Effektiviteten av kombinasjonsbehandlingen av Laminaria Japonica og Cistanche Tubulosa-ekstrakter i hårvekst

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Kyungha Shin1# et al

Siden hårtap i hodebunnen har økt nylig, selv hos unge mennesker, noe som alvorlig påvirker individers livskvalitethårvekst-stimulerende effekter av Laminaria japonica ekstrakt (LJE) ogCistanche tubulosaekstrakt (CTE) ble undersøkt. Etter å ha bekreftet den anagene fasen av follikler under barbering, ble C57BL/6-hannmus påført dermalt med 3 prosent Minoxidil eller oralt administrert med kombinasjonene LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)i 21 dager. Minoxidil fremmet gjenvekst av hår og økte -glutamyl transpeptidase (-GTP) og alkalisk fosfatase (ALP) aktiviteter. I tillegg oppregulerte Minoxidil nivåene av epidermal vekstfaktor (EGF) og vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF). Samadministrasjon av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)ved 54 mg/kg LJE pluss 162 mg/kg, CTE (Cistanche tubulosaekstrakt)utøvde synergistiske fremmende effekter på hårveksten, sammenlignbar med 3 prosent Minoxidil. LJE forbedret fortrinnsvis ALP-aktivitet, mens CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)økte både -GTP- og ALP-aktiviteter samt EGF- og VEGF-uttrykk. In vivo luftposebetennelsesmodell, karragenan-indusert vaskulær ekssudasjon og økte nitrogenoksid- og prostaglandin E2-konsentrasjoner i ekssudatene ble synergistisk undertrykt ved samtidig administrering av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt). I tillegg ble inflammatorisk celleinfiltrasjon vesentlig hemmet av kombinasjonsbehandlingen. Resultatene tyder på at kombinasjonsbehandling med LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)upassende doser og forhold forhindrer hårtap og forbedrer alopecia, som delvis kan være mediert av deres anti-inflammatoriske aktiviteter.

Nøkkelord Hårvekst, betennelse, Laminaria japonica,Cistanche tubulosa, kombinasjonsbehandling

Cistanche tubulosaekstrakt har mange funksjoner

I det siste har hårtap i hodebunnen økt selv hos unge mennesker, noe som har påvirket en persons livskvalitet alvorlig. Selv om skallethet ikke er et av helseproblemene, kan det forårsake dypt psykologisk ubehagelig sosialt stress. Derfor er det av stor interesse å utvikle nye forebyggende og/eller terapeutiske materialer for hårtap og gjenvekst. Til tross for milliardmarkedet er det noen få for tiden effektive produkter tilgjengelig [1].
Hårsekkene omformer seg selv i perioder med vekst (anagen), regresjon (katagen), hvile (telogen) og avfall (eksogen) [2]. Under catagen gjennomgår mange av follikkelcellene programmert celledød (apoptose) [3], noe som reduserer follikkelstørrelsen når folliklene går inn i telogen. Aktivering av epitelstamceller som sjelden sykler, lokalisert i folliklenes bule-region, gjengir follikulær regenerering ved begynnelsen av neste anagene fase [4]. Stamcelleavkom danner en ny follikulær matrise under tidlig anagen, og hårskaftet og den indre rotskjeden er avledet fra disse relativt udifferensierte matrisecellene [5]. Det er velkjent at størrelsen på hårsekken og varigheten av den anagene fasen styrer henholdsvis størrelsen (diameteren) og lengden på hårstrået. Denne sykliske veksten av hår reguleres av ulike vekstfaktorer.

Minoxidil, finasterid og Propecia er kommersielt tilgjengelige for å redusere hårtap og forenkle hårvekst. Minoxidil er en vasodilator som utøvde en bivirkning for å lettehårvekst[6] som kan skyldes dens næringstilførsel og kaliumkanalåpningsaktiviteter [7,8]. Minoxidil er effektivt for androgen alopeci, blant andre behandlinger for skallethet, selv om effektiviteten forsvinner innen måneder etter seponering av behandlingen. Til sammenligning er finasterid og Propecia, terapeutiske midler for godartet prostatahyperplasi og prostatakreft, registrert i mange land for androgenetisk alopecia (mannlig skallethet). Finasteride og Propecia er syntetiske antiandrogener, som hemmer type II 5- reduktase, et enzym som omdanner testosteron til dihydrotestosteron (DHT) i papillacellene nederst i hårsekkene [9].

Laminaria japonica, Undaria pinnatifida og Cladosiphon okamuranus, vidt distribuert i mange land, har blitt brukt som terapeutika i orientalsk medisin i lang tid. I tidligere studier hadde fucoidan, et sulfatpolysakkaridkompleks, blitt ekstrahert og identifisert fra tangene og bekreftet å ha antioksidative, anti-koagulerende, anti-kreft og anti-inflammatoriske aktiviteter [10,11]. Deretter er gunstige effekter av fucoidan på inflammatoriske sykdommer, iskemi, immundysfunksjon og svulster vist [12,13]. På den andre siden,Cistanche tubulosaekstrakt (CTE) har også blitt mye brukt til tradisjonell medisinering i Kina. CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)forbedrer blodstrømmen ved å senke kolesterolnivået i blodet [14]. Nylig ble det rapportert at CTE reduserte produksjonen av tumor-nekrosefaktor- (TNF- ) og interleukin-4 (IL-4) som er hovedfaktorer for produksjon av nitrogenoksid (NO) i den inflammatoriske veien [15]. Vi demonstrerte også at fucoidan fra Laminaria japonica-ekstrakt (LJE) og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)synergistisk svekket betennelse in vitro og in vivo [16]. Spesielt har det blitt påvist at det var en nær sammenheng mellom hud (spesielt tårekjertel) betennelse med alopecia [17]. Dermed dukker det opp antiinflammatoriske aspekter ved behandling av alopecia [18].
Basert på forbedringsaktivitetene på blodstrøm og betennelse, undersøker vi kombinasjonseffekten av LJE og CTE（Cistanche tubulosa ekstrakt)påhårvekstog underliggende mekanisme(r), sammenlignet med 3 prosent Minoxidil (Hyundai Pharmaceutical, Seoul, Korea), en velkjenthårvekstforsterker.

Cistanche tubulosaekstrakt er bra forHårvekst

Materialer og metoder

Materialer

LJE og CTE (Cistanche tubulosaekstrakt)ble hentet fra Misuba RTech Co., Ltd. (Asan, Korea). Tørket pulver av Laminaria japonica ble ekstrahert i renset vann ved 6 0oC i 24 timer, filtrert gjennom en 0,45 μm membran, desinfisert og spraytørket.Cistanche tubulosable ekstrahert i 80 prosent etanol, desinfisert, konsentrert og tørket. LJE og CTE (Cistanche tubulosaekstrakt)ble holdt ved 4oC, blandet (1:3) og oppløst i renset vann før bruk, og administrert oralt i et volum på 5 ml/kg.
Dyr
Hann C57BL/6 mus forhårvekststudie- og ICR-hannmus for inflammasjonsstudie ble kjøpt fra Daehan Biolink (Eumseong, Korea), og plassert i et rom med konstante miljøforhold (23±2ºC; 45-65 prosent relativ fuktighet; 12-timers lys -mørk syklus; 150-300 lux lysstyrke). Pelletsfôr og renset vann var tilgjengelig ad libitum. Alle dyreforsøkene ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Chungbuk National University (CBNU), Korea, og utført i henhold til Standard Operation Procedures (SOP) til Laboratory Animal Research Center, CBNU.

Behandling for hårvekst

Etter å ha bekreftet den anagene fasen ved å observere homogent rosa hudfarge i bakhuden til C57BL/6-mus (6 uker gamle, n=8/gruppe) etter klipping i den telogene fasen, ble håret barbert [1,19 ,20]. Fra neste dag ble mus uten synlige riper valgt og oralt
behandlet med LJE (18 eller 54 mg/kg), CTE (54 eller 162 mg/kg), eller deres blanding (18 pluss 54 eller 54 pluss 162 mg/kg) en gang daglig i 21 dager. Lave doser av LJE (18 mg/kg) og CTE (54 mg/kg) kom fra estimerte humane doser på 100 mg/kropp (70 kg) og 300 mg/kropp etter overflateoversettelse av kroppsvekt (Km{{14} } for henholdsvis menneske/Km=3 for mus). Høye doser av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)ble satt til 3 ganger, alene eller i kombinasjon, for å vurdere maksimale synergistiske effekter [16]. Minoxidil (3 prosent, 0,2 ml) ble påført lokalt én gang daglig på den barberte huden i samme tidsplan med LJE/CTE-behandling.

Grov observasjon av hårvekst

På dager med 3-dagers intervaller etter barbering og under behandling, ble musene lett bedøvet med dietyleter, og det ble tatt bilder på baksiden. Forholdet mellom hårvekst (gjenvekst område/barbert område) på fotografiene ble analysert ved bruk av et datastyrt bildeanalysesystem (Imageinside, Daejeon, Korea).

Mikroskopisk undersøkelse av hårsekker

På dag 14 og 21 ble musene ofret ved dyp anestesi med dietyleter, og ryggskinnene deres ble fjernet [1]. Rygghuden ble kuttet i to deler. Formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt (5 μm i diameter) av en del ble farget med hematoxylin-eosin for å undersøke antall hårsekker og de histologiske funnene. Den andre delen av vevet ble frosset i flytende nitrogen for enzymanalyse og immunanalyse.

Analyse av enzymaktivitet

Hudvev ble homogenisert i 4 volumer fosfatbuffer (pH 7,4). Homogenatet ble sentrifugert ved 3,000 rpm i 20 minutter, og supernatanten ble brukt for analyse av -glutamyltranspeptidase (-GTP) og alkalisk fosfatase (ALP) aktiviteter ved bruk av p-nitrofenylfosfat (PNPP)-DEAV som substrat [1,21].

Cistanche tubulosa

Kvantifisering av vekstfaktorer

Epidermal vekstfaktor (EGF) og vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) ble kvantifisert ved bruk av enzym-koblet immunosorbent assay (ELISA) sett (R&D Systems, Minneapolis, USA) i henhold til produsentens instruksjoner [1,22].

Behandling for betennelse

ICR-mus (7 uker gamle, n=8/gruppe) ble oralt behandlet med LJE (18 eller 54 mg/kg), CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)(54 eller 162 mg/kg), eller deres blanding (18 pluss 54 eller 54 pluss 162 mg/kg) en gang daglig i 7 dager [16]. På 1. dag av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)behandling, ble musene subkutant injisert med 10 ml steril luft på baksiden for å danne en pose [16,23,24]. Etter 2 og 5 dager ble posen injisert på nytt med 5 ml luft. En time etter siste LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)behandling ble 1 mL karragenan (1 prosent i saltvann; Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) eller dets vehikel (saltvann) injisert i posen.

Analyse av eksudatene

Luftposen ble vasket med 1 mL kald saltvann 6 timer etter karragenaninjeksjon, og nettovolumet av skyllevæske ble registrert [16]. Totalt antall inflammatoriske celler inkludert nøytrofiler, monocytter og lymfocytter ble bestemt ved bruk av en kolter.

Konsentrasjonene av NO og prostaglandin E2 (PGE2) ble bestemt med henholdsvis Griess-reagens (Sigma-Aldrich) og enzymimmunoassay (EIA) ved bruk av et Correlate-EIA-sett (Assay Designs, Ann Arbor, USA), [16].

Statistisk analyse

Data presenteres som gjennomsnitt±standardfeil. Den statistiske signifikansen ble bestemt ved enveis variansanalyse, etterfulgt av posthoc Tukeys multippelsammenligningstest. P-verdier<0.05 were="" considered="" to="" be="" statistically="">

Resultater

Påføring av Minoxidil (3 prosent), et referansemateriale, lettet markanthårvekstav C57BL/6 mus, som viser en nesten full dekning (92,4 prosent) av det barberte området (Figur 1, 2B) sammenlignet med 29,2 prosent i normal vekst (Figur 1, 2A) på dag 21. Selv om det er mindre effektivt enn Minoxidil-påføring , muntlig behandling av LJE lettet ogsåhårvekst, noe som fører til 33,5 og 69,1 prosent dekning ved henholdsvis 18 og 54 mg/kg (figur 1, 2C, 2D). CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)var også effektiv til å forbedrehårvekst, og nådde 73,6 og 80,4 prosent dekning ved henholdsvis 54 og 162 mg/kg (figur 1, 2E, 2F). Spesielt kombinasjonsbehandling med høye doser LJE (54 mg/kg) og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)(162 mg/kg) forbedret bemerkelsesverdighårvekstfra dag 12, sammenlignbar med effekten av Minoxidil (figur 1, 2H), selv om lave doser av LJE (18 mg/kg) og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)(54 mg/kg) utøver en synergistisk effekt bare i den tidlige fasen (figur 1, 2G).

Figur 1. Tidsforløp for gjenvekst av hår hos mus behandlet med Minoxidil, eller Laminaria japonica-ekstrakt (LJE) og/ellerCistanche tubulosaekstrakt (CTE). ,

○normal; ●, Minoxidil (3 prosent) påføring; △, 18 mg/kg LJE; ▼, 54 mg/kg LJE; □, 54 mg/kg CTE; ■, 162 mg/kg CTE; ◇, 18 mg/kg LJE pluss 54 mg/kg CTE; ◆, 54 mg/kg LJE pluss 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaekstrakt).

Figur 2. Representative grove funn av hårvekst hos mus behandlet med Minoxidil, eller Laminaria japonica-ekstrakt (LJE) og/ellerCistanche tubulosaekstrakt (CTE) på dag 21.

A, normal; B, Minoxidil (3 prosent) påføring; C, 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; E, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaekstrakt); F, 162 mg/kg CTE; G, 18 mg/kg LJE pluss 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE pluss 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaekstrakt).

Sammenlignet med normale hårsekker (Figur 3A), forbedret Minoxidil-påføring integriteten til hårsekkene, og viste større follikler og tykkere hårstrå (Figur 3B). Slike effekter ble også funnet i skinnet til mus behandlet med LJE og/eller CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)(Figur 3C-3H). Spesielt den hårsekkforsterkende effekten av kombinasjonsbehandling av LJE og CTE (Cistanche tubulosaekstrakt)var sammenlignbar med Minoxidil.

Figur 3. Representative mikroskopiske funn av hårvekst hos mus behandlet med Minoxidil, eller Laminaria japonica-ekstrakt (LJE) og/ellerCistanche tubulosaekstrakt (CTE) på dag 21.

A, normal; B, Minoxidil (3 prosent) påføring; C, 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; E, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaekstrakt); F, 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaekstrakt); G, 18 mg/kg LJE pluss 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE pluss 162 mg/kg CTE

Minoxidil-påføring økte aktiviteten til -GTP som induserer hårsekkene til anagen fase med 90-120 prosent på dag 14 og 21, sammenlignet med nivået av normal hud (figur 4). LJE (54 mg/kg) økte også enzymaktiviteten, selv om det var store variasjoner. CTE utøvde lignende effekter, og forbedret -GTP-aktiviteten betydelig på dag 14. Interessant nok kombinasjonsbehandling av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)ytterligere økte enzymaktiviteten høyere enn når ekstraktene ble brukt alene.
ALP-aktivitet, en markør for beinvekst og angiogenese, økte betydelig i huden på dag 14 og 21 etter topisk påføring av Minoxidil (Figur 5). LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)økte også ALP-aktiviteten etter oral administrering på en doseavhengig måte. Spesielt ble enzymaktiviteten synergistisk forbedret ved kombinasjonsbehandling med LJE og CTE.

Figur 4. Effekter av Minoxidil (MXD, 3 prosent), eller Laminaria japonica-ekstrakt (LJE) og/ellerCistanche tubulosaekstrakt (CTE) (i mg/kg) på -glutamyl transpeptidase (-GTP) aktivitet på dag 14 (A) og 21 (B) av behandlingen.

*Vesentlig forskjellig fra normal (Nor) kontroll (s<>

Figur 5. Effekter av Minoxidil (MXD, 3 prosent), eller Laminaria japonica-ekstrakt (LJE) og/ellerCistanche tubulosaekstrakt (CTE) (i mg/kg) på alkalisk fosfatase (ALP) aktivitet på dag 14 (A) og 21 (B) av behandlingen.

*Vesentlig forskjellig fra normal (Nor) kontroll (s<>

I analysen av EGF, en velkjenthårvekstfaktor, økte Minoxidil-påføring nivået av EGF 3,5 ganger av normal kontroll på både dag 14 og 21 (figur 6). LJE (18 mg/kg) økte EGF bare på dag 21, mens CTE (162 mg/kg) kraftig oppregulerte produksjonen på dag 14 og 21. Det er interessant å merke seg at kombinasjonsbehandlingen av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)selv ved lave doser viste markerte synergistiske effekter.

Minoxidil-behandling økte også nivået av VEGF med 50-80 prosent over kontrollverdien (figur 7). Selv om LJE var ineffektiv, CTE (Cistanche tubulosaekstrakt)utøvde bemerkelsesverdige forsterkende effekter. I tillegg kombinasjonsbehandling av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)viste en synergistisk aktivitet i den tidlige fasen på dag 14.

Figur 6. Effekter av Minoxidil (MXD, 3 prosent), eller Laminaria japonica-ekstrakt (LJE) og/ellerCistanche tubulosaekstrakt (CTE) (i mg/kg) på innhold av epidermal vekstfaktor (EGF) på dag 14 (A) og 21 (B) av behandlingen.

*Vesentlig forskjellig fra normal(Nor) kontroll (P<>

Figur 7. Effekter av Minoxidil (MXD, 3 prosent), eller Laminaria japonica-ekstrakt (LJE) og/ellerCistanche tubulosaekstrakt (CTE) (i mg/kg) på innhold av vaskulær endotelvekstfaktor (VEGF) på dag 14 (A) og 21 (B) av behandlingen.

*Vesentlig forskjellig fra normal (Nor) kontroll (s<>

Injeksjon av karragenan i ICR-museluftposen økte ekssudatvolumet i posen 6 ganger kontrollnivået (tabell 1). Slik økt eksudasjon ble signifikant dempet ved behandling med LJE (18 og 54 mg/kg) eller CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)(54 og 162 mg/kg). Spesielt reduserte kombinasjonsbehandling med LJE og CTE ekssudatvolumet ytterligere sammenlignet med de individuelle effektene. Antall inflammatoriske celler ble drastisk økt ved karrageenaninjeksjon: 34,6, 4,2 og 24,9 ganger kontrollnivåer for henholdsvis nøytrofiler, monocytter og lymfocytter (tabell 1). Imidlertid, LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)reduserte de inflammatoriske cellene betydelig på doseavhengige måter, der LJE var noe bedre enn CTE（Cistanche tubulosaekstrakt). Forventet ble synergistiske effekter i inflammatorisk celleinfiltrasjon oppnådd ved samtidig administrering av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt).
Parallelt med den inflammatoriske celleinfiltrasjonen i posen økte NO- og PGE2-innholdet i posen også drastisk etter karragenaninjeksjon (tabell 1). Sammenlignet med den milde effekten av LJE, CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)reduserte NO-konsentrasjonen markant. Kombinasjonsbehandling av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)reduserte NO-nivået ytterligere på en doseavhengig måte. På lignende måte ble det økte PGE2-nivået synergistisk undertrykt ved kombinasjonsterapi av LJE og CTE (tabell 1).

Diskusjon

Menneskehodet har i gjennomsnitt 100000 hårsekker. I løpet av livet vokser og faller hver follikkel omtrent 20 ganger, og viser daglig hårtap på 100 hårstrå [25]. Hårtap inkludert alopecia og skallethet er en plagsom tilstand for menn og kvinner, spesielt i det moderne samfunnet. Derfor er det av stor betydning å utvikle nye terapier som forhindrer hårtap og øker gjenveksten av hår. I denne forbindelse har alternativ medisin tiltrukket seg etterforskernes interesse.

Aldringsrelaterte morfologiske, histokjemiske og biokjemiske aspekter ved mannlig skallethet har blitt avslørt av en serie studier på stubbehalemakaker. Ved mannlig skallethet ble den telogene fasen forlenget, mens den anagene fasen ble forkortet. Derfor anses det at for å forbedre hårtap, er vedlikehold av hårsekkforlengelse som skjer fra tidlig anagen til midten av anagen svært viktig [26]. I denne studien demonstrerte vihårvekst-tilrettelegge aktivitet av en kombinasjonsbehandling LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt). Det viktigste er at kombinasjonsforskriften av LJE (54 mg/kg) og CTE (162 mg/kg) viste en utmerket hårvekstaktivitet, til tross for oral administrering av ekstraktene. Spesielt var effekten av kombinasjonsterapi sammenlignbar med den av dermal påføring av en høy konsentrasjon (3 prosent) av en renset forbindelse Minoxidil, selv om konsentrasjonene av aktive ingredienser av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)i huden etter oral administrering ble ikke bekreftet.
I den syklende musehuden er -GTP-aktivitet uttalt under anagen, men sterkt redusert under telogen [27]. I huden eksisterer enzymet utelukkende i de ytre og indre rotkappene til hårsekkene under nivået til talgkjertlene der -GTP er fraværende [27]. Til sammenligning er ALP fremtredende uttrykt i de pilosebaceous enhetene, og aktiviteten øker i området for gjenvekst av hår. ALP som angiogen faktor forbedrer ernæringstilførselen til dermale papiller og induserer derved tykkelse under anagen [28]. Det ble imidlertid bekreftet at ALP-aktiviteten gikk ned i den alopetiske huden [21]. I den mekanistiske studien økte referanseforbindelsen Minoxidil markant aktiviteten til -GTP og ALP, noe som antyder at Minoxidil letterhårvekstikke bare ved å indusere hårsekker
til den anagene fasen, men også ved å forbedre blodstrømmen via angiogenese. Siden LJE økte ALP-aktiviteten, foreslås det at LJE viser en gunstig effekt påhårvekstgjennom dets angiogene potensial, som utledet fra en tidligere studie at fucoidan, en aktiv ingrediens i LJE, har en blodstrømsforbedrende aktivitet [29]. Til sammenligning, CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)forbedret både -GTP- og ALP-aktivitetene, noe som tyder på dens effekter på induksjon av anagen fase samt forbedring av blodstrømmen. I henhold til de synergistiske virkningene på -GTP- og ALP-enzymer, antas det at en høyere hårvekst kan oppnås ved samtidig administrering av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt).
Det er velkjent at forskjellige cytokiner og vekstfaktorer inkludert EGF og VEGF er involvert i reguleringen av hårmorfogenese og vekst [30,31]. Det er interessant å merke seg at faktorer avledet av hudpapiller har kjemotaktiske aktiviteter på de omkringliggende cellene, som igjen fører til fremme avhårvekst[32]. EGF uttrykkes i forbindelse med utviklingen av hårsekker [33,34]. Selv om ekspresjonen av både EGF og dens reseptor (EGFR) i den ytre rotskjeden nedreguleres med fullføringen av follikulær vekst, gjenopprettes deres uttrykk når follikkelcellene går inn i den anagene fasen. VEGF spiller en viktig rolle involvert i angiogenese under inflammatorisk reaksjon og tumorutvikling [35]. Spesielt er det vaskulære nettverket nært forbundet med hårvekstsyklusen [36-38]. Derfor ble det bekreftet at genuttrykket av VEGF varierer i henhold til menneskets hårsyklus [39].

Fra resultatene i denne studien forklares det athårvekst-fremmende effekt av Minoxidil kan skyldes dets potensielle oppregulerende EGF og VEGF som letter follikkelveksten så vel som angiogenese. Selv om LJE ikke påvirket VEGF-ekspresjon, økte det EGF-innholdet i huden etter oral administrering. Til sammenligning, CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)var effektiv i ekspresjonen av både EGF og VEGF. Spesielt LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)utøvde additive effekter på uttrykket av vekstfaktorene.

I tillegg til forlengelsen av hår, ble integriteten til hårsekkene bemerkelsesverdig forbedret etter behandling med Minoxidil, LJE og/eller CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)i den mikroskopiske undersøkelsen. I den tidlige fasen av hårtap og skallethet hos menneskelige pasienter og dyremodeller ble integriteten til folliklene svekket og tykkelsen på hårstrået redusert, mens follikkelintegriteten og skafttykkelsen ble gjenopprettet i regenererende hår. Interessant nok ble slike positive effekter på integriteten og gjenveksten av hårkomponenter oppnådd med oral administrering av LJE pluss CTE（Cistanche tubulosaekstrakt), hvor effekten var sammenlignbar med den ved topisk påføring av en høy konsentrasjon av Minoxidil. Derfor er det forventet at kombinasjonen for oralt inntak av LJE pluss CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)kan være en resept relativt praktisk sammenlignet med dermal bruk av Minoxidil.
I musealopeci-modellen er steroidsensitiv lymfocyttinfiltrasjon rundt hårsekkene vanlig, og viser et mønster som ligner på immunterapi av human alopecia med tårekjertelbetennelse [17,40]. I denne studien ble karragenan-indusert hudbetennelse markant svekket av LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)behandling; dvs. vaskulær eksudasjon og inflammatorisk celleinfiltrasjon ble synergistisk undertrykt. I kvantitativ analyse ble de store inflammatoriske mediatorene NO og PGE 2 vesentlig kontrollert etter oral samtidig administrering av LJE og CTE (Cistanche tubulosaekstrakt). Interessant nok, siden LJE viste anti-inflammatorisk aktivitet høyere enn den til semi-renset fucoidan [16], antas det at det kan være en ekstra aktiv ingrediens(er), i tillegg til fucoidan, i LJE.

Samlet indikerer resultatene at kombinasjonsbehandling med LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)forbedrer hårtap ved å oppregulere vekstfaktorer og relaterte enzymaktiviteter og delvis via anti-inflammatorisk potensial. Derfor foreslås det at en kombinasjon inkluderer LJE og CTE（Cistanche tubulosaekstrakt)upassende kliniske doser og forhold kan være en kandidatoppskrift for pasienter med hårtap.

Cistanche tubulosaekstrahere produkter

Anerkjennelser

Denne forskningen ble økonomisk støttet av Leading Industry Development for Economic Region ved Chungcheong Leading Industry Office, Korea Institute for Advancement of Technology (KIAT) og Ministry of Knowledge Economy (MKE), og delvis av High Value-Added Food Technology Development Program , Landbruks-, mat- og landbruksdepartementet (MAFRA; tilskuddsnummer 113034-3).

Interessekonflikt

Forfatterne erklærer at det ikke er noen økonomisk interessekonflikt å publisere disse resultatene.

Fra: 'Effektiviteten av kombinasjonsbehandlingen av Laminaria japonica og Cistanche tubulosa-ekstrakter i hårvekst' avKyungha Shin1# et al

--- Lab Anim Res 2015: 31(1), 24-32http://dx.doi.org/10.5625/lar.2015.31.1.24

REFERANSER

1. Kim JS, Kang BS, Park HJ, Kim DY, Hwang SY, Nam SY, Yun YW, Lee BJ. Fremme effekt av blandinger av urteekstrakter på gjenvekst av hår i C3H/HeJ mus. J Biomed Res 2009; 10(3): 99-108.
2. Paus R, Cotsarelis G. Biologien til hårsekkene. N Engl J Med 1999; 341(7); 491-497.
3. Cotsarelis G. Hårsekken: døende etter oppmerksomhet. Am J Pathol 1997; 151(6): 1505-1509.
4. Cotsarelis G, Sun TT, Lavker RM. Etikettholdende celler ligger i buleområdet til pilosebaceous enhet: implikasjoner for follikulære stamceller, hårsyklus og hudkreft. Cell 1990; 61(7): 1329-1337.
5. Oshima H, Rochat A, Kedzia C, Kobayashi K, Barrandon Y. Morfogenese og fornyelse av hårsekker fra voksne multipotente stamceller. Cell 2001; 104(2): 233-245.
6. Burton JL, Marshall A. Hypertrikose på grunn av minoksidil. Br J Dermatol 1979; 101(5): 593-595.
7. Meisheri KD, Cipkus LA, Taylor CJ. Virkningsmekanisme for minoksidilsulfat-indusert vasodilatasjon: en rolle for økt K pluss permeabilitet. J Pharmacol Exp Ther 1988; 245(3): 751-760.
8. Buhl AE, Waldon DJ, Baker CA, Johnson GA. Minoxidilsulfat er den aktive metabolitten som stimulerer hårsekkene. J Invest Dermatol 1990; 95(5): 553-557.
9. Kaufman KD, Dawber RP. Finasteride, en type 2 5alfa-reduktasehemmer, i behandling av menn med androgenetisk alopecia. Expert Opin Investig Drugs 1999; 8(4): 403-415.
10. Feldman SC, Reynaldi S, Stortz CA, Cerezo AS, Damont EB. Antivirale egenskaper til fucoidan fraksjoner fra Leathesia difformis. Phytomedicine 1999; 6(5): 335-340.
11. Wang J, Zhang Q, Zhang Z, Song H, Li P. Potensiell antioksidant- og antikoagulantkapasitet av fucoidanfraksjoner med lav molekylvekt ekstrahert fra Laminaria japonica. Int J Biol Macromol 2010; 46(1): 6-12.
12. Bojakowski K, Abramczyk P, Bojakowska M, Zwoliñska A, Przybylski J, Gaciong Z. Fucoidan forbedrer nyreblodstrømmen i det tidlige stadiet av nyreiskemi/reperfusjonsskade hos rotte. J Physiol Pharmacol 2001; 52(1): 137-143.
13. Li N, Zhang Q, Song J. Toksikologisk evaluering av fucoidan ekstrahert fra Laminaria japonica i Wistar-rotter. Food Chem Toxicol 2005; 43(3): 421-426.
14. Shimoda H, Tanaka J, Takahara Y, Takemoto K, Shan SJ, Su MH. De hypokolesterolemiske effektene av Cistanche tubulosa-ekstrakt, en kinesisk tradisjonell råmedisin, hos mus. Am J Chin Med 2009; 37(6): 1125-1138.
15. Yamada P, Iijima R, Han J, Shigemori H, Yokota S, Isoda H. Hemmende effekt av akteosid isolert fra Cistanche tubulosa på frigjøring av kjemisk mediator og inflammatorisk cytokinproduksjon av RBL-2H3- og KU812-celler. Planta Med 2010; 76(14): 1512-1518.
16. Kyung J, Kim D, Park D, Yang YH, Choi EK, Lee SP, Kim TS, Lee YB, Kim YB. Synergistiske anti-inflammatoriske effekter av Laminaria japonica fucoidan og Cistanche tubulosa ekstrakt. Lab Anima Res 2012; 28(2): 91-97.
17. Chee E, Fong KS, Al Jajeh I, Nassiri N, Rootman J. Foreningen av tårekjertelbetennelse med alopecia areata. Orbit 2015; 34(1): 45-50.
18. Brzezinska-Wcislo L, Bergler-Czop B, Wcislo-Dziadecka D, LisSwiety A. Nye aspekter ved behandlingen av alopecia areata. Postepy Dermatol Alergol 2014; 31(4): 262-265.
19. Hattori M, Ogawa H. Biokjemisk analyse avhårvekstfra aspekter av aldring og enzymaktiviteter. J Dermatol 1983; 10(1): 45-54.
20. Lee SH, Lee HJ, Baek IJ, Yon JM, Nam SY, Lee BJ, Yun YW, Kim YB, Hwang SY, Hong JT. Effekt av DREAMMO® hodebunnslotion påhårvekstpromotering i en alopecia-modell av C57BL/6 mus. Lab Anima Res 2006; 22(1): 91-96.
21. Handjiski BK, Eichmüller S, Hofmann U, Czarnetzki BM, Paus R. Alkalisk fosfataseaktivitet og lokalisering under den murine hårsyklusen. Br J Dermatol 1994; 131(3): 303-310.
22. Cross MJ, Dixelius J, Matsumoto T, Claesson-Welsh L. VEGF-reseptorsignaltransduksjon. Trends Biochem Sci 2003; 28(9): 488-494.
23. Shin S, Jeon JH, Park D, Jang JY, Joo SS, Hwang BY, Choe SY, Kim YB. Anti-inflammatoriske effekter av et etanolekstrakt av Angelica gigas i en Carrageenan-luftpose betennelsesmodell. Exp Anim 2009; 58(4): 431-436.
24. Kim D, Park D, Kyung J, Yang YH, Choi EK, Lee YB, Kim HK, Hwang BY, Kim YB. Anti-inflammatoriske effekter av Houttuynia cordata superkritisk ekstrakt i carrageenan-luftpose betennelsesmodell. Lab Anima Res 2012; 28(2): 137-140.
25. Rebora A. Patogenese av androgenetisk alopecia. J Am Acad Dermatol 2004; 50(5): 777-779.
26. Shirai A, Ikeda J, Kawashima S, Tamaoki T, Kamiya T. KF19418, en ny forbindelse forhårvekstmarkedsføring in vitro og in vivo musemodeller. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 213-218.
27. Kawabe TT, Kubicek MF, Johnson GA, Buhl AE. Bruk av gamma-glutamyl transpeptidase aktivitet som en markør for hårsyklus og anagen induksjon i musehårsekker. J Invest Dermatol 1994; 103(1): 122-126.
28. Hamada K, Suzuki K. Evaluering av biokjemiske indekser som en hårsyklusmarkør i C3H-mus. Exp Anim 1996; 45(3): 251-256.
29. Park SJ, Lee KW, Lim DS, Lee S. Det sulfaterte polysakkaridet fucoidan stimulerer osteogen differensiering av humane fettavledede stamceller. Stem Cells Dev 2012; 21(12): 2204-2211.

30. Danilenko DM, Ring BD, Pierce GF. Vekstfaktorer og cytokiner i hårsekkutvikling og syklus: nyere innsikt fra dyremodeller og potensialene for klinisk terapi. Mol Med i dag 1996; 2(11): 460-467.
31. Ozeki M, Tabata Y. In vivo fremmet veksten av musenes hårsekker ved kontrollert frigjøring av vekstfaktorer. Biomaterialer 2003; 24(13): 2387-2394.
32. Fujie T, Katoh S, Oura H, Urano Y, Arase S. Den kjemotaktiske effekten av en dermal papillacelle-avledet faktor på ytre rotskjedeceller. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 206-212.
33. Stenn KS, Paus R. Kontroller av hårsekksykling. Physiol Rev 2001; 81(1): 449-494.
34. Chapman RE, Hardy MH Effekter av intradermalt injisert og lokalt påført museepidermal vekstfaktor på ullvekst, hud og ullfollikler hos merinosau. Aust J Biol Sci 1988; 41(2): 261-268.
35. Dvorak HF, Brown LF, Detmar M, Dvorak AM. Vaskulær permeabilitetsfaktor/vaskulær endotelial vekstfaktor, mikrovaskulær hyperpermeabilitet og angiogenese. Am J Pathol 1995; 146(5): 1029-1039.
36. Ellis RA, Moretti G. Vaskulære mønstre assosiert med catagene hårsekker i den menneskelige hodebunnen. Ann NY Acad Sci 1959; 83: 448-457.
37. Stenn KS, Fernandez LA, Tirrell SJ. De angiogene egenskapene til rottevibrissa-hårsekken er assosiert med pæren. J Invest Dermatol 1988; 90(3): 409-411.
38. Yano K, Brown LF, Detmar M. Kontroll avhårvekstog follikkelstørrelse ved VEGF-mediert angiogenese. J Clin Invest 2001; 107(4): 409-417.
39. Lachgar S, Charveron M, Ceruti I. Distribusjon av VEGF mRNA likegyldige hårsekkstadier ved fluorescens in situ hybridisering kombinert med konfokal lasermikroskopi. I: Hair Research for the Next Millennium (Van Neste DJJ, red), Elsevier, Amsterdam, 1996; s 407-12.
40. Freyschmidt-Paul P, Sundberg JP, Happle R, McElwee KJ, Metz S, Boggess D, Hoffmann R. Vellykket behandling av alopecia areata-lignende hårtap med kontaktsensibilisatoren squaric acid dibutyl ester (SADBE) i C3H/HeJ mus . J Invest Dermatol 1999; 113(1): 61-68.