Innholdsbestemmelse av fem forbindelser i Semen Rehmanniae og etablering av dets HPLC-fingeravtrykk

Tabell 3 Resultater av gjenopprettingstest (n=6)

2.4 Prøvebestemmelse

De seks partiene av Rehmannia som ble samlet ble fremstilt i henhold til metoden under "2.2.2" og prøvetatt og bestemt i henhold til de kromatografiske forholdene under "2.1". Resultatene av innholdsbestemmelsen er vist i tabell 4. Resultatene viser at blant de fem komponentene er innholdet av rehmannia-glykosid D høyest, og varierer fra 0.460 % til {{1 0}}.730 %; innholdet av leonuri-glykosid er nummer to, og varierer fra 0,100 % til 0,270 %, og innholdet av de to komponentene i prøver fra ulike produksjonsområder er ikke signifikant forskjellig. I prøve SX1, bortsett fra echinacoside, er innholdet av de andre fire komponentene betydelig høyere enn i andre partier av prøver; innholdet av echinacoside, cistancheside A og verbascoside i Rehmannia glutinosa fra forskjellige produksjonsområder er ganske forskjellig og uregelmessig.

CISTANCHE URT MEDGOD KVALITET KONSISTENS

2.5 Etablering og likhetsevaluering av HPLC-fingeravtrykk av Rehmannia glutinosa

Kromatogrammene og dataene for flerkomponentinnholdsbestemmelsen i Rehmannia glutinosa ble importert til programvaren "Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System (2012 Edition)", og kromatogrammet til SX1-testprøven ble valgt. som referansespekteret. Tidsvinduets bredde ble satt til 0.10 min, og medianmetoden ble brukt til å generere overlagrede spektre og referansespektre. Totalt 23 vanlige topper ble identifisert (se figur 3). Likheten mellom fingeravtrykkene til Rehmannia glutinosa-prøven og referansen var 0,904~0,950, noe som indikerer at prøvene av Rehmannia glutinosa fra forskjellige produksjonsområder og mellom rå Rehmannia glutinosa og kokt Rehmannia glutinosa var like og hadde god konsistens.

Tabell 4 Innholdsbestemmelsesresultater av 5 komponenter i Semen Rehmanniae/%

13. rehmanniosid D; 17. leonurid; 19. echinacoside; 20. kastanosid A; 21. akteosid

Figur 3 Overliggende HPLC-kromatogrammer av 6 batcher av Semen Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) og referanse (R)

3 Diskusjon

3.1 Valg av kromatografiske forhold

Fire mobilfasesystemer, acetonitril-vann, acetonitril-0,1 % maursyreløsning, metanol-vann og metanol-0,1 % maursyreløsning, ble undersøkt i denne studien. Resultatene viste at de fem komponentene hadde gode separasjonseffekter i acetonitrilsystemet; sammenlignet med acetonitril-vann-mobilfasesystemet, var toppene av rehmannia glutinosa og motherwort-glykosider i acetonitril--0.1 % maursyreløsning-mobilfase smalere og hadde god toppsymmetri. Samtidig, på grunn av ulik ultrafiolett absorpsjon av de fem komponentene, varierer innholdet i komponentene sterkt. For mer nøyaktig å bestemme innholdet i hver komponent og for å sikre at absorpsjonsintensiteten til de fem komponentene er jevnt fordelt i samme kromatogram, vil den ultrafiolette absorpsjonen avrehmannia glykosid D, motherwort-glykosid, echinacoside, cistancheside A og verbascoside ble analysert, og variabel bølgelengdebestemmelse ble valgt, det vil si 0-24 min, det første separerte rehmannia-glykosidet ble bestemt ved 203 nm og 24-40 min, det separerte echinacoside, cistancheside A og verbascoside ble bestemt ved 330 nm. I tillegg undersøkte denne studien også ekstraksjonseffektene av metanol, 70 % metanolløsning, 50 % metanolløsning og 50 % acetonitrilløsning som ekstraksjonsløsningsmidler. Resultatene viste at 70 % metanolløsning som ekstraksjonsløsningsmiddel bedre kan løse komponentene som skal testes, og den ekstraherte prøven har færre urenheter. Derfor valgte denne studien 70 % metanol som ekstraksjonsløsningsmiddel, acetonitril-0.1 % maursyreløsning som mobilfasesystemet, og brukte variabel bølgelengde for å bestemme innholdet av de fem komponentene i Rehmannia.

3.2 Analyse av prøvebestemmelsesresultater

Av bestemmelsesresultatene kan man se at etter damping, bortsett fra en svak økning i innholdet av echinacosid, ble innholdet av de andre fire komponentene betydelig redusert, spesielt innholdet av leonurisid og cistancheside A; innholdet av rehmannia glykosid D og cistancheside A i Rehmannia glutinosa fra samme produksjonsområde var litt forskjellig, og innholdet av leonurisid, echinacoside og verbascoside var signifikant forskjellig; Innholdet av echinacosid i Rehmannia glutinosa fra Henan produksjonsområde var betydelig høyere enn i prøvene fra Shanxi produksjonsområde, og innholdet av de andre fire komponentene var litt annerledes. Samtidig, i henhold til HPLC-fingeravtrykket etablert i denne studien, var likheten mellom de 6 partiene med Rehmannia-prøver og kontrollfingeravtrykket 0.904~0.950, noe som indikerer at hovedkjemikaliet komponentene i de 6 partiene med Rehmannia-prøver før og etter prosessering var svært konsistente.

Oppsummert er innholdsbestemmelsesmetoden og HPLC-fingeravtrykket etablert i denne studien nøyaktige, pålitelige og har god spesifisitet. De kan brukes til å karakterisere endringene i komponentene og graden av prosessering av Rehmannia glutinosa før og etter prosessering, og gi teknisk støtte for kvalitetskontrollen av Rehmannia glutinosa. Denne studien har imidlertid ulempene med små prøvepartier og ufullstendig dekning av produksjonsområder, noe som krever ytterligere analyser og verifisering.

Referanser

[1] Kinesisk farmakopékomité. Farmakopéen til Folkerepublikken Kina: bind 1 [S]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Forskning på den historiske utviklingen av navnene på bearbeidet Rehmannia glutinosa og studiet av dens effektivitet [J]. Kinesisk patentmedisin, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe, et al. Forskningsfremgang på Rehmannia glutinosa og prediksjonsanalyse av dens kvalitetsmarkører [J]. Chinese Patent Medicine, 2022, 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Forskningsfremgang på den kjemiske sammensetningen og farmakologiske effektene av Rehmannia glutinosa [J]. Chinese Herbal Medicine, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangle. Forskningsfremgang på kjemiske komponenter og farmakologiske effekter av Rehmannia glutinosa［J］.

Drug Evaluation Research, 2015, 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei, et al. Analyse av kjemiske komponenter av fersk Rehmannia glutinosa, rå Rehmannia glutinosa og kokt Rehmannia glutinosa ved UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Kinesisk patentmedisin, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei, et al. Fingeravtrykkmønstergjenkjenning og multikomponent innholdsbestemmelse av forskjellige bearbeidede Rehmannia glutinosa-produkter［J］. Hubei Agricultural Sciences, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Forskningsfremgang på kjemiske komponenter og farmakologiske effekter av Rehmannia glutinosa［J］. Kinesisk urtemedisin, 2021, 52(6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian, et al. Sammenlignende studie av kjemiske komponenter av Rehmannia glutinosa før og etter behandling av UHPLC-Q-TOF/MS［J］. New Chinese Medicines and Clinical Pharmacology, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan, et al. Dynamisk akkumulering av nukleosid- og aminosyrekomponenter i Rehmannia glutinosa basert på UPLC-TQ-MS［J］. Kinesisk urtemedisin, 2021, 52(23): 7323-7330.

［11］ Li Yujiao. Studie på prosesseringsteknologi og mekanisme for "ni damping og ni eksponering" av Rehmannia glutinosa［D］. Jinan: Shandong University, 2023.

［12］ Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan, et al. HPLC Samtidig bestemmelse av innholdet av åtte komponenter i Rehmannia glutinosa og dets forskjellige bearbeidede produkter ved UPLC-fingeravtrykkanalyse og multiindekskomponentinnholdsbestemmelse [J]. Chinese Medicinal Materials, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Kvalitetsevaluering av Rehmannia glutinosa basert på UPLC-fingeravtrykk og innholdsbestemmelse av multiindekskomponenter [J]. Chinese Medicinal Materials, 2021, 44 (4): 917-923.