Cistanche-polysakkarider hemmer prostatakreftcelleproliferasjon og induserer apoptose via ROS-generering og antioksidantgenundertrykkelse

Abstrakt:
Objektiv:For å undersøke effektene og underliggende mekanismene tilCistanche polysakkariderom spredning og apoptose avprostatakreftceller.

Metoder:
Humane prostatakreft DU145-celler ble behandlet med lave, middels og høye konsentrasjoner avCistanche polysakkarider(henholdsvis 20, 40 og 80 mg/ml). Celleproliferasjon ble evaluert ved å brukeMTT-analyse, og apoptose ble vurdert avflowcytometri. Intracellulærtreaktive oksygenarter (ROS)nivåer ble målt via flowcytometri, mensglutation (GSH)nivåer ble bestemt ved hjelp avELISA. mRNA- og proteinekspresjonsnivåene tilglutamat-cystein ligase katalytisk underenhet (GCLC), glutamat-cystein-ligase-modifiserende underenhet (GCLM), ogtioredoksinreduktase 1 (TXNRD1)ble analysert avRT-PCRogWestern blot, henholdsvis.

Resultater:
Den halvmaksimale inhiberende konsentrasjonen (IC50) avCistanche polysakkariderpå DU145-celler var 40,35 mg/ml, og dermed ble 40 mg/ml valgt som middeldose for påfølgende eksperimenter. De lave, middels og høye dosene ble definert som henholdsvis 50 %, 100 % og 200 % av IC50.

Alle behandlingsgruppene viste signifikant økte apoptoserater sammenlignet med kontrollgruppen. Dehøydose Cistanche gruppeviste den største hemmingen av celleproliferasjon og den høyeste apoptosehastigheten, etterfulgt av middels- og lavdosegruppene (P< 0,01). ROS-nivåene var signifikant forhøyet, og GSH-nivåene ble signifikant redusert hos alleCistanche-behandlede grupperkontra kontroll. Spesielthøydosegruppehadde markant høyere ROS og lavere GSH-nivåer enn middels- og lavdosegruppene (P< 0,05); mellomdosegruppen viste lignende forskjeller sammenlignet med lavdosegruppen (P< 0,05).

Uttrykksnivåer avGCLC, GCLM, ogTXNRD1(både mRNA og protein) ble signifikant nedregulert i alle Cistanche-behandlede grupper sammenlignet med kontroll (P< 0,05). Dehøydosegruppeviste den mest signifikante undertrykkelsen av disse antioksidantrelaterte genene og proteinene, etterfulgt av middels- og lavdosegruppene (P< 0,05).

Konklusjon:
Cistanche polysakkariderhemme uttrykket av antioksidantfaktorerGCLC, GCLM, ogTXNRD1, og dermed redusereGSH syntese, fremmeROS-akkumulering, og til slutt induserendeapoptose i prostatakreftceller. Disse funnene tyder på detCistanchekan tjene som ennaturlig terapeutisk middelfor prostatakreft viaoksidativt stress-medierte mekanismer.

Cistanche tubulosa-

Cistancheekstrakt med høye polysakkarider

Kjøp nå

Støttende tjeneste fra Wecistanche-The Kontakt oss for å få en engrospris
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tlf:+86 15292862950

Bakgrunn og metoder

Prostatakreftstår for ca7,1 % av alle mannlige maligniteter, med toppforekomst etter fylte 60 år. Ettersom Kinas befolkning fortsetter å eldes, forventes forekomsten av denne sykdommen å stige ytterligere [1]. Studier tyder på at den høye forekomsten av prostatakreft hos eldre menn kan være relatert tildegenerative forandringer i prostata, genetisk disposisjon, kostholdsvaner, oglivsstilsfaktorer [2].

Kirurgisk reseksjoner fortsatt en bærebjelke i behandling av prostatakreft, med sikte på å fjerne det meste av svulstmassen. Det er imidlertid forbundet med betydelige komplikasjoner, som f.eksurininkontinens, seksuell dysfunksjon, og mest kritisk,tumorresidiv og metastasering, som er hovedårsakene til dårlig prognose [3].

De siste årene harTradisjonell kinesisk medisin (TCM)har fått økende oppmerksomhet for sin rolle i kreftbehandling. TCM kan hjelpeøke immuniteten, motvirke kjemoterapi/strålebehandlingsbivirkninger, ogforbedre avgiftning. Noen medisinske urter viser ogsådirekte antitumoregenskaper, inkludert hemming av tumorvekst oginduksjon av apoptose i kreftceller [4].

Blant disse,Cistanche (Cistanche deserticola)er en tradisjonell tonic urt kjent for sinimmunmodulerende, antioksidativt, ogantitumoreffekter. Dens viktigste bioaktive komponenter erpolysakkariderogfenyletanoidglykosider. Denne studien undersøker effektene og den underliggende mekanismen tilCistanche polysakkariderpåspredning og apoptose av prostatakreft DU145-celler.

Buy Cistanche With 25 Echinacoside and 9 Acteoside

1. Materialer og metoder

1.1 Hovedmaterialer og reagenser

DU145 humane prostatakreftcellerble hentet fra Tongpai Biotech (Shanghai, Kina).

Cistanche polysakkarider(Batch No: 0287181) ble kjøpt fra Weikeqi Bio Co., Ltd. (Sichuan, Kina).

Fosterserum fra storfe, penicillin/streptomycin, ogDMEMble levert av Zeta Life (USA).

MTT-analyse, Annexin V/PI apoptosesett, RIPA lyseringsbuffer, BCA protein kvantifiseringssettble hentet fra Elabscience (Shanghai, Kina).

Deteksjonssett for reaktive oksygenarter (ROS).ogGSH ELISA-settble kjøpt fra BioLab (Shanghai, Kina).

Trizol reagens, omvendt transkripsjonssett, ogPCR-settble hentet fra NeuroSym (Hangzhou, Kina).

Antistoffer motGCLC, GCLM, TXNRD1, -aktin, og tilsvarende sekundære antistoffer ble kjøpt fra UnivBio (Shanghai, Kina).

cistanche deserticola

1.2 Cellekultur og spredningsanalyse

DU145-celler ble dyrket iDMEM supplert med 10 % FBS og 1 % penicillin/streptomycini en CO₂-inkubator. ForMTT-analyseDU145-celler i logaritmisk fase ble sådd i 96-brønners plater og behandlet medCistanche polysakkaridløsningerved konsentrasjoner av10, 20, 40 og 80 mg/ml. Kontrollgruppen mottok kun DMEM-medium.

Etter 24 timers behandling,20 µL 5 mg/ml MTTble tilsatt til hver brønn og inkubert i 4 timer. Supernatanten ble fjernet, og150 µL DMSOble lagt til. Etter risting i 10 minutter ble absorbansen målt til490 nmved hjelp av en mikroplateleser. DeIC₅₀ble beregnet, og20, 40 og 80 mg/mlble valgt ut somlave, middels og høye doserfor påfølgende eksperimenter. Decelleproliferasjonshemmingshastighetble beregnet som:
Inhiberingshastighet (%)=(OD_control - OD_treated) / OD_control × 100

cistanche coffee

1.3 Apoptoseanalyse

Log-fase DU145 celler ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner avCistanche polysakkarideri henhold til grupperinger. Etter fiksering og farging,Annexin V-FITCogPIble brukt til å merke apoptotiske celler.Flowcytometrible utført for å oppdage fluorescenssignaler, og prosentandelen av apoptotiske celler ble registrert.

1.4 Påvisning av intracellulære ROS- og GSH-nivåer

ROS-nivåer ble målt ved å bruke enROS fluorescenssondeog flowcytometri. GSH-nivåer ble kvantifisert ved hjelp avELISA. En standardkurve ble utarbeidet ved bruk av kjente konsentrasjoner av GSH-standarder, og absorbansen ble målt for å beregne GSH-konsentrasjoner i prøver.

1,5 RT-PCR for mRNA-ekspresjon av GCLC, GCLM, TXNRD1

Totalt RNA ble ekstrahert ved bruk avTrizolog cDNA ble syntetisert. PCR ble utført ved bruk av spesifikke primere:

GCLC:

Forover: 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3'

Revers: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'

GCLM:

Forover: 5'-CCGATGACGCCATAAACGTCCGTAGC-3'

Revers: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'

TXNRD1:

Forover: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'

Revers: 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'

-aktin (intern kontroll):

Forover: 5'-TTAGGCGCGATGCAGTCAGATAAGC-3'

Revers: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'

Forsterkningsforhold: 95 grader i 60 s, etterfulgt av 30 sykluser på 95 grader i 30 s, 60 grader i 30 s og 72 grader i 60 s. PCR-produkter ble analysert vedgelelektroforese, og relativ genuttrykk ble normalisert til-aktin.

1.6 Western blotting for proteinuttrykk

Totalt protein ble ekstrahert ved bruk avRIPA buffer, og proteinkonsentrasjonen ble bestemt avBCA-analyse. Proteiner ble separert medSDS-SIDE, overført tilPVDF membraner, blokkert og inkubert over natten ved 4 grader med primære antistoffer motGCLC, GCLM, TXNRD1, og-aktin. Etter inkubasjon medHRP-konjugerte sekundære antistoffer, ble bånd visualisert ved hjelp avkjemiluminescensog kvantifisert avImageJ programvare.