Intervensjonsforskning av fenyletylalkoholglykosider i cistanche på perimenopausalt syndrom Dyremodell Ⅱ

Eksperiment 1 Fremstilling av Cistanche fenyletanoid glykosid 1 Kilde til medisinske materialer

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, batchnummer: 20130501.

2 reagenser

95 % etanol (medisinsk kvalitet); AB-8 makroporøs adsorpsjonsharpiks, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, batchnummer: 20130618.

Echinacoside referansesubstans, levert av China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, batchnummer: 111670-200503.3

HVOR LANG TAR DET FØR CISTANCHE FUNGERER?

Forberedelsesmetode

Det ble henvist til litteraturmetoden [19] og ble utført under veiledning av professor Feng Suxiang fra Institutt for legemiddelanalyse ved Henan College of Traditional Chinese Medicine.Grind Cistanchetil et grovt pulver, tilsett 10 ganger mengden 70 % etanol til tilbakeløp, og ekstraher to ganger, 1,5 time hver gang, kombiner de to alkoholekstraktene, konsentrer under redusert trykk til det ikke er alkohollukt, og disperger med destillert vann (konsentrasjonen er 0,5 g medisinsk materiale/ml) som prøveløsning. Pass gjennom AB-8 harpiks (kolonne medikament: harpiks er 1:10), legg prøven i en strøm, og la den stå i 5 timer til den er fullstendig adsorbert. Vask først med 10 ganger kolonnevolumet med destillert vann, kast vannet og bruk deretter 10 ganger kolonnevolumet. Bruk 10 % etanol for å fjerne urenheter, og eluer til slutt med 7 ganger kolonnevolumet til 60 % etanol. Samle opp eluatet og fordamp til tørrhet for å oppnå et pulver. 4 Valg av målebølgelengde

Mål nøyaktig {{0}},5 ml av referanseløsningen, tilsett 1 ml 5 % natriumnitrittløsning, rist godt og la stå i 6 minutter; tilsett 1 ml 10 % aluminiumnitratløsning, rist godt og la stå i 6 minutter; tilsett 10 % natriumhydroksidløsning 10 mL, fortynn til 25 mL med vann, rist godt og la stå i 18 minutter for å tjene som referanseløsning. 0,5 ml avCistanche fenyletanolglykosidløsningen ble fremstilt på samme måte som testløsningen. Bruk den parallelle prøven uten å tilsette referansestoff og test løsningen som blindprøve, og klargjør blindprøven på samme måte. På UV-spektrofotometeret, utfør en full bølgelengdeskanning på de tre løsningene ovenfor i bølgelengdeområdet 200-800nm. Både referansestoffet og testløsningen har maksimale absorpsjonstopper ved 507 nm, så 507 nm bestemmes som absorpsjonsbølgelengden.

Etter fargeutvikling av Cistanche fenyletanolglykosidprøve + fargeutvikling av Echinacea mandarinreferansesubstans (overlappet sammenligning), se figur 1.

Figur 1 Etter fargeutvikling av Cistanche fenyletanoid glykosidprøve + etter fargeutvikling av Echinacea mandarin oransje referansesubstans Figur 5 Innholdsdeteksjonsmetode

Mål nøyaktig 1 mL av løsningen som skal testes, tilsett 1 mL 5 % natriumnitrittløsning, rist godt og la stå i 6 minutter; tilsett 1 mL 10 % aluminiumnitratløsning, rist godt og la stå i 6 minutter; tilsett 10 % natriumhydroksid Løsningen er 10 ml, fortynn til 25 ml med vann, rist godt og la stå i 18 minutter. Bruk den parallelle prøven uten å tilsette prøveløsning som en blindprøve, og klargjør en blindprøve på samme måte. Målt med UV-spektrofotometer ved 507nm. 6 Metodegjennomgang

6.1 Tilberedning av referanseløsning og prøveløsning

Klargjøring av referanseløsningen: Vei nøyaktig 3.06 mg av echinacoside-referansestandarden som har blitt tørket til konstant vekt, plasser den i en 25mL målekolbe, tilsett 70 % løsning for å løse opp og fortynne til merket, rist godt, og sett til side. Standardkonsentrasjonen er 0,1224 mg/ml.

Tilberedning av prøveløsning: Vei nøyaktig 5 mg avCistanche fenylethanoid glykosid ekstrakti en 10 ml målekolbe, løs den opp med 70 % etanol og fortynn til volum.

6.2 Utarbeidelse av standardkurve

Tegn nøyaktig {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5.0 , 6,0 mL referanseløsning, fremkall farge og fortynn til volum i henhold til metoden i 4.2, og mål absorbansverdien ved 507 nm. Ved å bruke konsentrasjon versus absorbans for å lage en regresjonskurve, er regresjonsligningen: Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994), og det lineære området er 4.{{ 23}},4 ug/ml.

6.3 Presisjonstest

Ta prøveløsningen og mål den seks ganger parallelt i henhold til punktet "Innholdsbestemmelsesmetode". Beregn det relative standardavviket til absorbansen. Absorbansene er henholdsvis {{0}}.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0.297, 0,297. Gjennomsnittlig absorbans=0.298, RSD=0.330 % (n =6).

6.4 Stabilitetstest

Ta en passende mengde av prøveløsningen, og mål absorbansverdiene ved {{0}}, 15, 30, 50 i henhold til elementet "Content Determination Method". , og 60 minutter etter at løsningen er fullstendig farget, og beregn det relative standardavviket. Absorbansene er henholdsvis 0,304, 0,303, 0,300 og 0,296. , 0,295, 0,295, gjennomsnittlig absorbans=0.299, RSD=1,362 % (n=5).

6.5 Repeterbarhetstest

Ta en prøve, klargjør 6 prøveløsninger i henhold til punktet "Preparering av prøveløsning", og mål absorbansverdien i henhold til elementet "Content Determination Method", og beregn innholdet. Innholdet er henholdsvis 65,2 %, 65,6 %, 66,7 %, 67,2 % og 66,5 %. , 65,8 %, gjennomsnittlig innhold 66,2 %, RSD=1.142 % (n=6).

6.6 Prøvegjenopprettingstest

Trekk nøyaktig opp 0,5 mL av prøveløsningen med kjent innhold, totalt 9 deler, og tilsett henholdsvis 200, 250 og 300 ul av standardløsningen. Mål og beregn utvinningsgraden og det relative standardavviket for Cistanche fenyletanolglykosid. Utvinningsgraden er henholdsvis 101,45 % og 99,26 %. , 98,94 %, 101,83 %, 99,05 %, 99,47 %, 98,72 %, 99,17 %, 100,64 %, gjennomsnittlig gjenopprettingsgrad er 99,84 %, RSD=1.164 % (n=9).

7 Eksempel på innholdsbestemmelse

Tabell 1 Bestemmelsesresultater av fenyletanoidglykosidinnhold i Cistanche