Cistanche-baserte kapsler lindrer kronisk ikke-bakteriell prostatitt hos rotter ved å modulere tarmmikrobiota, serummetabolitter og SPHK1/S1P1/PI3K/Akt-signalveien

3.5 Serummetabolomisk analyse av CBC i EAP-rotter

3.5.1 Multivariat statistisk analyse av fekal metabolomikk

Hovedkomponentanalyse (PCA) avslørte klare gruppeseparasjoner under positiv ionemodus blantnormal-, modell- og høydose CBC-grupper, medCBC-gruppe grupperer seg nærmere normalgruppenog lenger fra modellgruppen. Under negativ ion-modus ble delvis overlapping observert mellom normal- og modellgruppen, mens CBC-behandlede prøver fortsatt viste god diskriminering (figur 5).

Partiell minste kvadraters diskriminantanalyse (PLS-DA) bekreftet en sterk klassifiseringseffekt på tvers av alle tre gruppene under begge ioniseringsmodusene. De200-gangers permutasjonstestvaliderte modellens pålitelighet, med enQ² avskjæring under 0,05, som indikerer ingen overtilpasning. En nedadgående trend iR²- og Q²-verdierlangs X-aksen bekreftet ytterligere modellstabilitet (Figur 6).

CISTANCHE-BASERT FORMELTE

Kjøp nå

 

 

 

 

 

3.5.2 Identifikasjon av differensielle metabolitter påvirket av CBC

Differensielle serummetabolitter ble filtrert basert påVIP > 1fra PLS-DA,fold endring Større enn eller lik 1, ogp < 0,05. Etter å ha ekskludert eksogene forbindelser,10 signifikante endogene metabolitterble identifisert (tabell 9).

 

3.5.3 KEGG Pathway Enrichment Analysis

KEGG-anrikningsanalyse av differensialmetabolittene indikerte detCBC-behandling kan modulere viktige metabolske veierinvolvert i kronisk prostatitt. De berikede veiene inkluderte:

Sfingolipidmetabolisme

Retinol metabolisme

Glycin-, serin- og treoninmetabolisme

Glyserofosfolipidmetabolisme

Arakidonsyremetabolisme(Figur 7)

Disse banene er kjent for å spille viktige roller iimmunregulering, oksidativt stress og betennelse.

3.5.4 Korrelasjon mellom differensielle metabolitter og tarmmikrobiota

Spearman-korrelasjonsanalyse ble utført mellom de 10 differensielle metabolittene og signifikant endrede bakterielle taxa. Viktige sammenhenger inkluderer:

PA(6-keto-PGF1 /i-20:0): positivt korrelert medLactobacillusogRomboutsia ilealis, negativt medNeglectibacter timonensis

SM[d16:2/20:4-2OH]: positivt korrelert medParaprevotella claraogRomboutsia ilealis

PS[18:1/20:0]: positivt korrelert medRomboutsia ilealis, negativt medOscillospiraceae

lysoPA(0:0/18:0): negativt korrelert medLactobacillusogRomboutsia ilealis, positivt medNeglectibacter timonensis

Ureidoisosmørsyre: negativt korrelert medParaprevotella clara

16(R)-HETEog(2R,3R)-2-aminooktadekan-1,3-diol: positivt korrelert medNeglectibacter timonensis

Sfingosin: negativt korrelert medRomboutsia ilealis, positivt medNeglectibacter timonensis

lysoPA(18:0/0:0)ogRetinoyl-glukuronid: negativt korrelert medBifidobacterium animalisogRomboutsia ilealis(Figur 8)

Disse korrelasjonene tyder påen sterk kobling mellom CBC-induserte metabolomiske endringer og tarmmikrobiotamodulering.

 

3.6 Regulering av SPHK1/S1P1/PI3K/Akt Pathway av CBC

Western blot-analyse viste detSPHK1- og S1P1-proteinuttrykk var signifikant forhøyet i modellgruppensammenlignet med normalgruppen. CBC (høydose) betydelignedregulerte SPHK1- og S1P1-proteinnivåer. Ingen signifikant forskjell ble observert i SPHK2-ekspresjon blant gruppene (Figur 9, Tabell 10).

I tillegg,PI3K og Aktekspresjonsnivåene ble betydelig redusert i modellgruppen, mensp-PI3K og p-Aktnivåene ble betydelig økt, noe som indikerer aktivering av vei. CBC behandlinggjenopprettet PI3K- og Akt-nivåeroghemmet deres fosforylering, reduserep-Akt/Akt og p-PI3K/PI3K forhold.

Disse resultatene tyder på detCBC hemmer SPHK1/S1P1/PI3K/Akt-signalveien, som bidrar til dens anti-inflammatoriske effekt.

4. Diskusjon

Kronisk ikke-bakteriell prostatitt (CNP) står for over90 % av alle prostatittdiagnoserog er assosiert med en kompleks etiologi, inkludertpatogen mikrobiell infeksjon, oksidativt stress, immunforstyrrelser og autoimmune responser [20–21].

Nyere bevis tyder på detbetennelse og autoimmuniteter sentrale for CNP-patogenesen [22–24]. Deeksperimentell autoimmun prostatitt (EAP) rottemodell, som etterligner human CNP i histopatologi og immunrespons, ble derfor valgt [25].

I våre tidligere farmakokjemistudier i serum ble CBC-komponenter funnet ihøyere mengde i avføring enn i serum, antyderintestinal interaksjon som en primær handlingsvei(se CNKI Enhanced Publication Materials).

CBC forbedrer prostatapatologi og inflammatoriske indekser

HE-farging viste at CBC lindretlymfocyttinfiltrasjon, restaurertacinar struktur, og øktekjertelsekret. CBC betydeligredusert antall leukocytteri prostata homogenater og restaurertlecithin kroppstetthet-begge nøkkel CNP diagnostiske markører [26–28]. Betennelse fører til epitelskade og redusert lecitinsekresjon, mens aktiverte makrofager oppsluker lecitinlegemer [29]. CBC reverserte effektivt disse patologiske endringene.

CBC ogsåreduserte pro-inflammatoriske cytokiner(TNF-, IL-1, IL-6, IL-8, IL-2, iNOS) ogforhøyet antiinflammatorisk IL-10, som støtter dens kraftige antiinflammatoriske virkning.

 

CBC regulerer tarmmikrobiota dysbiose

CNP er nært knyttet tilubalanse i tarmmikrobiota, som kan reduserekortkjedede fettsyrer (SCFA)og kompromittere tarmbarrieren, slik atLPS-translokasjonog utløser prostatabetennelse viamikrobielt assosierte molekylære mønstre (MAMPs) [30].

Studier viser detCistanche polyfenolerforbedre mikrobiota ubalanse og modulere viktige taxa involvert iinflammatorisk tarmsykdom (IBD)[31]. I denne studien,Lactobacillus og Bifidobacterium animalisble utarmet i EAP-rotter, men kom seg etter CBC-behandling. Disse probiotika er kjent for å lindre urogenital betennelse [32–33]. I kontrast,Veillonella, ofte beriket i autoimmune tilstander [34], ble forhøyet i EAP-rotter og redusert etter CBC-administrasjon. TilsvarendePrevotellaceae, assosiert med prostatakreft [35], ble beriket i EAP-gruppen og redusert med CBC.

 

CBC modulerer sentrale metabolske veier

Metabolomikk avslørtsfingosinhøydei EAP-rotter, betydelig redusert av CBC, noe som tyder på involvering isfingolipidmetabolisme. Sfingolipider er sentrale strukturelle og signalmolekyler involvert icellevekst, apoptose og immunregulering [36].

Sfingosin-1-fosfat (S1P), syntetisert avSPHK1/2, er en potent lipidformidler som binder seg tilS1P-reseptorer (S1PRs)for å regulere handel med immunceller og er involvert iinflammatoriske og autoimmune sykdommer[37–39]. S1PR-modulatorenFTY720 (fingolimod)har vist seg å redusere betennelse og vevsskade i EAP-modeller [40].

S1P aktiverer også nedstrøms veier somPI3K/Akt, som er assosiert med kronisk betennelse. I vår studie, CBCnedregulert SPHK1 og S1P1, og hemmetPI3K og Akt fosforylering, noe som antyder en regulatorisk effekt på denne kritiske aksen.

 

Konklusjon

Denne studien, integreretarmmikrobiotasekvensering og umålrettet metabolomikk, viser detCistanche-baserte kapsler (CBC)effektivt:

Forbedretskade på prostatavev

Undertrykkinflammatoriske cytokiner

Restaureregunstig tarmflora

Reguleresfingolipidmetabolisme

InhibereSPHK1/S1P1/PI3K/Akt signalering

Disse funnene giroverbevisende bevisfor CBCs potensial som enmulti-target urteterapi for kronisk ikke-bakteriell prostatitt, og tilbyr envitenskapelig grunnlag for utvidet klinisk anvendelse.