Mahanimbin forbedret aldringsrelatert hukommelsessvikt hos mus gjennom forbedret kolinerg overføring og undertrykt oksidativt stress, amyloidnivåer og nevroinflammasjon Del 2

2.6. Evaluering av malondialdehyd (MDA) og glutation (GSH) nivåer

Ved å bruke kommersielt tilgjengelige sett ble MDA- og GSH-nivåene analysert i hjerneprøver (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA).

Ettersom vitenskap og teknologi fortsetter å utvikle seg, prøver forskere å avdekke mysteriene til mystiske og viktige menneskelige psykologiske aktiviteter som hukommelse, tenkning og bevissthet. Blant dem anses studiet av hjerneprøver for å være et felt av stor bekymring fordi det kan hjelpe oss å forstå forholdet mellom hukommelse og hjernen dypere.

Klikk vet kosttilskudd for å øke hukommelsen

Først av alt, hva er en hjerneprøve? Enkelt sagt refererer det til en metode for å fange, bevare og analysere nevroner (hjerneceller) og deres forbindelser i hjernen. I lekmannstermer er det som et kart over hjernen som kan vise sammenhenger og funksjoner mellom ulike områder.

La oss deretter snakke om forholdet mellom hjerneprøver og hukommelse. Vitenskapelig forskning har vist at hukommelsen vår er nært knyttet til hjernens struktur. Når vi lærer ny kunnskap, dannes det nye nevronale forbindelser i hjernen, og disse forbindelsene blir sterkere over tid. Gjennom studiet av hjerneprøver jobber forskere hardt for å studere disse hjerneforbindelsene og prøve å forstå hvordan man kan forbedre læring og hukommelse gjennom dem.

I tillegg, gjennom analyse av hjerneprøver, kan forskere også finne noen interessante ting. For eksempel fant de ut at hippocampus i den menneskelige hjernen er et område som er nært knyttet til hukommelsen. Dette er fordi hippocampus har en viktig funksjon i den menneskelige hjernen for å konvertere informasjon fra korttidshukommelse til langtidshukommelse.

Derfor er verdien av hjerneprøveforskning ikke bare å hjelpe oss å bedre forstå forholdet mellom hjernen og hukommelsen, men også å hjelpe oss med å oppdage de grunnleggende årsakene til hukommelsesforstyrrelser eller kognitive sykdommer, og dermed fremme behandling og forebygging av relaterte sykdommer.

Til slutt bør vi se positivt på hjelpen av hjerneprøveforskning på hukommelse. Selv om det fortsatt er mange vitenskapelige problemer som skal løses, med kontinuerlig forbedring av vitenskap og teknologi, tror vi at det vil komme flere gjennombrudd i fremtiden. La oss se frem til fremtiden sammen og se frem til å gjøre hjernen vår smartere gjennom vitenskapelig forskning! Det kan sees at vi trenger å forbedre hukommelsen. Cistanche kan forbedre hukommelsen betydelig fordi Cistanche har antioksidant-, betennelsesdempende og antialdringseffekter, som kan bidra til å redusere oksidative og inflammatoriske reaksjoner i hjernen, og dermed beskytte nervesystemets helse. I tillegg kan Cistanche også fremme vekst og reparasjon av nerveceller, og dermed forbedre tilkoblingen og funksjonen til nevrale nettverk. Disse effektene kan bidra til å forbedre hukommelsen, læreevnen og tenkehastigheten, og kan også forhindre forekomsten av kognitiv dysfunksjon og nevrodegenerative sykdommer.

MDA- og GSH-nivåer ble målt i nanomol/milligram protein og mikromol/milligram protein, tilsvarende. Bradford-teknikken ble fulgt for å estimere proteininnholdet i hjernevevet.

2.7. Estimering av acetylkolin (ACh) og acetylkolinesterase (AChE) aktiviteter

ACh- og AChE-nivåene i hjernehomogenatet ble analysert ved bruk av kommersialiserte sett (BioAssay System, Hayward, CA, USA), som var henholdsvis EnzyChromTM AcetylcholineAssay-sett og QuantiChromTM Acetylcholinesterase Assay-sett.

Intensiteten til fargedannelsen ble detektert i en mikroplateleser ved henholdsvis 570 og 412 nm. Nivået av ACh oppnådd ble uttrykt som µM, mens AChE-aktivitet ble uttrykt som U/L.

2.8. Måling av -Amyloidnivåer

ELISA-settene fra Cloud Clone Corp (Katy, TX, USA) ble brukt til å evaluere nivåene av A 1-40 og A 1-42 i hjernehomogenater. En mikroplateleser satt til 450 nm ble brukt for å måle fargedannelsen.

Konsentrasjonen av A 1-40 og A 1-42 i prøven var omvendt relatert til fargeintensiteten. Resultatene ble representert i form av pg/mLof totalt protein.

2.9. Vurdering av -Secretase (BACE-1) aktivitet i musehjerne

BACE-1-aktivitet i homogenatet ble kvantifisert ved å bruke et kommersialisert sett (SensoLyte® -Secretase Assay Kit fra AnaSpec, Fremont, CA, USA). Deteksjonen av settet er basert på et peptid, som spaltes av BACE-1, og signalet detekteres ved hjelp av aspektrofotometer med eksitasjon/emisjon ved 490/520 nm.

2.10. Måling av total cyclooxygenase (COX) aktivitet

Aktiviteten til total COX i hjernehomogenatet ble estimert ved bruk av et ELISA-sett (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA). Fargedannelsen var direkte proporsjonal med den totale COX-aktiviteten. En mikroplate-leser ble brukt for å lese absorbansen ved 590 nm.

2.11. Genuttrykk av BACE-1 og COX-2

Ekspresjonen av BACE-1 og COX-2 i isolert hjerne-RNA ble analysert med RT-PCR. De tre hovedtrinnene som var involvert var: RNA-ekstraksjon, konvertering av RNA-tocDNA og sanntids polymerasekjedereaksjon (RT-PCR).

Alle trinnene involvert kit levert av Qiagen Valencia, CA, USA. For det første ble RNA ekstrahert fra hjerneprøven bevart i RNA. I dette trinnet ble omtrent 100 mg hjernevevsprøve homogenisert ved bruk av en TissueRuptor i 1 mL QIAzol-lysereagens og inkubert i 5 minutter ved romtemperatur.

Blandingen av hjernelysat og QIAzol lysereagens ble tilsatt kloroform og ristet kraftig i 15 s, etterfulgt av inkubering ved romtemperatur i 2–3 minutter.

Blandingen ble sentrifugert ved 12,000× g i 15 minutter ved 4 ◦C, og de tre fasene dannet en fargeløs fase (øvre fase), som besto av RNA og ble samlet med 1 volum 70 % etanol tilsatt til den.

Deretter ble 700 µL av prøven overført til en spinnkolonne og sentrifugert ved romtemperatur ved 8000 x g i 15 s; gjennomstrømningen ble forkastet. Etter tilsetning av 700 µL buffer RW1 (følger med i settet) og sentrifugering i 15 s ved 8000 × g, ble gjennomstrømningen forkastet. Trinnet ble fortsatt med tilsetning av 500 µL buffer RPE (følger med i settet) og sentrifugering i 15 s ved 8000 x g.

Dette trinnet ble gjentatt to ganger for å vaske eventuell organisk kontaminering i RNA. Til slutt ble RNA eluert ved å tilsette 50 µL RNAsefritt vann og sentrifugert i 1 min ved 8000 × g.

Konsentrasjonen av RNA ble målt ved bruk av ananodrop (nanodrop 2000c, Thermofisher Scientific, Waltham, MA, USA). Det ekstraherte RNAet ble deretter omdannet til cDNA, som ble brukt til å utføre RT-PCR.

Først ble 14 µL mal-RNA tilsatt med 6 µL revers-transkripsjonsmasterblandingen (1 µL Quantiscript revers transkriptase, 4 µL Quantiscript RT-buffer, 1 µL RT-primerblanding). Etter blanding ble den inkubert i 15 minutter ved 42 ◦C, etterfulgt av inkubering ved 95 ◦C i 3 minutter for å inaktivere Quantiscript revers transkriptase.

Produktet som ble dannet var cDNA, og til slutt ble RT-PCR utført. RT-PCR-betingelsene ble fastsatt som 95 ◦C i 5 minutter etterfulgt av 40 sykluser ved 95 ◦C i 10 minutter og 60 ◦C i 30 minutter.

Ekspresjonen av BACE-1- og COX-2-gener ble kvantifisert og normalisert mot de to husholdningsgenene (-actin og GAPDH). Primerne til nukleotidsekvenser var basert på muse-BACE-1 (foran50-GCATGATCATTGGGTGGTATC-30: omvendt 50-CCATCTTGAGATCTTGAC-CA-30) ​​og COX-2 (fremover 50-GTGTGCGACATACTCAAGCAGGA) cDNA-sekvenser. -30: revers 50-TGAAGTGGTAACCGCTCAGGTG-30), GAPDH (fremover 50-TGACAGGATGCAGAAGGAGA-30: revers 50-GCTGGAAGGTGGACAGTGAG-30), og -aktin (fremover 50-TGACAGGATGCAGAAGGAGA-30: bakover 50-GCTGGAAGGTGGACAGTGAG-30).

Fluorescensmålinger ble oppnådd, og Rotor-Gene 6000 programvare ble brukt til å evaluere dem (Qiagen, Hilden, Tyskland).

Resultatene ble presentert som ekspresjonsnivåene etter normalisering til husholdningsgenet, som var B-aktin og GAPDH ved bruk av den komparative CT-tilnærmingen (terskelsyklus). Ligning (1) ble brukt for å beregne genuttrykket til prøven.

CT-verdien til hver prøve ble oppnådd basert på standardkurven som ble generert for hvert gen (målgen og referansegen).

∆∆CT=∆CT-prøve − ∆CT-kontroll (1)

hvor

∆CT-prøve: CT-verdi av målgen − CT-verdi av referansegen

∆CT-kontroll: CT-verdi av målgen − CT-verdi av referansegen

2.12. Statistisk analyse

Eksperimentelle data ble presentert som gjennomsnitt ± SEM. Enveis ANOVA-prosedyre (Graph Pad versjon 9, GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA) og Tukey-Kramerpost hoc-test ble brukt for å kategorisere statistiske variasjoner. Signifikant ble definert som en sannsynlighetsverdi på 0.05.

3. Resultater

3.1. Mahanimbin-forbedret hukommelse hos eldre mus

Den romlige lærings- og minneevnen til mahanimbin i musemodellen ble undersøkt ved hjelp av MWM-testen. Escape latency (EL), escape distance (ED) og tid brukt i målkvadranten ble målt.

Dessuten ble lokomotorisk aktivitet også vurdert basert på gjennomsnittlig svømmehastighet for mus. Figur 2A viser at den eldre kontrollgruppen hadde markant lengre EL fra dag 1 i dag 3 (22.05 ± 1.70 s, henholdsvis 21,35 ± 1,85 s, 19,96 ± 2,34 s; p < 0,001;

Den avslørte at gamle mus etablerte et betydelig underskudd i læring og minnefunksjon i MWM-testen. Peroral behandling med forskjellige doser (1 og 2 mg/kg) mahanimbin viste imidlertid en reversering av de nevnte endringene i EL hos gamle mus.

EL-verdiene for 1 mg/kg mahanimbingruppen var 22.01 ± 1,60 s, 15,88 ± 1,54 s (p < 0.01), og8 .26 ± 0.93 s (p < 0.001) for dag 1, 2 og 3, tilsvarende sammenlignet med den gamle kontrollen, mens EL verdiene for 2 mg/kg mahanimbingruppen var 16.09 ± 0.33 s(p < 0.05), 17.14 ± 0.57 s (p < 0.05), 10.57 ± 0.86 s (p < 0.05). 0,01), henholdsvis parallelt med den eldre kontrollen. På dag 3 var EL for begge gruppene (1 og 2 mg/kg) mahanimbin ikke signifikant forskjellig fra den unge kontrollen.

Figur 2. Effekt av mahanimbin på (A) rømningslatens, tid det tar å finne den skjulte plattformen. (B) Rømningsavstand, tilbakelagt distanse fra startpunktet til man finner den skjulte plattformen; (C) gjennomsnittlig hastighet, svømmehastighet av dyr for å finne den skjulte plattformen; (D) sondetest, eldre muss prosentvise tid brukt i målkvadranten ved bruk av Morris vannlabyrint-test. Det var betydelige forbedringer i rømningslatens og rømningsavstand med mahanimbin hos gamle mus.

I tillegg økte behandlingen tiden brukt i målkvadranten til gamle mus. Alle data ble uttrykt som gjennomsnitt ± SEM (n {{0}}). Enveis ANOVA (dag 1: F(3,20)=11.74, p < 0.001, dag 2: F(3,20)=17.38,p < 0.001 og dag 3: F(3,2{{69 }})=14.88, p < 0.001 for escape latency dag 1: F(3,20) {{ 26}}.22, p < 0.001,dag 2: F(3,20)=28.62, p < 0,001, og dag 3: F(3,20) {{40 }}.15, p < 0.001 for rømningsavstand dag 1:F(3,20)=1.939, p > 0.05, dag 2: F(3,20)=3.467, p > 0,05, og dag 3: F(3,20)=2.497, p > 0.05 for gjennomsnittshastighet F(3,20)=7.185, p < 0.01 for sondetest etterfulgt av Tukey–Kramer multiple sammenligningstest.** p < 0,01 og *** p < 0,001 sammenlignet med ung kontroll, # p < 0,05, ## p < 0,01, og ### p < 0,001i sammenligning med eldre kontroll.

Figur 2B representerer effekten av mahanimbin på avstanden tilbakelagt fra startpunktet til man finner den skjulte plattformen. Den eldre kontrollgruppen reiste den lengste avstanden før de fant den skjulte plattformen på dag 1, 2 og 3 (4,79 ± 0,73 m, 4,34 ± {{10}},11 m og 4,38 ± 0,59 m; p < {{20}}.001; henholdsvis 0,24 m og 0,78 ± 0,14 m;

Eldre mus som ble matet med 1 mg/kg mahanimbin reduserte ED signifikant (2,17 ± 0.11 m (p < 0.01),2.10 ± { {13}},24 m (p < 0.001), henholdsvis 0,89 ± 0,18 (p < 0,001) for dag 1 til dag 3 som samsvarer med den gamle kontrollen.

En signifikant parallell nedgang i ED ble observert hos mus som ble administrert 2 mg/kg mahanimbin i dag 1, 2 og 3 (2,43 ± 0.28 (p < 0.01) , 2,78 ± 0,32(p < 0.001), 1,47 ± 0,30 (p < 0,001);

Når det gjelder gjennomsnittlig svømmehastighet under oppgaven, ble det ikke observert noen forskjeller mellom gruppene (Figur 2C). Dette indikerer at mahanimbin ikke endret noen lokomotorisk aktivitet relatert til motorisk funksjon hos gamle mus.

Etter 24 timer med selve oppgaven ble det utført en sondetestøkt (dag 30) for å evaluere hukommelsesbevaringen til dyr. Den eldre kontrollgruppen (figur 2D) brukte mindre tid i målkvadranten (10.10 ± 1,14 % (p < 0,001)) og viste en betydelig redusert tid brukt i målkvadranten sammenlignet med ung kontroll (19,53 ± 2,56 %), mens aldmus behandlet med 1 mg/kg (20,27 ± 4,84 %, p < 0,01) og 2 mg/kg (17,85 ± 1,56 %, p < 0,05) mahanibin ved oral gavage viste en signifikant lengre tid brukt i målkvadranten sammenlignet med den eldre kontrollen.

3.2. Effekt av Mahanimbine på MDA- og GSH-nivåer i den eldre musehjernen

MDA-nivåene i den eldre kontrollen (Figur 3A) var betydelig høyere (11,54 ± 0.88 µM; p < 0.001) relatert til den unge kontrollen (4.37 ± 0.09) µM). Økningen i MDA-nivået i hjernehomogenatet til gamle mus reflekterte en høyere LPO-aktivitet, noe som indikerte en økning i oksidativt stress i hjernevevet.

Motsatt reduserte administrering av mahanimbin (1 mg/kg, po) signifikant hjernens MDA-nivåer hos gamle mus (7,56 ± 0.35 µM; p < 0.001) sammenlignet til alderskontrollen. Ingen vesentlige endringer ble notert med 2 mg/kg mahanimbin (9,65 ± 0,51 µM).

Mengden glutation (GSH) i hjernehomogenatet antydet mahanimbins antioksidantpotensial. Statistisk analyse av GSH (figur 3B) viste en betydelig dempning mellom den eldre kontrollgruppen (0.0028 ± 0.0004 µmol/ mg; p < 0,001) når assosiert med den unge kontrollen (0,0447 ± 0,0029 µmol/mg).

Denne studien fant også at behandling med mahanimbin (1 og 2 mg/kg, po) reverserte GSH-nivået, som var betydelig høyere (0.0372 ± 0.{{8} }{{10}}38 µmol/mg, henholdsvis p < 0,001 og 0,0282 ± 0,0041 µmol/mg, p < 0,001) som samsvarer med den eldre kontrollen.

3.3. Mahanimbin forbedret den kolinerge aktiviteten i den eldre musehjernen

Figur 4A viser ACh-nivåene i musehjernen. ACh ble sammenlignet redusert (p < 0.001) i den eldre kontrollen (17,79 ± 1,54 µM) som matchet med den unge kontrollen (34,82 ± 0). 31 uM). Administrering av mahanimbin (1 og 2 mg/kg) økte imidlertid signifikant (35,61 ± 0,85 µM, (p < 0.001); 39,42 ± 0,88 µM (p < 0,001); henholdsvis) nivået av ACh i hjernen assosiert med den eldre kontrollen.

Figur 4B representerer effekten av mahanimbin mot ACHE-aktivitet i hjernen. Aktiviteten til AChE i den eldre kontrollgruppen (204,80 ±1,55 U/L) var betydelig forhøyet (p < 0,001) parallelt med den unge kontrollen (51,06 ± 1,36 U/L).

Ikke desto mindre ble AChElevel foreslått hemmet med behandling på 1 mg/kg (62.03 ± 4.64 U/L; p < 0.001) og 2 mg/kg (43.73 ± 4.76 U) /L; p < 0,001) mahanimbin når assosiert med den gamle kontrollen. Totalt sett ga administrering av en høy dose mahanimbin (2 mg/kg, po) bedre resultater for kolinerg aktivitet siden det økte ACh-nivået og undertrykte AChE-aktiviteten.

For more information:1950477648nn@gmail.com