Abstrakt

Objektiv:For å undersøke den molekylære mekanismen somCistanche-basert Bushen Kaixuan Tongluo Formulautøver en nyrebeskyttende effekt hos mus med diabetisk nyresykdom (DKD) ved å regulere den sykliske adenosinmonofosfat (cAMP) signalveien.

Metoder:Tretti spesifikke patogenfrie (SPF) db/db hannmus ble adaptivt matet i 3 uker. Mus med tilfeldige blodsukkernivåer i halevenen større enn eller lik 11,1 mmol·L⁻¹ og et urinmikroalbumin/kreatinin-forhold større enn eller lik 30 mg·g⁻¹ ble ansett som vellykket modellert. De modellerte musene ble tilfeldig tildelt fem grupper (n=6 per gruppe): modellgruppe, lav-, middels- og høydose Bushen Kaixuan Tongluo Formula-grupper (7, 14 og 28 g·kg⁻¹·d⁻¹), og en irbesartangruppe (20 mg·kg⁻¹¹¹¹¹). Seks db/m mus ble brukt som blank gruppe.

Behandlingen varte i 12 uker via intragastrisk administrering. Generelle tilstander, kroppsvekt og nyrefunksjonsindikatorer ble overvåket. Etter intervensjon ble fastende blodsukker (FBG) målt. En automatisk biokjemisk analysator ble brukt for å vurdere serumkreatinin (SCr), blod urea nitrogen (BUN), urin mikroalbumin (uALB), albumin-kreatinin ratio (ACR), aspartat aminotransferase (AST), alanin aminotransferase (ALT), total kolesterol (TC), triglyserider (tg), glyserider (TG) og proteiner, glycerider (tg) og proteiner. (INS).

Nyrevevshistopatologi ble evaluert ved bruk av HE, PAS og Massons trikromfarging. Immunhistokjemi (IHC) påviste uttrykk for proteinkinase A (PKA) og cAMP-responselementbindende protein (CREB). Western blot analyserte nivåer av PKA, fosforylert PKA (p-PKA), CREB, fosforylert CREB (p-CREB) og Bcl-2. Sanntids-PCR ble brukt til å evaluere mRNA-uttrykk av PKA, CREB og Bcl-2.

Resultater:Sammenlignet med den blanke gruppen, viste modellgruppen sløvhet, redusert aktivitet og betydelig økt kroppsvekt (P<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

Sammenlignet med modellgruppen viste de formelbehandlede gruppene forbedret allmenntilstand og en nedadgående trend i kroppsvekt. BUN, uALB, ACR, TC, GSP og INS ble betydelig redusert (P<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

Histopatologisk analyse avslørte at modellgruppen viste klassiske DKD-trekk som glomerulær basalmembranfortykning, mesangial matriseutvidelse og kollagenavsetning i tubulointerstitium. Disse patologiske endringene ble lindret i alle behandlingsgrupper.

IHC-resultater viste signifikant reduserte p-PKA- og p-CREB-uttrykk i modellgruppen (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

Western blot viste at p-PKA/PKA-, p-CREB/CREB- og Bcl-2-nivåer ble betydelig redusert i modellgruppen (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

Sanntids PCR bekreftet nedregulering av PKA, CREB og Bcl-2 mRNA i modellgruppen (P<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Konklusjoner:DeCistanche-basert Bushen Kaixuan Tongluo Formulaforbedrer lever- og nyrefunksjonen, korrigerer lipid- og glukosemetabolismeforstyrrelser hos db/db-mus. Dens nyrebeskyttende effekt er assosiert med oppregulering avcAMP/PKA/CREB signalvei, som reduserer nyrefibrose og oksidativt stress, og beskytter derved nyrefunksjonen.

 

 

 

 

Cistanche-basert Bushen Kaixuan Tongluo Formel forforbedring av lever- og nyrefunksjon

Klikk på bildet for flere detaljer

Nøkkelord

Diabetisk nyresykdom (DKD);
Bushen Kaixuan Tongluo Formel;
Cistanche;
cAMP signalvei;
Tradisjonell kinesisk medisin (TCM)

 

Cistanche-basert middel

 

Bakgrunn

Diabetisk nyresykdom (DKD), en av de alvorligste mikrovaskulære komplikasjonene ved diabetes, er en ledende årsak til sluttstadium nyresykdom (ESRD) over hele verden. Dens økende utbredelse utgjør en betydelig utfordring for offentlige helsesystemer. DKD-funksjoner inkluderer progressiv glomerulær mesangial matriseutvidelse, tubulointerstitiell fibrose og vedvarende proteinuri. Patogenesen involverer komplekse interaksjoner mellom glukose- og lipidmetabolismeforstyrrelser, oksidativt stress og unormal aktivering av ulike signalveier.

Nåværende førstelinjebehandlinger inkluderer primært renin-angiotensin system (RAS) hemmere, som bidrar til å redusere glomerulær hypertensjon og forsinke tidlig proteinuri. Imidlertid er de mindre effektive hos pasienter med etablert tubulointerstitiell fibrose, med 30–40 % progresjon til ESRD.

Derfor er det av presserende klinisk og vitenskapelig interesse å utforske nye DKD-mekanismer og finne effektive, trygge terapeutiske mål. Tradisjonell medisin tilbyr multi-target regulering med færre bivirkninger, noe som gjør den mer egnet for langvarig bruk ved kronisk nyresykdom. DeCistanche-basert Bushen Kaixuan Tongluo Formulaer en empirisk validert urteblanding for DKD, vist i tidligere kliniske studier for å forbedre symptomer og forsinke sykdomsprogresjon.

Imidlertid er dens molekylære mekanisme, spesielt dens interaksjon med viktige signalveier, fortsatt dårlig forstått. Bevis tyder påcAMP/PKA/CREBpathway kan dempe nyrefibrose, men relaterte studier er begrenset. Denne studien fokuserer på denne veien for å belyse hvordan detteCistanche-basert formelforbedrer DKD.

 

Materialer og metoder

1. Dyr

30 db/db hannmus (7 uker gamle, SPF-grad, kroppsvekt: 37,58±0,62 g)

6 alderstilpassede db/m mus (kroppsvekt: 24,38±0,35 g)

Leverandør: Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Lisens: SCXK (Su) 2020-0009 og SYXK (Jing) 2020-0033

Etikkgodkjenning: BUCM2024041506-2090

2. Urtesammensetning

Bushen Kaixuan Tongluo-formelen inkluderer (i gram):
Cistanche(erstatter rå Astragalus) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa 20, Cornus officinalis 20, Rosale 20 vignat 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bidentata 30, Dioscorea opposita 20.

Alle urter ble autentisert av en autorisert farmasøyt og tilberedt via vannavkok, redusert under vakuum og spraytørket for å danne et pulver. Den endelige konsentrasjonen var 1,43 g·mL⁻1 rå urter.

3. Reagenser og instrumenter

(Se originalteksten for detaljerte oppføringer.)

 

Eksperimentell design

Modellvurdering

Etter 3 uker med adaptiv fôring ble mus med tilfeldig blodsukker større enn eller lik 11,1 mmol·L⁻¹ og ACR større enn eller lik 30 mg·g⁻¹ ansett som vellykkede DKD-modeller.

Gruppering og dosering

Blank gruppe (db/m): vann

Modellgruppe: vann

Lavdose: 7 g·kg⁻¹·d⁻¹

Middels dose: 14 g·kg⁻¹·d⁻¹

Høy dose: 28 g·kg⁻¹·d⁻¹

Irbesartangruppe: 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹

Varighet: 12 uker under fri fôring og drikking.

---

Prøveinnsamling og analyse

Urin:Samlet over 24 timer, sentrifugert og lagret ved -20 grader

Blod:Samlet via orbital ekstraksjon, sentrifugert og lagret ved -80 grader

Nyrer:Delt inn for patologi (formalinfiksert), protein (flytende nitrogen) og genuttrykk (frosset)

---

Deteksjonsmetoder

Biokjemisk analyse:SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP og uALB

Histopatologi:HAN, PAS, Masson-farging

IHC:p-PKA og p-CREB proteinekspresjon

Western blot:p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -aktin

Sanntids PCR:mRNA-ekspresjon av PKA, CREB og Bcl-2

---

Tabell 1. Primersekvenser

Gene	Forward Primer (5′–3′)	Reverse Primer (5′–3′)	Lengde (bp)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
Bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA	95