Kinesisk medisin Cistanche Kjemisk sammensetning og analyse av komponenter i kroppen Ⅲ

Kapittel 2 Kvalitativ studie om den kjemiske sammensetningen av Cistanche deserticola

Cistanche er den tørre skjellete blad kjøttfulle stammen avCistanche deserticola YC.Maog Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. Det er en av de berømte nyre-yang nærende tradisjonelle kinesiske medisinene. Den har funksjonene tilnærende nyre-yang, fyller på essens og blod og fukter Den har en avføringseffekt og brukes ofte til å behandle impotens, infertilitet, ømhet i midje og knær, svakhet i muskler og bein, tørr tarm og forstoppelse, etc. Den har farmakologiske effekter som anti- demens, anti-Parkinsons sykdom, beskyttelse mot cerebral iskemi og forbedring av lærings- og hukommelsesevner. For å avklare det materielle grunnlaget foreffektiviteten til Cistanche deserticola, bruker dette kapittelet HPLC og LC-IT-TOF-MS for å karakteriserekjemiske komponenter i Cistanche. Basert på en systematisk oppsummering av krakkingsreglene til ulike typer kjemiske komponenter, analyseres egenskapene til Cistanche deserticola systematisk. Kjemisk sammensetning, for å gi rike data fra pålitelige kilder forinngående belysningav de medisinske egenskapene tilCistanche deserticolain vivo.

buy cistanche

HVOR LANG TAR DET FØR CISTANCHE FUNGERER?

Seksjon 1 Eksperimentelt materiale

1. Instrument

Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS væskemassespektrometer (utstyrt med 2 LC-20ADXR-pumper, SIL-20AC automatisk prøvetaker, CTO-20AC kolonneovn, SPD-M20A UV-detektor, DGU-20A3R dekontamineringsgassmaskin, CBM-20A-kontroller, ESI-ionekilde, Shimadzu Company, Japan), Milli-Q ultrarent vannrensesystem (Milipore Company, USA): Mettler ME204 elektronisk analytisk balanse ( Mettler Toledo Company, Sveits).

2. Reagenser

Metanol av kromatografikvalitet og massespektrometrikvalitet, acetonitril og maursyre av massespektrometrikvalitet ble kjøpt fra Thermo-Fisher Company (Pittsburgh, PA, USA). Vannet var Milli-Q ultrarent vann laget i laboratoriet (Millipore, Bedford, MA, USA). Resten reagenser er alle av analytisk kvalitet.

Salidrosid, 6-deoksykatalpol, 8-epi-logansyre, echinakosid, acteosid, isosid Verbascoside (isoacteosid,) og pinoresinol- -D-glukopyranosid (pinoresinol- -D-glukopyranosid) ble begge levert av professor Tu Pengfeis forskningsgruppe ved Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs ved Peking University. Sarcoside F ( cistanosideF) ble kjøpt fra Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanoside A (cistanoside A), 2'-acetylacteosid (2'-acetylacteosid), 2'-acetylpoliumosid (2'-acetylpoliumosid), cistanoside polyglucosid (poliumosid) ), cistanoside E (cistanosideE), isocistanoside E (isocistanosideE), cistanoside C (cistanosideC), isocistanoside C (isocistanosideC) og cistanoside D (cistanosideD) ble alle kjøpt fra Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd., tubuloside A (tubulosideA) tubuloside B (tubulosideB) ble kjøpt fra Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.

Del 2 Eksperimentelt innhold

1. Prøveforberedelse

1.1 Fremstilling av referansestoff

Vei nøyaktig passende mengder av forskjellige referansestoffer i "Seksjon 1 Eksperimentelle materialer" ovenfor og klargjør 10 mM stamløsninger med DMSO. Pipetter nøyaktig 2 mL av hver stamløsning og fortynn den med 25 % acetonitril for å lage en 2 μM blandet kontrollløsning. 1.2 Klargjøring av prøveløsning

Det vandige ekstraktet av Cistanche deserticola ble laget av vårt laboratorium, og prøven er lagret i Modernization Research Center of Traditional Chinese Medicine, School of Traditional Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine. Ta 20 mg Cistanche deserticola-pulver, tilsett 40 ml vann for å løse opp, vortex og bland, sentrifuger ved 10000 rpm i 10 minutter, og ta supernatanten. Det vil si at testløsningen oppnås.

3. Massespektrometriforhold

Elektrosprayionekilde (ESI), skanningsmodusen er å skanne positive og negative ioner samtidig og automatisk utløse multi-level massespektrometri. Masseskanningsområdet til MS'~MS' for positive ioner er m/z50~800, og for negative ioner er m/z100~1000. Spenningen til spraykammeret er henholdsvis 4,5 kV og -3,5 kV: strømningshastigheten for forstøvningsgass (Nz) er 1,5 Lmin; tørkegasstrykket er 110 MPa; deteksjonsspenningen er 1,55 kV; temperaturen på det buede løsemiddelrøret (CDL) og varmemodulen er begge 200 grader. Kollisjonskammertrykket er 1,5e-Pa; ionefelletrykket er 2,8e-Pa; antall repetisjoner av de positive og negative første trinnene er 1, og ioneakkumuleringstiden er 30 ms; antall repetisjoner av de positive og negative andre trinnene er 2, og ioneakkumuleringstiden er 20ms. ; Kollisjonsindusert dissosiasjonsenergi (CID) er 50 %.

Del 3 Resultater og diskusjon

Kolonnevalg

For å oppnå bedre kromatografisk separasjon undersøkte vi omfattende kromatografiske kolonner fra forskjellige produsenter og spesifikasjoner, for eksempel ACEUltraCore 2.5 SuperC8 kromatografisk kolonne (3.0x150 mm, 2.5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, Skottland), Shiseido Capcell Core Ci8 (2,1 mm x 150 mm, 2,7 μm), Waters Acquity UPLC HSS T3-kolonne (2,1 x 100 mm, 1,8 μm, Milford, MA, USA) og Capcell Core ADME-kolonne (2,1x150 mm, Shiseido Corporation, 2,7μm, Japan). Gjennom systematisk sammenligning ble det funnet at ved bruk av Capcell Core ADME-kromatografikolonnen (2,1x150 mm, 2,7μm, Shiseido Co., Ltd., Japan), kan hvert kromatografisk signal separeres bedre (Figur 3-1).

2. Valg av væskefaseforhold

Siden de viktigste kjemiske komponentene iCistanche deserticolaer fenyletanolglykosider, lignaner, iridoider og andre forbindelser, reagerer det generelt bedre under negative ionforhold. For å identifisere kjemiske komponenter på lavt nivå i vannekstraktet til Cistanche deserticola, spekuleres det i at det kan være nødvendig å tilsette syrer til den mobile fasen for å øke kraften. Derfor brukte dette eksperimentet vann-metanol, vann-acetonitril, 0.1% maursyre vann-metanol og 0.1% maursyre vann-acetonitril som mobilfasesystemer for undersøkelse. Det ble funnet at 0.1 % maursyrevann-acetonitril hadde den beste separasjonseffekten, med god toppform og stor toppkapasitet, så 0.1 % maursyrevann og acetonitril ble valgt som mobil fase. 3. Kvalitativ analyse av kjemiske komponenter. Bruk 19 eksisterende referansestoffer for å utforske massespektrometri-fragmenteringsreglene for ulike typer forbindelser i Cistanche deserticola. De blandede referansestoffene er PDA-kromatogrammer ved 340 nm på ADME-kolonnen og BPC-diagrammer i positive og negative ionemoduser. Se figur 3-1. Vi gjennomgikk relevant litteratur gjennom PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP og Wanfang, etc., og konstruerte en selvlaget database med kjemiske komponenter av Cistanche deserticola. Basert på sammenligningen av massespektrometri-fragmenteringsregler og retensjonstider for kjente forbindelser, identifiserte vi foreløpig 45 forbindelser i Cistanche deserticola. forbindelser, inkludert 31 fenyletanolglykosider, 9 iridoider, 3 benzylglykosider og 2 lignaner, som vist i tabell 3-1.

buy cistanche

Ved å sammenligne konfidensialitetstiden, MS' spektrum og MS' spektrum for referansestoffet, forbindelsene 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 ble sekvensielt Nøyaktig identifisert som genipin, cistanchein F, cistancheosid E, echinaceaside, chrysantoside, cistanchein A, tuberosin A, lerchresinol 4-0- -D glukosid, mullein glykosider, isocannabinoid glykosid, pinoresin monomethyl glycoside glycoside 2 C, isosistankosid C, tuberosin B og cistancheglykosid D.

Dette eksperimentet bruker HPLC-IT-TOF-MS-teknologi for raskt og nøyaktig systematisk å analysere de komplekse kjemiske komponentene i vannekstraktet til Cistanche deserticola, noe som gir grunnlag for omfattende kvalitetsanalyse av Cistanche deserticola og forskning på farmakologiske stoffer in vivo.

buy cistanche