Nye roller til bevegelige epidermale kloroplaster i planteimmunitet

Abstrakt:

Plantens epidermis inneholder atypiske små kloroplaster. Imidlertid er den fysiologiske rollen til denne organellen uklar sammenlignet med den til store mesofyllkloroplaster, hvis velkjente funksjon er fotosyntese. Selv om kunnskapen om involvering av kloroplaster i planteimmunitet har blitt utvidet til dags dato, er forskjellene mellom epidermale og mesofyllkloroplaster utenfor rammen av denne studien. Gitt rollen til planteepidermis som en barriere for miljøpåkjenninger, inkludert patogenangrep, og den immunrelaterte funksjonen til kloroplaster, er planteforsvarsforskning på epidermale kloroplaster et fremvoksende felt. Nyere studier har avslørt de dynamiske bevegelsene til epidermale kloroplaster som respons på sopp- og oomycete-patogener. Videre er det rapportert om epidermale kloroplastassosierte proteiner og cellulære hendelser som er tett knyttet til epidermal resistens mot patogener. I denne anmeldelsen har jeg fokusert på den nylige fremgangen innen epidermal kloroplast-mediert planteimmunitet.

Nøkkelord: epidermal kloroplast; kloroplast bevegelse; stromule; plantepatogen; penetrasjon; ikke-vert motstand; preinvasivt forsvar; Arabidopsis thaliana; Nicotiana benthamiana; CHUP1.

Planteimmunitet og menneskelig immunitet er to forskjellige forsvarsmekanismer, og det er åpenbare forskjeller:

1. Ulike patogener å kjempe mot: planter motstår hovedsakelig biologiske patogener som bakterier, sopp og virus, mens menneskelig immunitet hovedsakelig motstår bakterier og virus.

2. Ulike immunresponsmetoder: planteimmunitet forsvarer hovedsakelig mot patogener gjennom fysisk isolasjon, kjemisk hemming og genregulering, mens menneskelig immunitet hovedsakelig motstår patogener gjennom makrofager, T-celler og B-celler.

3. Ulik immunspesifisitet: Planteimmunitet bruker samme forsvarsmetode mot alle patogener, det vil si uspesifikk immunitet, mens menneskelig immunitet er spesifikk, i stand til å gjenkjenne og produsere tilsvarende immunresponser mot spesifikke patogener.

4. Ulik immunminne: Planter har ikke evnen til immunminne, det vil si at når de først har motstått et bestemt patogen, må de fortsatt starte immunresponsen på nytt neste gang de møter det samme patogenet. Det menneskelige immunsystemet har evnen til immunminne, det vil si at etter å ha motstått et patogen, vil det ha et langsiktig immunminne for dette patogenet, og neste gang det møter det samme patogenet igjen, kan det raskt generere en immunrespons , og dermed effektivt kontrollere patogenet Infect. Så til sammenligning er vår menneskelige immunitet også veldig viktig. Vi må fokusere på å forbedre immuniteten vår. Cistanche deserticola kan gjøre det. Polysakkaridene i kjøttet kan regulere immunresponsen til det menneskelige immunsystemet og forbedre stressevnen til immuncellene. , Forbedre den bakteriedrepende effekten av immunceller.

Klikk cistanche deserticola supplement

1. Introduksjon

Overhuden til flercellede organismer, inkludert planter, fungerer som en barriere for å beskytte mot en rekke påkjenninger som endringer i det ytre miljø og patogenangrep. Fra perspektivet til patogener er det å bryte gjennom plantens epidermale celler et viktig første skritt i invasjonen; spesielt sopp- og oomycete-patogener trenger å trenge direkte inn i plantens epidermis og utvikle invasive hyfer inne for vellykket infeksjon. For eksempel danner antraknosesoppen Colletotrichum-arten og rissprengesoppen Pyricularia oryzae (syn. Magnaporthe oryzae) en melanisert kuppelformet celle kalt et appressorium på planteoverflaten for å utvikle en penetrasjonsplugg i epidermis til vertsplantene, etterfulgt av invasiv hyphal extension og utbrudd av destruktiv sykdom [1].

Imidlertid, hvis planten er en ikkevert, kan disse sopppatogenene danne melanisert appressorium, men kan ikke trenge gjennom epidermalcellen på grunn av den pre-invasive ikkevertsresistensen (NHR) til planter, som generelt gir holdbar, robust og bredspektret immunitet og effektivt forhindrer invasjonen av et stort antall ikke-tilpassede sopp og oomyceter i inkompatible interaksjoner [2,3]. I modellen brassicaceous-planten Arabidopsis thaliana er det rapportert at mange immunveier og komponenter underbygger utplasseringen av epidermal NHR på en flerlags måte mot inntreden av ikke-tilpassede sopp- og oomycete-patogener, slik som Blumeria graminis f. sp. hordei [4–12], Colletotrichum tropicale [13–16], P. oryzae [17–22] og Phytophthora infestans [6,7]. En fullstendig forståelse av det molekylære grunnlaget for preinvasiv NHR forblir imidlertid unnvikende. For å få en helhetlig forståelse av NHR, er det viktig å identifisere ukjente immunrelaterte hendelser og komponenter i plantens epidermis.

I høyere planter, bortsett fra få planter, som tobakk, ble det lenge antatt at ingen kloroplaster eksisterer i epidermale celler annet enn vaktceller [23–26]. De fleste studier på kloroplast fokuserer på mesofyllceller, hvor mange typiske store kloroplaster er svært differensierte for fotosyntese [27–29]. Imidlertid er klorofyllholdige atypiske små kloroplaster også observert i de epidermale fortaucellene til A. thaliana, selv om thylakoider, som er ansvarlige for lysavhengige fotosyntesereaksjoner, er dårlig utviklet [30–36]. Derfor er den fysiologiske rollen til epidermale kloroplaster et fremvoksende tema innen plantevitenskap.

Kloroplaster er kjent for å fungere som miljøsensorer mot flere biotiske og abiotiske påkjenninger [37,38]. For eksempel, for planteimmunresponser mot patogener, er sekundære budbringere, slik som reaktive oksygenarter (ROS) og kalsium (Ca2 pluss), og forløperne til fytohormoner, som salisylsyre (SA), jasmonsyre og abscisinsyre. alle avledet fra kloroplaster [39–42]. Det er mange gode anmeldelser om rollene til kloroplaster i planteimmunitet. Jeg henviser leserne til nylige anmeldelser, som vil gi en oversikt over kloroplastrelaterte planteforsvarsresponser [43–47].

Imidlertid er det svært få planteforsvarsstudier som fokuserer på epidermale kloroplaster, og de funksjonelle forskjellene mellom epidermale og mesofyllkloroplaster i plantens immunsystem har ikke vakt mye oppmerksomhet. Nylig viste noen rapporter involvering av epidermale kloroplaster i planteimmunitet. I denne gjennomgangen er hovedfokuset på epidermale kloroplaster, og den nylige fremgangen i planteepidermal immunitet er beskrevet.

2. Epidermal kloroplastrespons kontrollerer inntreden av sopppatogener i A. thaliana

2.1. Intracellulære bevegelser av epidermale kloroplaster som respons på sopppatogener i A. thaliana

I steady state av A. thaliana observeres ikke epidermale kloroplaster nær den øvre periklinale veggen (overflaten) til fortaucellene, fordi de vanligvis er plassert ved de nedre periklinale (nederst) og antiklinale veggene. I en fersk rapport oppdaget jeg at epidermale kloroplaster dukket opp på overflaten av fortauceller som respons på Colletotrichum-sopp med melanisert appressoriumdannelse, og kalte dette fenomenet epidermal kloroplastrespons (ECR) (Figur 1) [48].

Interestingly, ECR occurs more strongly against nonadapted fungi such as the Japanese flowering cherry pathogen Colletotrichum nymphaea PL1-1-b, the cosmos pathogen Colletotrichum fioriniae CC1, and the apple pathogen Colletotrichum siamense MAF1, compared to the adapted Brassicaceae pathogen Colletotrichum higginsianum Abr1-5, which readily penetrates and infects wild-type plants of A. thaliana [48]. Furthermore, the frequency of ECR varies according to the nonadapted fungal strains; the order of ECR-inducing ability in the wild-type plant is as follows: C. nymphaea PL1-1-B > C. fioriniae CC1 > C. siamense MAF1, while two other nonadapted strains, hau tree pathogen C. siamense COC4, and cucurbit pathogen Colletotrichum orbiculare 104-T, do not trigger ECR in the wild-type plant [48]. Importantly, C. siamense COC4 and C. orbiculare 104-T sufficiently induce ECR in plants with a mutation in the PEN2 gene [48], which encodes an atypical myrosinase that works as a core preinvasive NHR contributor against many fungal and oomycete pathogens [6,9,13,17,48–50], although these two nonadapted pathogens cannot invade pen2 mutants. The frequencies of ECR in the pen2 mutant against C. fioriniae CC1 and C. siamense MAF1 are also higher than those in the wild-type plant, whereas other single mutants of immune-related genes such as EDR1, GSH1 EDS5, and CAS have little effect on ECR [48]. These results suggest that ECR is preferentially activated when PEN2-based antifungal preinvasive defense becomes ineffective in epidermal cells. Similarly, in penetration tests on multiple Arabidopsis mutants with many immune-related mutations, these five nonadapted Colletotrichum strains displayed the differential abilities to overcome preinvasive NHR in the same order as the ECR-inducing ability; C. nymphaea PL1-1-B and C. fioriniae CC1 can invade the epidermis of the wild-type plant to some degree and more of the pen2 mutant, whereas C. siamense MAF1, COC4, and C. orbiculare 104-T can break through the epidermal NHR only in the presence of pen2 mutation or with additional mutations such as edr1, gsh1, eds5, and cas (Figure 2, Redrawn from [51]) [48,51]. Thus, there is a tight link between ECR induction in plants and the invasion ability of the nonadapted Colletotrichum fungi, which implies the involvement of ECR in epidermal preinvasive NHR, because these fungal pathogens are incompatible with and definitely cannot infect A. thaliana. The contribution of ECR to preinvasive NHR is described in a later section. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, x FOR PEER REVIEW 3 of 17 readily penetrates and infects wild-type plants of A. thaliana [48]. Furthermore, the frequency of ECR varies according to the nonadapted fungal strains; the order of ECR-inducing ability in the wild-type plant is as follows: C. nymphaea PL1-1-B > C. fioriniae CC1 >C. siamense MAF1, mens to andre ikke-tilpassede stammer, hau tree-patogen C. siamense COC4 og cucurbit-patogen Colletotrichum orbiculare 104-T, ikke utløser ECR i villtypeplanten [48].

Det er viktig at C. siamense COC4 og C. orbiculare 104-T i tilstrekkelig grad induserer ECR i planter med en mutasjon i PEN2-genet [48], som koder for en atypisk myrosinase som fungerer som en kjerne preinvasiv NHR-bidragsyter mot mange sopp- og oomyceter. patogener [6,9,13,17,48–50], selv om disse to ikke-tilpassede patogenene ikke kan invadere pen2-mutanter. Frekvensene av ECR i pen2-mutanten mot C. fioriniae CC1 og C. siamense MAF1 er også høyere enn de i villtypeplanten, mens andre enkeltmutanter av immunrelaterte gener som EDR1, GSH1 EDS5 og CAS har lite effekt på ECR [48]. Disse resultatene tyder på at ECR fortrinnsvis aktiveres når PEN2-basert antifungalt preinvasivt forsvar blir ineffektivt i epidermale celler.

Tilsvarende, i penetrasjonstester på multiple Arabidopsis-mutanter med mange immunrelaterte mutasjoner, viste disse fem ikke-tilpassede Colletotrichum-stammene de differensielle evnene til å overvinne preinvasiv NHR i samme rekkefølge som den ECR-induserende evnen; C. nymphaea PL1-1-B og C. fioriniae CC1 kan invadere epidermis til villtypeplanten til en viss grad og mer av pen2-mutanten, mens C. siamense MAF1, COC4 og C. orbiculare {{8 }}T kan bryte gjennom den epidermale NHR bare i nærvær av pen2-mutasjon eller med tilleggsmutasjoner som edr1, gsh1, eds5 og cas (figur 2, gjentatt fra [51]) [48,51]. Det er således en tett kobling mellom ECR-induksjon i planter og invasjonsevnen til de ikke-tilpassede Colletotrichum-soppene, noe som innebærer involvering av ECR i epidermal preinvasiv NHR, fordi disse sopppatogenene er inkompatible med og definitivt ikke kan infisere A. thaliana. Bidraget fra ECR til preinvasiv NHR er ikke-vert Arabidopsis-mutanter ble evaluert basert på melanisert appressorium-mediert inngang (MAE) og klassifisert. MAE-raten ( prosent ) ble beregnet ved å bruke følgende numeriske formel: (antall melanisert appressoria med dannelse av invasive hyfer)/(antall melanisert appressoria). Tilpasset C. higginsianum Abr1-5 (MAFF305635) vises som kontroll. Prosentandelen av soppinngangstester som "−", " pluss /−", " pluss ", " pluss pluss ", " pluss pluss pluss " og " pluss pluss pluss pluss " er 0–2 prosent , 2–10 prosent , henholdsvis 10–20 prosent, 20–35 prosent, 35–60 prosent og 60–100 prosent. nd: ikke bestemt. Tilpasset fra [51].

ECR er ikke spesifikk for Colletotrichum. Epidermale kloroplaster dukker også opp ved overflaten etter inokulering med det ikke-tilpassede patogenet P. oryzae, som viser planteinvasjon av melanisert appressorium-mediert (MAE)-type, men er fylogenetisk fjernt beslektet med Colletotrichum [48]. Frekvensen av P. oryzae-indusert ECR øker også i pen2-mutanten. Dermed kan ECR være en bredspektret epidermal respons på et bredt spekter av sopppatogener. Denne ideen stemmer overens med det nye funnet om at den ikke-tilpassede soppen Alternaria alternata, som ikke er et MAE-type patogen og danner melaniserte konidier, også induserer ECR i ikke-verten A. thaliana, spesielt i nærvær av pen2-mutasjonen (Figur 3). .

2.2. Utløseren av epidermal kloroplastrespons

Selv om hvordan planteepidermis gjenkjenner sopppatogener og induserer ECR fortsatt er et åpent spørsmål, indikerer noen data en fascinerende korrelasjon mellom soppinngangsforsøk-relaterte egenskaper og ECR-induksjon [48]. Noen av de godt studerte patogen-avledede molekylene er patogen/mikrobe-assosierte molekylære mønstre (PAMPs/MAMPs), som er svært konserverte blant bredspektrede patogener og bidrar til deres levedyktighet [52]. Skadeassosierte molekylære mønstre (DAMPs), vertsavledede molekyler som Pep1 frigitt ekstracellulært under patogeninvasjon, er også signaler for medfødte immunresponser [53]. PAMPs/DAMPs gjenkjennes av plantemønstergjenkjenningsreseptorer (PRR), og PAMP/DAMP-utløst immunitet initieres via PRR-assosierte proteiner, som RLP 23 og RLP30, membraninnebygde reseptorlignende proteiner (RLP), FLS2 og BAK1 , membraninnebygde reseptorlignende kinaser (RLKs), og BIK1 og PBL1, reseptorlignende cytoplasmatiske kinaser (RLCKs) [54–61].

Eksepsjonelle anmeldelser om PRR-signalering i planteimmunitet er publisert av flere forskere [62–65]. Interessant nok er ikke ECR avhengig av BAK1, BIK1, PBL1, Pep1-sensing RLK, PEPR1 og PEPR2; derfor er PAMP- og/eller DAMP-signaleringshendelser, i det minste de mediert av disse RLK-ene og RLCK-ene, ikke involvert i induksjonen av ECR [48]. Videre avslørte kvantifisering av ECR i pen2-mutantplanten mot flere C. orbicular-mutanter som mangler i forskjellige trinn av invasjonsrelatert morfogenese at dannelsen av penetrasjonspinnen, en nållignende soppstruktur som dukker opp fra appressoriumet for vellykket inntreden i planten epidermis, er avgjørende for ECR-induksjon [48].

Plantepatogene sopp og oomyceter skiller ut et arsenal av virulensproteiner, kalt effektorer, for å manipulere plantecellulære prosesser og indusere immunundertrykkelse. Tallrike anmeldelser er publisert om effektorene til plantepatogener [66–70]. I Colletotrichum akkumuleres fluorescerende merkede effektorproteiner fortrinnsvis ved bunnporen av appressorium for sekresjon gjennom penetrasjonspinnen [71,72]. Denne effektorsekresjonen avhenger av den v-SNARE SEC22-mediert intracellulære trafikkruten i soppen [72] og korrelerer interessant nok med ECR-induksjon [48]. Disse observasjonene antyder følgende potensielle kandidater som utløsere av ECR: (i) patogen-avledet molekyl(er) utskilt fra penetrasjonspinnen under soppinnføringsforsøk og (ii) planteavledede signal(er) generert som respons på graden av soppprogresjon i forsøket på å penetrere. ECR er en universell begivenhet mot mange typer sopppatogener, inkludert Colletotrichum-arter, P. oryzae og A. alternata (Figur 3) [48]. Derfor kan typiske effektorer som er begrenset til et smalt utvalg av sopppatogener for deres vertsspesifisitet ikke være et tegn på ECR; snarere kan vanlige celleveggnedbrytende enzymer eller svært konserverte kjerneeffektorer av et bredt spekter av patogene sopp- eller planteskadesignaler som ikke er assosiert med Pep1 utløse ECR i planteepidermis.

2.3. Regulatorene for epidermal kloroplastrespons og preinvasiv ikke-vertsresistens av Arabidopsis

Store mesofyllkloroplaster viser intracellulære bevegelser basert på lysintensiteten for sikker og effektiv fotosyntese; de unnslipper fra sterkt lys og migrerer til de antiklinale veggene i cellen for å forhindre fotoskade (unngåelsesrespons) og beveger seg mot svakt lys og legger seg på de periklinale veggene for å øke fotosyntetisk effektivitet (akkumuleringsrespons). Mange regulatoriske proteiner av dette adaptive fenomenet, kalt kloroplastfotoflyttingsbevegelser, har blitt identifisert i mesofyllceller [73]. Imidlertid er det få rapporter, og lite er kjent om komponentene som kontrollerer den intracellulære bevegelsen av epidermale kloroplaster [74,75]. I denne sammenhengen demonstrerte jeg nylig at ECR i epidermale celler deler vanlige regulatoriske proteiner med mesofyllkloroplastfotoflyttingsbevegelser [48]. Det aktinbindende proteinet CHUP1 genererer en kloroplast-aktin-basert drivkraft og er avgjørende for både akkumulering og unngåelsesresponser [76–78], mens det auxilinlignende J-domeneproteinet JAC1 regulerer utseendet og forsvinningen av kloroplast-aktinfilamenter og er nødvendig for akkumuleringsresponsen [79]. Den genmodifiserte A. thaliana viser at overekspresjon av CHUP1-proteiner forårsaker sterk undertrykkelse av ECR.

Vanligvis oppdages epidermale kloroplaster knapt på overflaten, selv etter inokulering med ikke-tilpassede sopppatogener [48]. Imidlertid fører overekspresjon av JAC1 eller delesjon av CHUP1 til konstitutiv posisjonering av epidermale kloroplaster på overflaten, uavhengig av soppinokulering [48]. Dermed regulerer CHUP1 og JAC1 henholdsvis negativt og positivt plasseringen av epidermale kloroplaster ved overflatearealet til fortauceller (Figur 4). Det er bemerkelsesverdig at inokuleringen av chup1-mutanten med høye konsentrasjoner av ikke-tilpassede sopp bare økte populasjonen av overflatekloroplaster, og antyder dermed svekkelse av ECR ved uttømming av CHUP1-proteinet. I motsetning til dette er fototropin 1 og 2, som er reseptorer for blått lys som er ansvarlige for bevegelser av kloroplastfotoflytting [80–82], uunnværlige for aktivering av ECR [48]. Derfor har kloroplastfotoplassering og ECR forskjellige stimulusgjenkjenningssystemer for henholdsvis lys og patogener, men deler i det minste noen nedstrøms regulatoriske komponenter. Fra synspunktet om forskjellene mellom mesofyll og epidermale kloroplaster, kan allsidigheten til de adaptive systemene mot forskjellige miljøbelastninger gjenspeile plantens forseggjorte overlevelsesstrategi.

Hvorvidt ECR bidrar til planteimmunitet i epidermalcellene til A. thaliana er et fascinerende spørsmål. For å klargjøre involveringen av ECR i preinvasiv NHR, er effekten av ECR-svekkelser ved å overuttrykke eller tappe CHUP1-proteiner på MAE-hastigheten til flere ikke-tilpassede sopp i planteepidermis blitt undersøkt [48]. C. nymphaea PL1-1-B, som viste relativt lavere inkompatibilitet med A. thaliana sammenlignet med andre ikke-tilpassede sopp, viste en økt MAE-rate i ECR-svekkede planter (Figur 2) [48]. I planter med pen2 eller andre tilleggsmutasjoner som edr1, gsh1, eds5 og cas, fremmet dessuten en økning eller reduksjon i nivåene av CHUP1-proteiner MAE-hastigheten til C. fioriniae CC1, C. siamense MAF1, COC4 og C . orbiculare 104-T (Figur 2) [48]. Lignende resultater ble oppnådd for MAE-hastigheten til P. oryzae. Følgelig er ECR en stressrespons fra planten, hvorved den preinvasive NHR forsterkes i epidermale celler når sopppatogenene forsøker å invadere gjennom penetrasjonspinnen.

Som beskrevet aktiveres ECR fortrinnsvis i fravær av en PEN2-relatert forsvarsvei. På samme måte induserte inokuleringen av ikke-tilpasset C. fioriniae CC1 også ekspresjonen av mange forsvarsrelaterte gener, slik som PAD3, CYP79B2, CYP71A13, PDF1.2a, MYB51, PR1, FRK1 og NHL10, bare i tilfelle pen2-mutasjon, selv om terskelen for ECR var lavere enn for ekspresjonen av disse genene [48]. Basert på den lagdelte strukturen til plantens NHR, er ECR en av forsvarsresponsene som er programmert til å sikkerhetskopiere den preinvasive NHR når banene involvert i preinvasivt forsvar på høyere lag, inkludert PEN2-relaterte veier, er ineffektive [ 48,51].

Dette samsvarer med forholdet mellom A. thaliana og det nedre inkompatible, ikke-tilpassede patogenet C. nymphaea PL1-1-B, som delvis overvinner det preinvasive høylagsforsvaret [51]; C. nymphaea PL1-1-B utløser sterkt ECR og induserer også forsvarsrelaterte gener i villtypeplanten [48]. Flere fytopatogene sopp, som C. nymphaea PL1-1-B, som delvis overvinner det høyere lag preinvasive forsvaret til A. thaliana, antas å eksistere i naturen. Derfor har planter utviklet ECR som en av mekanismene til epidermal NHR mot denne typen sopppatogener (figur 4).

3. Epidermal kloroplast-lokaliserte immunkomponenter bidrar til preinvasiv antifungal nonhost-resistens av Arabidopsis

3.1. Den foretrukne lokaliseringen av immunrelaterte komponenter til bevegelige epidermale kloroplaster i A. thaliana

Hvordan ECR bidrar til preinvasiv NHR mot ikke-tilpassede sopppatogener gjenstår å bli fullstendig belyst. Fluorescens levende celleavbildning avslørte at immunrelaterte komponenter, slik som -glutamylcysteinsyntetase GSH1, Ca2 pluss-sensing receptor CAS, MATE-familietransportør EDS5, isochorismatsyntase ICS1/SID2 og aminotransferase ALD1, var lokalisert i epidermale små kloroplaster (Figure-kloroplaster) [15,48,83–86]. Interessant nok er de fluorescerende signalene til disse komponentene i epidermale kloroplaster mye sterkere enn de i store mesofyllkloroplaster [48,83,85,86]. I ECR-aktiverte fortauceller etter inokulering med ikke-tilpasset C. fioriniae CC1, ble GSH1-, EDS5- og CAS-proteinene funnet å lokalisere seg til overflaten sammen med de bevegelige epidermale kloroplastene, noe som tyder på en tett kobling mellom ECR og den intracellulære posisjoneringen av disse immunkomponenter [48]. Disse observasjonene kan styrke betydningen av epidermale kloroplaster i planteimmunitet

3.2. Epidermale kloroplast-lokaliserte immunkomponenter og preinvasivt forsvar hos A. thaliana

GSH1 bidrar til planteforsvar via glutationbiosyntese i både kompatible og inkompatible A. thaliana-patogen interaksjoner [15,87]. CAS er involvert i forbigående Ca2 pluss-signalering i kloroplaster under planteimmunitet [88], og den CAS-målrettede soppeffektoren til Sclerotinia sclerotiorum forstyrrer SA-signalering i vertsplanten [89]. ICS1/SID2 og EDS5 er nødvendig for henholdsvis biosyntese og transport av SA-forløpere under plantens immunrespons [85,90,91]. Den tette koblingen mellom disse immunkomponentene og epidermale kloroplaster innebærer deres involvering i epidermal NHR mot sopppatogener som utløser ECR. Bidragene fra GSH1, CAS, EDS5 og ICS1/SID2 til preinvasiv NHR mot ikke-tilpassede sopp har blitt demonstrert; C. nymphaea PL1-1-B viste økt MAE i epidermis av gsh1, cas og eds5 enkeltmutanter sammenlignet med det i villtypeplanten [51], mens lignende effekter av disse mutasjonene på MAE av C. fioriniae CC1, C. siamense MAF1 og P. oryzae ble observert i hver dobbeltmutant med pen2-mutasjon (figur 2) [48].

De økte MAE-ratene av mer inkompatible C. siamense COC4 og C. orbiculare 104-T ble bekreftet i pen2-mutante planter med flere mutasjoner i immunrelaterte gener (Figur 2) [48]. Derfor korrelerer de penn-2--avhengige effektene av disse muterte genene, som koder for epidermale kloroplast-lokaliserte proteiner, med ECR utløst av hvert sopppatogen. Denne studien foreslår at Arabidopsis epidermale celler distribuerer en ECR-sentrert immunrespons, der den intracellulære reposisjoneringen av immunrelaterte proteiner kan forbedre antifungal NHR (Figur 4) [48]. Det epidermale kloroplastspesifikke proteinet, ALD1, er essensielt for lokal sykdomsresistens og systemisk ervervet resistens mot både virulente og avirulente bakterielle patogener, og det utøver sin effekt ved å kontrollere SA-akkumulering [86,92–94]. I fremtiden bør det belyses om ALD1 også fungerer i den preinvasive NHR mot sopppatogener.

4. Epidermale kloroplaster akkumuleres ved grensesnittet med Oomycete-patogen og CHUP1 er nødvendig for penetrasjonsmotstand i Nicotiana benthamiana

4.1. Fokal akkumulering av epidermale kloroplaster ved grensesnittet med Oomycete-patogen i N. benthamiana

Rollen til epidermale kloroplaster som respons på oomycete-patogenet P. infestans har også blitt studert i modellen solanaceous plante N. benthamiana [95–97]. I denne delen nevner jeg nyere forskning på dynamikken i epidermale kloroplastbevegelser og involveringen av CHUP1 i actinomycete-immunitet, selv om det er tvetydighet angående de adaptive eller ikke-adaptive egenskapene til P. infestans til N. benthamiana, som viser tvetydig aldersrelatert resistens. til P. infestans; modne planter er resistente, mens unge planter er mottakelige [98].

Under responsen til N. benthamiana på P. infestans viser epidermale kloroplaster intracellulære bevegelser og akkumuleres i grensesnittet med patogenet haustorium, infeksjonsrelaterte spesialiserte hyfer, på en BAK1-uavhengig måte (Figur 5) [96] . Således har fokal immunitet mediert av epidermale kloroplaster blitt foreslått i N. benthamiana-P. infestans patosystem. Et lignende fenomen ble observert i de ECR-aktiverte cellene til A. thaliana under den antifungale responsen; Imidlertid var de fleste overflatekloroplastene spredt i tilfelle av ECR og, i det minste under mikroskopet, assosierte de ikke med patogengrensesnittet [48]. Gitt at epidermal kloroplast av N. benthamiana vanligvis påvises ved overflaten av fortauceller, uavhengig av patogeninokulering, var ikke arbeidsmekanismene til epidermale kloroplaster som respons på patogenangrep helt de samme mellom A. thaliana og N. benthamiana.

Videre kan CHUP1-relatert ECR og fokal akkumulering av epidermale kloroplaster til sopppenetrasjonsstedene være uavhengige hendelser i A. thaliana fordi den patogengrensesnittspesifikke akkumuleringen av epidermale kloroplaster i N. benthamiana er CHUP{{2} }uavhengig (Figur 5) [97]. I denne sammenheng gjenstår det å belyse om en del av de epidermale kloroplastene til A. thaliana, som akkumuleres fokalt ved sopppenetrasjonsstedene, har en distinkt rolle(r) fra ECR-assosierte epidermale kloroplaster, så vel som den i N benthamiana.

4.2. CHUP1-Dependent Callose-avsetning på Oomycete Penetration Site under epidermal motstand av N. benthamiana

Savage et al. rapporterte at plasseringen av epidermale kloroplaster ved grensesnittet mellom N. benthamiana og haustoria til P. infestans skjedde uavhengig av CHUP1 [97], som var litt forskjellig fra Arabidopsis ECR [48]. Imidlertid demonstrerte de at CHUP1 er nødvendig for penetrasjonsmotstand i epidermale celler av N. benthamiana mot P. infestans [97]. Demping eller knockout av to CHUP1-alleler i N. benthamiana øker følsomheten for P. infestans, mens akkumuleringen av epidermale kloroplaster rundt haustoria ikke er svekket i CHUP1-knockout-mutanten (chup1) [97]. Arabidopsis chup1-mutanten viste også redusert preinvasiv NHR mot MAE av ikke-tilpassede sopppatogener [48], noe som tyder på viktigheten av det kloroplastassosierte proteinet CHUP1 i epidermal planteimmunitet mot både oomycet- og sopppatogener.

Interessant nok er fokal kalloseavsetning ved haustoria til P. infestans, som er en av forsvarsresponsene til planten, CHUP1-avhengig, noe som antyder at det kloroplastassosierte proteinet CHUP1 bidrar til epidermal immunitet mot oomycete-patogen ved å forsterke penetrasjonsmotstand via kalloseavsetning (Figur 5) [97]. Nøkkelspørsmålet er hvordan koblingen mellom denne kalloseavsetningen og den fokale akkumuleringen av epidermale kloroplaster ved patogengrensesnittet eksisterer fordi CHUP1 er et kloroplastassosiert protein. I denne forbindelse har Savage et al. viste ingen korrelasjon mellom kalloseavsetning og tilstedeværelsen av kloroplaster rundt haustoriet [97]. I samsvar med dette funnet, i A. thaliana-C. orbikulær inkompatibel interaksjon, kalloseavsetning korrelerer ikke med ECR-aktivering; kallosen er tilstrekkelig avsatt på stedene for patogenpenetrasjonsforsøk i villtypeplanten, hvor ECR knapt aktiveres på grunn av en tidligere funksjon av høylags preinvasivt forsvar(er) [48]. CHUP1-gen-knockout i N. benthamiana påvirker ikke andre kjerneimmunprosesser, slik som PAMP-utløst MAPK-fosforylering, konstitutivt aktiv MEK2DD-indusert hypersensitiv respons (HR)-lignende celledød og effektor-utløst HR-celledød [97].

Derfor har Savage et al. spekulerte i at i CHUP1-knockouten N. benthamiana, kan reduksjon i produksjonen av epidermale kloroplastavledede molekyler, slik som ROS- og SA-forløpere, sannsynlig føre til svekkelse av kalloseakkumulering rundt haustoriet. De utelukket heller ikke muligheten for at snapshot-avbildning ikke nøyaktig reflekterte involveringen av epidermal kloroplastmobilisering til haustoria i fokal kalloseavsetning, fordi kloroplastene kan ha beveget seg bort fra haustoria etter kalloseavsetning [97]. Jeg forventer at fremtidig forskning vil klargjøre den regulatoriske mekanismen for kalloseavsetning ved patogengrensesnittet via kloroplastassosiert CHUP1 i N. benthamiana, og sammenligne det med de epidermale kloroplastrelaterte immunresponsene i A. thaliana.

5. Dynamisk morfologi av epidermale kloroplaster og inter-organelle interaksjoner i planteimmunitet

5.1. Stromuleformasjon, utvidelse og hulromsformasjon

Mesofyll og epidermale kloroplaster vokser dynamiske rørformede forlengelser kalt stromuler, som er fylt med stroma [99]. I epidermale celler av N. benthamiana øker stromuler under antivirale og antibakterielle immuniteter, hvor effektorutløst HR-celledød oppstår [95]. N. benthamiana induserer også stromuldannelse under PAMP-utløst immunitet mot oomyceten INF1 i tillegg til bakteriell flg22 og soppkitin på en BAK1-avhengig måte [95,96]. Interessant nok er stromule-induksjon undertrykt av P. infestans-effektoren AVR3a [96]. Stromule-induksjon i epidermale kloroplaster ble også observert under antibakteriell immunitet hos A. thaliana [95]. Til sammen antyder disse observasjonene mulig involvering av stromuler i planteforsvarsresponser. Det er viktig at kloroplastbevegelser og forbindelser med andre organeller, slik som kjerner, formidles av stromuler under plantens immunrespons [95 100]. Dessuten kan stromuler transportere det forsvarsrelaterte signalmolekylet ROS og kloroplastforsvarsproteinet NRIP1 til kjernen i N. benthamiana [95,101]. NRIP1 er nødvendig for antiviral resistens hos N. benthamiana [102]. Immunrelaterte proteiner GSH1, EDS5 og CAS er også lokalisert til stromuler som strekker seg fra de epidermale kloroplastene i A. thaliana, selv om lokaliseringssignalet til tylakoidproteinet CAS i stromuler er svakere enn det til de to andre proteinene og kan være en artefakt av overuttrykk [48].

Således, i epidermale celler, kan immunrelaterte komponenter dynamisk endre deres posisjonering gjennom kloroplastbevegelser og ytterligere utvide deres plassering til utsiden av kloroplastene via stromuler under immunresponser. Imidlertid er det også svært kontroversielt om økte stromuler har positive effekter på antimikrobiell resistens. Caplan et al. rapporterte at CHUP1-gendempede N. benthamiana- og Arabidopsis chup1-mutanter viste økte stromuler, som ble visualisert med NRIP1-GFP-fusjonsprotein, i fravær av patogener og fremmet effektor-utløst HR-celledød under antiviral og antibakteriell immunrespons [95]. I kontrast viser Savage et al. demonstrerte at chup1-mutanter av både N. benthamiana og A. thaliana viste reduserte stromuler, som ble visualisert med GFP, i fravær av patogener [97].

Dessuten kan chup1-mutanten av N. benthamiana indusere stromuldannelse tilstrekkelig når den utfordres med P. infestans, til tross for dens økte mottakelighet for dette patogenet [97]. Redusert preinvasiv NHR i Arabidopsis med en chup1-mutasjon mot MAE-type sopppatogener er også rapportert [48]. Disse avvikene kan forklares i fremtidige studier. Det er bemerkelsesverdig at i planteimmunitet er stromulinduksjon og kloroplastbevegelser, som ECR og fokal akkumulering ved patogengrensesnittet, mer relaterte, men forskjellige hendelser, fordi førstnevnte avhenger av PAMP-signaleringskinase BAK1, mens sistnevnte ikke gjør det. Derfor kan distinkte patogen-avledede signaler integreres gjennom et epidermalt kloroplast-sentrert system for å harmonisere forsvarsresponser.

De epidermale kloroplastene er betydelig mindre enn mesofyllkloroplastene. Interessant nok kunne imidlertid forstørrede epidermale kloroplaster i ECR-aktiverte celler observeres, og populasjonen av de forstørrede kloroplastene økte gradvis under inkubasjon med de ikke-tilpassede sopppatogenene (Figur 6). Forstørrede kloroplaster ble ikke observert i det tidlige stadiet av ECR. Dannelsen av hulrom inne i de forstørrede epidermale kloroplastene ble bekreftet (Figur 6). Den fysiologiske betydningen av disse endringene i morfologien til de epidermale kloroplastene under ECR er foreløpig uklar, men epidermale kloroplaster kan forsterke den preinvasive NHR via disse tilleggshendelsene på det sene stadiet av ECR. Alternativt kan planteorganellarmorfologi bli påvirket av patogeneffektorer, fordi det er rapportert at forbigående ekspresjon av Colletotrichum effektorproteiner fører til utvidelse av kjerner i epidermale celler av N. benthamiana [103]. Hvis slike organellutvidelser er blant patogeninfeksjonsstrategiene via effektorer, stemmer det overens med det faktum at mange patogeneffektorer går inn i kloroplaster og målretter mot kloroplastlokaliserte proteiner [46,47].

5.2. Perinukleær gruppering av epidermale kloroplaster og kjernefysiske bevegelser

Kloroplaster er kjent for å klynge seg rundt kjernen for interorganellkommunikasjon, der overføring av retrograde signaler skjer som respons på ulike miljøpåkjenninger (37,38,104-106). I forsvarsresponsene til N. benthamiana er det rapportert retrograd ROS-signalering fra perinukleære kloroplaster til kjernen gjennom stromuler (95); det samme er foreslått i A. thaliana (88,107,108). Interessant nok fører tapet av CHUP1-genet til økt perinukleær clustering av epidermale kloroplaster i både N. bnethamiana og A. thaliana (97. Perinukleær clustering av epidermale kloroplaster ble også observert under Arabidopsis ECR etter patogeninokulering eller i CHUP{10}} utarmede tilstander uten patogen [48]. Disse to planteartene har således lignende reguleringsmekanismer for å kontrollere den perinukleære klyngingen av epidermale kloroplaster, der CHUP1 viser negative effekter. Gitt svekkelsen av ECR og preinvasiv NHR ved den konstitutive overflateposisjoneringen av epidermale kloroplaster i chup1-mutanten av A. thaliana [48], større perinukleær klynging av epidermale kloroplaster kan også forringes funksjonelt. I samsvar med denne ideen er CHUP1-knockout N. benthamiana mer utsatt for P. infestans [97] .

Lysindusert kjernefysisk bevegelse i Arabidopsis mesofyll og epidermale fortauceller er CHUP1-avhengig [74,78]. CHUP1 lokaliserer spesifikt til omhyllingen av kloroplaster, men ikke kjerner, og regulerer kloroplastbevegelser; derfor er CHUP1-mediert intracellulær bevegelse av epidermale kloroplaster en drivkraft for kjernefysisk bevegelse som respons på sterkt lys [74,78]. Tilsvarende migrerer kjerner, sammen med perinukleære kloroplaster, til overflateområdet under ECR i A. thaliana, som er tett knyttet til mengden CHUP1-proteiner [48]. Det perinukleære endoplasmatiske retikulum reposisjonerer seg også til den epidermale overflaten under ECR [48]. I N. benthamiana beveger kjernen seg til penetrasjonsstedene til oomyceten P. infestans [96,109]. Dette er også observert i andre plantepatosystemer som bruker sopp- og oomycetpatogener [110–112]. Den fokale akkumuleringen av kjernen ble ikke påvirket av økt perinukleær clustering av epidermale kloroplaster i CHUP1-knockout N. benthamiana [97]. Gitt at overekspresjonen og uttømmingen av CHUP1-proteiner har motsatte effekter på epidermale kloroplastbevegelser under Arabidopsis ECR, ville det være interessant å finne ut om perinukleær clustering av epidermale kloroplaster undertrykkes av CHUP1-overekspresjon i N. benthamiana, og dermed om den fokale akkumuleringen av kjernen ved P. infestans-grensesnittet er forstyrret.

6. Konklusjoner

Betydningen av kloroplastfunksjon i planteimmunitet er allment anerkjent. Forskning med fokus på typene kloroplast har nå dukket opp innen antimikrobielle responser. Gitt funksjonen til planteepidermis som en primær høyborg for å frastøte fienden, slik som sopp- og oomycete-patogener med direkte penetrasjonsevne, er epidermale atypiske kloroplaster et ideelt forskningsemne på grunn av deres små mengde informasjon sammenlignet med velkjente typiske mesofyllkloroplaster .

Spesielt har nyere studier avslørt en sammenheng mellom den intracellulære dynamikken til epidermale kloroplaster og planteepidermal immunitet, der ECR, fokal akkumulering av epidermale kloroplaster til patogengrensesnittet, stromuldannelse, interorganellkommunikasjon og andre prosesser kan orkestreres til øke antimikrobiell resistens [48,95–97,113]. Kloroplast-lokalisert CHUP1, som opprinnelig ble identifisert som en regulator av kloroplastfotoflyttingsbevegelser i mesofyllceller [76], har en nøkkelfunksjon i epidermale kloroplastrelaterte hendelser som respons på patogener. JAC1, en regulator av den fotoinduserte akkumuleringsresponsen til kloroplaster, er også involvert i den intracellulære posisjoneringen av epidermale kloroplaster under ECR [48]. For å forstå mekanismen som ligger til grunn for epidermal immunitet via motile kloroplastsentrerte responser, er det nødvendig med ytterligere analyse av hvilke og hvordan komponentene som brukes i kloroplastfotoflyttingssystemet bidrar til forsvarsresponsene i planteepidermis.

Finansiering:

Denne forskningen ble finansiert av JSPS KAKENHI Grant Numbers 15K18648, 18K05643 og 21H02194, og av programmet Leading Initiative for Excellent Young Researchers (LEADER) til MEXT.

Anerkjennelser:

Jeg takker Yoshitaka Takano for hans hjelp og nyttige diskusjoner.

Interessekonflikter:

Forfatteren erklærer ingen interessekonflikt.

Referanser

1. Kubo, Y.; Furusawa, I. Melaninbiosyntese: Forutsetning for vellykket invasjon av planteverten av appressoria av Colle-totrichum og Pyricularia. I Fungal Spore og sykdomsinitiering hos planter og dyr; Cole, GT, Hoch, HC, red.; Plenum Publishing: New York, NY, USA, 1991; s. 205–217.

2. Heath, MC Nonhost-resistens og uspesifikke planteforsvar. Curr. Opin. Plant Biol. 2000, 3, 315–319. [CrossRef]

3. Lee, H.-A.; Lee, H.-Y.; Seo, E.; Lee, J.; Kim, S.-B.; Å, S.; Choi, E.; Choi, E.; Lee, SE; Choi, D. Nåværende forståelse av plante-ikke-vertsmotstand. Mol. Plante-mikrobe samspill. 2017, 30, 5–15. [CrossRef] [PubMed]

4. Collins, NC; Thordal-Christensen, H.; Lipka, V.; Bau, S.; Kombrink, E.; Qiu, J.-L.; Hückelhoven, R.; Stein, M.; Freialdenhoven, A.; Somerville, SC; et al. SNARE-proteinmediert sykdomsresistens ved plantecelleveggen. Nature 2003, 425, 973–977. [CrossRef] [PubMed]

5. Jacobs, AK; Lipka, V.; Burton, R.; Panstruga, R.; Strizhov, N.; Schulze-Lefert, P.; Fincher, GB En Arabidopsis Callose Synthase, GSL5, kreves for sår- og papillærcallosedannelse. Plantecelle 2003, 15, 2503–2513. [CrossRef]

6. Lipka, V.; Dittgen, J.; Bednarek, P.; Bhat, R.; Wiermer, M.; Stein, M.; Landtag, J.; Brandt, W.; Rosahl, S.; Scheel, D.; et al. Forsvar både før og etter invasjonen bidrar til motstand mot ikke-vert i Arabidopsis. Science 2005, 310, 1180–1183. [CrossRef] [PubMed]

7. Stein, M.; Dittgen, J.; Sánchez-Rodríguez, C.; Hou, B.-H.; Molina, A.; Schulze-Lefert, P.; Lipka, V.; Somerville, S. Arabidopsis PEN3/PDR8, en ATP-bindende kassetttransportør, bidrar til motstand mot upassende patogener som kommer inn ved direkte penetrering. Plantecelle 2006, 18, 731–746. [CrossRef] [PubMed]

8. Jensen, MK; Hagedorn, PH; de Torres-Zabala, M.; Grant, MR; Rung, JH; Collinge, DB; Lyngkjaer, MF Transkripsjonsregulering av en NAC (NAM-ATAF1,2-CUC2) transkripsjonsfaktor demper ABA-signalering for effektivt basalforsvar mot Blumeria graminis f. sp. hordei i Arabidopsis. Plant J. 2008, 56, 867–880. [CrossRef] [PubMed]

9. Bednarek, P.; Pi´slewska-Bednarek, M.; Svatoš, A.; Schneider, B.; Doubský, J.; Mansurova, M.; Humphry, M.; Consonni, C.; Panstruga, R.; Sanchez-Vallet, A.; et al. En glukosinolatmetabolismevei i levende planteceller medierer bredspektret antifungal forsvar. Vitenskap 2009, 323, 101–106. [CrossRef]

10. Pinosa, F.; Buhot, N.; Kwaaitaal, M.; Fahlberg, P.; Thordal-Christensen, H.; Ellerström, M.; Andersson, MX Arabidopsis Phospholipase Dδ er involvert i basalforsvar og motstand mot pulveraktig muggsopp. Plant Physiol. 2013, 163, 896–906. [CrossRef]

11. Campe, R.; Langenbach, C.; Leissing, F.; Popescu, G.; Popescu, SC; Goellner, K.; Beckers, GJM; Conrath, U. ABC-transportør PEN 3/PDR 8/ABCG 36 interagerer med calmodulin som, i likhet med PEN 3, er nødvendig for Arabidopsis nonhost-resistens. Ny Phytol. 2015, 209, 294–306. [CrossRef]

12. Nielsen, ME; Jürgens, G.; Thordal-Christensen, H. VPS9a aktiverer Rab5 GTPase ARA7 for å gi distinkt pre- og postinvasiv plante-medfødt immunitet. Plantecelle 2017, 29, 1927–1937. [CrossRef] [PubMed]

13. Hiruma, K.; Onozawa-Komori, M.; Takahashi, F.; Asakura, M.; Bednarek, P.; Okuno, T.; Schulze-Lefert, P.; Takano, Y. Entry Mode-Dependent Function of an Indol Glucosinolate Pathway in Arabidopsis for Nonhost Resistance against Anthracnose Pathogens. Plantecelle 2010, 22, 2429–2443. [CrossRef]

14. Hiruma, K.; Nishiuchi, T.; Kato, T.; Bednarek, P.; Okuno, T.; Schulze-Lefert, P.; Takano, Y. Arabidopsis ENHANCED SYKDOMRESISTANCE 1 er nødvendig for patogenindusert ekspresjon av plantedefensiner i ikke-vertresistens og virker gjennom interferens av MYC2-mediert repressorfunksjon. Plant J. 2011, 67, 980–992. [CrossRef] 15. Hiruma, K.; Fukunaga, S.; Bednarek, P.; Pi´slewska-Bednarek, M.; Watanabe, S.; Narusaka, Y.; Shirasu, K.; Takano, Y. Glutation og tryptofan metabolisme er nødvendig for Arabidopsis-immunitet under den overfølsomme responsen på hemibiotrofisk. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2013, 110, 9589–9594. [CrossRef] [PubMed]

16. Irieda, H.; Inoue, Y.; Mori, M.; Yamada, K.; Oshikawa, Y.; Saitoh, H.; Uemura, A.; Terauchi, R.; Kitakura, S.; Kosaka, A.; et al. Konservert soppeffektor undertrykker PAMP-utløst immunitet ved å målrette mot planteimmunkinaser. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2018, 116, 496–505. [CrossRef] [PubMed]

17. Maeda, K.; Houjyou, Y.; Komatsu, T.; Hori, H.; Kodaira, T.; Ishikawa, A. AGB1 og PMR5 bidrar til PEN2-mediert preinvasjonsmotstand mot Magnaporthe oryzae i Arabidopsis thaliana. Mol. Plante-mikrobe samspill. 2009, 22, 1331–1340. [CrossRef]

18. Nakao, M.; Nakamura, R.; Kita, K.; Inukai, R.; Ishikawa, A. Ikke-vertsresistens mot penetrering og hyfevekst av Magnaporthe oryzae i Arabidopsis. Sci. Rep. 2011, 1, 171. [CrossRef] [PubMed]

19. Okawa, C.; Ishikawa, A. MPK6 Bidrar til ikke-verts motstand mot Magnaporthe oryzae i Arabidopsis thaliana. Biosci. Bioteknologi. Biochem. 2013, 77, 1320–1322. [CrossRef]

20. Takahashi, T.; Shibuya, H.; Ishikawa, A. SOBIR1 bidrar til ikke-vertsresistens mot Magnaporthe oryzae i Arabidopsis. Biosci. Bioteknologi. Biochem. 2016, 80, 1577–1579. [CrossRef]

21. Takahashi, T.; Shibuya, H.; Ishikawa, A. ERECTA bidrar til ikke-vertsresistens mot Magnaporthe oryzae i Arabidopsis. Biosci. Bioteknologi. Biochem. 2016, 80, 1390–1392. [CrossRef]

22. Takahashi, T.; Murano, T.; Ishikawa, A. SOBIR1 og AGB1 bidrar uavhengig til ikke-vertresistens mot Pyricularia oryzae (syn. Magnaporthe oryzae) i Arabidopsis thaliana. Biosci. Bioteknologi. Biochem. 2018, 82, 1922–1930. [CrossRef] [PubMed]

23. DuPree, P.; Pwee, K.-H.; Gray, JC Uttrykk av fotosyntese-gen-promoter-fusjoner i bladepidermale celler av transgene tobakksplanter. Plant J. 1991, 1, 115–120. [CrossRef]

24. Bowes, BG; Mauseth, JD Plant Structure—A Color Guide, 2. utg.; Manson Publishing, Ltd.: London, Storbritannia, 2008. 25. Vaughan, K. Immunocytochemistry of Plant Cells; Springer: Dordrecht, Nederland, 2013.

For more information:1950477648nn@gmail.com