Cistanche Tubulosa beskytter dopaminerge nevroner gjennom regulering av apoptose og glialcelle-avledet nevrotrofisk faktor: in vivo og in vitro-Ⅱ

Atferdstester

Svømmeprøve (Zhu et al., 2014)

Koordinasjonen av kroppsbevegelse hos mus ble målt ved svømmetest. Musene ble individuelt plassert i en vanntank (25 cm i høyden og 10 cm i diameter) som inneholdt 10 cm vann og testet i et rolig miljø for å registrere deres stasjonære varighet over 5 minutter.

Open Field Test (Kawai et al., 1998)

Bevegelsesaktivitet ble målt ved å bruke Open field-testen. Musene ble testet i et stille og svakt opplyst miljø og plassert individuelt i en 30 cm × 30 cm × 15 cm gjennomsiktig akrylbeholder med et 6 cm × 6 cm separasjonsgitter i bunnen. Musene fikk 10 minutter til å tilpasse seg miljøet, og deretter ble ambuleringen av rutenettnummeret og oppvekstfrekvensen til individuelle mus målt fem påfølgende ganger for å oppnå gjennomsnittsverdier.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA FOR FORBEDRING AV SEKSUELL FUNKSJON PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Hjernevevsprøvetaking

Før vevsprøvetaking ble musene matet ad libitum med fri tilgang til vann og fikk medikamentintervensjon i 14 påfølgende dager. Fire mus i hver gruppe ble valgt ut og raskt halshugget. SN (Bregma: -2,75 mm -2,92 mm) fra hvert dyr ble isolert og plassert på is. Hjernevev ble skylt med 0,9 % iskald natriumkloridløsning for å fjerne eventuelt blod og tørket på filterpapir før oppbevaring ved -80◦C. Fire mus fra hver gruppe ble bedøvet intraperitonealt og brystene åpnet. En infusjonsnål ble deretter satt inn i venstre ventrikkel til hvert dyr. For å fjerne blod i sirkulasjonssystemet ble det høyre atrievedhenget kuttet og dyret ble infundert med 4◦C normalt saltvann til leveren ble blek for å sikre suksessiv perfusjon. Så snart avløpet fra høyre atrium ble klart, ble hvert dyr perfusert med 4 % paraformaldehydfiksativ. Etter perfusjonen ble hjernevevet til hvert dyr dissekert forsiktig og etterfiksert i 4% paraformaldehyd i 24 timer. Festet hjernevev ble deretter skylt under rennende vann, dehydrert i en gradert serie etanolløsninger og renset i xylenløsning. Dette ble fulgt av parafinneddykking og innstøping.

Endringer i DA-mengde målt ved HPLC

Nanopulverisert SN fra hver gruppe ble plassert i et isbad inneholdende 0,9 % natriumkloridløsning (1:9-forhold). Hjernevevet ble homogenisert ved bruk av en ultrasonisk celleforstyrrelse og sentrifugert ved 1200 rpm i 20 minutter ved 4◦C for å oppnå supernatanten. For HPLC ble en Hypersil AA-ODS-kolonne (2,1 mm × 200 mm, 5 µm) ved 30◦C kolonnetemperatur brukt. Fluorescensdeteksjon ble utført ved 280 nm λex og 340 nm λem. Injeksjonsvolumet var 10 µL.

Ekspresjon av TH, GDNF, GFR 1 og Ret påvist ved immunhistokjemi

Parafinseksjoner (5 µm tykke) av individuelt hjernevev ble isolert fra hvert dyr og plassert i et 40◦C varmt vannbad for å flate ut og feste seg til glassglass. Alle vevsglassene ble inkubert i en 60◦C ovn i 3–6 timer, etterfulgt av xylenavvoksing, gradientetanoldehydrering og antigenhenting ved inkubering i en sitronsyrebuffer og oppvarming i mikrobølgeovn i 20 minutter. Vevsglassene ble deretter inkubert i en 3% H2O2-løsning ved romtemperatur i 10 minutter. Etter å ha blitt vasket tre ganger i PBS, ble vevsglassene inkubert med normalt serum i et lukket kammer ved romtemperatur i 20 minutter. Immunhistokjemisk farging ble utført i henhold til produsentens instruksjoner. En Motic Med 6.0 bildeanalysator ble brukt til å beregne verdien av integrert optisk tetthet i de positivt fargede cellene.

Western blot-analyse i hjernevev hos mus

Denne studien vurderte proteinekspresjonen av tyrosinhydroksylase (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 og Bax. Hjernelysatet fra hver gruppe ble homogenisert i 3{{10}} min på is, etterfulgt av lavtemperatursentrifugering, 20,000 rpm, ved 4 ◦C for 5 min for å samle supernatanten. Proteinprøvene ble separert under konstant trykk ved å bruke en 10% SDS-PAGE gel som beskrevet ovenfor. Den primære antistoffkonsentrasjonen: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml og Bax 0,11 mg/ml. Fremgangsmåten var den samme som ovenfor.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FOR ANTI ALDRING ANTI-ALZHEIMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Statistisk analyse

Denne studien brukte SPSS 20.0 statistisk programvare for databehandling og analyse. Parameterverdier ble uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik (¯x ± S). ANOVA ble brukt til enkeltfaktordataanalyse. LSD eller Games-Howell-testen ble brukt for å sammenligne gruppene. P< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

RESULTATER

De aktive komponentene i C. tubulosa Nanopowder

I området 200–400 nm skanning hadde ECH i C. tubulosa og VER i 330 nm den maksimale absorpsjonstoppen, som dukket opp innen 20 min. ICA hadde maksimale absorpsjonstopper ved 270 nm og dukket opp etter 20 minutter (figur 1A). Resultatene viste at de negative prøvene ikke forstyrret påvisningen (figur 1B). Prøvene og kontrollen hadde de samme kromatografiske toppene og den negative prøven hadde ingen. Dette viste at de andre ingrediensene i prøven ikke forstyrret komponenten som ble målt. Dessuten kan de tre komponentene og de tilstøtende toppene nå separasjonsgrunnlinjen og separasjonsgraden var større enn 1,5.

C. tubulosa Nanopowder Redusert MPP+ -Indusert cytotoksisitet i MES23.5-celler

Levedyktigheten til MES23.5-celler ble betydelig redusert med økende konsentrasjoner av MPP+. Figur 2F viser den signifikante cytotoksisiteten til forskjellige konsentrasjoner av MPP+.

C. tubulosa nanopowder reduserte MPP+-indusert cytotoksisitet og forbedret levedyktigheten til MES23.5-celler. Figur 2G viser at C. tubulosa nanopowder-doser på 10–250 µg/ml utøvde doseavhengige beskyttende effekter på de MPP+-behandlede MES23.5-cellene.

Cytomorfologisk effekt av C. tubulosa Nanopowder

Normale MES23.5-celler hadde god celleadhesjon og var spindelformet med klare cellegrenser og synapser. MPP+-skadede MES23.5-celler viste dårlig celleadhesjon og krymping, og mange ble suspendert i media med sammentrukket synapser. Disse cellene ble aggregert, krympet og runde med vakuoler inni, og kjernene ble oppløst eller kollapset. C. tubulosa nanopowder i forskjellige doser forbedret cytomorfologien til MES23.5-celler i forskjellige grader ved å forbedre celleadhesjon og synaptisk clearance av bærergruppen. MES23.5-celler i høydose C. tubulosa-behandlingsgruppen viste morfologi som var lik den normale kontrollgruppen (figur 2A–E).

Effekt av C. tubulosa nanopowder på TH-ekspresjon og apoptose i cellene

Figur 3 viser en signifikant reduksjon i TH-proteinekspresjonen i bærergruppen. TH-proteinekspresjonen økte forskjellig i grupper behandlet med forskjellige doser av C. tubulosa. LSD-testen viste imidlertid at det ikke var noen signifikant forskjell mellom de tre behandlede gruppene.

Figur 4 viser resultatene av apoptosevurderingen ved bruk av flowcytometri. Raten av apoptose i bærergruppen var signifikant høyere enn i de andre gruppene. Celler behandlet med forskjellige doser av C. tubulosa nanopowder viste forskjellige grader av nedgang i den apoptotiske hastigheten sammenlignet med vehikelgruppen. Celler i mellom- og høydose C. tubulosa-behandlingsgruppen hadde den mest signifikante forbedringen i apoptotisk rate sammenlignet med de andre C. tubulosa-behandlingsgruppene. LSD-testen viste at det ikke var noen signifikant forskjell mellom de to behandlede gruppene, men også en signifikant forskjell mellom lavdosegruppen.

Effekt av C. tubulosa Nanopowder på Bcl2/Bax-proteinekspresjon i cellene

Figur 5 viser at ekspresjonen av Bcl2-protein i cellene i bærergruppen var signifikant lavere sammenlignet med den normale kontrollgruppen. I motsetning til dette var uttrykket av Bax-protein i celler i bærergruppen signifikant høyere enn i den normale kontrollgruppen. C. tubulosa-behandlingsgrupper viste økt Bcl2-proteinekspresjon og redusert Bax-proteinekspresjon i MPP+-behandlede MES23.5-celler. Mellom de tre behandlede gruppene var det signifikante forskjeller i LSD-testen. Disse effektene var doseavhengige.

Atferdstester

Resultatene fra svømmetesten antydet at musene i kjøretøygruppen hadde relativt lang stasjonær varighet, som økte over tid. På dag 14 hadde musene i bærergruppen en signifikant lengre stasjonær varighet enn musene i den normale kontrollgruppen. Den stasjonære varigheten av musene i

den lave dosenC. tubulosabehandlingsgruppen var ikke signifikant forskjellig fra musene i bærergruppen. Imidlertid var den stasjonære varigheten til musene i høydose C. tubulosa-behandlingsgruppen signifikant mindre enn for musene i bærergruppen.

Resultatene av Open field-testen antyder at etter MPTP-indusert skade i musene, viste musene i vehikelgruppen en betydelig nedgang i deres evne til spontan aktivitet som vist av oppdrettsfrekvensen. Etter en 14-dagers administrasjon avC. tubulosa nanopowder, musene i moderat- og høydosebehandlingsgruppene hadde signifikant høyere oppdrettsfrekvenser sammenlignet med musene i bærergruppen (figur 6A, B).

Effekt av C. tubulosa Nanopowder på DA-innhold i mus

Endringer i DA-innholdet til SN ble bestemt ved HPLC. Det ble funnet at DA-innholdet i hjernen til bærergruppen ble betydelig redusert. DA-innholdet i hjernen til PD-mus i lavdose C. tubulosa-behandlingsgruppen skilte seg ikke signifikant fra musene i bærergruppen. ImidlertidC. tubulosa behandlingøkte DA-nivåene i hjernen til PD-mus på en doseavhengig måte. Hjernen til PD-mus behandlet med høydose C. tubulosa hadde et betydelig høyere DA-innhold enn hjernen til mus i bærergruppen (Figur 6C).

Effekt av C. tubulosa Nanopowder på TH-ekspresjon i mus

Antall TH-positive celler og nivået av TH-proteinekspresjon i SN av MPTP-induserte PD-mus var lavere sammenlignet med mus i kontrollgruppen. Etter C. tubulosa-behandlingen økte antallet TH-positive celler og nivået av TH-proteinekspresjon i SN av MPTP-induserte PD-mus, med en signifikant forskjell mellom høydose C. tubulosa-behandlingsgruppen og bærergruppen ved LSD-test; og det var signifikante forskjeller mellom de tre behandlede gruppene (figur 7).

Effekt av C. tubulosa Nanopowder på proteinekspresjon av GDNF og dets reseptorer, GFR 1 og Ret i mus

Proteinuttrykket av GDNF og dets reseptorer, GFR 1 og Ret, i de positivt fargede cellene, ble evaluert ved bruk av immunhistokjemi. Western blot-analyse ble brukt for å evaluere proteinekspresjonsnivåene i SN for de forskjellige gruppene av mus. Funnene for de forskjellige gruppene var like ved bruk av de to deteksjonsmetodene. Ekspresjonen av GDNF og dets reseptorproteiner, GFR 1 og Ret, i positivt fargede celler i SN av musene i bærergruppen, var signifikant lavere enn i musene i den normale kontrollgruppen. Ulike doser av C. tubulosa-behandling økte antallet GDNF-, GFR 1- og Ret-positive celler (figur 8A–S).

Proteinekspresjonen av GDNF, GFR 1 og Ret i SN til musene i bærergruppen var signifikant lavere enn hos musene i kontrollgruppen. Økende behandlingskonsentrasjoner avC. tubulosa nanokraftforbedret uttrykket av disse proteinene betydelig. Proteinekspresjonen av GDNF, GFR 1 og Ret i SN til musene i høydose C. tubulosa-behandlingsgruppen var signifikant høyere enn i musene i bærergruppen (P< 0.01; Figures 8T, U). 

Effekt av C. tubulosa Nanopowder på proteinuttrykk av Bcl2/Bax i mus

Bcl2-proteinekspresjon ble betydelig redusert og Bax-proteinekspresjon ble betydelig forbedret i SN av mus i bærergruppen (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

DISKUSJON

PD og apoptose

PD er en nevrodegenerativ lidelse. I følge Zhang et al. (2005), er prevalensen 10,7 % i den kinesiske befolkningen over 55 år og 1,67 % hos de over 65 år. Antall PD-pasienter har økt årlig med akselerasjonen av global aldring, noe som legger en stor økonomisk byrde på familiene til pasientene og samfunnet for øvrig. I hjernen er dopaminerge nevroner hovedsakelig involvert i syntesen og sekresjonen av DA. De er vidt distribuert i sentralnervesystemet og lokalisert primært i SN (80%). TH er det nøkkelhastighetsbegrensende enzymet for DA-syntese. Dermed reduserer hemming av TH-aktivitet DA-syntese (Huot og Parent, 2007). De viktigste patologiske og biokjemiske endringene av PD er apoptose av dopaminerge nevroner i SN, en betydelig reduksjon av nigrostriatal DA, og dannelsen av Lewy-legemer i dopaminerge nevroner (Dexter og Jenner, 2013). Etiologien til PD involverer assosierte genetiske faktorer, miljøfaktorer og aldring av nervesystemet (Allam et al., 2005). Patogenesen til PD er fortsatt uklar i moderne medisin. Siden slutten av 1960-tallet har levodopa-erstatningsterapi blitt brukt med suksess for å behandle PD og har blitt anerkjent som et stort vendepunkt i PD-behandling. Imidlertid forårsaker den langsiktige bruken av denne terapien bivirkninger og terapien behandler ikke de underliggende årsakene til PD (Del Sorbo og Albanese, 2008). Derfor er aktiv forskning for nye medisiner eller behandlingsmetoder rettet mot beskyttelse av dopaminerge nevroner avgjørende for behandling av PD.

I tidligere studier indikerte bruken av terminal deoksynukleotidyltransferase-mediert dUTP nick-end-merking at 0,6 %–4,8 % av dopaminerge nevroner i SN av PD-pasienter viste apoptose (Mochizuki et al., 1996). Elektronmikroskopi viste apoptotiske trekk, inkludert kromatisk kondensasjon og apoptotiske legemer i dopaminerge celler (Anglade et al., 1997). Tompkins et al. (1997) utførte en ultrastrukturell analyse av hjernevevsobduksjoner fra pasienter med PD, AD og diffus Lewy body disease (DLBD). De fant apoptotiske kropper i det tette laget av SN hos PD- og DLBD-pasienter, noe som ga avgjørende bevis på nevronal apoptose ved PD og relaterte sykdommer. Derfor er reduksjon eller undertrykkelse av apoptose i dopaminerge nevroner grunnleggende for PD-behandling.

Tidligere studier viste at MPTP induserte PD-lignende symptomer. MPTP krysser blod-hjerne-barrieren og metaboliseres av type B monoaminoksidaser i astrocytter. Det blir deretter omdannet til giftig MPP+, som akkumuleres i mitokondriene til dopaminerge nevroner gjennom proteininntaket til DA-transportøren. Det genererer dermed overflødige oksygenfrie radikaler som hemmer kompleks I-aktiviteten til mitokondriell respirasjonskjede og ATP-syntese. Disse hendelsene fremmer ytterligere dannelse av frie radikaler og oksidative stressreaksjoner, og fører til slutt til degenerasjon og død av dopaminerge nevroner. Derfor brukte denne studien MPP+ for å etablere en in vitro-bærer i MES23.5 dopaminerge nevroner og MPTP for å indusere en kjøretøymus for gjensidig verifisering. I følge resultatene av MTT-analysen reduserte MPP+ signifikant levedyktigheten til MES23.5-celler, noe som tyder på at MPP+ var cytotoksisk for dopaminerge nevroner. Resultatene viste også at C. tubulosa effektivt forbedret ekspresjonen av anti-apoptotiske proteiner og hemmet økningen av MPP+-indusert apoptose.

PD og GDNF

GDNF er en nevrotrofisk faktor, som først ble isolert av Lin et al. (1993). Lin et al. (1993) viste også at GDNF hadde spesifikke ernæringsmessige effekter på dopaminerge nevroner i mellomhjernen til rotter. GDNF, neurturin (NTN), persefin (PSP) og artemin (ART) utgjør GDNF-familien. De er strukturelt like og funksjonelt beslektede sekretoriske proteiner (Kotzbauer et al., 1996; Baloh et al., 1998; Milbrandt et al., 1998; Woodbury et al., 1998).

GDNF-reseptoren består av to komponenter. Den første komponenten, GFR, er festet til den ytre membranen av glykosylfosfatidylinositol (GPI) og forankret til overflaten av connexin. Den andre komponenten er Ret-proteinet. Forskning har vist at det er fire forskjellige typer GFR: GFR 1, GFR 2, GFR 3 og GFR 4. GFR 1 er en høyaffinitetsreseptor for GDNF (Onochie et al., 2000; Chen et al., 2001; Lindahl et al., 2001). Ret-protein er en funksjonell reseptor for GDNF. Homodimermolekylet til GDNF binder seg direkte til GFR 1 for å danne komplekser og interagerer med Ret, noe som resulterer i dimerisering og aktivering av Ret. På grunn av autofosforyleringen av Ret, aktiverer Ret flere vanlige TH-signalveier. I fravær av Ret-protein forårsaker GDNF proteinfosforylering av MAPK, PI-3 og PLC-, i tillegg til mRNA-ekspresjon og funksjonell aktivitet av C-fos gjennom reseptorproteinet, GFR 1 (He et al., 2008).

Studier har vist at GDNF hadde den sterkeste beskyttende effekten på dopaminerge nevroner (Rangasamy et al., 2010; Campos et al., 2012). I kjøretøy som bruker MPTP og 6-hydroksydopamin (6-OHDA) for å indusere skade i dopaminerge nevroner, beskytter GDNF dopaminerge nevroner ved å redusere apoptose og fremme aksonal vekst for å indusere stamcelledifferensiering (Lucas et al., 2012; Littrell et al., 2013). Lin et al. (1993) viste at GDNF spesifikt fremmet levedyktighet, differensiering og aksonal vekst av dopaminerge nevroner for å fremme opptak av DA i nevroner. Studien viste også at GDNF ikke bare forhindret akutt toksisitet, men også lindret langsiktig toksisitet av MPP+ eller 6-OHDA i dopaminerge nevroner, og forhindret dessuten celledød i stressede eller skadede celler (Yu et al., 2010). I tillegg fremmet GDNF nevrale stamcelleproliferasjon og differensiering mot dopaminerge nevroner i mellomhjernen (Lindsay, 1995) for å redde dopaminerge nevroner fra retrograd degenerasjon (Hong-Juan et al., 2011).

Studier har vist at GDNF-ekspresjon i SN ble betydelig redusert i dyrebærere (Yang et al., 2010). Dette antyder at det kan være en av mekanismene for patogenese hos PD-rotter. Injeksjonen av 5–15 µg/d GDNF i lateral ventrikkel eller striatum til et MPTP-indusert bærerdyr i tre påfølgende måneder fremmet nigrostriatal reparasjon av det dopaminerge systemet i bærerdyret (Grondin et al., 2002). Studier av GDNF-behandling for PD i dyrekjøretøyer har vist at intracerebral injeksjon av GDNF i forskjellige hjerneregioner, slik som SN, caudate nucleus og lateral ventrikkel, forbedret bevegelsesforstyrrelser assosiert med PD-dyremodeller, inkludert redusert motorisk aktivitet, muskelstivhet og skjelving (Grondin et al., 2002). Imidlertid kan GDNF ikke direkte passere gjennom blod-hjerne-barrieren. Derfor innebærer lokal cerebral injeksjon av GDNF betydelig risiko og vanskeligheter ved klinisk anvendelse. Søknader for å introdusere eksogen GDNF via mikrosfærer med kontrollert frigjøring, kapsler med forsinket frigjøring og virale gener blir fortsatt studert (Liang et al., 2010; Yang et al., 2010; Qiao et al., 2012). Gitt begrensningene til ulike teknikker for å introdusere eksogen GDNF i hjernen, er nevrobeskyttende midler som fremmer frigjøring av endogen GDNF viktige for klinisk anvendelse.

PD ogC. tubulosaNanopulver

PD er mer vanlig hos middelaldrende voksne og eldre. Teorien om TCM vurderer at PD primært er lokalisert i hjernen og hovedsakelig skyldes lever- og nyremangel, i tillegg til vital energi og blodmangel. I følge denne teorien bør PD-behandling derfor fokusere på å styrke nyre og benmarg.Yang et al. (2010)brukte randomiserte, dobbeltblindede og placebokontrollerte kliniske studier og fant at kombinasjonsterapi ved bruk av Madopar og nyretonifiserende oppskrifter lindret motoriske dysfunksjoner til PD-pasienter. Behandlingsresultatet var bedre enn en enkelt terapi med Madopar. Behandlingseffekten av TCM-monoterapi eller reseptbelagte sammensatte ved PD har blitt bekreftet i PD-dyremodeller og kliniske applikasjoner. TCM-applikasjoner for å tonifisere nyrene og fremme blodsirkulasjonen reduserte dosen av monoterapi for PD ved bruk av Madopar. Noen studier har antydet at TCM forbedret symptomer på PD og beskyttet dopaminerge nevroner, som kan ha vært nært knyttet til fremme av endogent GDNF-uttrykk (Hong-Juan et al., 2011; Qiao et al., 2012).

Den nyretonifiserende forbindelsen som ble brukt i denne studien,C. tubulosananopulver, inneholdtCistanche, epimedium, ogRhizoma polygonati. Moderne forskning tyder på at den kjemiske sammensetningen avCistancheer ECH, som beskytter dopaminerge nevroner i SN i MPTP-induserte PD-mus og hemmer reduksjonen av DA og DA-transportøren (Zhao et al., 2010). I tillegg forhindrer den 6-OHDA-indusert reduksjon i DA og beskytter striatale dopaminerge nevroner (Chen et al., 2007). Epimedium hemmer aktiveringen av caspase-3 og utøver nevrobeskyttende roller (Liu et al., 2011). Epimedium flavonoider fremmer effektivt proliferasjon og differensiering av nevrale stamceller (Yao et al., 2010).

I denne studien,C. tubulosananopowder motvirket økningen av MPP+-indusert apoptose på en doseavhengig måte. Det forbedret TH-uttrykket betydelig iin vitrobærer og hadde betydelige anti-apoptotiske effekter i dopaminerge nevroner. De MPTP-induserte bærermusene viste atferdsforstyrrelser og betydelig redusert TH-ekspresjon i mellomhjernens vev og DA-nivåer, som er typiske patologiske trekk ved PD. Ulike doser avC. tubulosananopowder forkortet den stasjonære varigheten, forbedret autonome aktiviteter, forbedret atferdsforstyrrelser, forhøyede DA-nivåer i hjernen og økt TH-uttrykk i kjøretøyer. Disse resultatene antydet detC. tubulosananopowder utøvde beskyttende effekter i dopaminerge nevroner, og forbedret dermed atferdsforstyrrelser til kjøretøyer. Ulike doser avC. tubulosananopowder økte uttrykket av GDNF-protein og dets reseptorproteiner i hjernen til kjøretøymus. HøydoseC. tubulosabehandling oppregulerte Bcl2-ekspresjonen betydelig og reduserte Bax-ekspresjonen, noe som antydet detC. tubulosananopulverkan fremme GDNF-uttrykk og sekresjon i den MPTP-skadede musehjernen. I tillegg kan det utøve nevrobeskyttende effekter i dopaminerge nevroner og minimere nevronal apoptose gjennom de nevrotrofiske støtterollene til GDNF.

Denne studien viste detC. tubulosananopowder utøvde beskyttende effekter i dopaminerge nevroner i beggein vitroogin vivoog økt TH-uttrykk for å forbedre DA-innhold. Det forbedret også atferdsforstyrrelser hos MPTP-induserte bærermus, regulerte proteinuttrykk av GDNF og dets reseptorproteiner i SN, og hadde anti-apoptotiske effekter i PD-musene. Mekanismen som ligger til grunn for de kliniske effektene avC. tubulosananopowder i PD kan innebære å øke innholdet av endogen GDNF i hjernen og dermed redusere skaden på dopaminerge nevroner.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FOR FORBEDRING AV SEKSUELL FUNKSJON PHGS75% ECH 30% ACT 12