Mangan(II)-komplekser stimulerer antitumorimmunitet via forverrende DNA-skade og aktiverer CGAS-STING-banen

Aktivering av den sykliske GMP-AMP-syntasestimulatoren av interferon-genet (cGAS-STING)-veien er en lovende immunterapeutisk strategi for kreftbehandling. Mangan(II)-komplekser MnPC og MnPVA (P=1,10-fenantrolin, C=klor og VA=valproinsyre) ble funnet å aktivere cGAS-STING-veien . Kompleksene skadet ikke bare DNA, men hemmet også histon-deacetylaser (HDAC) og polyadenosin-difosfat-ribose-polymerase (PARP) for å hindre reparasjon av DNA-skade, og fremmet dermed lekkasje av DNA-fragmenter inn i cytoplasma. DNA-fragmentene aktiverte cGAS-STING-veien, som initierte en medfødt immunrespons og toveiskommunikasjon mellom tumorceller og tilstøtende immunceller. Den aktiverte cGAS-STING økte ytterligere produksjonen av type I-interferoner og sekresjon av pro-inflammatoriske cytokiner (TNF-a og IL-6), og økte tumorinfiltrasjonen av dendrittiske celler og makrofager, samt stimulering av cytotoksiske T-celler å drepe kreftceller in vitro og in vivo. På grunn av den forbedrede DNA-skadelige evnen, viste MnPC og MnPVA mer potent immunkompetanse og antitumoraktivitet enn Mn2+-ioner, og demonstrerte dermed et stort potensial som kjemoimmunoterapeutiske midler for kreftbehandling.

Fordeler med cistanche tubulosa-Antitumor

Introduksjon

Residiv, metastaser og medikamentresistens av svulster utgjør store utfordringer for konvensjonelle antitumormedisiner.1 Immunterapi er en effektiv strategi for å utrydde tumorceller ved å utnytte eller styrke immunsystemet til pasienter.2,3 I løpet av det siste tiåret har flere kreftimmunterapier inkludert immunkontrollpunkthemmere, onkolytisk virus og kimære antigenreseptor T (CAR-T)-celler ble brukt i klinisk praksis for å forbedre adaptiv antitumorimmunitet.4–6 Imidlertid primær og adaptiv medikamentresistens, utilstrekkelig immunaktivering og tap av tumorspesifikk antigenmål undergraver ofte effekten av immunterapi.7,8 Adaptiv antitumorimmunitet er svært avhengig av robust medfødt immunitet.8 Foruten å forme og opprettholde adaptiv antitumorimmunitet, tar det medfødte immunsystemet som den rest barrieren for å forsvare vertsceller hovedansvaret for gjenkjennelse av tumorceller.9 Dessverre, under tumorprogresjon, unnslipper ondartede celler ofte immunovervåking og utvikler seg til slutt til "kalde" svulster.10,11 Aktivering av medfødt immunitet og tilrettelegging av samspillet med adaptiv antitumorimmunitet kan således forsterke immunforsvaret. respons på svulster og forbedre den terapeutiske effekten av immunterapi. De sykliske GMP-AMP-syntase-stimulatorene av interferon-gener (cGAS-STING) utgjør de vitale komponentene i medfødt immunitet, som har dukket opp som lovende mål for kreftimmunterapi.12,13 Aktiveringen av cGAS-STING-banen utløser en serie nedstrøms. signalhendelser, inkludert stimulering og rekruttering av TANK-bindende kinase 1 (TBK1) og interferon regulatorisk faktor 3 (IRF3), som induserer frigjøring og sekresjon av type I interferoner (IFN-Is) og proinflammatoriske faktorer IL-6 og TNF-a. 13,14 IFN-er fremmer deretter modningen og migreringen av dendritiske celler (DC), forbedrer den naturlige dreper (NK) cellemedierte cytotoksiske effekten, og kryss-prime tumorspesifikke T-celler, og orkestrerer dermed den medfødte og adaptive immuniteten for å regulere atferden av aggressive svulster.15,16 For tiden er den terapeutiske prosessen med småmolekylær oral agonist MSA-2,17 naturlige agonistiske sykliske dinukleotider (CDN),18 og noen nanosystemer19–23 testet i murine tumormodeller for å gripe inn i cGAS-STING-veien. Mangan (Mn) er et ernæringsmessig sporelement som spiller viktige roller i mange fysiologiske prosesser, inkludert antitumor-immunresponser.24,25 Nylig ble Mn2+-ioner oppdaget for å øke følsomheten til en dobbelttrådet DNA (dsDNA)-sensor cGAS og trigger produksjonen av en sekundær messenger cGAMP, og øker derved STING-aktiviteten gjennom å øke cGAMP-STING-bindingsaffiniteten.12,26 Dessuten hemmer Mn2+-ioner indirekte tumorprogresjon ved å fremme funksjonen til CD8+ T-celler via indusering av IFN-produksjon in vivo. 27 Ikke desto mindre kan direkte administrering av Mn2+-ioner in vivo ikke garantere effektiv konsentrasjon i tumormikromiljøet23, og overdreven Mn2+-ioner kan indusere systemtoksisitet, som irreversibel nevrotoksisitet og kardiovaskulær toksisitet.28 Mn-komplekser er mer stabil og inert overfor biomolekyler på grunn av den beskyttende effekten av ligander og kan derfor lindre toksisiteten til Mn2+-ioner. Imidlertid har ingen Mn-kompleks blitt brukt for å aktivere cGAS-STING-veien så langt. Epigenetiske modifikasjoner endrer reversibelt genuttrykk, noe som kan bidra til initiering og progresjon av kreft og undertrykkelse av antitumorimmunitet. Den reversible naturen til epigenetisk modifikasjon tillater ondartede celler å gå tilbake til en normal tilstand.29,30 Histon-deacetylaser (HDAC) medierer proteinacetylering, kromatindynamikk, proteinomsetning og DNA-skaderesponser. HDAC-hemmere er en klasse av potente epigenetiske modulatorer, med kromatin som mål, som virker på de fleste eller alle tumortyper.31 Hemmingen av HDAC bidrar i det minste delvis til histonacetylering, noe som resulterer i endret dannelse og reparasjon av DNA-dobbeltrådbrudd ( DSB),32,33 som kan bidra til å oppheve medikamentresistensen i kreftceller.34 Den avslappede kromatinstrukturen indusert av HDAC-hemmere kan fremme kjemoterapeutiske midler for lettere å få tilgang til DNA, og derved forverre DNA-skade,35 som er gunstig for aktivering av cGAS STING-veien. Noen HDAC-hemmere – som valproinsyre (VA) – påvirker klasse I og II HDAC (HDAC1/2), som sensibiliserer kreftceller for DNA-skadelige terapier.36

cistanche tubulosa-forbedre immunsystemet

Polyadenosin difosfat-ribose polymeraser (PARP) er essensielle proteiner involvert i kreftresistens mot kjemoterapi. Disse enzymene er avgjørende for reparasjon av DNA-enkeltstrengsbrudd (SSB),37 og deltar i flere cellulære prosesser, som apoptose, immunrespons, gentranskripsjon og inflammasjon.38–40 PARP-hemmere forhindrer reparasjon av DNA-lesjoner, som fører til anrikning av cytosolisk DNA, som gjenkjennes av cGAS for å aktivere cGAS-STING-veien.41,42 En serie antikreftmetallkomplekser inkludert platina, rutenium og gull har vist seg å hemme PARP-aktiviteten.43, 44 Her rapporterer vi de immunstimulerende og antitumoregenskapene til to MnII-komplekser MnPC og MnPVA. De kjemiske strukturene og krystallstrukturene til kompleksene er vist i fig. 1. I disse kompleksene er 1,10-fenantrolin (P) en ikke-toksisk DNA-interkalator, og VA er en hemmer av HADC.31 VA kan fremme acetyleringen av DNA-konjugerte histonproteiner, øker tilgjengeligheten av DNA i avslappet kromatin og reaktiverer sovende tumorsuppressorgener.33,35 Vi antar at inkorporering av 1,10-fenantrolin og/eller VA i MnPC eller MnPVA kan gi kompleksene med antiproliferativ aktivitet ved å indusere DNA-skade og stimulere antitumorimmunitet. En serie eksperimenter viste at MnPC og MnPVA effektivt skadet DNA, aktiverte cGAS-STING-veien i tumor- og immunceller og økte utskillelsen av IFN-er og pro-inflammatoriske cytokiner. Spesielt hemmet MnPVA aktiviteten til HDAC1/2 og PARP1, og aktiverte dermed cGAS-STING-banen mer effektivt enn MnPC. Alle resultatene ble bekreftet både in vitro og in vivo. Så vidt vi vet, er MnPC og MnPVA de rest multifunksjonelle MnII-kompleksene som undertrykker tumorceller hovedsakelig gjennom å aktivere antitumorimmunitet via den DNA-skadeinitierte cGAS-STING-veien.

Fig. 1 Kjemiske og krystallstrukturer av MnPC og MnPVA. Hydrogenatomer er utelatt for klarhetens skyld.

Resultater og diskusjon

Kjemiske og fysiske egenskaper

MnPC og MnPVA ble fremstilt i henhold til litteraturmetoder45,46 og fullstendig karakterisert ved elementæranalyse, IR-spektroskopi (Fig. S1†), elektronparamagnetisk resonans (Fig. S2,† EPR) og røntgenkrystallografi. Krystallstrukturparametrene og utvalgte bindingslengder og -vinkler er presentert i tabellene S1 og S2 (se ESI†). Mn-atomet i disse kompleksene viste en forvrengt oktaedrisk geometri med et koordinatnummer på 6. MnPC krystalliserte i det monokliniske krystallsystemet med romgruppen P21/c; MnII dannet fire Mn–N-bindinger med to bidentate 1,{{10}}fenantrolinligander og to Mn–Cl-bindinger. Mn–N-bindingslengdene varierer mellom 2,281 og 2,369 Å, det vil si at bindingslengden til Mn–N1, Mn–N2, Mn–N3 og Mn–N4 er 2,369(4), 2,281(3), 2,341(3) ), og henholdsvis 2,287(3) Å, og vinkelen til N1–Mn–N2, N1–Mn–N4 og N2–Mn–N3 er 71,15(11) grader , 97.86(11) henholdsvis grad og 89.00(11) grad. Denne strukturen er noe forskjellig fra den som er rapportert av Abbas et al., 45 der MnPC krystalliserte i det trikliniske krystallsystemet med romgruppen P1. Følgelig er de tilsvarende bindingslengdene og vinklene forskjellige i disse tilfellene. I likhet med en rapportert struktur krystalliserte 46 MnPVA i det monokliniske krystallsystemet med romgruppen C2/c, med et N2O4-donorsett. MnII koordinert med to N-atomer fra 1,10-fenantrolin og fire O-atomer fra henholdsvis ett vannmolekyl og to VA-ligander. En av VA reagerte som en monodentat ligand, mens den andre var en bidentat ligand. Bindingslengden til Mn–N1 og Mn–N2 er henholdsvis 2,265(19) og 2,298(2) Å, og den til Mn–O1, Mn–O2, Mn–O3 og Mn–O5 er 2,2476(19), henholdsvis 2,260 (2), 2,0639 (18) og 2,1471 (17) Å. Som en sterk N, nchelerende ligand, stabiliserer 1,10-fenantrolin Mn-komplekser mot demetallering. Stabiliteten til MnPC og MnPVA i fosfatbufret saltvann (PBS, med 0,5 % v/v DMSO, pH 7,4 og 37 grader) og cellekulturmedier (inneholdende 10 % FBS) ble undersøkt ved UV-synlig spektroskopi (fig. S3†) ). De tidsavhengige UV-spektrene viser at disse kompleksene er stabile innen 72 timer.

Tabell 1 IC50-verdier (mM) av MnPC og MnPVA mot forskjellige cellelinjer ved 72 timer, med MnCl2, VA, CDDP og P som referanser. Data vises som gjennomsnitt ± standardavvik (SD, n=3)

Antiproliferativ aktivitet

De antiproliferative aktivitetene til forbindelsene mot human trippelnegativ brystkreft (MDA-MB-231), human bukspyttkjertelkreft (PANC-1), human hepatocellulær kreft (HepG2), musebrystkreftcelle (4T1) linjer, og den humane normale renale tubulære epitelcellelinjen (HK-2) ble evaluert ved MTT-analysen. MnCl2, VA, cisplatin (CDDP) og 1,10-fenantrolin (P) ble brukt som referanseforbindelser. De halvmaksimale hemmende konsentrasjonene (IC50) etter 72 timer er oppført i tabell 1. MnPC og MnPVA viste kraftig antiproliferativ aktivitet mot alle de testede kreftcellelinjene, spesielt mot MDA-MB-231 og PANC-1 celler som er ufølsomme for CDDP, og viser henholdsvis omtrent 8- og 11- ganger høyere aktivitet. Den antiproliferative aktiviteten til MnPC og MnPVA mot HepG2 og 4T1 er lik den til CDDP. Interessant nok viste både MnPC og MnPVA en redusert toksisitet mot HK-2-celler, med IC50-verdier som var litt høyere enn for CDDP. Derimot var MnCl2, VA og P nesten ikke-toksiske i disse cellelinjene, noe som er i samsvar med litteraturen.13,36 Ifølge disse resultatene var følgende undersøkelser fokusert på virkningen av MnPC og MnPVA på MDA-MB -231 celler.

Cellulært opptak og DNA-skade

Akkumuleringen av kompleksene i MDA-MB-231-celler i form av Mn ble målt ved ICP-MS co-inkubasjon i 24 timer. Som vist i fig. 2A, følger akkumuleringen en rekkefølge på MnPVA > MnPC > MnCl2, i tråd med deres anti-proliferative aktivitet. Vi bestemte videre DNA-bundet Mn i MDA-MB{10}}-celler ved hjelp av ICP-MS. Som vist i fig. 2B, viste MnPC og MnPVA større DNA-bindingsevne enn MnCl2, muligens på grunn av deres høyere cellulære opptak. Fosforylert histon g-H2AX er en sensitiv markør for DNA-dobbeltstrengsbrudd (DSB).47 For å evaluere DNA-skaden indusert av Mn-kompleksene, oppdaget vi ekspresjonen av gH2AX ved immunblotting. Som vist i fig. 2C, økte MnPC og MnPVA ekspresjonen av g-H2AX i MDA-MB-231-celler etter 24 timer. Det er kjent at metallkomplekser av P er effektive DNA-interkalatorer; 48,49, men P alene forårsaket knapt DNA-skade (fig. S4†). Ekspresjonen av g-H2AX i tumorvev fra 4T1-tumorbærende mus ble også undersøkt ved immunforsvar og behandling med hver forbindelse (1,3 mg Mn per kg) en gang annenhver dag i 16 dager. MnPC og MnPVA skadet effektivt DNA i tumorvevet, mens MnCl2 og PBS knapt påvirket g-H2AX (fig. S5†). DsDNA frigjort fra MDA-MB- 231-celler til kulturmediumsupernatanten ble bestemt ved å bruke et ELISA-sett aer-behandling med Mn-kompleksene. Som presentert i fig. 2D var innholdet av dsDNA i det MnPC- eller MnPVA-behandlede cellekulturmediet tydeligvis høyere enn i andre grupper. Resultatene tyder på at MnPC og MnPVA kan heve ustabiliteten til genomisk DNA og nivået av cytosolisk DNA. Naturen til DNA-skaden ble først studert ved å måle fluorescensendringene til et kalvethymus DNA-etidiumbromid (EB)-system. EB er en interkalator som gir en betydelig økning i fluorescens når den er bundet til DNA, mens fluorescensen avtar når den fortrenges.50 MnPC og MnPVA reduserte fluorescensintensiteten moderat (fig. S6†), noe som tyder på at disse kompleksene kunne interkalere inn i DNA-sporene for å erstatte den bundne EB på grunn av den plane strukturen til P. Interaksjonen er imidlertid ikke en robust kovalent binding. Noen Mn-komplekser kunne generere intracellulære reaktive oksygenarter (ROS) og indusere oksidativt stress,51 og vi oppdaget derfor ROS i MDA-MB-231-celler ved konfokal avbildning ved bruk av 2′,7′-diklor-fluoresceindiacetat ( DCFH-DA) som en ROS fluorescensprobe etter eksponering for Mn-komplekset i 18 timer. Som vist i fig. 3, intensiverte MnPC og MnPVA den intracellulære ROS-fluorescensen sammenlignet med kontrollen eller MnCl2, spesielt MnPVA, noe som tyder på at de kan forårsake oksidativ skade på cellulært DNA. Skaden på DNA bidrar ikke bare til å drepe kreftceller, men stimulerer også antitumorimmunitet ved å aktivere cGAS-STING-veien.14,52

Fig. 2 Cellulært opptak (A) og DNA-bundet Mn (B) bestemt ved ICPMS, ekspresjon av DNA-skademarkøren g-H2AX bestemt ved western blotting (C), og ekstracellulært dsDNA bestemt ved bruk av ELISA-settet (D) etter MDA-MB-231-celler ble behandlet med henholdsvis MnCl2, MnPC, MnPVA og VA (6 mM) i 24 timer.

Cellesyklusstans og apoptose

Cellulær DNA-skaderespons (DDR) er assosiert med signaleringen som driver sjekkpunktfangsten av cellesyklusen.53 Virkningen av Mn-komplekser på cellesyklusen til MDA-MB-231-celler ble analysert ved hjelp av owcytometri. Som vist i fig. 4A, økte MnPC og MnPVA G1-fasestoppet mildt mens de forårsaket en fullstendig kollaps av G2-fasen sammenlignet med kontrollen og MnCl2. Resultatene indikerer at DNA-skaden indusert av MnPC og MnPVA alvorlig blokkerte det senere stadiet av DNA-syntese. Derfor skiller den antiproliferative mekanismen til MnPC og MnPVA seg fra den til MnCl2. Dødsmodusen til MDA-MB-231-celler ble undersøkt ved hjelp av lavcytometri etter behandling med kompleksene i 72 timer og farging med annexin V-FITC og propidiumjodid (PI). Som vist i fig. 4B og S7,† sammenlignet med kontrollen og MnCl2, nådde apoptosefrekvensen (tidlig + sen) indusert av MnPC og MnPVA henholdsvis 84,0% og 87,4%. Resultatene indikerer at MnPC og MnPVA har sterk pro-apoptotisk evne, som er nært korrelert med deres antitumoraktivitet.

cistanche supplement fordeler-øke immunitet

Mitokondriell membranpotensial

Mitokondrier er sentrale deltakere i medfødt immunitet, og mitokondrielt DNA (mtDNA) er anerkjent som en agonist av det medfødte immunsystemet.54 Det ble rapportert at både cytosolisk DNA og mtDNA bandt seg til mønstergjenkjenningsreseptorer og utløste cGAS-STING-signalveien. 55 For å utforske mulig mtDNA-frigjøring fra mitokondrier i nærvær av MnPC og MnPVA, sjekket vi integriteten til mitokondriemembranen ved konfokal avbildning ved bruk av JC-1 som en fluorescerende sonde, som danner aggregater og viser rød fluorescens i normale mitokondrier med høy DJm, mens den eksisterer som en monomer og avgir grønn fluorescens hos skadede med lav DJm. 56 Som vist i fig. 5, reduserte MnPC og MnPVA kraftig intensiteten av rød fluorescens i MDA-MB-231-celler farget med JC-1. Det "grønne (G) til røde (R)" fluorescensforholdet for MnPC- og MnPVA-behandlede celler er henholdsvis 4,91 og 5,66, betydelig høyere enn det for kontroll- (2,35) og MnCl2--behandlede celler ( 1,75). Observasjonene antyder at integriteten til mitokondriemembranen ble skadet av MnPC og MnPVA, noe som kan lette lekkasje av mtDNA inn i cytosolen for å utløse cCAS-STING-veien.

Fig. 3 Fluorescenskonfokal avbildning av ROS generert av Mn-kompleksene (12 mM) i MDA-MB-231-celler etter inkubering i 18 timer og farging med DCFH-DA (10 mM) i 30 minutter.

Fig. 4 Cellesyklusstans av MDA-MB-231-celler etter inkubering med forskjellige forbindelser (6 mM) i 24 timer (A), og apoptotisk analyse av MDA-MB-231-celler ved flowcytometri etter inkubering med forskjellige forbindelser (6 mM) i 72 timer (B).

Aktivitet og uttrykk for HDAC

HDAC-hemmere sensibiliserer kreftceller for DNA-skadelige terapier ved å endre kromatinstrukturen og hindre DNA-reparasjon.33,35 Som en klasse I HDAC-hemmer retter VA seg selektivt mot HDAC1- og HDAC2-enzymene, og modulerer DNA-skadesignalering for å ødelegge genomisk stabilitet og hemme tumor. spredning in vivo. 31 Inkorporering av VA i MnPVA kan forsterke inhiberingen av HDAC og induksjon av DDR mer effektivt. Derfor bestemte vi effekten av Mn-komplekser på den totale HDAC-aktiviteten i MDA-MB-231-celler etter samkubasjon i 48 timer. Som vist i fig. 6A inhiberte MnPVA signifikant den totale HDAC-aktiviteten, med inhiberende aktivitet som var omtrent 1,5 ganger høyere enn den for VA. Vi studerte videre ekspresjonen av HDAC1/2-proteiner i MDA-MB-231-celler ved immunblotting. Som vist i fig. 6B og C, nedregulerte MnPVA åpenbart uttrykket av HDAC1 og HDAC2 sammenlignet med kontrollen. Selv om MnPC hemmet HDAC-aktiviteten, påvirket det knapt ekspresjonen av HDAC1/2-proteiner. Uventet viste ikke VA som en kjent HDAC-hemmer åpenbar hemming på HADC1/2 ved denne konsentrasjonen (6 mM), og fremhever dermed den essensielle rollen til Mn-koordinering i å intensivere hemmingen av VA på HADC. Resultatene indikerer at MnPVA er en effektiv hemmer av HDAC1/2, som vil fremme DDR og utløse cGAS-STING-veien, og dermed stimulere antitumorimmunitet. Vi oppdaget videre uttrykket av HDAC i tumorvev til 4T1-tumorbærende mus ved immunouorescens etter behandling med hver forbindelse. Som vist i fig. 6D, reduserte MnPVA tydeligvis uttrykket av HDAC1, mens MnPC og MnCl2 bare i liten grad eller knapt påvirket HDAC1.

Fordeler med cistanche tubulosa-Antitumor

Ekspresjon av PARP1 og apoptotiske proteiner

PARP-er spiller en nøkkelrolle i reparasjonen av DNA-lesjoner. PARP-hemmere forhindrer DNA-reparasjon, som fører til eksport av DNA-fragmenter til cytosolen, og utløser en cGAS-mediert medfødt immunrespons.42 Som et sensorprotein for DNA-trådbrudd, lokaliserer PARP1 seg til stedene for DNA-skade og dominerer reparasjon av DNA, og blir dermed et viktig mål for kreftbehandling. Aktiveringen av kaspaser, spesielt kaspase-3, kan initiere apoptose gjennom spaltning av PARP1, som anses som et kjennetegn på apoptose.38,57 Derfor er uttrykkene for caspase-3, PARP1 og spaltet PARP1 i MDA-MB-231-celler ble undersøkt med western blotting. Som vist i fig. 7, oppregulerte MnPC og MnPVA bemerkelsesverdig ekspresjonen av caspase-3 og spaltet PARP1 sammenlignet med kontrollen og andre forbindelser. Spaltningen av PARP1 med aktivert caspase-3 vil skille det DNA-bindende domenet fra det katalytiske domenet, og dermed forhindre PARP-aktivering og reparasjon av DNA-lesjoner. Videre kan hemmingen av PARP1 øke nivået av tumorinfiltrerende T-lymfocytter og regulere medfødte immunresponser. DNA-reparasjonsdysfunksjon har potensial til å initiere globale DNA-avvik, som kan utløse apoptose. Proapoptotiske Bax- og antiapoptotiske Bcl-xL-proteiner spiller sentrale roller i apoptose.38 Derfor oppdaget vi deres uttrykk i MDAMB-231-celler etter behandling med forskjellige forbindelser i 48 timer ved bruk av western blotting. MnPC og MnPVA oppregulerte uttrykket av Bax markant og nedregulerte uttrykket av Bcl-xL. Resultatene indikerer at MnPC og MnPVA kan fremme apoptose via regulering av apoptotiske proteiner som en PARP1-relatert kaskadeeffekt. Selv om VA kan indusere tumorcelleapoptose ved å hemme uttrykket av HDAC1/2 ved høye doser,58 påvirket det ikke disse apoptotiske proteinene signifikant under denne tilstanden, noe som indikerer overlegenheten til Mn-komplekser.

Fig. 5 Fluorescensbilder av MDA-MB-231-celler etter inkubering med henholdsvis MnCl2, MnPC og MnPVA (6 mM) i 36 timer og farging med JC-1-fluorescerende probe.

Aktivering av cGAS-STING-veien

Det er kjent at PARP1-hemmeren kan fremkalle en cGAS-STING-signalkaskaderespons i kreftceller.40,59 cGAS er en medfødt immunsensor som gjenkjenner et mangfoldig utvalg av cytosolisk dsDNA, inkludert DNA med viral, apoptotisk, eksosomal, mitokondriell, mikrokjerner , og retroelement-opprinnelse.60,61 Anrikningen av cytosolisk DNA indusert av MnPC og MnPVA skapte en gunstig omstendighet for aktivering av cGAS-STING-veien, som deretter ville initiere nedstrøms signalhendelser via rekruttering og aktivering av TBK1 og IRF3.12,59 Vi oppdaget derfor ekspresjonen av disse proteinene i MDA-MB-231-celler ved å immunoblotting etter eksponering for hver forbindelse i 24 timer. Som vist i fig. 8A, økte MnPC og MnPVA signifikant ekspresjonen av cGAS, p-STING, p-TBK1 og p-IRF3. Videre undersøkte vi effekten av kompleksene på cGAS-STING-veien i humane monocytiske leukemi-THP-1-celler ved immunblotting. Som vist i fig. 8B, induserte MnPC og MnPVA en betydelig oppregulering av cGAS, p-STING, p-TBK1 og p-IRF3, spesielt MnPVA, noe som manifesterte at de aktiverte cGAS-STING-veien, noe som ville initiere medfødt immunitet mot blokkering tumor unnslipper og stimulerer adaptiv immunitet, uten å skade THP-1-cellene (tabell S3†). Derimot økte MnCl2 bare nivået av p-STING eller p-TBK1 og påvirket knapt ekspresjonen av cGAS og p-IRF3 sammenlignet med kontrollen, noe som kan skyldes dens manglende evne til å indusere DNA-skade og PARP1-spaltning ved lave konsentrasjoner , og er derfor ikke i stand til å utløse nedstrøms signaleringshendelser som aktivering av p-IRF3. Basert på disse resultatene konkluderer vi med at MnPC og MnPVA induserte nukleær og mitokondriell DNA-skade i tumorceller og frigjorde DNA-fragmentene til cytoplasmaet, som deretter aktiverte cGAS-STING-veien. Den aktiverte cGAS-STING kan direkte aktivere senescens og apoptose signalveier i kreftceller,62 som fører til en toveis antitumor immunrespons. Likevel ble uttrykket av STING, TBK1 og IRF-3 i MDA-MB-231- og THP-1-celler knapt påvirket (fig. S8†).

Fig. 6 (A) HDAC-aktivitet, (B) ekspresjon av HDAC1/2-proteiner, og (C) det tilsvarende proteininnholdet i forhold til GAPDH i MDA-MB-231-celler etter inkubering med hver forbindelse (6 mM) for 48 timer bestemt ved bruk av henholdsvis ELISA-settet og western blotting; (D) immunfluorescensbilder av HDAC1-ekspresjon i 4T1-svulstvevet til en mus etter behandling med hver forbindelse (1,3 mg Mn per kg) en gang hver 2. dag i 16 dager. *p < 0.05, **p < 0.01 og ***p < 0.001.

Interferoner og proinflammatoriske cytokiner

Aktiveringen av TBK1 og IRF3 kan indusere ekspresjon og sekresjon av IFN-er og proinflammatoriske cytokiner, slik som IFN-b, TFN-a og IL-6.59,63 Dermed ble det ekstracellulære IFN-I frigitt av THP{ {8}} celler og IFN-b, TNF-a og IL-6 frigitt av MDAMB-231-celler ble målt ved ELISA-analyse etter inkubasjon med forskjellige forbindelser i 24 timer. Som vist i fig. 9, økte MnPC og MnPVA dramatisk utskillelsen av IFN-I i forhold til kontrollen, MnCl2 og VA. Samtidig utløste de også sekresjon av IFN-b og TNF-a. Nivået av IL-6 ble imidlertid bare moderat økt. IFN-I (IFN-a og IFN-b) spiller flere immunstimulerende roller i antitumorimmunitet, slik som å fremme modning og antigenpresentasjon av DCs og krysspriming av tumorspesifikke T-celler for å drepe tumorceller ved å bygge bro med medfødt og adaptiv immunitet.13 TNF -a er involvert i den sykliske dinukleotid (CDN)-mediert akutt kreftnekrose og justering av immuninlatet.59 Resultatene indikerer at MnPC og MnPVA kan stimulere antitumorimmunresponser og antyder at de kan overvinne medikamentresistensen til svulster ved å en kjemoimmunoterapeutisk mekanisme.

Modning av benmargsavledede celler (BMDCs)

BMDCer representerer heterogene celler av myeloid opprinnelse bestående av myeloide stamceller og umodne makrofager, granulocytter og dendrittiske celler (DCs); de er involvert i immunresponsen ved å undertrykke T-celleaktivering og tumorassosiert makrofag (TAM) aktivering.64 Som de viktigste antigenpresenterende cellene (APCs), fungerer DC-er som en bro for kommunikasjon mellom det medfødte og adaptive immunsystemet. 22

Fig. 7 Uttrykk av DNA-reparasjons- og apoptose-relaterte proteiner i MDA-MB-231-celler etter eksponering for forskjellige forbindelser (6 mM) i 48 timer, og det tilsvarende proteininnholdet i forhold til a-tubulin. *p < 0.{{10}}5, **p < 0,01 og ***p < 0,001.

Fig. 8 Uttrykk av proteiner involvert i cGAS-STING-veien bestemt ved western blotting etter at MDA-MB-231 (A) og THP-1 (B)-celler ble behandlet med 6 og 3 mM forskjellige forbindelser i henholdsvis 24 timer og det tilsvarende proteininnholdet i forhold til GAPDH. *p < 0.{{10}}5, **p < 0,01 og ***p < 0,001.

Fig. 9 Utskillelse av (A) IFN-I i THP-1-celler, (B) IFN-b, (C) IL-6 og (D) TNF-a i MDA-MB{{ 7}} celler etter behandling med forskjellige forbindelser (6 mM) i 24 timer. Data vises som gjennomsnitt ± SD (n {{10}}); *p < 0.05, **p < 0,01 og ***p < 0,001.

Modne og aktiverte DC-er kan presentere et spesifikt antigen til T-lymfocytter og initiere en adaptiv respons mot svulster.65 For å teste om den MnPC- og MnPVA-aktiverte cGAS-STING-veien kunne indusere modning av BMDC-er, testet vi overflatemarkørene på BMDC-er ved å Gjennomfør cytometri luftbehandling med supernatanten av MDA-MB-231-celler inkubert med forskjellige forbindelser i 24 timer. Som vist i fig. 10A, sammenlignet med kontrollen, økte MnPC og MnPVA særlig samekspresjonen av modningsmarkørene CD86 og CD80, og nådde henholdsvis 36,62 % og 43,15 %. Imidlertid overgikk MnCl2 bare moderat den for kontrollen. I tillegg uttrykkes hovedhistokompatibilitetskompleks klasse II (MHC-II) konstitutivt av APC-er, som presenterer antigene peptider til T-celler. Som et resultat blir adaptive immunresponser initiert, vedlikeholdt og regulert.8 Som vist i fig. 10B og C, økte MnPC og MnPVA ekspresjonen av MHC-II til omtrent 1.5- ganger ekspresjonen til kontrollen . Dataene antyder at disse kompleksene i stor grad induserte modningen av BMDC, noe som kan utløse immunresponsene til cytotoksiske T-lymfocytter.

Fig. 10 (A) Samuttrykk av CD86 og CD80, (B) kvantitative analyser av CD11c+CD86+CD80+ i BMDCer, (C) uttrykk for MHC-II på BMDCs overflate, og (D) gjennomsnittlig intensitet av MHC-II bestemt ved flowcytometri etter behandling med supernatanten av MDA-MB-231-celler inkubert med forskjellige forbindelser (6 mM) i 24 timer.

Samkultur av kreftceller med PBMC-er

For ytterligere å vurdere de immunmodulerende effektene av kompleksene, ble levedyktigheten til MDA-MB-231-celler i nærvær av medikamentaktiverte humane perifere blodmononukleære celler (PBMCs) evaluert ved hjelp av MTT-analysen i henhold til en litteraturmetode.66 Kreftceller eller kreftceller med PBMC-er ble satt som kontroller. Som vist i fig. 11, i fravær av PBMCer, undertrykte MnPC og MnPVA cellenes levedyktighet til henholdsvis 64,98 % og 62,02 %. Samkulturen av cellene med PBMC uten et Mn-kompleks viste bare basal cytotoksisitet med en gjennomsnittlig cellelevedyktighet på 81,49 %. I nærvær av PBMC-er undertrykte imidlertid MnPC og MnPVA cellelevedyktigheten til henholdsvis 38,19 % og 36,98 %. Ved denne konsentrasjonen (6 mM) er de fleste PBMC-er fortsatt i live (fig. S9†). Resultatene viser at MnPC og MnPVA kan aktivere immunresponsen til PBMC-er for å utøve cytotoksiske effekter på MDA-MB-231-celler, og dermed vise en betydelig synergistisk effekt mot kreftcellene.

Akutt toksisitet og in vivo antikreftaktivitet

Den akutte toksisiteten til MnII-kompleksene ble evaluert på Balb/c hunnmus. Median letal dose (LD50) og kroppsvektsendringer etter intravenøs injeksjon av hvert kompleks ble bestemt. LD50 for MnPC og MnPVA var henholdsvis 16.08 ± 2.16 og 25.16 ± 3.19 mg kg−1 (fig. S10†), som er mye høyere enn det av CDDP (4.{{60}}6 ± 1.02 mg kg−1).67 Ingen signifikante endringer i kroppsvekt ble observert hos de MnPC- og MnPVA-behandlede musene. Resultatene indikerer at MnPC og MnPVA er lite toksiske for pattedyr. Interessant nok svekket binding av VA til Mn-komplekset den generelle toksisiteten eller økte biokompatibiliteten. Videre ble musemodeller som bærer 4T1 brystkreft etablert for å vurdere antikreftaktiviteten til MnPC og MnPVA in vivo. Som vist i fig. 12, etter behandling av musene med henholdsvis PBS, MnCl2, MnPC og MnPVA (1,3 mg Mn per kg) i 16 dager, viste MnPC og MnPVA mer effektiv hemming på tumorveksten enn MnCl2. På dag 16 ble gjennomsnittlig tumorvolum (A, B) redusert til henholdsvis 554,78 ± 43,76 og 348,01 ± 39,61 mm3 for de MnPC- og MnPVA-behandlede musene, mens det for PBS- og MnCl 2- behandlede mus var henholdsvis 1182,01 ± 95,87 og 784 ± 64,93 mm3. Gjennomsnittlig tumorvekt (C) var 1,41 ± 0,13, 0,95 ± 0,19, 0,82 ± 0,19 og 0,59 ± 0,1 g for henholdsvis PBS-, MnCl2-, MnPC- og MnPVA-behandlede mus. Tydeligvis var den tumorhemmende effekten av MnPVA overlegen den til MnPC og MnCl2, noe som kan skyldes den effektive inhiberingen av uttrykket av HDACer av MnPVA. I tillegg ble ingen tilsynelatende patologisk abnormitet eller lesjon på kroppsvekt (D), overlevelse og grov organanatomi observert (fig. S11†). Disse resultatene tyder på at MnII-kompleksene er lovende medikamentkandidater for kreftbehandling.

Fig. 11 Gjennomsnittlig levedyktighet (%) av MDA-MB-231-celler etter saminkubasjon med forbindelsesaktiverte PBMC-er (6 mM) i 48 timer. Data er vist som gjennomsnitt ± SD (n=3); **p < 0.01 og ***p < 0,001.

In vivo antikreft immunrespons

Den in vivo immunstimulerende evnen til MnII-kompleksene ble testet på Balb/c-mus som hadde 4T1-svulster. Statusen til immunceller i svulsten, milten og tumor-drenerende lymfeknuter (LNs) ble analysert ved hjelp av owcytometri.21 CD8+ T-celler er avgjørende for å begrense kreftinitiering og ondartet progresjon i immunsystemet, og induksjon av cytotoksiske T-lymfocytter (CTL-er) krever aktivering av umodne DC-er til modne,8,9 som ble betegnet som CD11c+ CD80+ CD86+-celler.68 Som vist i fig. 13A og B , i de MnPVA-behandlede musene, var prosentandelen av modne DC-er angitt ved ekspresjonen av co-stimulerende reseptorer CD80+ og CD86+ (ref. 69) høyere (45,59 %) i LN-er enn det behandlet med henholdsvis PBS, MnCl2 og MnPC. Makrofager er integrerte deler av immunsystemet, som modulerer tumormikromiljøet.70 I henhold til funksjonene kan makrofager klassifiseres i tumoricide M1 og protumorale M2 fenotypiske aktiveringstilstander.71 M1 makrofager er merket med TNF-a, IL-12 , CD80, CD86 og direkte dreping av tumorceller,70 mens M2-lignende TAM er preget av høy ekspresjon av makrofag mannosereseptor 1 (MMR eller CD206) og fremme av tumorcellevekst, som samt utviser sterk immunsuppressiv aktivitet. Det er kjent at inhibitorer av HDAC kan potensere pro-in-motion shis i makrofagpolarisering og forsterke M1-fenotypen i tillegg til å forhindre DNA-reparasjon.72 Derfor oppdaget vi polarisering av makrofager i milten og svulsten ved hjelp av lavcytometri. etter behandling med Mn-kompleksene. Som vist i fig. 13C–E og S12A–C,† ble M2-fenotypen markert med CD206+ signifikant undertrykt og M1-fenotypen markert med CD86+ ble bemerkelsesverdig økt i de MnPVA-behandlede musene. Resultatene indikerer at MnPVA effektivt induserte polariseringen av makrofager fra M2 til M1-fenotypen. MnCl2 og MnPC økte også uttrykket av CD86, men bare mildt påvirket CD206 sammenlignet med PBS. I mellomtiden ble IFN-b, IL-6 og TNF-a utskilt av modne DC-er og makrofager målt med ELISA. Som vist i fig. 13F og G, økte MnPVA nivåene av IFN-b og TNF-a mer effektivt enn PBS, MnCl2 og MnPC, som kan fremkalle T-celler for å drepe tumorceller. Imidlertid ble ingen signifikant endring i IL-6 observert (fig. S13†).

Fig. 12 Terapeutisk effekt av MnPC, MnPVA og MnCl2 på 4T1-tumorbærende mus, ved bruk av PBS som kontroll. (A) Bilder av utskårne svulster, (B) tumorvolum, (C) tumorvekt og (D) kroppsvekt til musene etter behandling med henholdsvis PBS, MnCl2, MnPC og MnPVA med 1,3 mg Mn per kg én gang annenhver dag i 16 dager. **p < {{10}},01 og ***p < 0,001.

Fig. 13 Modne DC-er (CD80+CD86+ gated på CD11c+) og kvantitative analyser på tumordrenerende lymfeknuter (A og B), polariseringen av makrofager (CD206+CD{ {7}} gated på CD11b+) i 4T1-tumorvevet til en mus (C–E) bestemt ved flowcytometri, og ELISA-analyser av IFN-b (F) og TNF-a (G) i serum fra mus etter behandling med hver forbindelse (1,3 mg Mn per kg) en gang annenhver dag i 16 dager. Data presenteres som gjennomsnitt ± SD (n=3). *P < 0.05; **P < 0.01; ***P < 0,001.

Ved aktivering av cGAS-STING-veien i DC-er og makrofager av MnPC og MnPVA, kunne de utskilte IFNs-I- og proinamatoriske cytokinene prime de cytotoksiske lymfocyttene.59 Derfor evaluerte vi videre aktiveringen av cytotoksiske T-celler (CD8+ ) og hjelper-T-celler (CD4+) i henholdsvis tumor- og miltvev. Som vist i figur 14A og S12D–F†, ble CD8+ T-cellene (blå firkant) i svulster effektivt aktivert (9,18 %) i de MnPVA-behandlede musene sammenlignet med de som ble behandlet med PBS (3,53 %). ), MnCl2 (4,48%) og MnPC (6,05%); CD4+ T-celler (rød firkant) ble også aktivert litt, og resultatene var motsatte av de i milten etter behandling med kompleksene. Fig. 14B viser at frekvensene til aktiverte (CD69+) tumorinltrerende CD8+ T-celler ble dramatisk økt. Alle disse resultatene indikerer at MnPVA var i stand til å stimulere sterke immunresponser in vivo på grunn av aktiveringen av cGAS-STING-veien.

Fig. 14 CD8+ (blå firkant) og CD4+ T (rød firkant) celler (A) og prosentandeler av CD69+-undergruppen blant CD8+ T-celler ( B) i 4T1-tumorvevet til en mus etter behandling med hver forbindelse (1,3 mg Mn per kg) en gang hver 2. dag i 16 dager bestemt ved flowcytometri.

Virkningsmekanismen

handling for Mn-kompleksene som vist i fig. 15 ble foreslått. I tumorceller skadet MnPC eller MnPVA kjernefysisk og/eller mitokondrielt DNA, noe som førte til oppregulering av g-H2AX; i mellomtiden hemmet komplekset aktiviteten til HDAC1/2 og PARP1, og svekket dermed DNA-reparasjonsevnen og forsterket DNA-skaden. De akkumulerte DNA-fragmentene ble frigjort fra kjernen og/eller mitokondriene til cytoplasma og gjenkjent av cGAS for å aktivere STING. STING stimulerte igjen fosforyleringen av TBK1 og IRF3 og translokasjon til kjernen, og induserte produksjonen av IFN, IL-6 og TNF-a. Disse IFN-ene og pro-inamatoriske cytokinene ble deretter utskilt fra kjernen til cytosolen og videre til tumormikromiljøet, hvor de fremmet modningen og antigenpresentasjonen av DC-er og makrofager, og ytterligere aktiverte cytotoksiske T-celler for å drepe kreftceller. Lignende hendelser skjedde også i immunceller som makrofager og cGAS-STING-TBK1-banen ble aktivert. Aktiveringen av cGAS-STING-veien initierte medfødte immunresponser og toveiskommunikasjon mellom tumorceller og tilstøtende immunceller for å øke den drepende effekten på svulster.21 Følgelig viste Mn-kompleksene kraftig antitumoraktivitet på grunn av synergien mellom kjemoterapi og immunterapi. . De fleste av disse prosessene har blitt bevist in vitro eller in vivo.

Fig. 15 Foreslått virkningsmekanisme for mangankomplekser.

Konklusjon

Økende bevis viser at mange metallkomplekser interagerer med både tumor- og immunceller for å remodellere immunsuppressive mikromiljøer i tillegg til å utøve en direkte cytotoksisk effekt på tumorceller.73 I denne studien presenterer vi to MnII-komplekser MnPC og MnPVA som potensielle kjemo-immunoterapeutika for å begrense kreft via stimulerende medfødte immunresponser samt bryte DNA-dobbeltråder. Disse multifunksjonelle kompleksene dreper kreftceller ikke bare ved å skade DNA, men også ved å reaktivere de sovende immunresponsene. For det første fungerer de som DNA-brytere, induserer oksidativ DNA-skade og produserer DNA-fragmenter; for det andre fungerer de som inhibitorer av HDAC og PARP1, og forhindrer reparasjon av DNA-skader og forsterker DNA-lesjoner; for det tredje fungerer de som agonister for cGAS-STING-veien, induserer utskillelsen av IFN-er og proinflammatoriske cytokiner for å fremme modningen av DC-er og makrofager, og stimulerer ytterligere tumorspesifikke T-celler til å drepe tumorceller.

cistanche tubulosa-forbedre immunsystemet

Klikk her for å se Cistanche Enhance Immunity-produkter

【Be om mer】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Alt i alt aktiverte MnPC og MnPVA effektivt cGAS-STING-banen og begrenset veksten av kreftceller in vitro og in vivo. Tethering VA til MnII-komplekset forsterket dets hemming på HDACs dramatisk og styrket den antiproliferative aktiviteten til komplekset, og dannelsen av Mn-komplekser gir en betydelig effekt på den antiproliferative aktiviteten til MnCl2 og 1,10-fenantrolin. Helt siden Jiang et al.  først rapporterte den stimulerende aktiviteten til Mn2+ til cGAS-STING-banen,12 ingen slik egenskap har blitt oppdaget i Mn-komplekser. Denne studien viser at den stimulerende evnen til MnPC og MnPVA til cGAS-STING-veien er mye høyere enn MnCl2 eller Mn2+ i både tumor- og immunceller fordi de induserte flere DNA-fragmenter i cytoplasmaet for å aktivere cGAS. -STING-vei. Funnene indikerer at mer potente cGAS-STING-agonister kunne oppnås ved å konstruere MnII-komplekser med DNA-skadelige eller DNA-reparasjonsblokkerende ligander.

Referanser

1 SL Shiao, AP Ganesan, HS Rugo og LM Coussens, Genes Dev., 2011, 25, 2559–2572.

2 A. Ribas og JD Wolchok, Science, 2018, 359, 1350–1355.

3 P. Sharma og JP Allison, Science, 2015, 348, 56–61.

4 M. Yi, D. Jiao, H. Xu, Q. Liu, X. Han og K. Wu, Mol. Kreft, 2018, 17, 129.

5 O. Hemminki, JM Dos Santos og A. Hemminki, J. Hematol. Oncol., 2020, 13, 84. 6 S. Yu, A. Li, Q. Liu, T. Li, X. Han og K. Wu, J. Hematol. Oncol., 2017, 10, 78.

7 P. Sharma, S. Hu-Lieskovan, JA Wargo og A. Ribas, Cell, 2017, 168, 707–723.

8 A. Li, M. Yi, S. Qin, Y. Song, Q. Chu og K. Wu, J. Hematol. Oncol., 2019, 12, 35.

9 A. Saeed, X. Ruan, J. Su og S. Ouyang, Adv. Sci., 2020, 7, 1902599.

10 LL van der Woude, MAJ Gorris, CG Figdor og IJM de Vries, Trends Cancer, 2017, 3, 797–808.

11 DS Chen og I. Mellman, Nature, 2017, 541, 321–330.

12 C. Wang, Y. Guan, M. Lv, R. Zhang, Z. Guo, X. Wei, X. Du, J. Yang, T. Li, Y. Wan, X. Su, X. Huang og Z Jiang, Immunity, 2018, 48, 675–687.

13 Y. Song, Y. Liu, HY Teo, ZB Hana, Y. Mei, Y. Zhu, YL Chua, M. Lv, Z. Jiang og H. Liu, Cell. Mol. Immunol., 2021, 18, 1571-1574.

14 Q. Chen, L. Sun og ZJ Chen, Nat. Immunol., 2016, 17, 1142-1149.

15 F. McNab, K. Mayer-Barber, A. Sher, A. Wack og A. O'Garra, Nat. Rev. Immunol., 2015, 15, 87-103.

16 H. Liu, H. Zhang, X. Wu, D. Ma, J. Wu, L. Wang, F. Liu, D. Yan, C. Chen, Z. Mao og B. Ge, Nature, 2018, 563 , 131–136.

17 BS Pan, SA Perera, JA Piesvaux, H. Woo, DF Wyss, S. Xu, DJ Bennett og GH Addona, Science, 2020, 369, 935.

18 RD Luteijn, SA Zaver, BG Gowen, SK Wyman, NE Garelis, L. Onia, SM McWhirter, GE Katibah, JE Corn, JJ Woodward og DH Raulet, Nature, 2019, 573, 434–438.

19 L. Hou, C. Tian, ​​Y. Yan, L. Zhang, H. Zhang og Z. Zhang, ACS Nano, 2020, 14, 3927–3940.

20 M. Gao, YQ Xie, K. Lei, Y. Zhao, A. Kurum, S. Van Herck, Y. Guo, X. Hu og L. Tang, Adv. Ther., 2021, 4, 2100065.

21 Q. Luo, Z. Duan, X. Li, L. Gu, L. Ren, H. Zhu, X. Tian, ​​R. Chen, H. Zhang, Q. Gong, Z. Gu og K. Luo, Adv. . Funksjon. Mater., 2021, 32, 2110408.

22 H. Tian, ​​G. Wang, W. Sang, L. Xie, Z. Zhang, W. Li, J. Yan, Y. Tian, ​​J. Li, B. Li og Y. Dai, Nano Today, 2022, 43, 101405.

23 C. Wang, Z. Sun, C. Zhao, Z. Zhang, H. Wang, Y. Liu, Y. Guo, B. Zhang, L. Gu, Y. Yu, Y. Hu og J. Wu, J Kontrollert utgivelse, 2021, 331, 480–490.

24 H. Haase, Immunity, 2018, 48, 616–618.

25 KJ Horning, SW Caito, KG Tipps, AB Bowman og M. Aschner, Annu. Rev. Nutr., 2015, 35, 71–108.

26 X. Sun, Y. Zhang, J. Li, KS Park, K. Han, X. Zhou, Y. Xu, J. Nam, J. Xu, X. Shi, L. Wei, YL Lei og JJ Moon, Nat. Nanotechnol., 2021, 16, 1260–1270.

27 M. Lv, M. Chen, R. Zhang, W. Zhang, C. Wang, Y. Zhang, X. Wei, Y. Guan, YC Liu, Q. Mei, W. Han og Z. Jiang, Cell Res ., 2020, 30, 966–979.

28 SL O'Neal og W. Zheng, Curr. Environ. Helserepresentant, 2015, 2, 315–328.

29 E. Li, Nat. Rev. Genet., 2002, 3, 662–673.

30 M. Guo, Y. Peng, A. Gao, C. Du og JG Herman, Biomark. Res., 2019, 7, 23.

31 A. Duenas-Gonzalez, M. Candelaria, C. Perez-Plascencia, E. Perez-Cardenas, E. de la Cruz-Hernandez og LA Herrera, Cancer Treat. Rev., 2008, 34, 206–222.

32 HV Diyabalanage, ML Granda og JM Hooker, Cancer Lett., 2013, 329, 1–8.

33 T. Robert, F. Vanoli, I. Chiolo, G. Shubassi, KA Bernstein, OA Botrugno, D. Parazzoli, A. Oldani, S. Minucci og M. Foiani, Nature, 2011, 471, 74–79.

34 JH Lee, ML Choy, L. Ngo, SS Foster og PA Marks, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2010, 107, 14639–14644.

35 KL Jin, JY Park, EJ Noh, KL Hoe, JH Lee, JH Kim og JH Nam, J. Gynecol. Oncol., 2010, 21, 262–268.

36 M. Gottlicher, S. Minucci, P. Zhu, A. Schimpf og S. Giavara, EMBO J., 2001, 20, 6968–6978.

37 JS Brown, B. O'Carrigan, SP Jackson og TA Yap, Cancer Discovery, 2017, 7, 20–37.

38 AN Weaver og ES Yang, foran. Oncol., 2013, 3, 290.

39 FJ Bock og P. Chang, FEBS J., 2016, 283, 4017–4031.

40 S. Cerboni, N. Jeremiah, M. Gentili, U. Gehrmann, C. Conrad, S. Amigorena, F. Rieux-Laucat og N. Manel, J. Exp. Med., 2017, 214, 1769–1785.

41 C. Pantelidou, O. Sonzogni, M. De Oliveria Taveira, AK Mehta, AJL Guerriero, GM Wulf og GI Shapiro, Cancer Discovery, 2019, 9, 722–737.

42 J. Shen, W. Zhao, Z. Ju, L. Wang, Y. Peng, M. Labrie, TA Yap, GB Mills og G. Peng, Cancer Res., 2019, 79, 311–319.

43 NA Yusoh, H. Ahmad og MR Gill, ChemMedChem, 2020, 15, 2121–2135.

44 F. Mendes, M. Groessl, AA Nazarov, YO Tsybin, G. Sava, I. Santos, PJ Dyson og A. Casini, J. Med. Chem., 2011, 54, 2196-2206.

45 S. Abbas, F. Rashid, E. Ulker, S. Zaib, K. Ayub, S. Ullah, MA Nadeem, S. Yousuf, R. Ludwig, S. Ali og J. Iqbal, J. Biomol. Struktur. Dyn., 2021, 39, 1068–1081.

46 L. Tabrizi, P. McArdle, M. Ektefan og H. Chiniforoshan, Inorg. Chim. Acta, 2016, 439, 138–144.

47 H. Zhang, T. Yang, Y. Wang, Z. Wang, Z. Zhu, ZJ Guo og XY Wang, Dalton Trans., 2021, 50, 304–310.

48 R. Jastrza˛b, M. Nowak, M. Skroba´nska, A. Toli´nska, M. Zabiszak, M. Gabryel, L. Marciniak og MT Kaczmarek, Coord. Chem. Rev., 2019, 382, ​​145–159.

49 Y. Cheng, L. Lv, L. Zhang, Y. Tang og L. Zhang, J. Mol. Struct., 2021, 1228, 129745. 50 Z. Zhu, Z. Wang, C. Zhang, Y. Wang, H. Zhang, Z. Gan, ZJ Guo og XY Wang, Chem. Sci., 2019, 10, 3089–3095.

51 C. Slator, Z. Molphy, V. McKee og A. Kellett, Redox Biol., 2017, 12, 150–161.

52 TJ Hayman, M. Baro, T. MacNeil, C. Phoomak, TN Aung, T. Sandoval Schaefer, BA Burtness, DL Rimm og JN Contessa, Nat. Commun., 2021, 12, 2327.

53 RM Chabanon, M. Rouanne, CJ Lord, JC Soria, P. Pasero og S. Postel-Vinay, Nat. Rev. Cancer, 2021, 21, 701–717.

54 AP Wes og GS Shadel, Nat. Rev. Immunol., 2017, 17, 363–375.

55 AP West, W. Khoury-Hanold, M. Staron, MC Tal, CM Pineda, SM Lang, M. Bestwick, BA Duguay, N. Raimundo, DA MacDuff, SM Kaech, JR Smiley, RE Means, A. Iwasaki og GS Shadel, Nature, 2015, 520, 553–557.

56 S. Jin, Y. Hao, Z. Zhu, N. Muhammad, Z. Zhang, K. Wang, Y. Guo, ZJ Guo og XY Wang, Inorg. Chem., 2018, 57, 11135-11145.

57 NJ Curtin og C. Szabo, Nat. Rev. Drug Discovery, 2020, 19, 711–736.

58 J. Chen, FM Ghazawi, W. Bakkar og Q. Li, Mol. Kreft, 2006, 5, 71.

59 SM Harding, JL Benci, J. Irianto, DE Discher, AJ Minn og RA Greenberg, Nature, 2017, 548, 466–470.

60 EJ Sayour og DA Mitchell, J. Immunol. Res., 2017, 17, 3145742.

61 BJ Francica, A. Ghasemzadeh, AL Desbien, D. Theodros, KE Sivick, AB Sharabi, ML Leong, SM McWhirter, TW Dubensky Jr, DM Pardoll og CG Drake, Cancer Immunol. Res., 2018, 6, 422–433.

62 C. Vanpouille-Box, S. Demaria, SC Formenti og L. Galluzzi, Cancer Cell, 2018, 34, 361–378.

63 SR Woo, MB Fuertes, L. Corrales, S. Spranger, MJ Furdyna, MY Leung, KA Fitzgerald, ML Alegre og TF Gajewski, Immunity, 2014, 41, 830–842.

64 C. Belli, D. Trapani, G. Viale, P. D'Amico, BA Duso, P. Della Vigna, F. Orsi og G. Curigliano, Cancer Treat. Rev., 2018, 65, 22–32.

65 BU Schraml, J. van Blijswijk, S. Zelenay, PG Whitney, A. Filby, SE Acton, NC Rogers, N. Moncaut, JJ Carvajal og C. Reis e Sousa, Cell, 2013, 154, 843–858.

66 AA van de Loosdrecht, E. Nennie, GJ Ossenkoppele, RHJ Beelen og MMAC Langenhuijsen, J. Immunol. Methods, 1991, 141, 15–22.

67 S. Zhang, X. Zhong, H. Yuan, Y. Guo, D. Song, F. Qi, Z. Zhu, XY Wang og ZJ Guo, Chem. Sci., 2020, 11, 3829–3835.

68 Y. Li og E. Seto, Cold Spring Harbor Perspect. Med., 2016, 6, a026831.

69 C. Chen, Y. Tong, Y. Zheng, Y. Shi, Z. Chen, J. Li, X. Liu, D. Zhang og H. Yang, Small, 2021, 17, e2006970.

70 A. Mantovani, F. Marchesi, A. Malesci, L. Laghi og P. Allavena, Nat. Rev. Clin. Oncol., 2017, 14, 399–416.

71 B. Ruffel og LM Coussens, Cancer Cell, 2015, 27, 462–472.

72 W. He, N. Kapate, CW t. Shields og S. Mitragotri, Adv. Drug Delivery Rev., 2020, 17, 251–266.

73 B. Englinger, C. Pirker, P. Heffeter, A. Terenzi, CR Kowol, BK Keppler og W. Berger, Chem. Rev., 2019, 119, 1519–1624.