Identifikasjon av hydrogenperoksid-responsive EST-er involvert i fenyletanoid-glykosidbiosyntese i Cistanche Salsa-cellekultur

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN et al

Abstrakt
Hydrogenperoksid er en effektiv abiotisk fremkaller som kan indusere sekundær metabolittbiosyntese i planter. Vi viser det i cellesuspensjonen kultur av en salt-tolerant medisinsk planteCistanchesalsa, produksjon av bioaktive komponenterfenyletanoidglykosider(PeGs) ble økt etter H2O2-behandling. For å identifisere gener relatert til PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese påvirket av H2O2, konstruerte vi et undertrykkende subtraktiv hybridiseringsbibliotek av H2O2-responsive gener ved å bruke enCistanchesalsacellelinje og identifiserte 105 uttrykte sekvensmerker (EST) og 85 gener. EST-bibliotekets funksjonelle merknader og genontologianalyser viste gener relatert til ulike stressresponser, biosyntese av sekundære metabolitter og transkripsjonsregulering. Blant dem identifiserte vi to gener relatert til PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntesevei (4-coumarate coenzym A-ligase og cinnamate 4-hydroksylase), og to transkripsjonsfaktorer av typen WRKY. Uttrykkene til utvalgte gener etter H2O2-behandlingen ble analysert med RT-qPCR. Tidlig økt transkripsjon av PeG(fenyletanoidglykosider)biosynteseveigener etter behandlingen avslørte at H2O2 induserte PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese via oppregulering av nøkkelgener.
Ytterligere søkeord: cinnamate-4-hydroksylase, 4-coumarate coenzyme A-ligase, suppresjonssubtraktiv hybridisering.Cistanchesalsa. fenyletanoidglykosider.

Introduksjon

Cistanchesalsaer en flerårig planteparasitt på roten til Haloxylos ammodendrun, og den vokser i ørkenområdet i det vestlige Kina. I århundrer,Cistanchearter har blitt brukt som tradisjonell urtemedisin (Wang et al. 2012). Bioaktive komponenter erfenyletanoidglykosider(PeGs) som har en bemerkelsesverdig effekt på reaktive oksygenarter (ROS) clearance, strålebeskyttelse, immunitetsforsterkning og antialdring (Nan et al. 2013). PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese iCistancheinitieres fra fenylalanin (fig. 1 Suppl.) og syntetisert koffeinsyre glykosyleres videre for å danne ulike PeG-er(fenyletanoidglykosider)(Wang et al. 2012). Tre hoved-PEG-er(fenyletanoidglykosider), echinakosid, akteosid og 2'-acetylakteosid, anses å være de mest aktive komponentene iCistanche(Kobayashi et al. 1984). For å forbedre innholdet deres iCistanchecellekultur, har ulike fremkallere blitt testet inkludert kitosan, putrescin, Ag plus og osmotisk stress (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu og Cheng 2008). Imidlertid er gener involvert i PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese iCistanche, hovedsakelig gener for fenylalaninmetabolisme, har sjelden blitt identifisert. Bare et gen som koder for phenylalanine ammonia-lyase (PAL) ble nylig identifisert i Cistanche deserticola (Hu et al. 2011). Andre gener som koder for for eksempel cinnamat-4-hydroksylase (C4H), som kan katalysere omdannelsen av kanel til kumarsyre, og 4-kumaratkoenzym A-ligase (4CL), et essensielt gen for lignin og flavanoider biosynteser, er ikke funnet iCistanche.
Vi brukte cellekulturen avCistanchesalsaå studere PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese og relaterte genuttrykk. Vi undersøkte også effekten av en effektiv elicitor H2O2 på PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese. Videre å finne tidlige responsive gener involvert i PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese, utførte vi suppression subtraktiv hybridisering (SSH) for å konstruere et cDNA-bibliotek av H2O2-responsive gener.

Fig. 1. Relativt genuttrykk bestemt ved RT-qPCR etter H2O2-behandling. CsWRKY1 - WRKY transkripsjonsfaktor (Contig07), CsC4H1 - cinnamat 4-hydroksylase (Contig09), Cs4CL1 - 4-coumarate: ligase (Contig03), CsHSP1 - varmesjokkprotein 70 kDa (Contig 01), og CsSOD1 - superoksiddismutase (Contig16). Celler ble behandlet med 80 ug dm-3 H2O2 i et flytende medium i 2 timer og uttrykk ble sammenlignet med en kontroll behandlet med vann. Betyr pluss - SD av tre biologiske repetisjoner; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Materialer og metoder

CS2001-cellelinjen ble etablert fra kronblader avCistanchesalsa(CA Mey.) Beck samlet i Neimenggu-provinsen og subkulturert. Kulturmetoden var lik en protokoll publisert tidligere (Liu et al. 2007). Generelt ble et solid Murashige og Skoog (1962; MS) medium brukt for subkultur og et flytende medium for PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese (det var det modifiserte MS-mediet supplert med 30 g dm-3 glukose og 2.0 mg dm-3 indol-3-eddiksyre). For H2O2-behandling ble 5.0 ± 0,2 g celler i en rask vekstperiode, vanligvis 20 til 30 dager etter at de ble subkulturert i det faste mediet, inokulert i et 50 cm3 flytende medium i en 250 cm3 Erlenmeyer-kolbe og dyrket i mørke med eller uten forskjellige H2O2-konsentrasjoner. PeG-ene(fenyletanoidglykosider)innhold etter 10 d induksjon av H2O2 ble analysert i henhold til en metode publisert tidligere (Liu et al. 2007) basert på omvendt fase høyytelses væskekromatografi med metanolgradient eluering.

Cellene 2 timer etter H2O2-behandlingen ble samlet fra mediet med filterpapir ved bruk av en Büchner-trakt, og deretter ble de frosset i flytende nitrogen og malt til pulver. Hver 2. g cellepulver ble lysert med en blanding av 1 cm3 2-merkaptoetanol, 1 cm3 av 200 g dm{{10}} sarcosyl, og 8 cm3 av en GTC-buffer (5 M guanidiniumisotiocyanat, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM tiourea og 10 mM ditiotreitol). Cellene ble deretter inkubert på is i 15 minutter, deretter ble 1/3 volum av 8,5 M CH3COOK, pH 6,0, tilsatt, og cellene ble inkubert på is i 15 minutter og deretter sentrifugert ved 15 000 g i 15 minutter . Supernatanten ble tilsatt til et likt volum isopropanol for å utfelle totalt RNA. Det totale RNA ble ytterligere renset med et RNeasy minisett (Qiagen, Hilden, USA) i henhold til produsentens instruksjoner. Messenger RNA ble isolert fra totalt RNA ved å bruke et Oligotex mRNA midi kit (Qiagen).

fenyletanoidglykosideriCistancheSalsa

Et SSH-bibliotek ble generert fra kontroll og 30 prosent H2O2-utløste celleprøver 2 timer etter fremkallingen ved bruk av et PCR-selektert cDNA-subtraksjonssett (Clontech, Mountain View, USA). For bibliotekkonstruksjon ble produktene renset separat ved bruk av et gelrensesett (Qiagen) og klonet inn i en pGEM-vektor ved bruk av et TA-kloningssett (Tiangen, Beijing, Kina). Plasmider fra uavhengige kloner ble isolert og sekvensert ved bruk av T7-primer. Alle uttrykte sekvensmerker (EST)-sekvenser fra biblioteket (med vektorsekvensene fjernet) ble brukt for contig-montering med CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). EST-ene ble gruppert i contigs og singletons; de ble brukt til homologisøk ved å bruke BLASTx-programmet ved NCBI (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov). Sekvenser ble deretter kommentert, analysert og klassifisert i henhold til genontologi (GO) termer ved bruk av Blast2GO (http://www. blast2go.com).
Sanntids kvantitativ polymerasekjedereaksjon (RT-qPCR) ble utført i henhold til Bustin et al. (2009). cDNA-prøvene ble syntetisert ved å bruke et PrimeScript RT-reagenssett (Takara, Dalian, Kina) fra 0,5 ug totalt RNA. RT-qPCR ble utført ved bruk av SYBR Premix Ex Taq II og ROX plus-sett (Takara) på et ABI 7300 sanntids PCR-system (Applied Biosystems, Foster City, USA) med tre tekniske replikater. Primere ble designet ved hjelp av online Primer3-programvaren i henhold til instruksjonene levert av Takara; primere brukt i denne studien er oppført i tabell 1 Suppl. Genuttrykkene ble normalisert til 18S RNA, hvis ekspresjon var stabil i alle prøvene.

Resultatene ble analysert ved bruk av R versjon 3.1.1, betydningen av forskjeller ble verifisert av Studentens t-test.

Resultater

Hydrogenperoksid-induserte biosyntesen av alle tre hoved-PEG-ene(fenyletanoidglykosider)iCistanchesalsasuspensjonsceller (tabell 1), men uten åpenbar effekt på cellevekst (fig. S2). Innholdet av echinacosid økte allerede etter 10 ug dm-3 H2O2-behandling (P < 0.05),="" en="" høyere="" økning="" ble="" registrert="" etter="" 20="" ug="" dm="" -3="" h2o2-behandling="" (p="">< 0,01),="" og="" den="" høyeste="" økningen="" var="" etter="" 40,="" 80="" og="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2-behandlinger.="" lignende="" resultater="" vises="" for="" akteosid,="" men="" innholdet="" toppet="" seg="" etter="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2-behandlingen.="" biosyntesen="" av="" 2'-acetylakteosid="" var="" mindre="" følsom="" for="" h2o2-behandling;="" en="" signifikant="" økning="" av="" innholdet="" (p="">< 0,05)="" var="" ved="" h2o2-konsentrasjoner="" over="" 40="" ug="" dm-3.="" etter="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2-behandlingen,="" mengden="" av="" alle="" de="" tre="">(fenyletanoidglykosider)betydelig økt (P < 0.01)="" i="" forhold="" til="" kontrollen.="" derfor="" ble="" denne="" konsentrasjonen="" brukt="" i="" videre="">
For å generere et bibliotek beriket for tidlig responsive gener som er oppregulert av H2O2, brukte vi cDNA fraCistanchesalsasuspensjonsceller behandlet med 80 ug dm-3 H2O2 i 2 timer. Enkeltpass-sekvensering av 129 rekombinante kloner i SSH-biblioteket ga 105 rene EST-er etter utelukkelse av vektorsekvens. Disse klare EST-ene ble brukt til montering av CAP3, og 18 contigs og 67 singletons ble generert (tabell 2). Dermed ble 85 gener isolert i dette biblioteket. Gjennomsnittlig lengde på de rene 105 EST-ene var 527 bp, noe som er tilstrekkelig for en sekvenslikhetsbasert funksjonell klassifisering.

fenyletanoidglykosideriCistancheSalsa

Alle 85 gener oppnådd i biblioteket ble hentet av BLASTx mot GenBank ikke-redundante proteindatabase for sekvenslikhet (E-verdi mindre enn eller lik 0.001). Tjueen gener viste ingen treff i databasen, de kan være spesifikke forCistanchesalsa. Resultatene med BLASThits ble importert til Blast2GO-programvaren for ytterligere GO- og KEGG-baneanrikningsanalyser. Av de 64 genene med BLAST-treff, ble 50 annotert i henhold til beskrivelsen av homologe gener fra andre arter. De kommenterte genene ble navngitt i henhold til beskrivelsen av BLAST-treff. GO-analysen (fig. 3 Suppl.) viser at blant disse 50 genene var det 14 gener involvert i responser på stimuli, og over 30 gener relatert til metabolske prosesser (tabell 1 og 2). Blant disse genene ble to PeG-biosyntesevei-genhomologer isolert som forventet: 4-coumarate coenzym A-ligase (kalt Cs4CL1: Contig03) og cinnamate 4-hydroksylase (kalt CsC4H1: Contig14). Videre ble RT-qPCR utført for å bekrefte induserte uttrykk av gener fra biblioteket etter H2O2-behandlingen.

For å bekrefte at essensielle gener identifisert fra SSH-biblioteket var responsive på H2O2-behandlingen, ble uttrykkene til to PeG-er(fenyletanoidglykosider)biosyntesevei-relaterte gener (Cs4CL1, CsC4H1), to ROS-induserte gener (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099), og ett WRKY-familie transkripsjonsfaktor-lignende gen (CsWRKY1: Contig 07) ble målt med RT-qPCR med H2O2 (fig. 1). CsC4H1-, Cs4CL1-, CsSOD1- og CsWRKY1-uttrykk ble oppregulert mer enn henholdsvis 15--fold, 3--fold, 45--fold og 4--fold, henholdsvis 2 timer etter H2O2 behandling. Uttrykket av CsHSP1 ble endret bare 1,8 ganger etter H2O2-behandlingen.
Tidsforløpet for uttrykkene til CsWRKY1, CsC4H1 og Cs4CL1 etter H2O2-behandlingen ble videre analysert ved RT-qPCR (fig. 2). CsC4H1- og Cs4CL1-uttrykkene ble sterkt økt (henholdsvis mer enn 80-fold og 50-fold) etter 16-h-behandlingen og deretter nedregulert etter 32 timer. Ekspresjonen av CsWRKY1 ble oppregulert mer enn 20- ganger etter 4 timer og deretter redusert fra 8 timer etterpå (fig. 2).

Fig. 2. Det relative uttrykket av CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) og Cs4CL1 (C) til forskjellige tider etter behandling med 80 ug dm-3 H2O2. Uttrykkene ble normalisert til en kontroll; (behandlet med vann). Betyr pluss - SD av tre biologiske repetisjoner; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Diskusjon

Hydrogenperoksid er en velkjent plantefremkaller som viser ulike effekter på planter. I likhet med ROS kan det indusere ROS-rensesystemet som består av superoksiddismutase, katalase, peroksidaser, etc., og det fungerer som nedstrømssignalet for salt, osmotisk og dehydrering

understreker (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Det ble antydet at H2O2-generering i planter er ledsaget av indusert sekundær-metabolittbiosyntese iCistanchesalsacellekultur. Som forventet avslører resultatene våre at PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese iCistanche salsacellekultur ble indusert etter H2O2-behandlingen (tabell 1). Innholdet i tre hoved-PEG-er(fenyletanoidglykosider)økt etter H2O2-behandlingen, noe som indikerer dens sentrale rolle i PeGs biosyntese. Gener beriket i SSH-biblioteket antydet ytterligere effekten på PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese induksjon iCistanche salsa.

Mange kjente H2O2-responsive gener, som askorbatperoksidase (CISTH069, Karyotou og Donaldson 2005), h-kinonoksidoreduktase (CISTH125, Bello, et al. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah et al. 2014), og sykdomsresistensresponsgener (Contig10, Nanda, et al. 2010), ble beriket i SSH-biblioteket (Tabell 3, Tabell 2 Suppl.). Noen av disse typiske ROS-responsive genene med et indusert uttrykk etter H2O2-behandlingen ble ytterligere bekreftet av RT-qPCR (fig. 1 og 2) som indikerer at et kvalifisert SSH-bibliotek ble konstruert her. To PeG-biosynteseveigener, CsC4H1 og Cs4CL1, ble også funnet i dette biblioteket, og disse to genuttrykkene ble indusert av H2O2-behandlingen på en tidsavhengig måte (fig. 2). Det antyder at H2O2-behandlingen induserte PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese på genetisk nivå via regulering av PAL-banegener. PAL og andre nedstrøms PeGs biosyntesegener (Wang et al. 2012) ble imidlertid ikke identifisert i SSH-biblioteket; det kan være fordi biblioteket ikke er tilstrekkelig sekvensert. En sammenheng mellom CsC4H1 og Cs4CL1-induserte uttrykk og en økt PeGs-biosyntese etter H2O2-behandlingen bør avklares ved ytterligere analyse.

I tillegg til PAL-banegenene indusert av H2O2-behandlingen, ble to WRKY-familietranskripsjonsfaktorer (CsWRKY1, CsWRKY2) funnet i SSH-biblioteket (tabell 3 og tabell 2 Suppl.), og et CsWRKY1-indusert uttrykk ble bekreftet av RT-qPCR . Dens ekspresjon var responsiv til H2O2-behandlingen tidligere enn ekspresjonen av to PAL-banegener, Cs4CL1 og CsC4H1 (fig. 2). Fra tidligere studier er samekspresjon av noen WRKY-transkripsjonsfaktorer og PAL-banegener observert i ris (Gupta et al. 2012). Videre er PAL-genekspresjon oppregulert i en OsWRKY03 overekspresjonsmutant (Liu et al. 2005). De ovennevnte to WRKY-familietranskripsjonsfaktorene kan også være involvert i PeG-er(fenyletanoidglykosider)biosyntese iCistanchesalsa. Interessant nok ble dehydreringsrelaterte EST-er (CISTH067, CISTH064) funnet i SSH-biblioteket, noe som kan tyde på at H2O2-behandlingen var relatert til dehydreringsresponsive generekspresjon iCistanchesalsasom observert i andre planter (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). Ett gibberellin (GA) signalrelatert gen, gibberellin reseptor gid1b-lignende (CISTH092), ble identifisert i SSH-biblioteket, noe som antyder sammenhengen mellom GA-signalering og H2O2-behandling iCistanchesalsa, som også ble rapportert i bygg (Bahin et al. 2011). Imidlertid er flere studier nødvendig for å bekrefte om disse genene er relatert til PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese. Annet enn genene nevnt ovenfor, presenterer SSH-biblioteket konstruert her også gener med eller uten BLAST-treff. Det forbedrer vår forståelse av H2O2-effekten på C. salsa og gir først informasjonen om gener som er involvert i PeGs biosyntese.

Avslutningsvis vurderte vi effekten av H2O2 på PeGs(fenyletanoidglykosider)induksjon iCistanchesalsacellekultur. SSH-biblioteket ble konstruert etter H2O2-behandlingen, og ekspresjonen av utvalgte gener ble bekreftet med RT-qPCR. To PeG-biosynteseveirelaterte gener og andre H2O2-responsive gener ble identifisert. Disse funnene vil utvide vår forståelse av H2O2-induserte PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntese iCistanchesalsatil molekylært nivå, og gir informasjonen for genmanipulering avCistanchesalsacellekulturer for å forbedre PeGs(fenyletanoidglykosider)produksjon.

Fra: ' Identifikasjon av hydrogenperoksid-responsive EST-er involvert i fenyletanoidglykosidbiosyntese i Cistanche salsa-cellekultur' avJ. CHEN et al.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10.1007/s10535-015-0541-år

Referanser

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Krysstale mellom reaktive oksygenarter og hormonelle signalveier regulerer kornhvilen i bygg. - Plantecellemiljø. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie,r P.: Reaktive oksygenarter generert av et varmesjokkprotein (Hsp)-induserende produkt bidrar til Hsp70-produksjon og Hsp{{1} }mediert beskyttende immunitet i Artemia franciscana mot patogene vibrios. - Dev. Comp. Immunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: Uttrykk av NAD(P)H: kinonoksidoreduktase 1 i HeLa-celler – rollen til hydrogenperoksid og vekstfase. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: Standardisering av qPCR og RT-qPCR. - Genet. Eng. Bioteknologi. Nyheter 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:Cistanchedeserticola cellesuspensjonskulturer:fenyletanoidglykosiderbiosyntese og antioksidantaktivitet. - Prosessbiokjemi. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ Forbedring avfenyletanoidglykosiderbiosyntese iCistanchedeserticola-cellesuspensjonskulturer av kitosan-elicitor. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abscisinsyre medierer hydrogenperoksidproduksjon i peanøtt indusert av vannstress. - Biol. Anlegg. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: Det enkeltfunksjonelle blastresistensgenet Pi54 aktiverer en kompleks forsvarsmekanisme i ris. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: Molekylær karakterisering av fenylalanin-ammoniakk-lyase-genet fraCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Planteresponser på vannstress: rollen til reaktive oksygenarter. – Plant Signal Behavior 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Askorbatperoksidase, en renser av hydrogenperoksid i glyoksysomale membraner. - Arc h. Biochem. Biofys. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Studier av bestanddelene icistancheer herba. 4. Isolering og strukturer av 2 nye fenylpropanoidglykosider, cistanoside-C og cistanoside-D. - Chem. Pharm. Okse. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: Forbedring avfenyletanoidglykosiderbiosyntese i cellekulturer avCistanchedeserticola ved osmotisk stress. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: Forbedret akkumulering avfenyletanoidglykosiderved forløpermating til suspensjonskultur avCistanchesalsa. - Biokjemi. Eng. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, en ristranskripsjonsaktivator som fungerer i forsvarssignalvei oppstrøms for OsNPR1. - Cell Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Et revidert medium for rask vekst og bioassays med tobakksvevskulturer. - Fysiol. Anlegg. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Fenyletanoidglykosidermed anti-inflammatoriske aktiviteter fra stilkene avCistanchedeserticola dyrket i Tarim-ørkenen. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reaktive oksygenarter under tidlige interaksjoner mellom plante og mikroorganismer. - J. Integr. Plant Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Forbedret produksjon avfenyletanoid glykosiderved forløpermating til cellekulturen avCistanchedeserticola. - Prosessbiokjemi. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Forbedret produksjon avfenyletanoidglykosideravCistanchedeserticola-celler dyrket i en intern sløyfe-luftløftbioreaktor med sikterstigerør. - Enzym Microbiol. Tech. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Anatomisk og histokjemisk karakterisering av in vitro haustorium fra røttene til Castilleja tenuiflora. - Biol. Anlegg. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: Akklimatisering av hydrogenperoksid øker salttoleransen ved å aktivere forsvarsrelaterte proteiner i Panax ginseng CA Meyer. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 regulerer reaktiv oksygenarter-avhengig signalering under den første responsen på saltstress
i ris. - Plant Cell 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert Ginseng": en anmeldelse. - Amer. J. chin. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Avsetningsmønster av hydrogenperoksid i bladkappene til ris under saltstress. - Biol. Anlegg. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 regulerer tørkestressresponser og blått lys-indusert stomatalåpning av hemmer akkumulering av reaktive oksygenarter i Arabidopsis. - Plantefysiologi. 162: 1030-1041, 2013.