Abstrakt

ObjektivFor å undersøke den urinsyresenkende effekten og sikkerhetsevaluering av echinacoside (Ech) utvunnet fraCistanche tubulosa. MetoderI den akutte toksisitetstesten ble KM-mus administrert Ech ved den maksimale konsentrasjonen to ganger daglig for observasjon av akutt toksisitet. En hyperurikemi (HUA) rottemodell ble etablert ved bruk av 1,5 g·kg⁻1 kaliumoksonat + 0.1 g·kg⁻1 adenin. HUA-modellrotter ble tilfeldig delt inn i en modellgruppe, en allopurinolgruppe (30 mg·kg⁻¹), og lav-, middels- og høydose Ech-grupper (50, 75, 100 mg·kg⁻¹), med en normal kontrollgruppe (n=10 per gruppe). Legemidler ble administrert intragastrisk én gang daglig i 28 påfølgende dager. Etter administrering ble rotter avlivet, og serum ble samlet for å påvise relevante biokjemiske indikatorer og xantinoksidase (XOD) nivåer; nyrehistopatologiske endringer ble observert. Organer ble veid for å beregne organkoeffisienter; ekspresjonsnivåene av relaterte gener og proteiner i nyrevev ble påvist.ResultaterIngen åpenbare toksiske reaksjoner ble observert i den akutte toksisitetstesten. Ech reduserte signifikant serumurinsyrenivåer, markant forbedret nyrefunksjon og renale tubulære/interstitielle lesjoner hos HUA-modellrotter, og regulerte signifikant transkripsjons- og proteinekspresjonsnivåene til urattransportørrelaterte gener i nyrevev.KonklusjonDen urinsyresenkende effekten av Ech i HUA-modellrotter kan være relatert til å redusere in vivo urinsyreproduksjon, regulere nyrefunksjonen og modulere uttrykket av urattransportører, med gunstig sikkerhet.Nøkkelord: Cistanche tubulosa; Echinacoside; hyperurikemi; Urinsyre; Gentranskripsjon; Proteinuttrykk; Virkningsmekanisme; Sikkerhetsvurdering

 

 

 

Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight er en ofte brukt nyre-tonifiserende urt i tradisjonell kinesisk medisin (TCM). Som registrert iKinesisk farmakopé, det fyller på nyre yang, fyller på essens og blod, og brukes klinisk for impotens og infertilitet, mangel på essens og blod, og sårhet i midje og knær. Fenyletanoidglykosider er de mest tallrike og biologisk aktive komponentene iCistanche tubulosa, som viser stort potensial for utvikling og applikasjon. Vårt forskerteam fant tidligere via nettverksfarmakologi og foreløpige museeksperimenter at echinacoside (Ech) fraCistanche tubulosaekstrakt kan ha urinsyresenkende effekter, mens dets mekanisme og sikkerhet sjelden rapporteres. Denne studien tar patogenesen til hyperurikemi som inngangspunkt for å undersøke den farmakologiske urinsyresenkende effekten av Ech, med sikte på å klargjøre mekanismen og evaluere sikkerheten.

1 Materialer og metoder

1.1 Instrumenter, reagenser og dyr

7100 Automatic Biochemical Analyzer (Hitachi, Japan); Multiskan GO 1510 mikroplateleser (Thermo, USA); BG-Power600i elektroforesesystem (Beijing Baijing Biotechnology Co., Ltd.); 7500 Fast Real-Time Fluorescent Quantitative PCR System (Applied Biosystems, USA).

Cistanche tubulosa extract (Ech, self-prepared, chromatographic purity >98%); kaliumoksonat, adenin (Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.); kreatinin (CREA), urinsyre (UA), urea (UREA), adenosindeaminase (ADA), alanintransaminase (ALT), aspartattransaminase (AST), alkalisk fosfatase (ALP) analysesett (Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.); XOD aktivitetsanalysesett (Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.); antistoffer URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 (Jiangsu Qinke Biotechnology); geit-anti-kanin IgG/HRP-konjugat (Beijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd., parti: 245440113); DEPC (Amresco, USA); M5 HiClear DL2000 DNA-markør (Beijing Juhemai Biotechnology Co., Ltd.); TRIzol™-reagens (Thermo Fisher Scientific, USA); 5× Alt-i-ett RT MasterMix, EvaGreen Express 2× qPCR MasterMix-Low ROX (Aibimeng Biotechnology Co., Ltd.).

Førti KM-mus av SPF-grad (hann og hunn, 18–22 g) og 90 SD-hannrotter av SPF-grad (150–180 g) ble levert av Experimental Animal Center ved Xinjiang Medical University (produksjonslisens nr. SCXK Xin 2023-0001).

1.2 Metoder og resultater

1.2.1 Akutt toksisitetstest

Dyreforsøk ble godkjent av den etiske komiteen ved Xinjiang Institute of Drug Research (godkjenningsnr. IACUC-(Zhun)-2024-008, IACUC-(Zhun)-2024-009). Førti KM-mus av SPF-grad ble tilfeldig delt inn i en kontrollgruppe og en behandlingsgruppe (n=20, hanner og hunner) etter karantene og akklimatisering. Mus ble fastet over natten med fri tilgang til vann før administrering. I følgeRetningslinjer for enkeltdose-toksisitetstesting av tradisjonelle kinesiske medisiner og naturprodukter, ble den maksimale konsentrasjonsløsningen (250 mg·ml-1) som kan føres gjennom en 12-gauge sondenål tilberedt. KM-mus ble oralt administrert 40 ml·kg⁻1 to ganger daglig med et 4-timers intervall, med en kumulativ dose på 20 g·kg⁻1. Generelle tilstander, pelsfarge, aktivitet, gange, mental tilstand, avføring og urin ble nøye observert for toksiske symptomer, debuttid, varighet og restitusjon. Ingen skadelige toksiske reaksjoner (f.eks. begrenset aktivitet, utmattelse, sløvhet, død) ble observert i behandlingsgruppen. Pelsfarge, aktivitet, gange, mental tilstand, avføring og urin forble normalt under observasjonsperioden. Kroppsvekt og matinntak viste ingen signifikante forskjeller mellom behandlings- og kontrollgruppen. Grov obduksjon ved slutten av observasjonen avdekket ingen abnormiteter i organvolum, farge eller tekstur.

 

Figur 1 Effekter av ekko kroppsvekt(AB) og matinntak(C,D) hos mus

 

1.2.2 Modelletablering, gruppering og administrasjon

Seksti SD-hannrotter (150–180 g) ble akklimatisert og delt inn i en normal kontrollgruppe (n=10) og en modelleringsgruppe (n=50). Modelleringsgruppen ble intragastrisk administrert 100 mg·kg⁻1 adenin + 1.5 g·kg⁻1 kaliumoksonat (suspendert i 0,5 % CMC-Na) ved 10 ml·kg⁻1 en gang daglig i 14 dager; kontrollgruppen mottok 0,5 % CMC-Na. Etter modellering ble orbitalt blod samlet for å påvise UREA, CREA og serumurinsyre (SUA). Modellen ble ansett som vellykket når UREA, CREA og SUA var betydelig forhøyet. Vellykkede HUA-modellrotter ble delt inn i en modellgruppe, allopurinolgruppe (30 mg·kg⁻¹), og lav-, middels- og høydose Ech-grupper (50, 75, 100 mg·kg⁻¹) (n=10 per gruppe). For å opprettholde stabil hyperurikemi, ble alle grupper unntatt kontrollgruppen administrert intragastrisk 100 mg·kg⁻¹ adenin + 500 mg·kg⁻¹ kaliumoksonat (0,5 % CMC-Na-suspensjon) hver morgen, og tilsvarende medikamenter hver ettermiddag i 14 dager. Modelleringsmidler ble deretter stoppet, mens medikamentadministrasjonen fortsatte i ytterligere 14 dager.

1.2.3 Bestemmelse av SUA og urinsyre (UUA) hos rotter

Etter siste administrering ble rottene fastet over natten med fri tilgang til vann. Urin ble samlet, sentrifugert (3×10³ r·min⁻1, 10 min), fortynnet 1:9 med saltvann og testet for UUA ved bruk av en biokjemisk analysator. Blod ble samlet under anestesi, og serum ble separert (3×10³ r·min⁻¹, 10 min) for SUA-deteksjon. Sammenlignet med kontrollgruppen, viste modellgruppen signifikant økt SUA (P<0.05) and decreased UUA (P<0.01). The allopurinol group and low-, medium-, and high-dose Ech groups had significantly reduced SUA (P<0.05); the allopurinol group and medium-/high-dose Ech groups had significantly increased UUA (P<0.05 or P<0.01).

 

Figur 2 Effekt av Ech på SUA(A) og UUA(B) i hyperurikemi-modellrotter

 

1.2.4 Bestemmelse av serum ADA- og XOD-nivåer hos rotter

Serum ADA ble målt ved bruk av en biokjemisk analysator; XOD-aktivitet ble detektert ved enzymbundet immunosorbentanalyse (absorbans ved 290 nm). Sammenlignet med normalgruppen hadde modellgruppen signifikant forhøyet ADA og XOD (P<0.01). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly reduced ADA (P<0.01); the allopurinol group and high-dose Ech group had significantly reduced XOD (P<0.01).

1.2.5 Bestemmelse av serum UREA, CREA, ALT, AST, ALP nivåer

Sammenlignet med normalgruppen hadde modellgruppen signifikant forhøyet UREA og CREA (P<0.05 or P<0.01). Compared with the model group, the allopurinol group had significantly reduced UREA (P<0.01); all Ech dose groups had significantly reduced UREA and CREA (P<0.05 or P<0.01); medium-/high-dose Ech groups had significantly reduced ALT (P<0.01); low-dose Ech group had significantly increased ALP (P<0.01).

1.2.6 Bestemmelse av nyreorgankoeffisient hos rotter

Organkoeffisient=organmasse (mg)/kroppsvekt (g). Sammenlignet med normalgruppen hadde modellgruppen signifikant redusert fastende kroppsvekt (P<0.01) and increased kidney and adrenal gland coefficients (P<0.05 or P<0.01). Compared with the model group, all Ech dose groups had significantly increased body weight (P<0.05); the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly reduced kidney coefficients (P<0.01).

 

Tabell 1 Effekter av Ech på UREA-, CREA-, ALT-, AST- og ALP-nivåer hos hyperurikemimodellrotter (xˉ±s, n=10)

 

Gruppe	Dose / mg·kg⁻¹	UREA/mmol·L⁻¹	CREA / μmol·L⁻¹	ALT / U·L⁻¹	AST / U·L⁻¹	ALP / U·L⁻¹
Kontroll	–	8.00 ± 0.71	34.11 ± 3.33	51.22 ± 3.80	109.11 ± 11.62	206.00 ± 42.20
Modell	–	23.20 ± 6.05**	100.10 ± 43.59*	62.00 ± 9.64	109.10 ± 7.92	173.10 ± 27.30
Allopurinol	30	10.70 ± 1.95##	55.20 ± 13.27	52.70 ± 12.79	117.50 ± 21.71	198.40 ± 52.66
Ech	50	11.20 ± 3.33##	44.80 ± 21.01#	55.70 ± 12.59	106.10 ± 13.80	242.11 ± 55.04##
	75	9.90 ± 1.45##	41.20 ± 4.54#	46.50 ± 5.72##	102.10 ± 16.11	183.70 ± 22.31
	100	8.90 ± 1.10##	35.20 ± 2.74#	46.50 ± 5.72##	106.00 ± 15.19	195.20 ± 33.96

Note:Sammenlignet med kontrollgruppe: *P<0.05, **P<0.01; compared with model group: #P<0.05, ##P<0.01

 

Tabell 2 Effekter av Ech på organkoeffisienter hos hyperurikemimodellrotter (xˉ±s, n=10)

 

Gruppe	Dose / mg·kg⁻¹	Fastende Kroppsvekt / g	Leverkoeffisient	Nyrekoeffisient	Binyrekjertelkoeffisient	Miltkoeffisient	Thymus koeffisient
Kontroll	–	403.6 ± 28.0	26.92 ± 3.15	6.57 ± 0.55	0.14 ± 0.04	1.88 ± 0.26	1.07 ± 0.15
Modell	–	352.5 ± 38.5**	26.60 ± 1.78	11.52 ± 1.67**	0.18 ± 0.03*	2.12 ± 0.23	1.03 ± 0.17
Allopurinol	30	367.5 ± 26.3	25.76 ± 1.14	7.93 ± 0.51##	0.16 ± 0.03	1.93 ± 0.35	1.08 ± 0.27
Ech	50	392.3 ± 28.3#	27.04 ± 2.14	8.06 ± 0.54##	0.16 ± 0.04	2.09 ± 0.24	1.09 ± 0.19
	75	388.4 ± 34.8#	26.78 ± 2.37	7.80 ± 0.78##	0.16 ± 0.02	2.00 ± 0.20	0.99 ± 0.25
	100	386.3 ± 41.4#	25.91 ± 1.46	7.58 ± 0.33##	0.18 ± 0.03	2.09 ± 0.28	1.17 ± 0.31

Note:Sammenlignet med kontrollgruppe: *P<0.05, **P<0.01; compared with model group: #P<0.05, ##P<0.01

 

 

 

1.2.7 Histopatologisk observasjon av rottenyre (HE-farging)

Nyrevev ble fiksert, dehydrert, innebygd, seksjonert (4 μm), farget med HE og forseglet. Modellgruppen viste renal tubulær epitelcelleutskillelse, nekrotisk og inflammatorisk celleinfiltrasjon og fokal inflammatorisk infiltrasjon i nyrenes interstitium. Allopurinolgruppen viste milde lesjoner; Ech-behandlingsgrupper viste lindret epitelcelleutskillelse, nekrose og inflammatorisk infiltrasjon.

 

 

Figur 4 HE-fargebildeav rottenyrevevavkontrollgruppe(A),modellgruppe(B),allopurinolgruppe(C,D),lav(E)oghøy
(F)dosegroupsofEch(×400)

 

1.2.8 Proteinuttrykk av URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 i rottenyre

Immunhistokjemi ble utført for å påvise proteinekspresjon (integrert optisk tetthet, IOD). Sammenlignet med normalgruppen hadde modellgruppen signifikant oppregulert URAT1 og GLUT9 (P<0.01) and downregulated OAT1 and OAT3 (P<0.05). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly downregulated URAT1 and GLUT9 (P<0.05, P<0.01) and upregulated OAT1 (P<0.05, P<0.01); the allopurinol group and medium-/high-dose Ech groups had significantly upregulated OAT3 (P<0.05, P<0.01).

 

Figur 5 Effekter av EchonURAT1/IOD-verdier(A),GLUT9/IOD-verdier(B),OAT1/IOD-verdier(C),ogOAT3/IOD-verdier(D)i
nyreproblem av hyperurikemi-modellrotter

 

Figur 6 Effekter av Ech på renal URAT1-ekspresjon i hyperurikemi-modellrotter

(Kontrollgruppe (A), modellgruppe (B), allopurinolgruppe (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech-grupper (D–F); IHC ×400)

 

Figur 7 Effekter av Ech på renal GLUT9-ekspresjon i hyperurikemi-modellrotter

(Kontrollgruppe (A), modellgruppe (B), allopurinolgruppe (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech-grupper (D–F); IHC ×400)

Figur 8 Effekter av Ech på renal OAT3-ekspresjon i hyperurikemi-modellrotter

(Kontrollgruppe (A), modellgruppe (B), allopurinolgruppe (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech-grupper (D–F); IHC ×400)

Figur 9 Effekter av Ech på renal OAT1-ekspresjon i hyperurikemi-modellrotter

(Kontrollgruppe (A), modellgruppe (B), allopurinolgruppe (C) og 50, 75, 100 mg·kg⁻¹ Ech-grupper (D–F); IHC ×400)

 

 

1.2.9 mRNA-ekspresjon av URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3 i rottenyre

Totalt RNA ble ekstrahert og revers-transkribert; qPCR ble utført ved å bruke 2⁻ΔΔCt-metoden. Sammenlignet med normalgruppen hadde modellgruppen signifikant oppregulert URAT1 og GLUT9 mRNA (P<0.05) and downregulated OAT1 and OAT3 mRNA (P<0.05). Compared with the model group, the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly downregulated URAT1 mRNA (P<0.05); the allopurinol group and low-/medium-dose Ech groups had significantly downregulated GLUT9 mRNA (P<0.05); the allopurinol group and all Ech dose groups had significantly upregulated OAT1 and OAT3 mRNA (P<0.05).

 

Tabell 3 Primersekvenser

 

Primer navn	Sekvens (5′ til 3′)	Produktstørrelse
URAT1-	F: GTTCCCATGGCCTCCAGATTR: CATATGCATGCCACACAGCC	121 bp
GLUT9	F: TCTGCCTTGGCTGAGTATTGAR: ATGTGTCCCCCACATCATTGT	2147 bp
OAT1	F: TGTGAAGCCCTTCCGTTCTCR: TGTGAAGCCCTTCCGTTCTC	218 bp
OAT3	F: TACCTGCATGTGACCTTGCTGR: GAGACACTTCTCAGGCTTCCC	171 bp
- Actin	F: CCCATCTATGAGGGTTACGCR: TTTAATGTCACGCACGATTTC	150 bp

 

1.2.10 Statistisk analyse

Data ble analysert ved bruk av SPSS 20.0, uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik (x̄±s). Enveis ANOVA ble brukt for gruppesammenligninger, og LSD eller Tamhanes T2 for post-hoc tester. P<0.05 was considered statistically significant.

Figur 5 Effekter av EchonURAT1/IOD-verdier(A),GLUT9/IOD-verdier(B),OAT1/IOD-verdier(C),ogOAT3/IOD-verdier(D) hos nyrevev av hyperurikemimodellrotter

 

2 Diskusjon

Vedvarende hyperurikemi forårsaker urinsyre-indusert nyreskade og endrer nyrefunksjonsbiomarkører. Denne studien etablerte en HUA-rottemodell ved bruk av adenin kombinert med kaliumoksonat, med UREA, CREA og SUA som nøkkelindikatorer. Resultatene viste at Ech fraCistanche tubulosaforbedret nyrefunksjon og redusert SUA hos HUA-modellrotter, som utøver terapeutiske effekter. Hyperurikemi oppstår fra overdreven urinsyreproduksjon og nedsatt utskillelse. Hepatisk XOD og ADA er nøkkelenzymer i urinsyresyntese; overproduksjon er en viktig årsak til HUA. Omtrent to tredjedeler av daglig urinsyre skilles ut via nyrene, noe som gjør nyreutskillelsessvikt til en primær driver. URAT1 og GLUT9 medierer urinsyrereabsorpsjon, mens OAT1 og OAT3 letter utskillelsen av urinsyre - alle er nøkkelmål for urinsyresenkende legemiddelutvikling. Jeg reduserte signifikant hepatisk ADA og XOD, nedregulerte nyre-URAT1/GLUT9 (protein og mRNA) og oppregulerte OAT1/OAT3 (protein og mRNA), noe som indikerer at dens urinsyresenkende effekt virker gjennom å redusere syntese og regulere transportører. Ved akutt toksisitetstesting ble det ikke observert dødelighet eller åpenbar akutt toksisitet hos mus. Ech forbedret nyrefunksjonen og senket lever-ALAT hos HUA-rotter uten å påvirke AST- eller organkoeffisienter, noe som bekrefter gunstig sikkerhet. Avslutningsvis utøver Ech betydelige urinsyresenkende effekter i adenin-kaliumoksonat-induserte HUA-rotter ved å undertrykke ADA/XOD-mediert urinsyresyntese, beskytte nyrefunksjonen og balansere urattransportøruttrykk, med pålitelig sikkerhet for potensiell klinisk anvendelse.

Referanser

Zhang MH, Du JW, Zhang T, et al. Mekanisme av Bixie Fenqing Wan i intervensjon av hyperurikemi-rotter ved å regulere urattransportøruttrykk [J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2023, 29(3): 1–8.

Niu YF, Zhou YF, Lin H, et al. Hemming av 3,5,2',4'-tetrahydroksikalkon på produksjon av urinsyre i hypoxantin-induserte hyperurikemiske mus [J]. Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2018, 41(1): 99–105.

Frédéric L. Gikt: en oppdatering[J]. Journal of Bone and Joint Surgery, 2019, 86(1): 103–115.

Takeo N, Kouhei O, Sho S, et al. Funksjonelt samarbeid mellom URAT1 (SLC22A12) og URATv1 (SLC2A9) ved nyreabsorpsjon av urat[J]. Nephrology Dialysis Transplantation, 2013, 28(3): 603–611.

Lee SY, Cho SS, Han KM, et al. Koreansk rød ginseng forbedrer serumurinsyrenivået ved å nedregulere URAT1 og oppregulere OAT1 og OAT3[J]. Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2024, 47(11): 1876–1882.

Falah K, Zhang P, Nigam AK, et al. In vivo-regulering av småmolekylære naturlige produkter, antioksidanter og næringsstoffer ved OAT1 og OAT3[J]. Næringsstoffer, 2024, 16(14): 2242.

 

Høyt innholdCistancheTilførselskilde for urinsyresenkende urter

For institusjoner, utøvere og enkeltpersoner fokusert påurteterapier for å redusere urinsyreog behandling av hyperurikemi,høy renhetCistanche tubulosaekstrakter et pålitelig naturlig råmateriale med verifisert effekt.

Kjernefordeler med forsyningskilden

Høystandardiserte aktive komponenter

Echinacoside (Ech): Større enn eller lik 10 %–40 %

Akteosid: Større enn eller lik 4 %–16 %

Totalt antall fenyletanoidglykosider: Større enn eller lik 40 %–85 % (oppfyller mat- og ekstraktkvalitetsspesifikasjoner for FoU og produktutvikling)

 

Cistanche base og fabrikk

Ta kontakt nå

 

Supportive Service Of Wecistanche-For mer informasjon om samarbeid
E-post:wallence.suen@wecistanche.com

 

Verifisert urinsyre-senkende mekanisme

Hemmer XOD/ADA for å redusere urinsyresyntese

Regulerer URAT1/GLUT9/OAT1/OAT3 for å fremme urinsyreutskillelsen

Beskytter nyrefunksjonen og lindrer hyperurikemi-relatert nyreskade

Trygg og godt tolerert

Akutt toksisitetstest: Ingen åpenbare bivirkninger ved høye doser

Ingen betydelig skade på lever, nyre eller større organer

Samsvar med krav til mat og kosttilskudd

Autoritativ forsyningskobling

https://www.xjcistanche.com/cistanche-extract-product/herbal-cistanche-dietary-supplement-capsules.html

 

Denne kilden gir standardiserteCistanche tubulosaekstrakt, kapsler, tabletter, orale væsker og tilpassede behandlingstjenester, som støtter urte-urinsyresenkende produktutvikling, klinisk forskning og kosttilskuddsformulering.