Cistanche: Echinacosid-indusert nitrogenoksidproduksjon i endotelceller: rollene til androgenreseptoren og PI3K-Akt-banen

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

LI GU, dANHONG LIAN, YIMEI ZHENG, WEI ZHOU, JINLEI GU og XIN LIU

Introduksjon

CistancheHoffmg. Et Link er en flerårig parasitturt av en slekt av Orobanchaceae-familien. HerbaCistanche, stammen tilCistanche deserticolaY. c. MA ogCistanche tubulosa(Schenk) R. Vekt, har blitt brukt som styrkende middel for å behandle nyremangel, impotens, sykelig leukoré og senil obstipasjon (1), som kan skyldes dens androgenlignende eller kjønnshormonregulerende effekt (2).Echinacoside(EcH; c35H46O20;

molekylvekt 786,73; Fig. 1), er en av fenyletanoidglykosidene (PhGs) isolert fra stilkene til HerbaCistanche, og viser flere biologiske egenskaper, inkludert antioksidanter, antialdring, antiinflammatoriske, leverbeskyttende og nevrobeskyttende effekter (3). Moderne farmakologiske undersøkelser har vist at ulike bestanddeler av HerbaCistanche, inkludert EcH, acteosid, kankanose, kankanosid F og cistanosid F, viser vasorelakserende aktivitet (4).

Endotelet er en kritisk regulator av vaskulaturen, og nitrogenoksid (NO) er en viktig avslappende faktor frigjort av endotelceller. Ved å diffundere inn i glatte muskelceller aktiverer NO guanylatcyklase, øker nivåene av syklisk guanosinmonofosfat (cGMP), og aktiverer deretter cGMP-avhengige proteinkinaser (PKGs) for å fremme glattmuskelavslapning (5). Det er tidligere vist at EcH ved 350-400 µM virker direkte på vaskulær glatt muskulatur og hemmer hypoksi-indusert proliferasjon i glatte muskelceller i lungearterie hos rotter (6), mens 30-300 µM EcH forårsaket akutt vasorelaksasjon i endotel- intakte ringer på en konsentrasjonsavhengig måte, og økt cGMP-produksjon i corpus cavernosum glattmuskulatur i aortaringer kontrahert av fenylefrin (7). Ved å åpne NO-cGMP-PKG-BKca-kanalene i glatte muskelceller, undertrykte 100 eller 300 µM EcH noradrenalin-indusert sammentrekning i lungearteriene til rotter, spesielt i ringer uten endotel (8). Endotelceller er sentrale regulatorer av kardiovaskulær funksjon, og i flere tilfeller har det blitt funnet at den endotelavhengige relaksasjonen skyldtes et overførbart stoff, som NO, frigjort fra endotelet (9). Imidlertid krever den oppstrøms molekylære mekanismen til EcH-indusert NO-produksjon i vaskulære endotelceller ytterligere undersøkelser.

I det vaskulære endotelet er NO-generering primært mediert av endotelial NO-syntase (eNOS). Flere grupper har vist at fosfatidylinositol 3-kinase (PI3K)-banen aktiverer serin-treonin-proteinkinase B (Akt), som forårsaker direkte eNOS-fosforylering ved serin 1177 (Ser1177) (10). Androgenreseptoren (AR) er medlem av kjernereseptorunderfamilien s3, som kanonisk modifiserer genuttrykk. AR-lokalisering til kaveolene i cellemembranen er involvert i

den ikke-genomiske reguleringen av endotelcellefunksjon eller genuttrykk ved å utløse c-Src/PI3K/Akt-kaskaden, som til slutt resulterer i eNOS-fosforylering og NO-produksjon (11). I humane aorta-endotelceller har testosteron blitt rapportert å aktivere PI3K/Akt-signalering og raskt indusere NO-produksjon på grunn av den direkte interaksjonen mellom AR og p85-underenheten til PI3K på det kardiovaskulære systemet (12). Det ble rapportert at EcH forverrer hormonmangelrelaterte symptomer og utøver sine androgenlignende effekter på grunn av konkurrerende binding til AR i stedet for testosteron (2). Derfor antok denne studien at PI3K/Akt-veien kan være involvert i NO-produksjon gjennom AR-avhengig eNOS-fosforylering indusert av EcH. Målet med denne studien var å evaluere følgende effekter av EcH: i) Induksjon av NO-produksjon og eNOS-fosforylering; ii) involvering av AR i eNOS-fosforylering; og iii) aktivering av PI3K/Akt-veien i humane navlevene-endotelceller (HUVEcs), en velkjent eksperimentell modell for å studere regulering av endotelcellefunksjoner og angiogenese (13).

Materialer og metoder

Kjemikalier og reagenser.EcH (renhet, 92,5 prosent) ble hentet fra National drug Reference Standards i National Institute for the Food and drug control. Antistoffer mot p-Akt (Ser473; kat.nr. ab8805), Akt (kat.nr. ab81283), p-eNOS (Ser1177; kat.nr. ab184154) og eNOS (kat.nr. ab76198) ble kjøpt fra Abcam. Inhibitorene av nilutamid og Icl 182780 ble oppnådd fra Sigma-Aldrich; Merck KGaA. L-NAME ble kjøpt fra Adamas-Beta, Ltd., og wortmannin ble kjøpt fra Pribolab.

Celle kultur og narkotika behandling.HUVEcs ble hentet fra Sciencell Research Laboratories Inc. og dyrket i endotelcellemedium (EcM; Sciencell Research Laboratories) med 5 prosent (v/v) føtalt bovint serum (FBS; Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc.) og 1 prosent endotelcelle veksttilskudd (ECGS) ved 37˚C (5 prosent CO2 og 95 prosent fuktighet) (14). Da de nådde sammenløpet, ble cellene fordøyd med trypsin og belagt i EcM med 1 prosent FBS og 1 prosent EcGS. For alle eksperimenter ble HUVEcs belagt med en konsentrasjon på 1x104/ml og dyrket til de nådde sammenløp. Før behandling med EcH eller andre stimulatorer ble cellene inkubert i fenolrødt fritt EcM uten FBS og EcGS i 6 timer for å indusere

vekststopp. I de inhiberende eksperimentene ble HUVEcs pre-inkubert med forskjellige antagonister eller inhibitorer, inkludert 10 µM nilutamid, 10 µM IcI 182780, 0,5 mM L-NAME eller 5 µM wortmannin, for 30 µM wortmannin. med eller uten ECH, ved 37˚C. I alle gruppene, inkludert kontrollen, ble dMSO brukt som løsningsmiddel i like konsentrasjoner på 0,001 prosent.

Måling av intracellulært INGEN produksjon.

Relative endringer i cytosolisk NO-konsentrasjon i HUVEcs ble overvåket ved å bruke den fluorescerende NO-sonden DAF-FM (Cayman Chemical Company), som tidligere rapportert (12). Kort fortalt ble cellene lastet med 5 µM DAF-FM-diacetat i 20 minutter ved 37˚C i en svart mikrotiterplate og skylt flere ganger med PBS (pH 7,4). Fluorescensen ble bestemt ved eksitasjons- og emisjonsbølgelengder på henholdsvis 495 og 515 nm, ved bruk av en fluorescerende mikroplateleser (Biotek Synergy H4; BioTek Instruments, Inc.) og et kompakt invertert mikroskop (Nikon eclipse Ts2R; Nikon corporation).

Vestlig blot analyse.Som tidligere rapportert (15), ble sammenflytende monolag av celler vasket to ganger i iskald PBS og lysert med RIPA-buffer (P0013d; Beyotime Institute of Biotechnology). Proteinkonsentrasjonen i supernatanten ble målt ved bruk av bicinchoninsyre-analysemetoden (16). Deretter ble 30 µg protein lastet per bane, separert ved bruk av 10 prosent polyakrylamidgeler og overført til polyvinylidendifluoridmembraner. Membranene ble blokkert med 5 prosent skummet melk i 1 time ved 25˚C. Etter inkubasjon med monoklonale antistoffer mot Akt (1:1,000 fortynning), p-Akt (1:500 fortynning), eNOS (1:2,{18}} fortynning), eller p-eNOS (1) :1,000 fortynning) ved 4˚C over natten, ble membranene vasket med TBST (inneholdt 0,1 prosent Tween-20) 4 ganger i ~15 minutter per vask ved 25˚C. Deretter ble membranene inkubert med pepperrotperoksidase-konjugerte sekundære antistoffer (1:5,000 fortynning; anti-muse-antistoff, kat.nr. A0216, eller anti-kaninantistoff, kat.nr. A0208, Beyotime Institute av bioteknologi) i 1 time ved 25˚C, og oppdaget ved hjelp av et forbedret kjemiluminescenssett (kat.nr. 32209, Thermo Fisher Scientific, Inc.). Båndintensiteter ble kvantifisert ved hjelp av Image J gelanalyseprogramvare, versjon 1.8.0_112 (National Institutes of Health).

Liten forstyrrer (si) RNA forberedelse og transfeksjon.De lange dobbelttrådete RNA-ene ble syntetisert av mål-mRNA-en til AR og østrogenreseptoren (ER) med sekvenser vist i tabell I. Betingelsene for siRNA-knockdown involverte transfeksjon av HUVEC-er ved 70 prosent konfluens opprettholdt i ikke-antimikrobielle stoffer. kulturmedium i 60 mm kollagenbelagte kulturskåler. Transfeksjon av 5 nM AR-siRNA eller 10 nM ER-siRNA med Lipofectamine 3000 reagens (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) ble utført separat, i henhold til produsentens protokoller. Transfeksjonseffektivitet ble evaluert ved omvendt transkripsjon kvantitativ-PcR-analyse (RT-qPcR), som tidligere rapportert (17). Termosyklusforholdene var som følger: 10 minutter ved 95˚C; 40 sykluser på 95˚C i 5 sek og 60˚C i 1 min, og en smeltekurve ved 95˚C i 15 sek, 60˚C i 1 min og 95˚C i 15 sek; tre uavhengige biologiske replikater ble utført for hver prøve. De påfølgende eksperimentene ble utført 48 timer etter transfeksjon. Primer-par ble designet med Primer Premier v5.0-programvare (PREMIER Biosoft) med følgende sekvenser: AR fremover, 5'-GGTTAcAccAAAGGGcTAGAA-3' og revers, 5'-GAcTTGTAGAGAGAcAGGGTAGA-3'; ER fremover, 5'-ccAGTAccA ATGAcA AGG GAAG -3' og revers, 5'-TcAcAGGAccAGAcTccATAA-3'; og GAPdH fremover, 5'-cAGGGcTGcTTTTAAcTcTGGTAA-3' og bakover, 5'-GGGTGGAATcATATTGGAAcATGT-3'.

Statistisk analyse.Alle data presenteres som gjennomsnitt ± standardavvik. Statistiske sammenligninger mellom grupper ble utført ved bruk av Kruskal-Wallis-testen eller toveis ANOVA med Tukeys post hoc-test for flere sammenligninger. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Resultater

ECH induserer NEI produksjon og eNOSfosforylering.Som vist i fig. 2A og B, økte 1 µM ECH signifikant intracellulær NO-produksjon i HUVEcs sammenlignet med de negative kontrollcellene, mens den stimulerende effekten av EcH ble dempet til kontrollnivået ved forbehandling med L-NAME. For å oppnå den optimale konsentrasjonen ble eNOS-fosforylering testet 60 minutter etter behandling med EcH ved konsentrasjoner

av {{0}}, 0.01, 0.1, 1 og 10 µM. Resultatene avslørte at EcH ved konsentrasjoner på 0,01-10 µM signifikant kan indusere eNOS-fosforylering ved Ser 1177 på en konsentrasjonsavhengig måte, med maksimal eNOS-fosforylering observert ved 10 µM EcH-induksjon (fig. 2c og d). Videre ble eNOS-fosforylering ved Ser1177 undersøkt ved western blot-analyse ved 0, 5, 15, 30, 60 og 120 minutter etter inkubering med 1 µM EcH. Det ble observert at eNOS-fosforylering ble raskt utløst av EcH etter 5 minutter, og fortsatte å øke inntil 30 minutter med inkubering (fig. 2E og F). Deretter, til tross for EcH-behandling, forble den relative størrelsen av eNOS-fosforylering stabil fra 30 minutter og utover; derfor påvirket ikke EcH totalt eNOS-uttrykk (fig. 2c og E).

AR formidler ECH-indusert NEI produksjon og eNOSforstyrrende effekter av AR-siRNA-1 og ER -siRNA-2 var de mest vellykkede med å hemme uttrykket av AR og ER i HUVEcs i denne studien (fig. 3). Deretter ble en antagonist for AR-inhiberings-av-funksjonsanalyse og siRNA for AR-tap-av-funksjonsanalyse brukt for å evaluere involveringen av AR i EcH-indusert eNOS-aktivering og NO-produksjon. Som vist i fig. 4A, økte 1 µM ECH signifikant NO-produksjonen i HUVEcs (P<0.05). pretreatment="" with="" the="" ar="" antagonist="" nilutamide="" (10="" µm)="" abolished="" ech-induced="" no="" production,="" whereas="" ici182789="" (an="" er="" antagonist)="" did="" not="" exert="" the="" same="" effects.="" furthermore,="" the="" effects="" of="" sirna-mediated="" ar="" knockdown="" on="" no="" production="" were="" examined="" in="" cultured="" cells,="" indicating="" that="" no="" production="" was="" diminished="" by="" transfection="" with="" ar="" sirnas;="" however,="" it="" was="" not="" affected="" by="" er="" sirnas="" or="" control="" random="" sirnas="" (fig.="" 4b).="" representative="" western="" blots="" and="" semi-quantitative="" analysis="" (fig.="" 4c="" and="" d)="" revealed="" that="" the="" phosphorylation="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" inhibited="" by="" nilutamide="" and="" ici182789,="" and="" that="" the="" inhibitory="" effect="" of="" nilutamide="" on="" ech-induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" higher="" compared="" with="" that="" of="" ici182789,="" which="" indicated="" that="" inhibi-="" tion="" of="" ar="" function="" had="" a="" greater="" impact="" than="" er="" on="" enos="" phosphorylation="" induced="" by="" ech.="" similarly,="" the="" phosphoryla-="" tion="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" reduced="" significantly="" in="" cells="" transfected="" with="" ar-sirna="" and="" er-sirna="" compared="" with="" the="" control="" random="" sirna;="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ar‑sirna="" on="" ech‑induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" stronger="" compared="" with="" that="" of="" er-sirna="" (fig.="" 4e="" and="" f).="" therefore,="" the="" aforementioned="" results="" suggested="" that="" ech="" may="" cause="" ar-dependent="" activation="" of="" enos="" to="" induce="" no="" production="" in="">

ECH aktiveres de PI3K/Akt vei.I denne studien ble Akt-fosforylering ved Ser473 testet 60 minutter etter EcH-inkubering ved konsentrasjoner på 0, 0.01, 0.1 1 og 10 uM. Resultatene indikerte at EcH (0.01-10 µM) kan indusere Akt-fosforylering betydelig. De relative ekspresjonsnivåene av p-Akt toppet seg ved 1 og 10 µM EcH-behandling (fig. 5A og B). Videre ble Akt-fosforylering undersøkt ved western blot-analyse ved 0, 5, 15, 30, 60 og 120 minutter etter tilsetning av 1 µM EcH til HUVEc-kulturer. Som vist i fig. 5c og d, økte EcH raskt Akt-fosforyleringen etter 5 min inkubering, og det maksimale proteinnivået av p-Akt ble observert etter 60 min. Derimot påvirket ikke EcH det totale Akt-uttrykket (fig. 5A og c). Dessuten, for å undersøke den potensielle effekten av PI3K-vei på eNOS-fosforylering, ble HUVEcs forhåndsbehandlet med PI3K-hemmeren wortmannin før EcH-påføring. Wortmannin ble funnet å redusere EcH-indusert NO-produksjon til basislinjenivåer (fig. 5E). Et lignende fenomen ble observert ved bruk av fluorescensmikroskopi når man undersøkte EcH-indusert DAF-FM-fluorescens (fig. 5F). Videre kan wortmannin ha evnen til å oppheve rask eNOS-fosforylering i HUVEcs (fig. 5G og H). De nevnte resultatene antyder at EcH kan aktivere eNOS-fosforylering og NO-produksjon via PI3K/Akt-veien.

Diskusjon

EcH er en naturlig forbindelse isolert fra HerbaCistanche, med forskjellige farmakologiske egenskaper. Det ble tidligere vist at EcH utøvde en endotelavhengig vaskulær avslapningseffekt ved å åpne NO-cGMP-PKG-BKca-kanaler i glatte muskelceller i blodkar (7,8). De nåværende funnene gir bevis på at ECH utøvde AR-avhengig aktivering av eNOS for å indusere NO-produksjon med involvering av PI3K/Akt-signalveien i vaskulære endotelceller.

Som det innerste laget av karveggen kan endotelet raskt føle og reagere på endringer i blodstrømmen, noe som igjen resulterer i signaloverføring til de underliggende glatte muskelcellene for å regulere vaskulær tonus (18). Det er mye rapportert at det eksisterer flere endotelavledede vasodilaterende forbindelser, med det mest prototypiske stoffeter NO, dannet fra den endoteliale isoformen av eNOS, som resulterer i fosforylering (19). Under normale forhold forblir eNOS inaktiv når den er bundet til caveolin, og aktiveres med følgende rekkefølge av hendelser i endotelialceller: i) eNOS skiller seg fra caveolin-1 og assosieres med ca2 pluss /caM; ii) varmesjokkprotein (HSP)90 fremmer eNOSdimerisering og favoriserer en sterisk formasjon for å rekruttere Akt; og iii) kalsineurin defosforylerer Thr495 for å forsterke aktiveringstilstanden (20). I denne studien ble NO-produksjonen betydelig økt i HUVEC-er behandlet med 1 µM ECH. Dette fenomenet var likt tidligere resultater, der EcH økte NO-frigjøring og stimulerte syntesen av cGMP i thorax-aortaringer hos rotter (7). Videre ser to fosforyleringssteder, Ser1177 og Thr495, ut til å være spesielt viktige for å regulere eNOS-aktivitet (20), og denne studien viste at EcH induserte akutt eNOS-fosforylering ved Ser1177 på en konsentrasjonsavhengig måte. I tillegg bestemmer stimuli knyttet til effektene på eNOS-proteinnivåer hovedsakelig eNOS mRNA-stabilitet, og dersom stimulansen opprettholdes over lengre tid, skjer eNOS mRNA-transkripsjon via mitogenaktivert proteinkinase og nukleær faktor κB (20). Til sammen indikerer disse observasjonene at aktiveringen av eNOS ved Ser1177 er ansvarlig for NO-syntese indusert av EcH.

Videre har et økende antall studier vist at AR uttrykkes i endotelceller i en rekke humane vev, noe som antyder en potensiell rolle for androgener og deres analoger, som virker gjennom AR-medierte prosesser, i moduleringen av humant endotel. cellehomeostase (21). I den ikke-klassiske PI3K/Akt-banen kan AR aktivere PI3K ved å interagere direkte med PI3K-regulatorisk underenhet p85 (22). Denne studien viste at en AR-antagonist eller AR-siRNA reduserte NO-produksjonen og eNOS-fosforylering indusert av EcH i HUVEcs. Det er tidligere rapportert at østrogener induserer eNOS-fosforylering og stimulerer NO-produksjon via klassisk ER-aktivering i endotelceller (23), og administrering av ECH øker uttrykket av ER i livmoren betydelig (24). Imidlertid, i denne studien, var effekten av AR mer fremtredende sammenlignet med effekten av ER på EcH-indusert eNOS-aktivering og NO-produksjon. I tillegg ble det observert at EcH forårsaket akutt NO-produksjon i løpet av minutter via AR-involvert eNOS-aktivering i HUVEcs, noe som stemmer overens med den ikke-genomiske naturen til responsen i endotelceller. AR er assosiert med stillasproteiner, inkludert HSP90, HSP70 og kinase Src, i cytoplasmaet, og det kan transporteres til membranen fra AR-komplekset innen 5 minutter etter testosteronbehandling (23). Basert på 'målfiske'-strategien ble HSP90 identifisert som det PhGs-koblede målet, noe som indikerte at EcH kan lette dissosiasjonen av AR fra stillasproteinene (25). En annen studie antydet at EcH i hypothalamus kan kombineres med AR-lommen ved aminosyrene Met-894 og Val-713 og hemme transporten av cytoplasmatisk AR til kjernen (26). Imidlertid krever den underliggende mekanismen som EcH formidler cytoplasmatisk AR-translokasjon til membranen ytterligere undersøkelser. Derfor kreves det ytterligere forskning for å belyse mekanismen som EcH oppnår AR-avhengig eNOS-aktivering gjennom og hvordan det kan være assosiert med binding til HSP90 i vaskulære endotelceller.

PI3K/Akt-banen er en av de viktigste signalkaskadene, hvis aktivering induseres ved å produsere fosfatidylinositol-3,4,5-trisfosfat for å binde det N-terminale pleckstrin-homologidomenet til Ser/ Thr kinase Akt. Dette letter Akt-rekruttering til plasmamembranen (27). PI3K/Akt-banen kan spille en viktig rolle i kontrollen av NO-avhengig avslapning indusert av EcH.

Denne studien viste at EcH-indusert NO-produksjon ble betydelig redusert når cellene ble inkubert med PI3K-hemmeren wortmannin. En tidligere rapport viste at 15 mg/kg EcH aktiverte PI3K/Akt-signalveien i 5-fluorouracil-undertrykte benmargsceller (28). I denne studien reduserte PI3K-hemmere signifikant EcH-indusert eNOS-fosforylering ved Ser1177. Dessuten ble Akt-aktiviteten hovedsakelig regulert av oppstrøms regulatoriske veier, spesielt PI3K-avhengig fosforylering ved Ser473 (20). I denne studien induserte EcH Akt-fosforylering ved Ser473 på en doseavhengig måte; tilsvarende viste en tidligere studie at 5, 10 eller 20 µM EcH utøvde en kardiobeskyttende effekt mot anoksi/reperfusjonsbehandling på en doseavhengig måte ved å potensielt oppregulere p-Akt og SLc8A3 (29). Transkripsjonsreguleringen av Akt-genet forblir stort sett ukjent (30); derfor fokuserte denne studien på de post-transkripsjonelle regulatoriske effektene av EcH på Akt. Ved å ta de nevnte funnene i betraktning, ble det utledet at bruken av EcH på HUVEcs kan føre til aktivering av PI3K/Akt-veien, som fosforylerer eNOS og deretter øker NO-produksjonen.

Avslutningsvis er EcH et naturprodukt som hovedsakelig er isolert fra HerbaCistanche.Den potensielle mekanismen som ligger til grunn for EcH-indusert NO-produksjon i endotelceller kan omfatte følgende (fig. 6): i) EcH fungerer som en funksjonell ligand av AR som er lokalisert til kaveolene i cellemembranen; ii) PI3K binder seg til det hydrofobe domenet til Akt ved Ser473 og letter Akt-rekruttering til cellemembranen; iii) rekrutteringen av PI3K/Akt-kaskadene utløser AR-avhengig eNOS-fosforylering; og iv) genereringen av NO formidles av eNOS i endotelceller. Observasjonen av at EcH induserer NO-produksjon gjennom den AR-avhengige fosforyleringen av eNOS med involvering av PI3K/Akt-banen kan bidra til ytterligere forståelse av de vasorelakserende effektene av EcH. Videre kan EcH som retter seg mot de endotelavledede NO-veiene skyldes ikke-genomiske effekter. Derfor kan denne studien bidra til å belyse mekanismene som EcH utøver sine farmakologiske effekter for å forhindre kardiovaskulær sykdom.

Anerkjennelser

Ikke aktuelt.

Finansiering

Denne studien ble støttet av National Natural Science Foundation i Kina (stipend nr. 81503333).

Tilgjengelighet av data og materialer

Datasettene generert og analysert under denne studien er tilgjengelig fra den tilsvarende forfatteren på rimelig forespørsel.

forfatternes bidragene

LG og XL unnfanget og designet eksperimentene. dL og YZ utførte forsøkene. WZ og JG analyserte dataene. LG utarbeidet manuskriptet. XL gjennomgikk og redigerte manuskriptet. Alle forfattere leste og godkjente det endelige manuskriptet.

1202 GUet al: EKINAKOSID INDUSERER NITRISKOKSID PRODUKSJON AV AR-AVHENGIG PI3K/AKT PATHWAY

Etikk godkjenning og samtykke til delta

Ikke aktuelt.

Tålmodig samtykke til utgivelse

Ikke aktuelt.

Konkurrerer interesser

Forfatterne erklærer at de ikke har noen konkurrerende interesser.

Referanser

1. provisjon for kinesisk farmakopé:CistancheHerba. I: Pharmacopoeia of the People's Repulic of China 1. chin. Med. Sci. Press, Beijing, s. 135, 2015.

2. Jiang Z, Wang J, Li X og Zhang X: Echinacoside ogCistanche tubulosa(Schenk)R. wight forbedrer bisfenol A-indusert testikkel- og sædskade hos rotter gjennom gonadakseregulerte steroidogene enzymer. J Ethnopharmacol 193: 321-328, 2016.

3. Liu J, Yang L, dong Y, Zhang B og Ma X: Echinacoside, et uvurderlig naturlig produkt i behandling av nevrologiske og andre lidelser. Molecules 23: piiE1213, 2018.

4. Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S og Muraoka O: Fenyletanoide oligoglykosider og acylerte oligosukkere med vasorelakserende aktivitet fraCistanche tubulosa. Bioorg Med chem 14: 7468-7475, 2006.

5. Arnold WP, ​​Mittal cK, Katsuki S og Murad F: Nitrogenoksid aktiverer guanylatcyklase og øker nivåene av guanosin 3':5'-sykliske monofosfat i ulike vevspreparater. Proc Natl Acad Sci USA 74: 3203-3207, 1977.

6. Gai XY, Tang F, Ma J, Zeng KW, Wang SL, Wang YP, Wuren TN, Lu dX, Zhou Y og Ge RL: Antiproliferativ effekt av echinacoside på glatte muskelceller i lungearterien hos rotter under hypoksi. J Pharmacol Sci 126: 155-163, 2014.

7. He WJ, Fang TH, Ma X, Zhang K, Ma ZZ og Tu PF: Echinacoside fremkaller endotelavhengig avslapning i rotteaortaringer via en NO-cGMP-vei. Planta Med 75: 1400-1404, 2009.

8. Gai XY, Wei YH, Zhang W, Wuren TN, Wang YP, Li ZQ, Liu S, Ma L, Lu dX, Zhou Y og Ge RL: Echinacoside induserer vasorelaksasjon i lungearterien hos rotter ved å åpne NO-cGMP-PKG- BKca-kanaler og reduserer intracellulære ca2 pluss-nivåer. Acta Pharmacol Sin 36: 587-596, 2015.

9. Maruhashi T, Kihara Y og Higashi Y: Vurdering av endotel-uavhengig vasodilatasjon: Fra metodikk til kliniske perspektiver. J Hypertens 36: 1460-1467, 2018.

10. Ahmad KA, Ze H, chen J, Khan FU, chen X, Xu J og derivat på humane navlevene endotelceller mot oksidativ stress-indusert skade: Involvering av antioksidasjon og PI3k/Akt/eNOS/NO signalveier. Biomed Pharmacother 106: 1734-1741, 2018.

11. Yu J, Akishita M, Eto M, Koizumi H, Hashimoto R, Ogawa S, Tanaka K, Ouchi Y og Okabe T: Src kinase medierer androgenreseptoravhengig ikke-genomisk aktivering av signalkaskade som fører til endotel nitrogenoksidsyntase . Biochem Bioph Res commun 424: 538-543, 2012.

12. Yu J, Akishita M, Eto M, Ogawa S, Son B, Kato S, Ouchi Y og Okabe T: Androgenreseptoravhengig aktivering av endotel nitrogenoksidsyntase i vaskulære endotelceller: Fosfatidylinositols rolle {{3} }kinase/Akt pathway.Endocrinology 151: 1822-1828, 2010.

13. Pittarella P, Squarzanti dF, Molinari c, Invernizzi M, Uberti F og Reno F: NO-avhengig spredning og migrasjon indusert av vitamin d i HUVEc. J Steroid Biochem 149: 35-42, 2015.

14. He Y, Luan Z, Fu X og Xu X: Overekspresjon av frakoblingsprotein 2 hemmer den høye glukose-induserte apoptosen til humane navlevene-endotelceller. Int J Mol Med 37: 631-638, 2016.

15. Xiao-Hong d, chang-Qin X, Jian-Hua H, Wen-Jiang Z og Bing S: Icariin forsinker homocystein-indusert endotelcellulær senescens som involverer aktivering av PI3K/AKT-eNOS-signalveien. Pharm Biol 51: 433-440, 2013.

16. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, Mallia AK, Gartner FH, Provenzano Md, Fujimoto EK, Goeke NM, Olson BJ og Klenk dc: Måling av protein ved bruk av bicinchoninsyre. Anal Biochem 150: 76-85, 1985.

17. Gu L, Zhong X, Lian d, Zheng Y, Wang H og Liu X: Triterpenoidbiosyntese og transkripsjonsresponsen fremkalt av nitrogenoksid i neddykket fermenteringGanoderma lucidum. Process Biochem 60: 19-26, 2017.

18. Ellinsworth dc, Sandow SL, Shukla N, Liu Y, Jeremy JY og Gutterman dd: Endothelium-derived hyperpolarization and coronary vasodilatation: diverse og integrerte roller av epoxye-icosatrienoic acids, hydrogen peroxide, and gap junctions. Mikrosirkulasjon 23: 15-32, 2016.

19. Freed JK og Gutterman dd: kommunikasjon er nøkkelen: Mechanisms of intercellular signaling in vasodilation. J cardiovasc Pharm 69: 264-272, 2017.

20. Quillon A, Fromy B og debret R: Endotelmikromiljøføling som fører til nitrogenoksidmediert vasodilatasjon: En gjennomgang av nervøse og biomekaniske signaler. Nitrogenoksid 45: 20-26, 2015.

21. Torres-Estay V, carreno dV, Francisco IF, Sotomayor P, Godoy AS og Smith GJ: Androgenreseptor i humane endotelceller. J Endocrinol 224: 131-137, 2015.

22. deng Q, Zhang Z, Wu Y, Yu WY, Zhang J, Jiang ZM, Zhang Y, Liang H og Gui YT: Ikke-genomisk virkning av androgener medieres av rask fosforylering og regulering av androgenreseptorhandel. Cell Physiol Biochem 43: 223-236,2017.

23. de Oliveira TS, de Oliveira LM, de Oliveira LP, costa RMd, Tostes Rc, Georg Rc, costa EA, Lobato NS, Filgueira FP og Ghedini Pc: Aktivering av PI3K/Akt-vei mediert av østrogenreseptorer står for østronindusert vaskulær aktivering av cGMP-signalering. Vascul Pharmacol 110: 42-48, 2018.

24. Li F, Yang X, Yang Y, Guoc, Zhang c, Yang Z og Li P: Antiosteoporotisk aktivitet av echinacoside i ovariektomiserte rotter. Phytomedicine 20: 549-557, 2013.

25. Zeng KW, Liao LX, Wan YJ, Jiang Y og Tu PF: Farmakologisk målidentifikasjon og effektanalyse av fenyletanoidglykosider fraCistancherHerba basert på 'target fishing' strategi. chin Tradit Herbal drugs 49: 173-178, 2018.

26. Jiang Z, Zhou B, Li X, Kirby GM og Zhang X: Echinacoside øker spermmengden hos rotter ved å målrette mot den hypotalamiske androgenreseptoren. Sci Rep 8: 3839-3850, 2018.

27. coffer PJ, Jin J og Woodgett JR: Proteinkinase B (c-Akt): En multifunksjonell mediator av fosfatidylinositol 3-kinaseaktivering. Biochem J 335, 1-13, 1998.

28. Wang S, Zheng G, Tian S, Zhang Y, Shen L, Pak Y, Shen Y og Qian J: Echinakosid forbedrer hematopoietisk funksjon hos 5-FU-indusert myelosuppresjonsmus. Life Sci 123: 86-92, 2015.

29. chen M, Wang X, Hu B, Zhou J, Wang X, Wei W og Zhou H: Beskyttende effekter av echinacoside mot anoksi/reperfusjonsskade i H9c2-celler via oppregulerende p-AKT og SLc8A3. Biomed Pharmacother 104: 52-59, 2018.

30. Abeyrathna P og Su Y: Den kritiske rollen til Akt i kardiovaskulær funksjon. Vascul Pharmacol 74: 38-48, 2015.