mg/ml arbutin reduserte melanininnholdet i mindre grad enn karvedilol (figur 1C). Etter 4 dager med karvedilolbehandling, reduserte melanininnholdet på en tidsavhengig måte (Figur 1D). Imidlertid induserte behandling med forskolin (FSK) i 4 dager etter forbehandling med karvedilol en økning i melanininnholdet (figur 1E). FSK øker transkripsjonen av MITF i størst grad etter 2 timer i NHM og antas å fungere via cAMP /PKA/CREB-vei (Figur 1F).

2.2. Carvedilol hemmer uttrykket av MITF og dets målgener og reduserer fosfo-CREB-nivåer i NHM

Fordi karvedilol reduserte melaninakkumulering, undersøkte vi cellulær tyrosinaseaktivitet. Behandling med karvedilol reduserte cellulær tyrosinaseaktivitet på en doseavhengig måte i NHM (Figur 2A). Tyrosinaseaktiviteten sank med 28,48 prosent etter 96 timer med 8 µM karvedilolbehandling (figur 2A). Vi bestemte deretter om karvedilol påvirker uttrykket av MITF, som spiller en avgjørende rolle i reguleringen av tyrosinase og nedstrøms melanogene gener. FSK-behandling økte intracellulære cAMP-nivåer og reverserte de anti-melanogene virkningene til karvedilol. Carvedilol reduserte proteinnivåene til MITF, en sentral transkripsjonsfaktor for melanogenese, signifikant ved 72 timer (figur 2B). Videre ble uttrykket av målgenene, som tyrosinase og TRP-1, redusert etter karvedilolbehandling (figur 2B). Disse resultatene indikerer at karvedilol hemmer melanogenese ved å nedregulere MITF-signalering.

Deretter undersøkte vi de intracellulære signalveiene til melanogenese, som regulerer MITF-transkripsjon, ved å måle ekspresjonsnivåene til fosfo-CREB og fosfo-ERK. Fosfo-ERK-nivåer endret seg ikke over tid etter karvedilolbehandling; Imidlertid ble fosfo-CREB-nivåene redusert (figur 2B). I samsvar med tidligere observasjoner viste resultatene våre at carvedilolin hemmer melanogenese ved å hemme cAMP/PKA/CREB-signalveien. Dessuten reverserte FSK-behandling den anti-melanogene virkningen av karvedilol ved å øke cAMP-nivåene.

2.3. Melaninindeks og immunhistokjemisk farging i ex vivo human hudkultur

Den epidermale melanocytttettheten og melaninindeksen i ex vivo humane hudkulturvevsseksjoner ble påvist ved henholdsvis Melan-A og Fontana–Massons farging. Carvedilol påvirket ikke antall Melan-A ( pluss )melanocytteri prøven behandlet med carvedilol pluss UV-stråling (UVR) sammenlignet med prøven behandlet med UVR alene (Figur 3A). HMB45(pluss)melanocytter kan indikere at melanocytisk aktivitet økte ved UVR-behandling og ble reversert nedregulert etter karvedilolbehandling (figur 3B). Melanininnholdet ble imidlertid betydelig redusert i prøver behandlet med carvedilol pluss UVR sammenlignet med det i UVR-alene behandlede prøver (figur 3C). For å beregne melaninindeksen ble brøkdelen av Fontana–Massons fargede område over det totale arealet mellom en prøve eksponert for UVR og den for carvedilol pluss UVR beregnet og sammenlignet (figur 3D). Cellelysater av hver prøve ble analysert ved Western blotassay, som viste at tyrosinase, TRP1 og DCT ble økt ved UVR og nedregulert av karvedilolbehandling (figur 3E). Som et resultat reduserte carvedilol bemerkelsesverdig melaninindeksen og melanogenese-relaterte proteiner, noe som viste dens anti-melanogene effekt på UVR-behandlet menneskelig hud.

3. Diskusjon

Melanin er pigmentet som er ansvarlig for hud- og hårfarge og syntetiseres i melanosomer avmelanocytter. Selv om epidermalt melanin spiller en viktig beskyttende rolle mot UVR, forårsaker melaninoverproduksjon og akkumulering i huden plagsomme hudhyperpigmentære lidelser, som PIH, fotoaldringsassosiert dyspigmentering, melasma og solar lentiginer [18,26]. Derfor har hemming av melanogenese vært i fokus for medisinske og kosmetiske behandlinger for hudskjønnhet og helse. Det er gjort betydelige anstrengelser for å identifisere nye og effektive anti-pigmenteringsmidler. Imidlertid er anti-melanogenese-mekanismene til de spesifikke midlene for tiden usikre og har generelt blitt evaluert i museceller, noe som gir resultater som ikke alltid er i samsvar med resultatene fra humane hudforsøk [27,28]. Ettersom melanogenesen til melanocytter er tett regulert av keratinocytter og andre naboceller, er samdyrkede humane celler eller ex vivo human hud mer pålitelige eksperimentelle innstillinger for utforskning av effektiveblekingagenter [29]. De fleste hudblekende midler, enten de er naturlig eller kjemisk avledet, kan forårsake hudtoksisitet eller irritasjon, noe som kan forutsies til en viss grad ved å bruke in vitro cellelevedyktighetsanalyser med melanocytter. I vår studie viste ikke carvedilol cytotoksisitet når det ble brukt i moderate doser.

cistanche bienfaits

Lokale hydrokinonkremer kan resultere i uønskede hypopigmenteringsforstyrrelser og hudtoksisitet [30–32]. Dessuten noenblekingKosmetikk har katastrofale konsekvenser ved å indusere hypopigmentering gjennom nedbrytning av tyrosinaseproteiner [33–35]. Blekemidler kan brukes i høyere doser, avhengig av brukeren, for å maksimere blekingen av hyperpigmentære lesjoner. Derfor er arbeidet med å oppdage trygge og sunne hudblekemidler kontinuerlig under utforskning.

Derfor ble denne studien designet for å bli utført i normale humane celler og ex vivohuman hud. Videre, basert på katekolaminers etablerte virkningsmekanisme for G-signalering, som øker det cellulære cAMP-nivået, trodde vi at en adrenerg blokker kunne redusere cAMP-nivåer og hemme UVR/cAMP/CREB-signalveien, som er hovedmekanismen for UV-indusert hudhyperpigmentering [36,37]. Derfor antok vi at adrenerge blokkere som reduserer cAMP-nivåene reduserermelanin syntese.

I tillegg til å utvikle trygtblekingmidler, pålitelige og reproduserbare mekanismer for anti-melanogenese bør følges parallelt. Den mest fysiologisk signifikante stimulansen er UV, og blant UVR-signalering til epidermalmelanocytter, er CREB-aksen den mest etablerte veien for regulering av melanogenese i den menneskelige epidermis [29]. Eksponering for UV aktiverer suksessivt cAMP-produksjon, PKA og transkripsjonsfaktoren CREB, som igjen induserer uttrykket av MITF og nedstrøms melanogene målgener [38,39]. I tillegg til CREB-fosforylering ved PKA, har nyere studier vist at rekruttering av CREB-regulert transkripsjonskoaktivator (CRTC) 3 til CREB-transkripsjonskomplekset også er nødvendig for cAMP-stimulert MITF. MITF utfører den viktigste rollen i reguleringen avmelanin synteseog den resulterende transkripsjonen av melanogene enzymer [26,40,41]. Under denne intracellulære signaleringsprosessen reguleres melanogenese av et nøkkelenzym, tyrosinase og ytterligere enzymatiske proteiner, som TRP-1 og DCT [1–4]. I denne studien reduserte karvedilol effektivt fosforyleringen av CREB, som indikerer at det reduserte MITF- og tyrosinaseproteiner ved å hemme MITF-transkripsjon (figur 4). Med tanke på at MITF mRNA-genregulering er intrikat kontrollert og reddet av andre intracellulære signalmolekyler og koaktivatorer, er transkripsjonsnivåreguleringen av MITF en lovende strategi for å utforske sunne hudblekende ingredienser fordi overlevelsesfunksjonen til MITF bevares og reddes [1,38,40]. Faktisk, da vi undersøkte FSK-indusert MITF-transkripsjon, ble MITF mRNA funnet å ha sin egen toppresponskurve for melanogenese og cellulær overlevelse for cellulær homeostase. De biologiske funksjonene tilmelanocytterså ut til å være iboende regulert av andre tilbakemeldingssignaler i humane melanocytter. Dessuten har karvedilol en lavere risiko for uønskede hendelser av hypopigmentering da det svekker cellulær tyrosinaseaktivitet over tid, snarere enn brått.

Katekolaminer inkluderer dopamin, adrenalin og noradrenalin og syntetiseres fra dietttyrosin ved påvirkning av enzymer [42]. Biosyntesen og nedbrytningen av katekolaminer forekommer i et bredt spekter av celler, inkludert nevronene til sympatiske nerver og hjernen, adrenomedullære celler, endotelceller, nøytrofiler og mononukleære celler [43–45]. I menneskelig hud forekommer katekolaminsyntese i keratinocytter. Omvendt uttrykker melanocytter også mRNA og enzymer for autokrin syntese av noradrenalin, men ikke epinefrin [7,42]. Hos mennesketmelanocytter, -1-AR kan være viktig i reaksjonen på noradrenalin, menmelanin synteseer også påvirket av funksjonell 2-AR-signalering [7,8]. Interessant nok har pasienter med vitiligo økt 2-AR-tetthet i keratinocytter [46]. Økte noradrenalinnivåer finnes i urin og plasma hos pasienter med ikke-segmentalvitiligo, noe som antyder at katekolaminmetabolisme kan være assosiert med utvikling og progresjon av vitiligo [47]. Dessuten, i tillegg til klassiske stress-nevrotransmittere, produserer melanocytter nevropeptider og hormoner, som kortikotropinfrigjørende faktor og proopiomelanokortin. Denne produksjonen stimuleres av UVR og andre midler som virker i hudens nevroendokrine system [48]. Derfor er virkningen av katekolaminer og melanocytisk funksjon nært beslektet i en rekke komplekse veier. Videre kan karvedilol forstyrre de kjemiske reaksjonene i den melanogene veien, og denne muligheten bør studeres videre. Carvedilol kan ha fordeler siden det har samtidige antiinflammatoriske effekter, da de fleste hyperpigmentære lidelser er PIH klinisk eller subklinisk hos mørkhudede pasienter. Siden permeasjonen av karvedilol gjennom huden har blitt studert både in vitro og ex vivo, kan karvedilol utvikles som en aktuellblekingagent i fremtiden [49–51].

Systemisk administrasjon av karvedilol kan forårsake bradykardi, svimmelhet, hypotensjon, hodepine og svimmelhet. Den topiske påføringen av karvedilol forårsaker vanligvis ikke systemiske symptomer, men vi bør være nøye med disse symptomene når vi påfører det til pasienter med defekte hudbarrierer, slik som de med atopisk dermatitt. Dessuten er eksem, kløe og lichenoidutbrudd rapportert i sjeldne tilfeller når du tar karvedilol. Disse dermatologiske bivirkningene så vel som kontaktdermatitt bør også tas i betraktning ved påføring av karvedilol som topikalblekingmiddel.

Avslutningsvis viste vi at karvedilol effektivt reduserte melanogenese hos menneskermelanocytterog ex vivo menneskelig hud ved å hemme cAMP/CREB/MITF-veien, noe som antyder dens potensielle bruk som et effektivt blekemiddel. Ytterligere undersøkelse av den funksjonelle involveringen av adrenergereseptoren av karvedilol i humane melanocytter bør følge.

4. Materialer og metoder

4.1. Materialer

Carvedilol, 3,4-dihydroksy-L-fenylalanin (L-DOPA), koleratoksin (CT) og 12-Otetradecanoylphorbol-13-acetat (TPA) ble kjøpt fra Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA). Fetalt bovint serum (FBS), antibiotika-antimykotisk og trypsin-EDTA ble kjøpt fra Gibco (Grand Island, NY, USA). Medium 254 (CascadeBiologics, Portland, OR, USA) og FSK ([3R-(3 ,4a ,5 ,6 ,6a ,10 ,10a ,10b )]-5-(Acetyloxy)-3-ethenyldodecahydro{ {24}},10,10b-trihydroksy-3,4a,7,7,10a-pentametyl-1H-nafto[2,1-b]pyran-1-on ) ble kjøpt fra Tocris Bioscience (Bristol, Storbritannia).

4.2. Cellelinjer og cellekultur

Primære NHMer oppnådd fra Invitrogen (Carlsbad, CA, USA) ble opprettholdt i Medium 254 (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) supplert med Human Melanocyte Growth Supplement (Thermo Fisher). Mel-ab-celler, en mus-avledet spontant udødeliggjort melanocyttcellelinje, ble hentet fra Korean Cell Line Bank (KCLB, Seoul, Korea) og opprettholdt i DMEM supplert med 10 prosent FBS, penicillin-streptomycin, 100 nM TPA og 1 nM CT. Alle cellene ble rutinemessig holdt ved 37 ◦C i et fuktet miljø med 5 prosent CO2.

4.3. Antistoffer og Western Blots

Cellene ble vasket én gang med kald PBS og lysert i proteinlysebuffer (1 prosent SDS i 10 mMTris og 5 mM EDTA, pH 7,4), etterfulgt av inkubering ved 98 ◦C i 10 minutter. Proteinprøvene ble separert med 8 prosent SDS-polyakrylamidgelelektroforese, blottet på nitrocellulosemembraner (GE Healthcare Life Sciences, Chicago, IL, USA), og deretter blokkert med Tris-bufret saltvann inneholdende 0,5 prosent Tween 20 og 5 prosent BSA, og utsatt for immunblotting. Tyrosinase- og TRP-1-antistoffer ble kjøpt fra Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, USA), og MITF ble kjøpt fra Abcam (Cambridge, Storbritannia). -tubulin (Gentex, Holland, MI, USA) ble brukt som en intern lastekontroll.

4.4. Melanin innhold

Den cytotoksiske effekten av karvedilol ble evaluert ved å bruke Ez-Cytox Cell Viability Assay Kit (Dogen-Bio Co., Ltd., Seoul, Korea) i samsvar med produsentens instruksjoner. Mel-Ab-celler og NHM-er ble sådd i seks-brønns plater ved en tetthet på henholdsvis 6 × 105 og 3 × 105 celler/brønn. Celler ble behandlet med karvedilol, som vist i figurene, i 3 eller 5 dager (d). Før måling av melanininnholdet ble cellene observert under et fasekontrastmikroskop og fotografert (Olympus, Tokyo, Japan). Celler ble oppløst i 550 µL 1 N NaOH ved 100 ◦C i 30 minutter og sentrifugert ved 13,{16}} rpm i 5 minutter. Absorbansen til supernatantene ble målt ved 405 nm av en mikroplateavleser. Det intracellulære melanininnholdet ble presentert som en prosentandel i forhold til cellenes ubehandlede kontroll. Arbutin (100 mg/ml) ble brukt som en positiv kontroll.

4.5. Cellulær tyrosinaseaktivitet

Tyrosinaseaktiviteten ble evaluert ved å måle graden av dopakromdannelse av L-DOPA. Etter inkubasjon med karvedilol ble cellene vasket i iskald PBS og lysert i tyrosinaselysebuffer (fosfatbuffer, pH 6,8, inneholdende 1 prosent Triton X{ {5}}) med gjentatte fryse-/tinesykluser. Lysatene ble klarnet ved sentrifugering ved 15,000 rpm ved 4 ◦C i 10 min. Etter å ha kvantifisert proteinnivåene til lysatet og justering av proteinkonsentrasjonene med lyseringsbuffer, ble 90 µL supernatant blandet med 10 µL 10 mM L-DOPA i tyrosinase-lysebuffer inkubert ved 37 ◦C. Cellulær tyrosinase-aktivitet ble målt ved å lese av tyrosinase-aktiviteten 475 nm med en mikroplateleser hvert 10. minutt i minst 1 time. Arbutin (100 mg/ml) ble brukt som et positivt kontrollmiddel.

herba cistanches

4.6. Immunhistokjemisk analyse

Parafininnstøpt menneskelig hudvev ble kuttet i 6-µm tykke seksjoner og farget med Melan-A (Novocastra, Newcastle, Storbritannia), Fontana-Masson-sett (ID-laboratorier, London, ON, Canada) og HMB45 (Santa Clara) , CA, USA), i henhold til produsentens instruksjoner. Melaninindeksen ble bestemt ved å måle prosentandelen av farget område til det totale vevsarealet ved å bruke ImageJ 1.52a-programvare (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA).

4.7. Statistisk analyse

Dataene presenteres som gjennomsnitt ± standardfeil for gjennomsnittet (SEM), og statistisk signifikans ble bestemt ved en uparet Students t-test ved bruk av GraphPad Prism5 programvare (San Diego, CA, USA). I denne studien ble p < 0.05,="" p="">< 0.01="" og="" p="">< 0.001="" ansett="" som="" statistisk="" signifikante="" og="" er="" representert="" med="" *,="" **="" og="" ***,="">

Referanser

1. Gillbro, JM; Olsson, MJ Melanogenesen og mekanismene til hudlysende midler - Eksisterende og nye tilnærminger. Int. J. Cosmet. Sci. 2011, 33, 210–221. [CrossRef] [PubMed]

2. Lee, YJ; Shin, HJ; Nei, TK; Choi, KH; Chang, SE Behandling av melasma og postinflammatorisk hyperpigmentering med en Picosecond 755-nm Alexandrite Laser hos asiatiske pasienter. Ann. Dermatol. 2017, 29 779–781. [CrossRef] [PubMed]

3. Lee, YJ; Park, JH; Lee, DY; Lee, JH Ervervet bilateral dyspigmentering på ansikt og hals: klinisk passende tilnærminger. J. Korean Med. Sci. 2016, 31, 2042–2050. [CrossRef] [PubMed]

4. Kang, HJ; Na, JI; Lee, JH; Roh, MR; Ko, JY; Chang, SE Postinflammatorisk hyperpigmentering assosiert med behandling av solenergilentiginer ved bruk av en Q-Switched 532-nm Nd: YAG-laser: En multisenterundersøkelse.J. Dermatolog. Behandle. 2017, 28, 447–451. [CrossRef] [PubMed]

5. Kato, H.; Araki, J.; Eto, H.; Doi, K.; Hirai, R.; Kuno, S.; Higashino, T.; Yoshimura, K. En prospektiverandomisert kontrollert studie av oral tranexamsyre for å forhindre postinflammatorisk hyperpigmentering etter Q-switched rubinlaser. Dermatol. Surg. 2011, 37, 605–610. [CrossRef] [PubMed]

6. Taylor, CR; Anderson, RR Ineffektiv behandling av refraktær melasma og postinflammatorisk hyperpigmentering med Q-switched rubinlaser. J. Dermatol. Surg. Oncol. 1994, 20, 592–597. [CrossRef]

7. Gillbro, JM; Marles, LK; Hibberts, NA; Schallreuter, KU Autokrin katekolaminbiosyntese og beta-adrenoceptorsignalet fremmer pigmentering i humane epidermale melanocytter. J. Investig. Dermatol.2004, 123, 346–353. [CrossRef]

8. Schallreuter, KU; Korner, C.; Pittelkow, MR; Swanson, NN; Gardner, ML Induksjonen av alfa-1-adrenoreseptorsignaltransduksjonssystemet på humane melanocytter. Exp. Dermatol. 1996, 5, 20–23.[CrossRef]

9. Sivamani, RK; Shi, B.; Griffiths, E.; Vu, SM; Lev-Tov, HA; Dahle, S.; Chigbrow, M.; La, TD; Mashburn, C.; Peavy, TR; et al. Akutt sår endrer beta2-adrenerg signalering og katekolaminsynteseveier i keratinocytter. J. Investig. Dermatol. 2014, 134, 2258–2266. [CrossRef]

10. Emery, AC Katekolaminreseptorer: Prototyper for GPCR-basert medikamentoppdagelse. Adv. Pharmacol. 2013, 68 335–356.

11. Do Vale, GT; Ceron, CS; Gonzaga, NA; Simplicio, JA; Padovan, JC Tre generasjoner av betablokkere: historie, klasseforskjeller og klinisk anvendelighet. Curr. Hypertens. Rev. 2019, 15, 22–31. [PubMed]

12. McTavish, D.; Campoli-Richards, D.; Sorkin, EM Carvedilol: En gjennomgang av dets farmakodynamiske og farmakokinetiske egenskaper og terapeutisk effekt. Drugs 1993, 45, 232–258. [CrossRef] [PubMed]

13. Hsu, CC; Lee, JY Uttalt rødme i ansiktet og vedvarende erytem av rosacea effektivt behandlet av carvedilol, en ikke-selektiv beta-adrenerg blokker. J. Am. Acad. Dermatol. 2012, 67, 491–493. [CrossRef][PubMed]

14. Pietschke, K.; Schaller, M. Langsiktig behandling av distinkt ansiktsrødme og vedvarende erytem ofrosacea ved behandling med karvedilol. J. Dermatolog. Behandle. 2018, 29, 310–313. [CrossRef] [PubMed]

15. Chang, A.; Yeung, S.; Thakkar, A.; Huang, KM; Liu, MM; Kanassatega, RS; Parsa, C.; Orlando, R.; Jackson, EK; Andresen, BT; et al. Forebygging av hudkreft med betablokkeren karvedilol. KreftForrige Res. 2015, 8, 27–36. [CrossRef] [PubMed]

16. Chen, M.; Liang, S.; Shahid, A.; Andresen, BT; Huang, Y. Betablokkeren Carvedilol forhindret ultrafiolett-mediert skade på murine epidermale celler og 3D menneskelig rekonstruert hud. Int. J.Mol. Sci. 2020, 21, 798. [CrossRef] [PubMed]

17. Huang, KM; Liang, S.; Yeung, S.; Oiyemhonlan, E.; Cleveland, KH; Parsa, C.; Orlando, R.; Meyskens, FL, Jr.;Andresen, BT; Huang, Y. Topisk påført karvedilol svekker solar ultrafiolett stråling-indusert hudkarsinogenese. Kreft Forrige. Res. 2017, 10, 598–606. [CrossRef]

18. Brenner, M.; Hørsel, VJ Melaninets beskyttende rolle mot UV-skader i menneskelig hud. Photochem.Photobiol. 2008, 84, 539–549.

19. Cleveland, KH; Liang, S.; Chang, A.; Huang, KM; Chen, S.; Guo, L.; Huang, Y.; Andresen, BT Carvedilolin hemmer EGF-mediert JB6 P pluss kolonidannelse gjennom en mekanisme uavhengig av adrenoceptorer. PLoS ONE 2019, 14, e0217038. [CrossRef]

20. Dzong, G.; Zhongbing, M.; Qinye, F.; Zhigang, Y. Carvedilol undertrykker migrasjon og invasjon av ondartede brystceller ved å inaktivere Src som involverer cAMP/PKA og PKCdelta signalvei. J. Cancer Res. Ther.2014, 10, 998–1003.

21. Rzepka, Z.; Bussman, E.; Beberok, A.; Wrzesniok, D. Fra tyrosin til melanin: signalveier og faktorer som regulerer melanogenese. Postepy Hig. Med. Dosw. Online 2016, 70, 695–708. [CrossRef]

22. Kim, Y.; Cho, JY; Å, SW; Kang, M.; Lee, SE; Jung, E.; Park, YS; Lee, J. Globulært adiponektin virker som et melanogent signal i humane epidermale melanocytter. Br. J. Dermatol. 2018, 179, 689–701. [CrossRef][PubMed]

23. Slominski, A.; Tobin, DJ; Shibahara, S.; Wortsman, J. Melaninpigmentering i pattedyrhud og dens hormonelle regulering. Physiol. Rev. 2004, 84, 1155–1228. [PubMed]

24. Slominski, A.; Zmijewski, MA; Pawelek, J. L-tyrosin og L-dihydroksyfenylalanin som hormonlignende regulatorer av melanocyttfunksjoner. Pigment Cell Melanoma Res. 2012, 25, 14–27. [CrossRef] [PubMed]

25. Howe, J.; Costantino, R.; Slominski, A. Om den antatte mekanismen for induksjon og regulering av melanogenese av L-tyrosin. Acta Derm Venereol. 1991, 71, 150–152.

26. D'Mello, SA; Finlay, GJ; Baguley, BC; Askarian-Amiri, ME signalveier i melanogenese. Int. J.Mol. Sci. 2016, 17, 1144. [CrossRef]

27. Jung, JA; Kim, BJ; Kim, MS; Du, HJ; Yoon, ES; Dhong, ES; Park, SH; Kim, DW Beskyttende effekt av botulinumtoksin mot ultrafiolett-indusert hudpigmentering. Plast. Rekonstr. Surg. 2019, 144, 347–356.[CrossRef]

28. Jeong, YM; Å, WK; Tran, TL; Kim, WK; Sung, SH; Bae, K.; Lee, S.; Sung, JH Aglycone of Rh4hemmer melaninsyntese i B16 melanomceller: Mulig involvering av proteinkinase A-veien.Biosci. Bioteknologi. Biochem. 2013, 77, 119–125. [CrossRef]

29. Kim, YH; Kim, D.; Hong, AR; Kim, JH; Yoo, H.; Kim, J.; Kim, I.; Kang, SW; Chang, SE; Song, Y. Therapeutic Potential of Rottlerin for Skin Hyperpigmentary Disorders ved å hemme transkripsjonsaktiviteten til CREB-regulerte transkripsjonskoaktivatorer. J. Investig. Dermatol. 2019, 139, 2359–2367.e2.[CrossRef]

30. Das, A.; Ghosh, A.; Kumar, P. Kjemisk leukodermi på grunn av hydrokinon: Et uvanlig fenomen. Indiske J.Dermatol. Venereol. Leprol. 2019, 85, 567. [CrossRef]

31. Jow, T.; Hantash, BM Hydrokinon-indusert depigmentering: Kasusrapport og gjennomgang av litteraturen. Dermatitt 2014, 25, e1–e5. [CrossRef]

32. Kersey, P.; Stevenson, CJ Vitiligo og yrkeseksponering for hydrokinon fra selvfotograferende maskiner. Kontakt Dermat. 1981, 7, 285–287. [CrossRef] [PubMed]

33. Sasaki, M.; Kondo, M.; Sato, K.; Umeda, M.; Kawabata, K.; Takahashi, Y.; Suzuki, T.; Matsunaga, K.;Inoue, S. Rhododendron, en depigmenteringsinduserende fenolforbindelse, utøver melanocyttcytotoksisitet via en tyrosinaseavhengig mekanisme. Pigment Cell Melanoma Res. 2014, 27, 754–763. [CrossRef] [PubMed]

34. Yoshikawa, M.; Sumikawa, Y.; Hida, T.; Kamiya, T.; Kase, K.; Ishii-Osai, Y.; Kato, J.; Kan, Y.; Kamiya, S.; Sato, Y.; et al. Klinisk og epidemiologisk analyse i 149 tilfeller av rhododendron-indusert leukoderma.J. Dermatol. 2017, 44, 582–587. [CrossRef] [PubMed]

35. Harris, JE Kjemisk-indusert vitiligo. Dermatol. Clin. 2017, 35, 151–161. [CrossRef] [PubMed]

36. Li-Sha, G.; Yi-He, C.; Na-Dan, Z.; Teng, Z.; Yue-Chun, L. Effekter av karvedilolbehandling på hjerte-cAMP-responselementbindende proteinekspresjon og fosforylering ved akutt coxsackievirus B3-indusert myokarditt. BMC Cardiovasc. Uorden. 2013, 13, 100. [CrossRef] [PubMed]

37. Zhang, F.; Steinberg, SF S49G og R389G polymorfismer av beta(1)-adrenerge reseptorer påvirker signalering via cAMP-PKA og ERK-veiene. Physiol. Genom. 2013, 45, 1186–1192. [CrossRef]

38. Lee, AY; Noh, M. Reguleringen av epidermal melanogenese via cAMP og/eller PKC signalveier: Innsikt for utvikling av hypopigmenterte midler. Arch. Pharm. Res. 2013, 36, 792–801. [CrossRef]

39. Garcia-Borron, JC; Abdel-Malek, Z.; Jimenez-Cervantes, C. MC1R, cAMP-veien og responsen på solenergi UV: Forlengelse av horisonten utover pigmentering. Pigment Cell Melanoma Res. 2014, 27, 699–720.[CrossRef]

40. Lin, CB; Babiarz, L.; Liebel, F.; Roydon Price, E.; Kizoulis, M.; Gendimenico, GJ; Fisher, DE; Seiberg, M. Modulering av mikroftalmi-assosiert transkripsjonsfaktor genuttrykk endrer hudpigmentering.J. Undersøk. Dermatol. 2002, 119, 1330–1340. [CrossRef]

41. Kim, JH; Hong, AR; Kim, YH; Yoo, H.; Kang, SW; Chang, SE; Song, Y. JNK undertrykker melanogenese ved å forstyrre CREB-regulert transkripsjonskoaktivator 3-avhengig MITF-uttrykk. Theranostics2020, 10, 4017–4029. [CrossRef] [PubMed]

42. Rios, M.; Habecker, B.; Sasaoka, T.; Eisenhofer, G.; Tian, ​​H.; Landis, S.; Chikaraishi, D.; Roffler-Tarlov, S. Katecholaminsyntese medieres av tyrosinase i fravær av tyrosinhydroksylase. J. Neurosci. 1999,19, 3519–3526. [CrossRef] [PubMed]

43. Cosentino, M.; Marino, F.; Bombelli, R.; Ferrari, M.; Lecchini, S.; Frigo, G. Endogen katekolaminsyntese, metabolisme, lagring og opptak i humane nøytrofiler. Life Sci. 1999, 64, 975–981. [CrossRef]

44. Marino, F.; Cosentino, M.; Bombelli, R.; Ferrari, M.; Lecchini, S.; Frigo, G. Endogen katekolaminsyntese, metabolismelagring og opptak i humane perifere mononukleære blodceller. Exp. Hematol.1999, 27, 489–495. [CrossRef]

45. Sorrento, D.; Santulli, G.; Del Giudice, C.; Anastasio, A.; Trimarco, B.; Iaccarino, G. Endotelceller er i stand til å syntetisere og frigjøre katekolaminer både in vitro og in vivo. Hypertension 2012, 60, 129–136.[CrossRef] [PubMed]

46. ​​Cucchi, ML; Frattini, P.; Santagostino, G.; Preda, S.; Orecchia, G. Katekolaminer øker i urinen fra ikke-segmentell vitiligo, spesielt under dens aktive fase. Pigment Cell Res. 2003, 16, 111–116. [CrossRef][PubMed]

47. Salzer, BA; Schallreuter, KU Undersøkelse av personlighetsstrukturen hos pasienter med vitiligo og mulig assosiasjon med nedsatt katekolaminmetabolisme. Dermatologi 1995, 190, 109–115. [CrossRef][PubMed]

48. Slominski, A. Nevroendokrin aktivitet av melanocytten. Exp. Dermatol. 2009, 18, 760–763. [CrossRef]

49. Gannu, R.; Vishnu, YV; Kishan, V.; Rao, YM In vitro-permeasjon av karvedilol gjennom svinehud: Effekt av bærere og penetrasjonsforsterkere. PDA J. Pharm. Sci. Teknol. 2008, 62, 256–263.

50. Kshirsagar, SJ; Bhalekar, MR; Mohapatra, SK Utvikling og evaluering av carvedilol-belastet transdermalt legemiddelleveringssystem: In vitro og in vivo karakteriseringsstudie. Drug Dev. Ind. Pharm. 2012, 38, 1530–1537. [CrossRef]

51. Tanwar, YS; Chauhan, CS; Sharma, A. Utvikling og evaluering av carvedilol depotplastre. Acta Pharm. 2007, 57, 151–159. [CrossRef] [PubMed]