Glykosider av Cistanche forbedrer læring og hukommelse i rottemodellen for vaskulær demens

for mer informasjon:ali.ma@wecistanche.com

J. CHEN1,2, S.-N. ZHOU1, Y.-M. ZHANG2, Y.-L. FENG2, S. WANG2

1 Avdeling for nevrologi, Qilu sykehus ved Shandong University, Jinan, Kina. & Brain Science Research Institute, Shandong University, Shandong, PR Kina

2Department of Neurology, The Indre Mongolia Autonomous Region People's Hospital, PR Kina

Jin Chen og Yan-Mei Zhang bidro like mye til denne studien

Abstrakt.– MÅL:Glykosider av cistanche(GC) er hentet fra Xin JiangCistanche, som er mye brukt som kinesisk urt. Denne studien tar sikte på å evaluere effekten av GC på vaskulær demens (VD).

MATERIALER OG METODER: VD-modellen ble etablert ved ligatur av den bilaterale felles halspulsåren hos voksne Wistar-rotter, som fikk daglig ip-administrering av saltvann, GC (10 mg/kg kroppsvekt/d, ip) eller oxiracetam (450 mg/kg kroppsvekt/d, ip) i 14 dager. Morris Water Maze test verdsatte den kognitive ytelsen til rottene. Hippocampus ble dissekert og utsatt for proteomikk og immunhistokjemisk analyse. RESULTATER: GC-gruppen viste signifikant lavere rømningslatens enn VD-gruppen fire og fem dager etter operasjonen. De viste ingen signifikant forskjell sammenlignet med den sham-opererte gruppen og oxiracetam-kontrollgruppen. I hippocampus viste de 21 proteinflekkene i GC-gruppen forskjellige ekspresjonsnivåer sammenlignet med VD-gruppen. Dette inkluderte de fire proteinene som viste en signifikant forskjell: tre oppregulerte proteiner tioredoksinlignende protein 1, dobbelspesifisitet mitogenaktivert proteinkinasekinase 1 og dihydropyridinase-relatert protein 2 (CRMP-2), og ett nedregulert protein glutationsyntetase. Immunhistokjemianalyse viste at P-tau-proteinnivået var signifikant høyere i VD-modellgruppen enn i den sham-opererte gruppen (p < 0,05).="" etter="" gc-behandling="" viste="" p-tau-proteinnivået="" i="" vd-modellrotter="" en="" signifikant="" reduksjon="" sammenlignet="" med="" vd-gruppen="" behandlet="" med="" saltvann="" (p="">< 0,05).="" konklusjoner:="" gc="" spiller="" en="" kritisk="" rolle="" i="" å="" beskytte="" hippocampale="" nevroner="" i="" vd,="" ved="" å="" redusere="" p-tau-fosforylering="" og="" øke="" crmp-2-ekspresjonsnivået.="" farmakologisk="" manipulasjon="" av="" gc="" gir="" en="" ny="" mulighet="" for="">

Stikkord:

Vaskulær demens, Glycosider of cistanche, Proteomics, P-tau, Dihydropyrimidinase-relatert protein 2.

Klikk til Cistanche og cistanche deserticola ma for å forbedre hukommelsen

Introduksjon

Vaskulær demens (VD) er den nest ledende senile demensen og er hovedsakelig forårsaket av iskemisk cerebrovaskulær sykdom. VD fører til heterogen kognitiv svikt, og nye effektive terapeutiske legemidler som behandler eller forhindrer progresjon av VD er nødvendig1. Imidlertid er det fortsatt ingen effektiv kinesisk urt for å forbedre kognitiv svekkelse indusert av cerebral iskemi.

Glykosider av cistanche (GC) har blitt mye brukt som en urt med nevrobeskyttende effekter. Herba Cistanches Extract forbedrerlæring og hukommelseav mus ved å fremme nevronal celledifferensiering, neurittvekst og synapsedannelse2. Glykosider av cistanche kan forhindre apoptose i cerebellare granulatnevroner og utøve en anti-apoptoseeffekt ved å hemme aktiveringen av caspase-3 og caspase-83. Echinacoside, en viktig aktiv komponent i Herba Cistanches, er tilstrekkelig til å beskytte nevronceller fra rotenonskade ved å aktivere Trk-signalering4. Imidlertid er mekanismene som GC forbedrer kognitiv svikt i VD fortsatt stort sett ukjente.

Tau-protein er et neuronalt mikrotubuli-assosiert protein som stabiliserer neuronale mikrotubuli. Fosforylering av tau-protein (P-tau) påvirker dets evne til å samhandle med mikrotubuli og påvirker synaptisk overføring. Akkumuleringen av nevrofibrillære floker (NFT) består av P-tau-protein og er en av hovedkarakteristikkene ved Alzheimers sykdom (AD)5. Det er velkjent at VD og AD er de to vanligste demenssykdommene. De deler en felles korrelasjon med vaskulære risikofaktorer, som hypertensjon, diabetes mellitus og hyperkolesterolemi. Derfor kan P-tau også være involvert i VD.

Vi evaluerte effekten av GC-er pålærings-minne funksjoni en rottemodell av VD og utførte proteomikk og immunhistokjemisk analyse på hippocampus til VD-rotter for å gi innsikt i de nevrobeskyttende effektene av GC. Resultatene våre viste at GCforbedret læring og hukommelsei VD-rotter, og endret nivåene av proteiner som P-tau i VD-rotter.

Materialer og metoder

Dyr

Seks måneder gamle Wistar-hannrotter (vekt 230- 270 g) ble levert av forsøksdyrsenteret i Hubei-provinsen, Kina. Alle eksperimentelle dyreprosedyrer ble utført i henhold til retningslinjene for dyrepleie og lokale etiske forskrifter ved Wuhan nr. 1 sykehus, Kina. Etikkgodkjenningsnummeret er 00014834. Dyrene ble holdt separat i grupper på 4 per bur ved 25 grader med en 12-times lys/12-times mørkesyklus og fri tilgang til mat og vann. Dyr (n=45) ble tilfeldig tildelt fire grupper: modellgruppe (n=12), sham-operert gruppe (n=11), GC-behandlet gruppe (n{{14} }), og oksiracetam-behandlet kontrollgruppe (n=10).

Bilateral Ligering av vanlig halspulsåre (2-VO)

Under dyp anestesi med 10 prosent kloralhydrat (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory reagens, Tianjin, Kina) (350 mg/kg kroppsvekt,

ip), bilaterale felles halspulsårer (CCA) ble forsiktig separert fra det omkringliggende vevet, og deretter tett ligert med suturen. Huden ble deretter rekonstruert og rottene ble deretter holdt ved romtemperatur og returnert til hjemmeburet inntil gjenopplivning. Sham-opererte kontrollrotter ble utsatt for samme kirurgiske prosedyre uten CCA-ligering. VD-rotter ble behandlet med GC (10 mg/kg kroppsvekt/d, ip) eller oxiracetam (450 mg/kg kroppsvekt/d, ip) umiddelbart etter operasjonen i 14 påfølgende dager. Modellgruppen ble injisert med samme volum normal saltvann.

Morris Water Maze Test

MWM-testen ble utført i henhold til en tidligere beskrevet metode7. Testområdet besto av et sirkulært basseng fylt med vann (25 ± 1 grad), gjort ugjennomsiktig med melk slik at rottene ikke var i stand til å se undervannsplattformen 1 cm under vannoverflaten. Bassenget ble delt inn i fire kvadranter (merket sone I, II, III og IV) og en plattform ble nedsenket i sone II. Visuelle signaler ble plassert på veggen i testrommet. Dyrene ble plassert i vannet ved ett av de fire startkvadrantpunktene, som ble variert tilfeldig gjennom forsøkene. Rottene fikk 2 minutter til å finne plattformen og sitte på den i 15 s. Rotter som ikke klarte å finne stedet innen en gitt tid, ble forsiktig ført til plattformen og fikk lov til å bli på den i 15 s. Et automatisk sporingssystem ble brukt til å registrere svømmebanen, latens, svømmedistanse og tid i hver sone. Alle rottene ble avlivet to uker etter MWM-testen for den påfølgende analysen.

Proteinekstraksjon

Under dyp anestesi med 10 prosent kloralhydrat ble alle rotter som ble utsatt for MWM-testen halshugget. Hippocampus-vevet ble raskt høstet på is, og deretter umiddelbart frosset i flytende nitrogen. Alt vev ble homogenisert under flytende nitrogen ved bruk av en morter og støder og samlet i lyseringsbuffer (7 M urea, 2 M tiourea, 2 prosent CHAPS, 20 mM Tris). Uløselige partikler ble fjernet ved sentrifugering ved 12,000 rpm i 20 minutter ved 4 grader. Kontaminerte nukleinsyrer i prøvene ble forstyrret av intermitterende sonisk oscillasjon i 5 min. Supernatantene ble samlet etter sentrifugering ved samme betingelser som beskrevet ovenfor. Proteinkonsentrasjonen i supernatantene ble målt ved Bradford-analyse, og supernatantene ble lagret ved 80 grader.

Todimensjonal gelelektroforese

Proteinalikvotene (120 µg) ble justert med en rehydreringsbuffer (7 M urea, 2 M tiourea, 4 prosent CHAPS, 1 prosent vekt/volum DTT, 0,5 prosent IPG-buffer, og et spor av bromfenolblått) i et volum på 35 0 µL. Isoelektrisk fokusering (IEF) ble utført i IPG-strimler (pH 4-7, størrelse 22 cm) ved 300 V i 12 minutter, 700 V i 18 minutter, 1500 V i 1,5 timer, 9900 V for 3 timer, 9990 V i 6,5 timer, og deretter 600 V i 20 timer på et Ettan IPGphor II-system (GE ETTAN IPGPHOR3). Etter IEF-programmet ble stripene ekvilibrert i en IPG-ekvilibreringsbuffer I (6 M urea, 2 prosent SDS, 30 prosent glyserol, 0,375 M Tris, pH 8,8, 20 mg/ml DTT og et spor av bromfenolblått), og deretter alkylert (25 mg/ml jodacetamid i stedet for DTT i en ekvilibreringsbuffer) i 15 min. 2-DE ble utført på 12,5 prosent SDS polyakrylamidgeler (24 cm×19,5 cm×1,0 mm) med 0,5 prosent agaroseforseglingslim, ved bruk av Ettan DALT Six elektroforesesystem (GE ETTAN DALTsix, PA, USA). Elektroforese ble utført ved 2 W i 45 minutter, etterfulgt av separasjon ved 17 W i fire timer inntil bromfenolblått nesten nådde bunnen av gelene. Proteinflekkene ble visualisert via sølvfarging (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) i analytiske geler. 2-DE-vasker dannet i tre eksemplarer og fra tre uavhengige proteinekstraksjoner for hver gruppe.

Preparativ gelelektroforese

Proteinprøver (600 µg) fra fire grupper av rotter ble utsatt for 2-DE etter metoden beskrevet ovenfor. Proteinflekkene ble visualisert via Coomassie brilliant blue farging (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) i preparative geler.

Bildeinnsamling og analyse

Gelbildene ble tatt på et {{0}}DE Image Scanning-system (UMAX Powerlook1100, VT, USA) og analysert av Image Master 2D Platinum 5.0-programvare (GE, PA, USA). Proteinflekkene ble oppdaget automatisk og deretter redigert manuelt for å fjerne striper, flekker og artefakter.

Matrise-assistert laserdesorpsjon ionisering-time-of-flight massespektrometri (MALDI-TOF-MS)

For peptidmasse-fingeravtrykk og påfølgende analyse ble geler skåret i skiver, og Coomassie-fargede flekker ble avfarget og vasket med 100 mM ammoniumbikarbonat og acetonitril, redusert med DTT ved 60 grader i 40 minutter, og deretter alkylert av IAA i 30 min i mørket. Gelen ble inkludert i 50 µL 12 ng/µl modifisert trypsinløsning i 50 mM ammoniumbikarbonat (pH 8,6) ved 37 grader over natten. Peptidene ble ekstrahert fra gelpluggen med 1 prosent maursyre/2 prosent acetonitril og konsentrert med C-18 Zip-Tips. Fordøyelser ble oppdaget (fire replikater) på et MALDI-mål ved å bruke a-cyano 4-hydroksykanelsyre (2 mg/ml i 50 prosent acetonitril, 0,1 prosent TFA inneholdende ti mM ammoniumfosfat) som en matrise. Spektra ble anskaffet på et 4700 MALDI TOF/TOF massespektrometer (Applied Biosystems, NY, USA), og analysert med GPS Explorer TM (Applied Biosystems) programvare.

Immunhistokjemi

Koronale hippocampale seksjoner ble fiksert i 4 prosent paraformaldehyd før de ble innebygd i parafin og deretter kuttet i 4- µm tykke seksjoner. Avsluttede koronale hippocampale seksjoner ble behandlet for å slukke endogen peroksidaseaktivitet ved bruk av 3 prosent H2O2 i fosfatbufret saltvann. Uspesifikke immunreaksjoner ble blokkert ved romtemperatur i 15 minutter. Seksjoner ble deretter inkubert med P-tau-antistoff og sekundært antistoff ved romtemperatur i 3 0 minutter og ble visualisert etter 3,3'-diaminobenzidintetrahydroklorid (Dako, Tokyo, Japan)-reaksjon. Bildene ble tatt med et lysmikroskop (Olympus, Tokyo, Japan) og behandlet med Photoshop-programvare (versjon 7.0, Adobe, San Jose, CA, USA).

Statistisk analyse

Kvantitative data ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Toveis variansanalyse (ANOVA) ble utført ved å bruke SPSS 10.0 analyseprogramvare (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). p < 0,05="" ble="" ansett="" som="">

Resultater

GC fremmer læring og hukommelse hos VD-rotter

For å evaluere effekten av GC på den kognitive funksjonen til VD-rottemodellen, utførte vi MWM-testen. I MWM-testen viste GC-gruppen signifikant lavere rømningslatens enn VD-gruppen 4 og 5 dager etter operasjonen, men viste ingen signifikant forskjell sammenlignet med den falske opererte gruppen og oksiracetam-kontrollgruppen (tabell I). Disse dataene tyder på at GC fremmer læring og hukommelse hos VD-rotter. GC endrer proteomiske profiler av Hippocampus til VD-rotter.

Ved proteomisk analyse av rottehippocampus fant vi at 21 proteinflekker i GC-gruppen viste forskjellige ekspresjonsnivåer sammenlignet med VD-gruppen. Blant dem viste fire proteiner en signifikant forskjell i hippocampus til GC-rottene (tabell II): inkludert tre oppregulerte proteiner tioredoksinlignende protein 1 (TXNL 1), mitogenaktivert proteinkinasekinase 1 med dobbel spesifisitet (MAPKK 1), og dihydropyrimidinase-relatert protein 2 (DPYSL2); og en nedregulert proteinglutationsyntetase (GCL). De typiske todimensjonale gelelektroforese- (2-DE)-profilene til DPYSL2 ble vist i figur 1.

GC modulerer P-tau-nivå i Hippocampus til VD-rotter

Ved immunhistokjemi-analyse fant vi at P-tau-proteinnivået var signifikant høyere i VD-modellgruppen enn i den falske opererte gruppen (p < 0.05).="" etter="" gc-behandlingen="" viste="" p-tau-proteinnivå="" i="" vd-modellrotter="" en="" signifikant="" reduksjon="" sammenlignet="" med="" vd-gruppen="" behandlet="" med="" saltvann="" (p="">< 0,05),="" men="" viste="" ingen="" signifikant="" forskjell="" sammenlignet="" med="" oksiracetam-kontrollgruppen="" (figur="">

Diskusjon

VD er på grunn av svekkelse av hukommelse og kognitiv funksjon hovedsakelig forårsaket av cerebrovaskulære sykdommer8,9,10,11. To-kar okklusjonsmodellen (2VO) er enkel og stabil og anerkjent som standardmodellen for cerebral iskemi. I denne studien brukte vi 2VO-modellen for å etablere VD-dyremodellen. Ved MWM-test fant vi at VD-gruppen viste redusert kognitiv evne sammenlignet med den falske opererte gruppen, noe som bekreftet at vi etablerte VD-modellen vellykket. Basert på denne modellen fant vi at GC-behandling forbedret den romlige kognitive evnen til VD-rottene i tilsvarende grad med oxiracetam, en positiv kontroll. Disse dataene indikerer at GC kan fremme romlig læring og hukommelsessvikt i VD.

For å undersøke mekanismen som GC utøver nevrobeskyttende effekter på VD, brukte vi en proteomisk tilnærming for å screene differensielt uttrykte proteiner i hippocampus til VD-rotter. Vi fant at flere proteiner relatert til energimetabolisme, proteinfolding, signalvei og cytoskjelett viste forskjellige uttrykk i hippocampus til VD-rottene behandlet med GC sammenlignet med de som ble behandlet med saltvann som kontroll.

Et av de differensielt uttrykte proteinene er DPYSL2, også kjent som kollapsinresponsmediatorprotein-2 (CRMP-2), som er anriket i den distale delen av voksende aksoner i primære hippocampale nevroner og er avgjørende for aksondifferensiering og nevronal utvekst12,13. Videre fremmer CRMP-2 mikrotubulussamling og medierer Ras-signalering for å forbedre dannelsen av flere aksoner og nevronal polaritet14,15. I denne studien ble proteinekspresjonsnivået til CRMP-2 økt med 2,28 ganger i GC-gruppen sammenlignet med VD-gruppen, noe som tyder på en viktig rolle for CRMP-2 i potensielle reparasjonsmekanismer for dannelse av nevrale nettverk og vedlikehold av nevronal polaritet i VD.

Videre, i denne studien fant vi høyere P-tau i VD-modellgruppen, men lavere P-tau-uttrykk etter GC-behandling. Tau-protein spiller en nøkkelrolle i morfogenesen til nevroner. I visse patologiske situasjoner kan P-tau-protein generere avvikende aggregater som er giftige for nevroner, ved å påvirke mitokondriell funksjon15. Tidligere studier tyder på at GC kan forbedre mitokondriell energimetabolisme med antioksidasjonsfunksjon16,17,18. Interessant nok har CRMP-2-fosforylering også blitt karakterisert som en bestanddel av nevrofibrillære floker i AD.

Konklusjoner

CRMP2 blir vanligvis fosforylert av cyklinavhengig proteinkinase-5 (Cdk5) og glykogensyntasekinase-3 (GSK3) i hjernen til AD-pasienter, de samme kinasene som fosforylerer tau-protein for å generere NFT-er19,20. Ytterligere studier er nødvendig for å undersøke om GC regulerer P-tau og CRMP2 ekspresjonsnivå i VD ved å regulere Cdk5 og GSK3 aktivitet21,22,23. Oppsummert tyder dataene våre på at GC spiller en kritisk rolle for å beskytte hippocampale nevroner av VD, ved å redusere P-tau-fosforylering og øke CRMP-2-ekspresjonsnivået. Farmakologisk manipulasjon av GC gir en ny mulighet for utvikling av terapi mot VD.

Anerkjennelser

Denne studien ble støttet av Special Foundation for Taishan Scholars og National Natural Science Fund (30960520).

Interessekonflikt

Forfatterne erklærer at det ikke er noen interessekonflikter.

Referanser

1)GORELICK PB, PANTONI L. Fremskritt i vaskulær kognitiv svikt. Hjerneslag 2013; 44: 307-308.

2)CHOI JG, MOON M, JEONG HU, KIM MC, KIM SY, OH MS. Cistanches Herba forbedrer læring og hukommelse ved å indusere nervevekstfaktorer. Behav Brain Res 2011; 216: 652-658.

3)TIAN XF, PU XP. Fenyletanoidglykosider fra Cistanches salsa hemmer apoptose indusert av 1- metyl-4-fenylpyridiniumion i nevroner. J Ethnopharmacol 2005; 97: 59-63.

4)ZHU M, LU C, LI W. Forbigående eksponering for echinacosid er tilstrekkelig til å aktivere Trk-signalering og beskytte nevronceller fra rotenon. J Neurochem 2013; 124: 571-580.

5) MEDINA M, AVILA J. Nye perspektiver på rollen til tau i Alzheimers sykdom. Implikasjoner for terapi. Biochem Pharmacol 2014; 88: 540-547.

6)NING M, ZHANG Z, CHEN Z, ZHAO T, ZHANG D, ZHOU D, LI W, LIU Y, YANG Y, LI S, HE L. Genetiske bevis på at vaskulær demens er relatert til Alzheimers sykdom: genetisk assosiasjon be- mellom tau polymorfisme og vaskulær demens i den kinesiske befolkningen. Alder Aldring 2011; 40: 125-128.

7) CAIN DP, BOON F. Detaljert atferdsanalyse avslører både oppgavestrategier og romlig hukommelsessvekkelse hos rotter som har fått bilateral hjerneslag. Brain Res 2003; 972: 64-74.

8)ZHONG G, WANG Y, ZHANG Y, GUO JJ, ZHAO Y. Røyking er assosiert med økt risiko for demens: en metaanalyse av prospektive kohortstudier med undersøkelse av potensielle effektmodifikatorer. PLoS One 2015; 10: e0118333.

9)NETO E, ALLEN EA, AURLIEN H, NORDBY H, EICHELE T. EEG-spektrale funksjoner skiller mellom Alzheimers og vaskulær demens. Front Neurol 2015; 6:25.

10)CALABRÒ RS, DE LUCA R, LEO A, BALLETTA T, MARRA A, BRAMANTI P. Lokomat-trening i vaskulær demens: motorisk forbedring og mer! Aging Clin Exp Res 2015 12. mars.

11)UTKAN T, YAZIR Y, KARSON A, BAYRAMGÜRLER D. Etanercept forbedrer kognitiv ytelse og øker eNOS- og BDNF-ekspresjon under eksperimentell vaskulær demens ved streptozotocin-indusert diabetes. Curr Neurovasc Res 2015 11. mars.

12) ZHOU LS, ZHAO GL, LIU Q, JIANG SC, WANG Y, ZHANG DM. Silencing collapsin respons mediator protein-2 omprogrammerer makrofagfenotypen og forbedrer infarktheling i eksperimentell hjerteinfarktmodell. J Inflamm (Lond) 2015; 12:11.

13)WILSON SM, KI YEON S, YANG XF, PARK KD, KHANNA R. Differensiell regulering av kollapsinrespons mediator protein 2 (CRMP2) fosforylering av GSK3ß og CDK5 etter traumatisk hjerneskade. Front Cell Neurosci 2014; 8:135.

14)LIM NK, HUNG LW, PANG TY, MCLEAN CA, LIDDELL JR, HILTON JB, LI QX, WHITE AR, HANNAN AJ, CROUCH PJ. Lokaliserte endringer i glykogensyntasekinase-3 og kollapsinresponsmediatorprotein-2 i hjernen som er påvirket av Huntingtons sykdom. Hum Mol Genet 2014; 23: 4051-4063.

15)BRUSTOVETSKY T, PELLMAN JJ, YANG XF, KHANNA R, BRUSTOVETSKY N. Collapsin respons mediator protein 2 (CRMP2) interagerer med N-metyl-D-aspartat (NMDA) reseptor og Na pluss /Ca2 pluss-veksler og regulerer deres funksjonell aktivitet. J Biol Chem 2014; 289: 7470-7482.

16)DONG B, YUAN X, ZHAO Q, FENG Q, LIU B, GUO Y, ZHAO B. Ultralydassistert vandig tofaseekstraksjon av fenyletanoidglykosider fra Cistanche deserticola YC Ma stammer. J Sep Sci 2015 Jan 21. [Epub ahead of print].

17)HU GS, JIA JM, KIM DH. Effekter av tilførsel av tyrosin og fenylalanin på akkumulering av fenyletanoidglykosider til Cistanche deserticola cellesuspensjonskultur. Chin J Nat Med 2014; 12: 367-372.

18)DONG S, GAO R, YANG Y, GUO M, NI J, ZHAO L. Samtidig bestemmelse av fenyletanoidglykosider og aglykoner ved kapillærsoneelektroforese med løpende buffermodifikator. Anal Biochem 2014; 449: 158-163.

19)XIONG WT, GU L, WANG C, SUN HX, LIU X. Antihyperglykemiske og hypolipidemiske effekter av Cistanche tubulosa hos type 2 diabetiske db/db mus. J Ethnopharmacol 2013; 150: 935-945.

20)LIU B, OUYANG J, YUAN X, WANG L, ZHAO B. Adsorpsjonsegenskaper og preparativ separasjon av fenyletanoidglykosider fra Cistanche deserticola ved bruk av makroporøse harpikser. J Chro- motor B Analyt Technol Biomed Life Sci 2013; 937: 84-90.

21)CALDERÓN-RIVERA A, SANDOVAL A, GONZÁLEZ-RAMÍREZ R, GONZÁLEZ-BILLAULT C, FELIX R. Regulering av nevronale cav3.1-kanaler ved hjelp av syklinavhengig kinase 5 (cdk5). PLoS One 2015; 10: e0119134.

22)CASTRO-ALVAREZ JF, URIBE-ARIAS A, CARDONA-GÓMEZ GP. Cyclin-Dependent Kinase 5-målretting forhindrer b-Amyloid-aggregering som involverer glykogensyntase-kinase 3b og fosfataser. J Neurosci Res 2015 Feb 24. [Epub foran trykk].

23) ROUGET R, SHARMA G, LEBLANC AC. Syklinavhengig Kinase 5-fosforylering av familiære prionproteinmutanter forverrer konvertering til amyloidstruktur. J Biol Chem 2015; 290: 5759- 5771.