Hvorfor Herba Cistanches kan brukes til å behandle nyremangelsyndrom?

Metabolsk profilering avslører terapeutiske effekter av Herba Cistanches i en dyremodell av hydrokortison-indusert "nyre-mangelsyndrom"

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Yunping Qiu, Minjun Chen, Mingming Su, Guoxiang Xie, Xin Li, Mingmei Zhou, Aihua Zhao, Jian Jiang og Wei Jia

Abstrakt

Bakgrunn

Herba Cistanches(Roucongrong) er effektiv i behandling av Shenxu Zheng ('nyre-mangel syndrom'). Imidlertid er mekanismene og systemiske metabolske responser på urteintervensjonen uklare.

Metoder

Ved å bruke GC-MS-basert metabolsk profilering undersøkte vi de metabolske responsene påHerba Cistanchesintervensjon i en rottemodell av hydrokortison-indusert 'nyre-mangel syndrom'.

Resultater

De metabolske profilene til rottene etter hydrokortisoninjeksjon avvek fra den metabolske tilstanden før dose på forskjellige tidspunkter, fra dag 1 til dag 10, mens metabolske profiler til rottene behandlet med både hydrokortison og vannekstrakt avHerba Cistanchesreturnerte til tilstanden før dosen på dag 10.

Konklusjon

Intervensjonen avHerba Cistanchesforårsaket en systemisk utvinning fra hydrokortison-indusert metabolsk forstyrrelse hos rotter. Denne studien viser også at metabolsk profilering er nyttig for å studere terapeutiske mekanismer for urtemedisiner.

Bakgrunn

Gjennom modulering av biokjemiske reaksjoner, kontrollmekanismer og enzymaktiviteter forårsaker mange medikamenter eller kjemikalier fluktuasjoner av metabolitter som er tilstede i enkeltceller, vev eller kroppsvæsker [1]. Metabolsk profilering, dvs. sondering av metabolitter med lav molekylvekt (MW < 1000="" da)="" ved="" hjelp="" av="" et="" avansert="" analytisk="" instrument="" kombinert="" med="" multivariat="" statistikk,="" kan="" vise="" systemiske="" responser="" fra="" levende="" systemer="" på="" fremmedfrykt.="" det="" er="" også="" teknisk="" mulig="" å="" katalogisere="" alle="" de="" multifaktorielle="" arvelige="" og="" miljøpåvirkede="" metabolske="" profilene="" til="" en="" organisme,="" inkludert="" de="" fysiopatologiske="" konsekvensene="" av="" toksin="" og/eller="" sykdomsinduserte="" forstyrrelser="" eller="" ulikvekt="" i="" det="" metabolske="" regulatoriske="" nettverket="" på="" et="" systemisk="" nivå.="" til="" dags="" dato="" er="" metabolsk="" profilering="" etablert="" i="" screening,="" diagnose,="" prognose="" av="" sykdommer="" [2–4]="" og="" sikkerhetsevaluering="" av="" visse="" legemidler="" og="" kjemikalier="">

Kjernemagnetisk resonans (NMR) [12] og massespektrometri (MS) [13], brukt alene eller i kombinasjon, har blitt brukt til å profilere og karakterisere metabolske konsekvenser av toksin- og/eller sykdomsinduserte forstyrrelser. NMR, som ikke krever kjedelig prøveforbehandling, er en rask og enkel metode for å få egeninformasjon fra komplekse og intakte biologiske prøver. På den annen side skyldes den brede anvendelsen av bindestrek MS i metabolsk profilering av dens høye sensitivitet og tilgjengelighet [14, 15]. Spesielt har GC-MS-basert metabolsk profilering blitt brukt for å oppdage mekanismer for legemidler og ugressmidler in vivo, biomarkører for sykdommer [16] og effekter av endret genuttrykk på metabolisme, og overvåking av ytelsen til organismer i bioteknologiske applikasjoner [17–20] .

Herba Cistanches(Roucongrong), en vanlig kinesisk tonic urt som vokser i ørkenen, viser markerte aktiviteter for å forbedre hukommelse [21] og/eller seksuell potens [22], frie radikaler, anti-aldring [23–26] og nevrobeskyttelse [27] , 28]. I århundrer,Herba Cistancheshar blitt effektivt brukt til å behandle Shenxu Zheng ('nyre-mangel syndrom') [29]. NyligHerba Cistanchesble vist å ha forbedret hydrokortison-induserte nyresykdommer [30]; dets metabolske konsekvenser er imidlertid ikke klare. Vår forrige studie [31] fant at metabolske profiler av rotter utsatt for hydrokortison i høye doser (dvs. en dyremodell for 'nyre-mangel syndrom') [32], viste et unikt biokjemisk mønster av endogene metabolitter i urin. Disse resultatene inspirerte oss til å studere mekanismene for konsistente biokjemiske endringer etter hydrokortisonmodifikasjon, ved å bruke GC-MS-basert metabolsk profilering for å undersøke om Herba Cistanches kunne reversere eller motvirke avvikende metabolske effekter av hydrokortison.

Cistanche kan forbedre nyrefunksjonen

Metoder

Materialer og instrument

Herba Cistanchesble kjøpt fra Shanghai Leiyunshang Pharmaceutical Co Ltd (Kina) og identifisert som Cistanche deserticola YC Ma av Dr. Mengyue Wang (Laboratory of Pharmacognostics, School of Pharmacy, Shanghai Jiao Tong University) i henhold til en standardprotokoll [33]. Hydrokortison oppløsning for injeksjon (0,5 prosent ) ble kjøpt fra Shanghai Xinyi Pharmaceutical Co (Kina). Derivatiseringsreagensene var N-metyl-N-trimetylsilyltrifluoracetamid (MSTFA) (Sigma-Aldrich Inc, USA) og trimetyljodsilan (TMSI) (Sigma-Aldrich Inc, USA) blandet i et forhold på 1000:1. Alle reagenser som ble brukt i forsøket var av analytisk kvalitet. Ultrarent vann ble fremstilt med et Millipore rensesystem (18,2 MΩ, USA). Metaboliske bur ble kjøpt fra Suzhou Fengshi Laboratory Animal Experiment Co Ltd (Kina).

Fremstilling av Herba Cistanches ekstrakt

Fem hundre gram grovt pulverisert plantemateriale ble tilbakeløpskokt med 2 L ultrarent vann i 2 timer. Etter filtrering ble ekstraktet fordampet til omtrent en tiendedel av det opprinnelige volumet på en Buchi rotasjonsfordamper og ble fortynnet til 250 ml i en målekolbe med ultrarent vann. Den endelige konsentrasjonen av råoljeHerba Cistanchesekstraktet var 2 g/ml.

Dosering og prøvetaking

Håndteringen av alle dyrene i denne studien var i samsvar med de nasjonale retningslinjene og ble utført ved Center for Laboratory Animals, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai, Kina. Totalt 19 ni uker gamle Wistar hannrotter ble kjøpt fra Shanghai Laboratory Animal Co Ltd (Kina). Alle dyrene ble holdt i et barrieresystem med regulert temperatur (20–22 grader) og fuktighet (60 ± 10 prosent), og på en 12 timers mørk/lys-syklus med lys på kl. 8:00. Rottene fikk ad libitum mat og vann. Etter to ukers akklimatisering ble dyrene overført til individuelle metabolske bur og tilfeldig delt inn i tre grupper: (1) behandlingsgruppe (n=7) der hydrokortison (5 prosent) ble injisert ip med 1,5 mg/100 g av kroppsvekt etterfulgt av oral administrering avHerba Cistanchestrekke ut i 10 dager; (2) modellgruppe (n=7) der hydrokortison (5 prosent) ble injisert ip ved 1,5 mg/100 g én gang daglig i 10 dager; og (3) kontrollgruppe (n=5) der bæreren ble injisert ip ved ca. 0,6 ml i 10 dager [31].Herba Cistanchesble administrert til behandlingsgruppen i en dose på 20 g/kg etter anbefalingen fra Shen et al. [30]. Tjuefire timers urinprøver ble samlet inn med bestemte tidsintervaller: førdose (-24 – 0 timer), dag 1 (0 – 24 timer), dag 3, dag 7 og dag 10. All urinen prøver ble sentrifugert (6383 × g, LG 16-W, Beijing Jingli Centrifuge Co Ltd, Kina) i 10 minutter for å fjerne suspendert rusk og umiddelbart lagret ved -80 grad for påfølgende GC-MS-analyse.

Prøveforberedelse og GC-MS

GC-MS ble utført i henhold til vår tidligere studie med mindre modifikasjoner [31]. Kort fortalt ble hver 0,5 μL alikvot av trimetylsilyl (TMS)-derivatisert analytt injisert i en kapillærkolonne med smeltet silika (17 m × 220 μm innvendig diameter, 0,11 μm filmtykkelse; HP Ultra{ {9}}, Agilent J&W Scientific, USA). GC-MS ble utført på en bindestrek PerkinElmer gasskromatografi og TurboMass-Auto system XL massespektrometer (PerkinElmer Inc, USA).

Databehandling og multivariat analyse

GC-MS-dataene ble konvertert til NetCDF-format gjennom DataBridge (PerkinElmer Inc, USA). Egendefinerte skript ble kjørt i MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, USA) for å utføre grunnlinjekorreksjon, toppdekonvolusjon og justering, intern standardekskludering og normalisering til totalsummen av kromatogrammet. Den resulterende 3-dimensjonale matrisen som omfatter vilkårlig toppindeks (parret retensjonstid-m/z), prøver (observasjoner) og normaliserte toppområder (variabler) ble importert til SIMCA-P 11.0-programvaren pakke (Umetrics, Sverige) for multivariat analyse.

Gjennomsnittlig sentrering ble utført kolonnevis for å fjerne forskyvningene. Alle de målte metabolittene ble behandlet på et likt nivå med auto-skalering (skalert til enhetsvarians) før multivariat analyse. Hovedkomponentanalyse (PCA) ble utført ved hjelp av SIMCA-P 11.0-programvaren for å avsløre den generelle klyngingen, grupperingen og trendene blant fagene uten forkunnskaper. Den første hovedkomponenten (PC1) representerer den største variansen i dataene. Den andre hovedkomponenten (PC2) er ortogonal til PC1 og representerer den maksimale variansen som ikke er forklart av PC1. De resterende hovedkomponentene ble konstruert på samme måte. I mellomtiden ble gjennomsnittlige baner for PCA-skåre brukt for å gi en dynamisk indikasjon for utbruddet, progresjonen og/eller utvinningen av syndromet over tid. Korrelasjonskoeffisienter fra de partielle minste kvadraters - diskriminantanalyse (PLS-DA) ble brukt for å rangere viktigheten av hver variabel for ytterligere å fange opp de differensielt uttrykte metabolittene som er ansvarlige for separasjonen mellom grupper. PLS-DA er avledet fra den partielle minste kvadraters (PLS) metoden som er en generalisert multippel regresjonsmetode som omhandler flere kollineære prediktorer og responsvariabler [34]. PLS-DA ble utført ved hjelp av SIMCA-P 11.0-programvaren [35]. En typisk 7-runde kryssvalidering ble utført. En syvendedel av prøvene ble ekskludert fra modellen i hver runde for å validere modellen. Denne prosedyren ble gjentatt på en iterativ måte for kryssvalidering inntil hver prøve var blitt ekskludert én gang.

Herba Cistanches kan brukes til å behandle nyre-mangelsyndromet

Univariat analyse

De differensielt uttrykte metabolittene identifisert fra den multivariate analysen ble også verifisert i MATLAB 7.0-programvaren (The MathWorks Inc, USA) ved ikke-parametrisk Kruskal-Wallis-test med et signifikansnivå på P < 0.05 .

Resultater og diskusjon

Tolkning av GC-MS-spektra

Typiske GC-MS totalionstrøm (TIC) kromatogrammer av rotteurin på dag 10 fra behandlingsgruppen, modellgruppen og kontrollgruppen er vist i figur 1. Ved å bruke vår optimaliserte GC-MS analyseprotokoll i forbindelse med en programvarebasert topp dekonvolusjonsprosedyre ble totalt 117 individuelle metabolitter konsekvent påvist i minst 90 prosent av urinprøvene. Sammensatt identifikasjon av topper av interesse ble utført ved å sammenligne massespektralfragmentet mot NIST (National Institute of Standards and Technology) referansebiblioteker, Wiley-biblioteker og referansestandarder. Vi var i stand til å verifisere 23 av de 117 metabolittene (20 prosent), hvorav de fleste var aminosyrer, polyaminer, fettsyrer, puriner og binyrehormoner som hovedsakelig er involvert i energimetabolisme, lipidmetabolisme og aminosyremetabolisme.

Figur 1 Typiske GC-MS totalionstrøm (TIC) kromatogrammer av urin på dag 10 fra behandlingsgruppe (A), modellgruppe (B) og kontrollgruppe (C).

Tidsavhengige endringer i urinprøver

De gjennomsnittlige banene til PCA-skårene avledet fra modellgruppen og behandlingsgruppen ble illustrert i figur 2. Det forbigående skiftet i baneplottet avslørte den dynamiske fremgangen til 'nyre-mangel syndrom' indusert av hydrokortison alene eller i kombinasjon medHerba Cistanchesbehandling. I modellgruppen var metabolske mønstre på dag 1 og dag 3 forskjellige fra de på dag 7 og dag 10, noe som tyder på at det metabolske regulatoriske nettverket på dag 1 og dag 3 kan ha gjennomgått en forbigående periode med høye fluktuasjoner og at det forstyrrede nettverket kan ha blitt gjenopprettet på dag 7 og dag 10, noe som til slutt førte til et stabilt mønster nær før-dose-tilstanden. Analogt indikerte det faktum at det metabolske mønsteret på dag 1 og dag 3 åpenbart avvek fra pre-dose i behandlingsgruppen den dominerende "nyre-mangel syndrom' stat. I denne perioden var effektene av hydrokortison sannsynligvis dominerende over effektene avHerba Cistanchesekstrakt. Disse funnene stemte overens med den generelle observasjonen at rotter fra begge gruppene viste mindre aktivitet på dag 1 og dag 3. Interessant nok nærmet de metabolske mønstrene på dag 7 og dag 10 seg gradvis og signifikant pre-dose-tilstanden, noe som tyder på atHerba Cistancheshadde noen motvirkende eller terapeutiske effekter på rottene som ble utsatt for hydrokortison. Disse resultatene støtter de kliniske funnene somHerba Cistancheser effektiv i å behandlenyre-mangel syndrom'. Generelt gir begge banene et visuelt, samlet og dynamisk bilde av utbruddet, progresjonen og gjenopprettingen avnyre-mangel syndrom'.

Figur 2 Gjennomsnittlig bane for PC1 vs PC2-score for urinprøver fra modellgruppen (-●-) og behandlingsgruppen (--●--). Hver prikk angir en gjennomsnittlig poengsum på forskjellige tidspunkt, dvs. før dose, dag 1, 3, 7 og 10. Feillinje representerer standardavviket for hvert tidspunkt oppnådd av den første hovedkomponenten.

Sammenlignende metabolsk analyse av urinprøver

For bedre å forstå de metabolske effektene av hydrokortison, sammenlignet vi de metabolske profilene oppnådd fra kontroll-, modell- og behandlingsgruppene. Generell gruppering av de tre gruppene kan lett observeres på forskjellige tidspunkter, dvs. pre-dose, dag 3 og dag 10 (figur 3). Selv om det ikke er noen separasjonstendens i urinprofiler før dose, avvek de metabolske profilene fra kontrollgruppen på dag 3 etter hydrokortisoneksponering. Den metabolske forstyrrelsen av hydrokortison dukket opp i både modell- og behandlingsgruppene. Imidlertid, etter en påfølgende 7-dagers behandling medHerba Cistanches, metabolske profiler for behandlingsgruppen ble sammenlignbare med de for kontrollgruppen igjen, noe som indikerer detHerba Cistanchesgjenopprettet effektivt den forstyrrede metabolismen.

Figur 3 Sammenligning av metabolske profiler fra kontrollgruppen (svart diamant), modellgruppen (rød diamant) og behandlingsgruppen (blå diamant) på forskjellige tidspunkt: førdose (A), dag 3 (B) og dag 10 (C). Hver prikk i PCA-poengsummen representerer dataene hentet fra en rotte.

Differensiell identifikasjon av metabolske profiler

En kryssvalidert PLS-DA-modell ble brukt for å identifisere nøkkelmetabolittene i forskjellige metabolske profiler for enklere differensiering mellom kontrollgruppens rotter og modellgruppen (dvs. hydrokortisoninduserte) rotter med eller utenHerba Cistanchesbehandling på dag 3 (tabell 1). Gangeendringer i den relative konsentrasjonen av hver nøkkelmetabolitt mellom grupper ble bestemt, og den tilsvarende visualiseringen av endringene mellom gruppene ved pre-dose, dag 3 og dag 10 ble produsert (Figur 4). Som vist i figur 4 og tabell 1, mens de fleste av de endogene metabolittene økte eller reduserte signifikant i modellgruppen, gjennomgikk de i behandlingsgruppen en forbigående periode som observert på dag 1 og dag 3 og nærmet seg gradvis kontrollnivået (normalt) . For eksempel, sammenlignet med den svake variasjonen (1,1–1,5 ganger) av metabolittene i behandlingsgruppen på dag 10, ble de sterkt økte nivåene (1,7–3,0 ganger) av urintyrosin, tyramin, dopamin og noradrenalin observert i modellgruppe gjennom hele forsøket. Vår forrige studie viste at den forbedrede katekolaminmetabolismen indusert av glukokortikoider resulterte i overforbruk av immunfunksjoner, og førte dermed tilnyre-mangel syndrom' [31]. Herba Cistanches, en styrkende urt som forbedrer immunforsvaret [36], kan motvirke enkelte effekter av hydrokortison.Herba Cistancheskan også være i stand til å gjenopprette et normalt metabolsk regulatorisk nettverk. Ytterligere eksperimenter med forskjellige tilnærminger som molekylærbiologi, cellebiologi og plantekjemi er nødvendig for å avgrense handlingene tilHerba Cistanches(og dens bestanddeler) i 'nyre-mangel syndrom'.

Tabell 1 En liste over metabolitter inkludert i den metabolske profileringen av denne studien

Fra: Metabolsk profilering avslører terapeutiske effekter avHerba Cistanchesi en dyremodell av hydrokortison-indusert 'nyre-mangel syndrom'

Merk: Korrelasjonskoeffisientene (korr-koeff) for alle forbindelsene ble beregnet fra en kryssvalidert PLS-DA-modell (Q2Ycum=0.899, en tilfredsstillende modell med to komponenter) på dag 3 mellom kontrollgruppen og modellgruppen med eller utenHerba Cistanchesbehandling. I tillegg ble foldendringene testet ved den ikke-parametriske Kruskal-Wallis-testen. Kw (P) angir P-verdiene for testen. H=kontrollgruppe, M=modellgruppe, D=behandlingsgruppe. For eksempel representerer H/M/0 de relative foldendringene (modell å kontrollere) ved pre-dose-tilstanden.

Figur 4 Fold endringer av nøkkelmetabolittene. Rød farge angir relative forhøyede konsentrasjoner (fold endringer > 1,5), mens grønn farge angir relative reduserte konsentrasjoner (fold endringer < -1.5).="" foldeendringer="" fra="" -1.5="" til="" 1.5="" anses="" å="" være="" fysiologiske="" variasjoner.="" en="" fold="" endring="" (m/h,="" d/h)="" er="" konsentrasjonsforholdet="" mellom="" modellgruppen="" eller="" behandlingsgruppen="" og="">

Konklusjon

Den nåværende metabolske profileringsstudien ved bruk av GC-MS viste detHerba Cistanchesforårsaket en systemisk utvinning fra hydrokortison-indusert metabolsk forstyrrelse hos rotter, en dyremodell fornyre-mangel syndrom'. Denne studien viser også at metabolsk profilering er en nyttig metode for å studere de terapeutiske effektene av urtemedisiner.

Forkortelser

MS: massespektrometri

GC-MS: gasskromatografi-massespektrometri

NMR: kjernemagnetisk resonans

PCA: hovedkomponentanalyse

PLS-DA: delvis minste kvadrater – diskriminantanalyse

Referanser

1. Nicholson JK, Lindon JC, Holmes E: 'Metabonomics': Forstå de metabolske responsene til levende systemer på patofysiologiske stimuli via multivariat statistisk analyse av biologiske NMR-spektroskopiske data. Xenobiotika. 1999, 29 (11): 1181-1189. 10.1080/004982599238047.

2. Brindle JT, Antti H, Holmes E, Tranter G, Nicholson JK, Bethell HWL, Clarke S, Schofield PM, McKilligin E, Mosedale DE, Grainger DJ: Rask og ikke-invasiv diagnose av tilstedeværelse og alvorlighetsgrad av koronar hjertesykdom ved bruk av 1H -NMR-basert metabonomi. Nat Med. 2002, 8 (12): 1439-1444. 10,1038/nm802.

3. Constantinou MA, Papakonstantinou E, Benaki D, Spraul M, Shulpis K, Koupparis MA, Mikros E: Anvendelse av kjernemagnetisk resonansspektroskopi kombinert med hovedkomponentanalyse for å oppdage medfødte metabolismefeil ved bruk av blodflekker: En metabonomisk tilnærming. Anal Chim Acta. 2004, 511 (2): 303-312. 10.1016/j.aca.2004.02.012.

4. Beckonert O, Monnerjahn J, Bonk U, Leibfritz D: Visualisering av metabolske endringer i brystkreftvev ved hjelp av 1H-NMR-spektroskopi og selvorganiserende kart. NMR Biomed. 2003, 16 (1): 1-11. 10.1002/nbm.797.

5. Mortishire-Smith RJ, Skiles GL, Lawrence JW, Spence S, Nicholls AW, Johnson BA, Nicholson JK: Bruk av metabonomikk for å identifisere nedsatt fettsyremetabolisme som mekanismen for legemiddelindusert toksisitet. Chem Res Toxicol. 2004, 17 (2): 165-173. 10.1021/tx034123j.

6. Waters NJ, Holmes E, Williams A, Waterfield CJ, Duncan Farrant R, Nicholson JK: NMR- og mønstergjenkjenningsstudier på de tidsrelaterte metabolske effektene av -naftylisotiocyanat på lever, urin og plasma hos rotter: En integrativ metabonomikk nærme seg. Chem Res Toxicol. 2001, 14 (10): 1401-1412. 10.1021/tx010067f.

7. Coen M, Lenz EM, Nicholson JK, Wilson ID, Pognan F, Lindon JC: En integrert metabonomisk undersøkelse av acetaminophen-toksisitet i mus ved bruk av NMR-spektroskopi. Chem Res Toxicol. 2003, 16 (3): 295-303. 10.1021/tx0256127.

8. Small-Howard A, Turner H: Eksponering for tobakksavledede materialer induserer overproduksjon av utskilte proteinaser i mastceller. Toxicol Appl Pharmacol. 2005, 204 (2): 152-163. 10.1016/j.taap.2004.09.003.

9. Waters NJ, Waterfield CJ, Farrant RD, Holmes E, Nicholson JK: Metabonomisk dekonvolusjon av innebygd toksisitet: Anvendelse på tioacetamid hepato- og nefrotoksisitet. Chem Res Toxicol. 2005, 18 (4): 639-654. 10.1021/tx049869b.

10. Robertson DG: Metabonomics in toxicology: A review. Toxicol Sci. 2005, 85 (2): 809-822. 10.1093/giftig/kfi102.

11. Robertson DG, Bulera SJ: Høy-throughput toksikologi: Praktiske betraktninger. Curr Opin Drug Discovery Dev. 2000, 3 (1): 42-47.

12. Nicholson JK, Connelly J, Lindon JC, Holmes E: Metabonomics: En plattform for å studere legemiddeltoksisitet og genfunksjon. Nat Rev Drug Discov. 2002, 1 (2): 153-161. 10.1038/nrd728.

13. Taylor J, King RD, Altmann T, Fiehn O: Anvendelse av metabolomikk til plantegenotypediskriminering ved bruk av statistikk og maskinlæring. Bioinformatikk. 2002, 18 (SUPPL 2): S241-S248.

14. Wilson ID, Nicholson JK, Castro-Perez J, Granger JH, Johnson KA, Smith BW, Plumb RS: Høyoppløselig "ultra-performance" væskekromatografi koblet til oa-TOF massespektrometri som et verktøy for differensiell metabolsk baneprofilering i funksjonelle genomiske studier. J Proteome Res. 2005, 4 (2): 591-598. 10.1021/pr049769r.

15. Jonsson P, Gullberg J, Nordstrom A, Kusano M, Kowalczyk M, Sjostrom M, Moritz T: En strategi for å identifisere forskjeller i store serier av metabolomiske prøver analysert ved GC/MS. Anal Chem. 2004, 76 (6): 1738-1745. 10.1021/ac0352427.

16. Ohdoi C, Nyhan WL, Kuhara T: Kjemisk diagnose av Lesch-Nyhan syndrom ved bruk av gasskromatografi-massespektrometri deteksjon. J Chromatogr, B: Anal Technol Biomed Life Sci. 2003, 792 (1): 123-130. 10.1016/S1570-0232(03)00277-0.

17. Fiehn O, Kopka J, Dormann P, Altmann T, Trethewey RN, Willmitzer L: Metabolittprofilering for plantefunksjonell genomikk. Nat Biotechnol. 2000, 18 (11): 1157-1161. 10.1038/81137.

18. Lafaye A, Junot C, Pereira Y, Daniel G, Tabet JC, Ezan E, Labarre J: Kombinerte proteom- og metabolittprofileringsanalyser avslører overraskende innsikt i gjærsvovelmetabolisme. J Biol Chem. 2005, 280 (26): 24723-24730. 10.1074/jbc.M502285200.

19. Schauer N, Steinhauser D, Strelkov S, Schomburg D, Allison G, Moritz T, Lundgren K, Roessner-Tunali U, Forbes MG, Willmitzer L, Fernie AR, Kopka J: GC-MS biblioteker for rask identifikasjon av metabolitter i komplekse biologiske prøver. FEBS Lett. 2005, 579 (6): 1332-1337. 10.1016/j.febslet.2005.01.029.

20. Willse A, Belcher AM, Preti G, Wahl JH, Thresher M, Yang P, Yamazaki K, Beauchamp GK: Identifikasjon av store histokompatibilitetskompleksregulerte kroppsluktstoffer ved statistisk analyse av et komparativt gasskromatografi/massespektrometrieksperiment. Anal Chem. 2005, 77 (8): 2348-2361. 10.1021/ac048711t.

21. Wang XW, Wang XF, Wu LY: Forbedring av hukommelsen til mus av fenyletanoidglykosider av Cistanche deserticola. Rep Chin Pharm. 2002, 19: 41-42.

22. Xie JH, Wu CF: Effekt av etanolisk ekstrakt av Cistanche deserticola på innholdet av monoaminnevrotransmittere i rottehjerne. Zhongcaoyao. 1993, 24: 417-419.

23. Li LL, Wang XW, Wang XF: Antilipidperoksidasjon og antistrålingsvirkning av glykosider iherba Cistanches.Chin J Chin Mater Med. 1997, 22 (6): 364-367.

24. Shahat AA, Nazif NM, Abousetta LM, Ibrahim NA, Cos P, Van Miert S, Pieters L, Vlietinck AJ: Fytokjemisk undersøkelse og antioksidantaktivitet til Duranta repens. Phytother Res. 2005, 19 (12): 1071-1073. 10.1002/ptr.1766.

25. Gao J, Igarashi K, Nukina M: Tre nye fenyletanoidglykosider fra Caryopteris incana og deres antioksidative aktivitet. Chem Pharm Bull. 2000, 48 (7): 1075-1078.

26. Kyriakopoulou I, Magiatis P, Skaltsounis AL, Aligiannis N, Harvala C: Samioside, et nytt fenylethanoidglykosid med frie radikaler og antimikrobielle aktiviteter fra Phlomis samia. J Nat Prod. 2001, 64 (8): 1095-1097. 10.1021/np010128 pluss .

27. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB: Beskyttende effekt av tubulosid B på TNF alfa-indusert apoptose i nevronceller. Acta Pharmacol Sin. 2004, 25: 1276-1284.

28. Geng XC, Song LW, Pu XP, Tu PF: Nevrobeskyttende effekter av fenyletanoidglykosider fra Cistanches salsa mot 1-metyl-4-fenyl-1, 2, 3, 6- tetrahydropyridin (MPTP) induserte dopaminerg toksisitet i C57-mus. Biol Pharm Bull. 2004, 27: 797-801. 10.1248/bpb.27.797.

29. He W, Shu X, Zong G, Shi M, Xiong Y, Chen M: Nyreforsterkende og yang som støtter handlingen til cistanche deserticola YC Ma før og etter tilberedning. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1996, 21 (9): 534-537. 575

30. Shen LZ, Zhong XY, Wang SX: Effekt av Cistanche deserticola på normale og mangelfulle Shen-yang-rotter. Zhongyao Yaoli Yu Linchuang. 2001, 17 (1): 17-18.

31. Chen M, Zhao L, Jia W: Metabonomisk studie på de biokjemiske profilene til en hydrokortison-indusert dyremodell. J Proteome Res. 2005, 4 (6): 2391-2396. 10.1021/pr050158o.

32. Chen Q, Yi NY: Dyremodellene og medisiner for Yin-mangel og Yang-mangel. Eksperimentell metodikk for farmakologisk forskning i tradisjonell kinesisk medisin. Redigert av: Chen Q. 1993, Beijing: People's Health Publishing House, 982-984.

33. National Committee of Pharmacopoeia: Pharmacopoeia of the People's Republic of China. 2005, Beijing: Press of Chemical Industry, 1: 90-

34. Multi- og Megavariat Data Analysis Del I: Grunnleggende prinsipper og anvendelser, Andre reviderte og utvidede utgave. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/training_literature/c/5]

35. Brukerveiledning for SIMCA-P og SIMCA-P plus 11. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/downloads_brukerguide/c/3]

36. Chin HL, Su YC: Studie på de farmakologiske effektene av Cistanche deserticola Ma. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1993, 19: 143-146.

Fra: Kinesisk medisin bind 3, artikkelnummer: 3 (2008)