Nukleinsyrebaserte vaksineplattformer mot koronavirussykdommen 19 (COVID-19)

Abstrakt

Pandemien med koronavirussykdommen 2019 (COVID-19) har infisert 673 010 496 pasienter og forårsaket døden til 6 854 959 tilfeller globalt frem til i dag. En enorm innsats har blitt gjort for å utvikle fundamentalt forskjellige COVID-19-vaksineplattformer. Nukleinsyrebaserte vaksiner bestående av mRNA- og DNA-vaksiner (tredjegenerasjonsvaksiner) har vært lovende når det gjelder rask og praktisk produksjon og effektiv provokasjon av immunresponser mot COVID-19. Flere DNA-baserte (ZyCoV-D, INO-4800, AG0302-COVID19 og GX-19N) og mRNA-baserte (BNT162b2, mRNA-1273 og ARCoV) godkjente vaksineplattformer har blitt brukt for covid{22}}-forebygging. mRNA-vaksiner er i forkant av alle plattformer for covid{23}}-forebygging. Disse vaksinene har imidlertid lavere stabilitet, mens DNA-vaksiner er nødvendig med høyere doser for å stimulere immunresponsene. Intracellulær levering av nukleinsyrebaserte vaksiner og deres bivirkninger trenger ytterligere forskning. Tatt i betraktning gjenoppkomsten av COVID-19-varianter, er revurdering av vaksiner og utvikling av polyvalente vaksiner, eller pan-koronavirusstrategier, avgjørende for effektiv infeksjonsforebygging.

cistanche supplement fordeler-hvordan styrke immunforsvaret

Klikk her for å se Cistanche Enhance Immunity-produkter

【Be om mer】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Nøkkelord

Koronavirussykdom 19 · Nukleinsyre-base vaksiner · Immunitet · Beskyttelse

Bakgrunn

På slutten av 2019 dukket et nytt beta-koronavirus opp i Wuhan, Kina, og spredte seg raskt over hele verden. Koronavirussykdommen 2019 (COVID-19) har et høyt potensial for en pandemi på grunn av sin høye smitterate med høy dødelighet globalt (Sharma et al. 2020; Su et al. 2020; Wibawa 2021). Derfor er det nødvendig med betydelig innsats for å utvikle effektive vaksiner eller terapier mot sykdommen (Su et al. 2020). Symptomer på COVID-19-sykdom varierer, inkludert milde fu-lignende symptomer, lungebetennelse, akutt respiratorisk nødsyndrom (ARDS) og dødelig utgang. Pasienter med kreft, diabetes, kardiovaskulære sykdommer, eldre voksne og til og med genetisk disponerte individer har høyest risiko for alvorlighetsgrad av covid-19 (Sharma et al. 2020; Su et al. 2020; Wibawa 2021; Vakil et al. 2022). I henhold til anbefalinger fra Verdens helseorganisasjon (WHO), er bruk av masker, bruk av antivirale medisiner, sosial distansering og overholdelse av vaksinasjonsprosedyrer avgjørende atferd for å kontrollere covid{14}}-pandemien rundt om i verden (Sharma et al. 2020). Den vitenskapelige innsatsen mot utvikling av effektive vaksiner mot invasive patogener går mange år tilbake i tid (Deb et al. 2020; Zhang et al. 2020; Wibawa 2021). Disse vaksineplattformene er også designet mot patogene bakterier (Farhani et al. 2019; Jafari og Mahmoodi 2021). I denne forbindelse anses utvikling av en effektiv, beskyttende og trygg vaksine som en sentral forebyggende tilnærming for å hindre spredning av det alvorlige akutte respiratoriske syndromet coronavirus 2 (SARS-CoV-2) (Moore og Klasse 2020). Derfor konkurrerte forskjellige farmasøytiske selskaper og forskningsteam over hele verden om å presentere en sikker og effektiv vaksine mot COVID-19 for bruk i internasjonalt samfunn. Denne innsatsen har utviklet andre vaksineplattformer for å gå inn i prekliniske og kliniske studier, og noen av dem har blitt godkjent (Chen et al. 2021), inkludert tradisjonelle vaksiner som levende eller inaktiverte, underenhets- og nukleinsyrebaserte vaksiner som neste generasjons vaksiner (Moore og Klasse 2020). Basert på vitenskapelig bevis stimulerer levende svekkede vaksiner de medfødte, cellulære og humorale immunresponsene ved å indusere Toll-like Receptors (TLR) med langvarig immunitet og kan utvikle overfølsomhet. Den største ulempen med disse vaksinene er deres kostbare sikkerhets- og effektvurderinger. Inaktiverte virale vaksiner provoserer dårlig cellulære immunresponser som reduserer deres effektivitet. I april 2020 ble en inaktivert COVID-19-vaksine produsert av Sinovac og Wuhan Institute of Biological Products (Sinopharm) (Moore og Klasse 2020; Su et al. 2020). Underenhetsvaksiner er trygge, med noen defekter inkludert lav immunogenisitet, booster- eller adjuvansbehov og høye kostnader (Koirala et al. 2020; Su et al. 2020). Nukleinsyrebaserte vaksiner er utviklet basert på sekvensinformasjon. De inkluderer DNA- eller mRNA-sekvenser av antigener som sterkt stimulerer cellulære og humorale immunresponser i forskjellige doser. På grunn av fordelene deres, for eksempel rask produksjon, og de tidligste COVID-19-vaksinene i kliniske studier, er en merkbar fordel med DNA-baserte vaksiner deres stabilitet under ulike lagringsforhold (Silveira et al. 2020; van Riel og de Wit 2020). RNA-baserte vaksiner fikk mer oppmerksomhet fra farmasøytiske selskaper som Pfizer/Biotech og Moderna. I motsetning til DNA-vaksiner stimulerer de effektiv humoral immunrespons som TLR-ligander uten adjuvans, og sekvensen deres er modifisert for å utelukke mRNA-nedbrytning (Moore og Klasse 2020; van Riel og de Wit 2020; Soiza et al. 2021). Denne gjennomgangen hadde som mål å vurdere den siste utviklingen innen nukleinsyrebaserte vaksiner, inkludert mRNA- og DNA-vaksiner mot COVID-19.

Hovedtekst

Coronavirus molekylær mekanisme for infeksjon og immunrespons

cistanche planteøkende immunsystem

COVID-19-genomet er et positivt enkelttrådet RNA som koder for fire hovedstrukturproteiner som består av konvolutt (E), pigg (S), membran (M) og nukleokapsid (N) (Stadler og Rappuoli 2005), som vist i fig. la. Human SARS-CoV omfatter spike (S) glykoprotein som en del av konvolutten. Virusinkorporering til vertsceller utføres av piggprotein som består av S1- og S2-underenheter. De spiller en viktig rolle i bindingen til vertscellereseptorer kjent som angiotensin-konverterende enzym II (ACE2) for infeksjonsinitiering (fig. 1b). Sentral region av S1-domenet som binder til ACE2 med høy affinitet er et reseptorbindende domene (RBD). I denne forbindelse er interaksjonen mellom RBD og ACE2 nødvendig for initiering av human celleinfeksjon (He et al. 2020). I tillegg er S-proteinavkortningen essensiell for viral inntreden i vertsceller; etter RBD-regionbinding til ACE2, spalter en vertsprotease kjent som TM-protease serin 2 (TMPRSS2) S-proteinet i S1- og S2-domener som fører til S2-domenefusjon til vertscellen (Huang et al. 2020). Selv om sterke immunresponser er effektive mot COVID-19, overfølsomhet og cytokinstorm (for det meste interleukin-6-, IL-1b, GM-CSF-, interferon- / IFN -, nekrosefaktor / TNF -, IL-10-, IL-2- og IL- 7-drevne svar) må være forbudt (Chowdhury et al. 2020). Etter viral binding (spike-ACE2-interaksjon) og inntreden i luftveisceller, presenterer fagocytiske alveolære makrofager og dendrittiske celler (DCs) virale antigener til T-celler og aktiverer T CD4+(hjelpe-T-celle) og T-CD{{37 }}(cytotoksisk T-celle). Deretter frigjøres proinflammatoriske cytokiner som IL6, IL12, TNF og IFN, etc. for å møte viruset. Høye nivåer av cytokinproduksjon som fører til cytokinstormen forårsaker imidlertid lungeskade (Hosseini et al. 2020). I følge vitenskapelig bevis er hjelpe-T-celler nødvendige for eliminering av virusinfeksjon, induksjon av B-celler for å produsere antistoffer og stimulering av cytotoksiske T-celler (Sharma et al. 2020). COVID-19 antigene mål Ved utvikling av en sikker og beskyttende vaksine mot en patogen organisme er det avgjørende å identifisere de beste immunogene målene (Lu et al. 2020b). Å ta i bruk potensielle antigene mål er avgjørende for å provosere T-celle- og B-celleepitoper for å indusere cellulær og humoral immunitet på riktig måte (Rueckert og Guzmán 2012). Det virale S-proteinet interagerer med vertscellene via RBD-domenet som en essensiell ligand. RBD-domenet kan indusere nøytraliserende antistoffproduksjon og T-celle-immunrespons mot COVID-19. Også immunogenisiteten til S-proteinet er bekreftet (Pushparajah et al. 2021). N-proteinet har en liten og svært konservert sekvens sammenlignet med andre virale proteiner. N-proteinet er sterkt uttrykt under virusinfeksjon, med en signifikant assosiert humoral immunrespons mot COVID-19 blant pasienter. I tillegg, med cellulære responser mot N-proteinet, kan det betraktes som et riktig kandidatantigen i vaksinedesign (Dutta et al. 2020). I tillegg stimulerer M-proteinet og E-proteinet T CD4+-epitoper (Wang et al. 2005; Abdelmageed et al. 2020; Dong et al. 2020). Å fremkalle sterke immunresponser mot S-proteinet er avgjørende og nødvendig (Buchholz et al. 2004). S-proteinet inkluderer de mest immunogene T-celle- og B-celleepitopene kjent som foretrukne mål i vaksineutvikling mot COVID-19. Den har blitt brukt i alle utviklede mRNA-plattformvaksiner som Pfizer/BioNtech og Moderna-vaksiner.

Fig. 1 a SARS-CoV-2 virionstrukturen; Hovedoverflateproteiner av COVID-19-virus inkluderer Spike (S) glykoprotein, Membran (M) og Envelope (E) proteiner. S-proteinet er hovedvaksinen og det terapeutiske målet som interagerer med den angiotensin-konverterende enzym II (ACE2) reseptoren for infeksjonsinitiering. b Domener av spike protein; S-proteinet inkluderer S1 (NTD eller ikke-oversatt domene og RBD eller reseptorbindende domene) og S2 underenheter

Historie om nukleinsyrebaserte legemidler

Oligonukleotider ble inngått i kliniske studier for mer enn 30 år siden. Historien om å bruke nukleinsyrebaserte terapeutiske tilnærminger dateres til 1977 da Paterson et al. brukte nukleinsyrer for å tilpasse genuttrykk (Paterson et al. 1977). Foreløpig har de fått mer omtanke. Nukleinsyrebaserte legemidler er delt inn i ulike kategorier, inkludert antisenseformer, ribozymer, mRNA og DNA-baserte vaksiner (Sharma et al. 2014). Et syntetisk oligodeoksynukleotid hemmet replikasjonen av Rous Sarcoma Virus (RSV), som var komplementær til RSV mRNA og var kjent som antisense (Zamecnik og Stephenson 1978). Den første antisensen ble lagt inn i klinikken mot Cytomegalovirus (CMV) (Mulamba et al. 1998). Lite interfererende RNA (siRNA) har potensialet til å hemme genuttrykk og ble for første gang rapportert i 1998. En annen gruppe av små ikke-kodende RNA inkluderer mikroRNA (miRNA) som har en uunnværlig rolle i reguleringen av genuttrykk, med funksjoner som ligner på siRNA og terapeutisk potensial (Usman og Blatt 2000; Sharma et al. 2014). Som nevnt fungerer ribozymklassen av RNA-molekyler som enzymer som retter seg mot transkripsjon. Ribozymes gikk inn i kliniske studier mot kreft og enkelte virusinfeksjoner som humant immunsviktvirus (HIV) (Usman og Blatt 2000; Abera et al. 2012). I tillegg til mRNA- og DNA-baserte vaksiner er de klassifisert i nukleinsyrebaserte legemidler introdusert i 1990 og fikk mer oppmerksomhet i utviklingen av vaksiner for å bekjempe COVID-19 (Le et al. 2020; Zhang et al. . 2020). Store fordeler med disse gruppene av vaksiner inkluderer deres raske produksjon og høye spesifisitet mot tilsvarende målantigener (Le et al. 2020).

cistanche tubulosa-forbedre immunsystemet

mRNA-baserte vaksiner

Den første leveringen av mRNA-molekyler til vertsceller inkluderte mRNA-transfeksjon til fibroblastceller ved bruk av et kationisk lipid (Park et al. 2021). mRNA-vaksiner inkluderer patogenantigener mRNA som produserer antigene proteiner av humane celler. Flere fordeler med mRNA-vaksiner inkluderer en enkel produksjonsprosess, effektiv og beskyttende immunitet, praktisk manipulering og industrialisering, og fleksibilitet til å svare på COVID-19-varianter (Kaufman et al. 2016; Fang et al. 2022). Noen tilnærminger, som tillegg av 5'-cap og Kozak-sekvenser, brukes ved å bruke 3'-poly-A-sekvenser og modifikasjon av mRNA-nukleosider (Borah et al. 2021). mRNA-vaksinene blir oversatt til vertens cytosol. Derfor er det ingen risiko for innsetting av vertsgenomer, som er kjent som deres viktigste fordel. I denne forbindelse fikk mRNA-baserte vaksiner mer oppmerksomhet som en sikker forebyggende tilnærming mot kreft og infeksjonssykdommer nylig (Kaur og Gupta 2020). Den primære virkningsmekanismen til mRNA-vaksiner er vist i fig. 2.

DNA-baserte vaksiner

DNA-vaksiner omfatter flere gener som koder for virale antigene peptider uttrykt av plasmidvektorer og overført til celler via elektroporasjon (EP). Sammenlignet med andre vaksineplattformer, foreslår DNA-vaksiner en fleksibel og rask plattform for utvikling av vaksiner, noe som gjør det til en fascinerende teknologi for å bekjempe utviklende epidemier som COVID-19. Dessuten skjer DNA-vaksineantigenproduksjon i målceller, noe som hjelper til med å rekapitulere virusantigenets naturlige konformasjon og post-translasjonelle modifikasjoner. Den største ulempen med DNA-vaksiner er deres begrensede immunogenisitet. Derfor er det viktig å vurdere strategier som adjuvans eller bruk av et prime-boost-regime som kan øke DNA-vaksinens potensial. Integrering av nukleinsyre i verts-DNA er også et annet biosikkerhetsproblem som resulterer i onkogenese og mutagenese (Rauch et al. 2018). Selv om risikoen for DNA-vaksineinnsetting ifølge tidligere studier er ubetydelig, anbefaler WHO og FDA implementering av DNA-vaksinesikkerhet for integrering (Wang et al. 2004; Schalk et al. 2006). DNA-vaksiner overfører koronavirusgenene til menneskelige celler. Prinsippet for vaksinasjon avhenger av DNA-leveringen inn i cellekjernen slik at antigentranskripsjonen startes og etterfølges av en translasjon. DNA-vaksiner bruker vanligvis plasmider som vektorer. Basert på administrasjonsveien for vaksine, adresseres både myocytter og keratinocytter. Imidlertid kan antigenpresenterende celler nær injeksjonsstedet også transfekteres direkte ved bruk av DNA-vaksiner. I slike tilfeller representerer kryssprimingsprosessen antigener ved bruk av både store histokompatibilitetskompleks (MHC-I/II) molekyler (Hobernik og Bros 2018). De genererte antigenene frigjøres ved hjelp av apoptotiske legemer eller eksosomer som resulterer i at de gjenkjennes av antigenpresenterende celler, som igjen provoserer cellulære og humorale immunresponser. Ulike leveringsstrategier brukes for å produsere en sterk immunrespons (Donnelly et al. 2005; Li og Petrovsky 2016; Strizova et al. 2021). Når det gjelder immunreguleringen under COVID-19-infeksjon, har det blitt avslørt at pasienter med risiko for perikardiell effusjon med feilprognose indikerer forhøyede CD3+CD8+ T-celler pluss redusert CD{{ 18}}HLA-DR og T regulatoriske (Treg) celler (Duerr et al. 2020). Disse resultatene viser at alvorlig infeksjon oppstår på grunn av en ubalansert immunrespons som forverrer sykdomstilstandene (Tay et al. 2020). COVID-19-vaksinefremskritt hadde som mål å utvikle en effektiv og hensiktsmessig immunrespons (inkludert begge armer) uten fremgang til slik ubalanse (Hobernik og Bros 2018). Mens de humane kliniske forsøkene med DNA-vaksiner utløste totale responser, er disse responsene ofte utilstrekkelige til å gi akseptable kliniske fordeler. I tillegg kan grunnleggende komponenter i plasmid-DNA, for eksempel umetylerte CpG-sekvenser, forårsake aktivering av medfødte immunresponser, og øke adaptive immunresponser mot de uttrykte antigenene. Dermed er DNA-vaksiner mer anvendelige i veterinærmedisin (Coban et al. 2013; Silveira et al. 2017; Hobernik og Bros 2018). På grunn av denne ulempen konsentrerer noen forskningslinjer seg om optimalisering og levering av DNA-vaksiner, inkludert kodonoptimalisering, promoterdesign, molekylære adjuvanser, EP-applikasjon, prime-boost-vaksinasjon eller "omics"-metoder for avansert vaksinedesign (Li et al. 2012; Silveira et al. 2020). Figur 3 illustrerer hovedstadiene av DNA-vaksinemekanismer i effektive immunresponser.

Fig. 2 mRNA-vaksineformulering, administrering og mekanismer for immunprovokasjon: en mRNA-formulering med en lipidnanopartikkel (LNP) opprettholder og forbedrer sekvensstabiliteten. b En saltoppløsning av mRNA-LNP-vaksine administreres intramuskulært. c Det LNP-holdige mRNA blir transfektert inn i de antigenpresenterende cellene (APCs) gjennom endocytose. mRNA frigjøres i cytoplasmaet og oversettes til virale proteiner, deretter lyseres de av proteasomet og binder seg til hovedhistokompatibilitetskomplekset I (MHC-I) på overflaten av det endoplasmatiske retikulum og presenteres for T-cytotoksiske (Tc)-celler

Potensialet til mRNA- og DNA-baserte vaksiner

En vaksinestruktur på mRNA-nivå inneholder elementer for å korrigere stabilitet og proteinekspresjon, inkludert 3′ UTR, kodende sekvens, 5′UTR, 5′ cap og poly (A) hale (Liu 2019). 5′ og 3′ UTR-elementene som flankerer den kodende sekvensen avledet fra virale eller eukaryote gener forbedrer den strukturelle stabiliteten og forbedrer translasjonen av mRNA som er essensielle faktorer for vaksiner (Ross og Sullivan 1985; Holtkamp et al. 2006). For effektiv proteintranslasjon fra mRNA er det nødvendig med en 5′ cap-struktur (Martin et al. 1975; Ross og Sullivan 1985). mRNA poly (A) halen har også en regulerende rolle i mRNA stabilitet og translasjon (Holtkamp et al. 2006). Kodonbruk har også en viktig rolle i proteinoversettelse. I denne forbindelse, for å øke proteintranslasjonen fra mRNA, erstattes sjeldne kodoner med brukte synonyme kodoner som har rikelig med beslektet tRNA i cytosolen (Stepinski et al. 2001). En annen tilnærming for sekvensoptimalisering er berikelsen av G:C-innhold. Flere metoder har utviklet effektive og sikre kandidat-DNA-vaksiner de siste årene. I en DNA-basert vaksineplattform påføres bakterieavledede plasmidvektorer for å uttrykke de ønskede antigenene i vertscellene. Bakterieplasmidene må føres inn i eukaryote celler og translokeres til kjernen. Deretter transkriberes og translateres DNAet fra fremmede gener i henholdsvis vertscellens kjerne og cytoplasma. Derfor er utforming av et riktig plasmid med høy transfeksjonseffektivitet og proteinekspresjon avgjørende for å oppnå en potent DNA-vaksine (Malone et al. 1989). Sekvensen til den eukaryote regionen (i DNA-vaksiner plasmider), oppstrøms for det innsatte gen, er sammensatt av en promoter og et poly A-signal (polyA) (AAU AAA) lokalisert i 3'-endene av den antigene sekvensen (Shan et al. . 2011). Promotorer er kritiske elementer som trengs i DNA-vaksineplasmider for å provosere frem høye ekspresjonsnivåer av de ønskede antigenene i vertscellene (Becker et al. 2008) og resultere i mRNA-transkripsjon fra det innsatte genet. Den mest brukte promoteren i DNA-vaksiner inkluderer den humane cytomegalovirus (CMV) promoteren. PolyA-sekvenssignalet forårsaker mRNA-stabilitet og overføring og eukaryotisk genuttrykk effektivt. Et annet kritisk element er en Kozak-sekvens (ACCATGG) som har en viktig rolle i oversettelse av det eukaryote ribosomet. Det er også nødvendig å legge til én eller to stoppkodonsekvenser for å unngå feil translasjon av det innsatte genet i vertscellen (Becker et al. 2008; Williams 2013). Sammenligning av DNA- og mRNA-vaksineplattformer Selv om DNA- og mRNA-vaksiner har vært under utvikling siden 1990-tallet og nylig utvikling og lisensiering av ulike veterinær-DNA-vaksiner, har betydelig entusiasme vendt seg til mRNA. Begge trenger innsats for å forbedre deres antigenisitet, stabilitet og effektivitet ved å manipulere plasmid-DNA og mRNA rett eller legge til immunmodulatorer eller adjuvanser og formuleringer og leveringssystemer (Liu 2019). Stabilitetsvarigheten til mRNA er lavere enn for plasmid-DNA. Det har blitt avdekket at DNA-vaksiner genererer det kodede proteinet raskt, og er høyere mengder enn mRNA-vaksiner på grunn av den høyere iboende plasmid-DNA-stabiliteten. Det er funnet at plasmid-DNA vedvarer i muskler i opptil 6 måneder i en ikke-integrert modus (Ledwith et al. 2000). Selv om DNA- og mRNA-vaksiner er ment å være et uttrykkssystem for favorittproteinet, er ingen immunologisk inerte. DNA-plasmider så vel som mRNA stimulerer også medfødt immunitet (Campbell 2017). Den DNA- og mRNA-baserte vaksineteknologien er kanskje ikke helt generell. mRNA er mer komplisert enn plasmid-DNA på grunn av modifiserte nukleosider og formuleringer som kreves for levering, stabilitet og nødvendigheten av å kontrollere den iboende immunstimulerende aktiviteten til mRNA. Likevel gagner det produksjon som unngår etterspørselen etter hvert cellulært eller animalsk produkt. Løftet er at kliniske prestasjoner vil være gjennomførbare etter at plasmid-DNA- og mRNA-vaksineutfordringene er løst, spesielt ved å bruke avanserte teknologier for å forebygge og behandle sykdommer (Liu 2019).

Fig. 3 Prosessen med COVID-19 DNA-vaksineekspresjon inn i de antigenpresenterende cellene (dendritiske celler eller DC). Plasmid-DNAet går inn i DC-kjernen og uttrykker antigener in vivo (1) Deretter presenteres antigenene til T-cellene (T-cellereseptorer eller TCR-er) via både MHC-I- og MHC-II-molekyler. Antigenpresentasjon skjer via DC CD80/86-molekylene og CD8+T-celle-CD28-molekylene ved siden av MHC-I-TCR og også via DC CD40 og CD4+T-cellen CD40L ved siden av MHC-II-TCR-interaksjoner (2a, 3 og 4) Aktivering og spredning av CD8+T-cellene og cytokiners frigjøring fører til effektive immunresponser som makrofagaktivering (2b) I tillegg aktiveres CD-en. 4+T-celler etter binding til og cytokineffekter fra DC-er er assosiert med B-celleaktivering, proliferasjon og antistoffutskillelse (5)

Fremgang i levering av DNA- og mRNA-vaksine

Fremmed DNA- og RNA-opptak av eukaryote celler er ikke effektivt sammenlignet med virale vektorer. Mange fysiske leveringsmetoder er etablert for å øke cellulær opptakskapasitet (Mellott et al. 2013). Fysiske metoder for gentransfeksjon inkluderer leveringssystemer som overfører genetisk materiale via mekaniske prosedyrer, inkludert EP- og projektorenheter (Gulce-Iz og Saglam-Metiner 2019). Biojektorenheter utnytter CO2-trykket til å transportere terapeutika gjennom IM (intramuskulær), ID (intradermal) og også SC (subkutan) administrering uten nålekravet (Jorritsma et al. 2016), noe som gir betydelige fordeler i forhold til konvensjonell kanyleinjeksjon, inkludert reduksjon av uønskede effekter, krysskontaminering av nåler og skader på nålestikk (Zhang et al. 2015). Relevant har to DNA-vaksiner blitt vurdert mot Zika-viruset i fase I-studien, som viser økt cellulær respons etter nålefri administrering sammenlignet med nålebruk (Gaudinski et al. 2018). Dessuten avslørte en mRNA-vaksineleveringsplattform mot rabies ved bruk av en projektor forbedrede antistoffresponser (Alberer et al. 2017). Den økte vaksineeffektiviteten gjennom jet-injeksjonen kan tilskrives en bredere distribusjon av vaksiner, og dermed resulterer i høyere opptak ved bruk av APC (Williams et al. 2000; Alberer et al. 2017). For tiden brukes ID- eller IM-injeksjoner etterfulgt av EP vanligvis for DNA-vaksinelevering i kliniske studier (Sardesai og Weiner 2011). EP inkluderer poredannelse i hudcellene for å øke cellulært opptak av det genetiske materialet ved hjelp av elektriske pulser (Pushparajah et al. 2021). IM EP-metoden ble først og fremst brukt i 1998 (Aihara 1998) for å forbedre penetrabiliteten til muskelcellene for levering av DNA-vaksiner (Rizzuto et al. 1999; Dupuis et al. 2000; Sokołowska og Błachnio-Zabielska 2019). Tallrike rapporter har avdekket bedre antigenekspresjon og økt antigenspesifikk immunrespons in vivo ved bruk av EP (Yan et al. 2008; Yan et al. 2009). Det er rapportert at en HIV-DNA-vaksine, ADVAX, økte immunogenisiteten etter overføringen gjennom EP (Vasan et al. 2011), sammenlignet med IM-administrasjonen (Vasan et al. 2010). Likevel lider EP-tilnærmingen av en celledødsrisiko på grunn av bruk av høye spenninger (Gulce-Iz og Saglam-Metiner 2019). Nye leveringsmetoder, som EP, er ennå under utredning for levering av RNA-vaksine.

cistanche fordeler for menn styrker immunforsvaret

EP-effekten for selvamplifiserende vaksinelevering har vært lik den for plasmid-DNA-vaksiner når det gjelder genuttrykk og immunresponser hos mus (Cu et al. 2013). Imidlertid har EP ikke forbedret leveringseffektiviteten til tradisjonelle ikke-replikerende RNA-vaksiner (Johansson et al. 2012), noe som muligens reduserer effektiviteten ved duplisering av RNA-vektorer. Følgelig er EP- og bioinjektorene fordelaktige for parenteral injeksjon av COVID-19 DNA/RNA-vaksiner. Disse tilnærmingene bidrar til høyere produksjon og levering av DNA-vaksinekandidater og forbedrer resultatene bemerkelsesverdig (Pushparajah et al. 2021).

Fordeler og begrensninger ved nukleinsyrebaserte vaksiner

Som nye og lovende metoder for immunisering gir nukleinsyrebaserte vaksiner innsikt i utvikling av trygg og beskyttende vaksinasjon (Choi og Chang 2013) som demonstrert av millioner av mennesker under COVID-19-pandemien. Nukleinsyrebaserte vaksiner har korte utviklingssykluser, noe som muliggjør rask distribusjon under en pandemi. Utnyttelse av rekombinante DNA-vaksiner krever effektiv overføring av DNA-vektor inn i kjernen, transkripsjon og deretter translasjon til det ønskede antigenet (Leitner et al. 1999). På grunn av praktisk manipulering og lavkostproduksjon er nakent plasmid-DNA en fascinerende vektor for å presentere antigener (Williams 2013). Vanligvis omfatter et plasmid-DNA grunnleggende genetiske elementer, inkludert det antigenkodende genet, en promoter, forsterkere og transkripsjonsterminering/polyadenyleringssekvenser (Vogel og Sarver 1995). Plasmid-DNA-plattformen er en lovende biofarmasøytisk konstruksjon som er replikert i høye nivåer innenfor rimelige prokaryote celler, men som krever rensing (Prazeres et al. 1999; Ferreira et al. 2000; Suschak et al. 2017). RNA-vaksiner er sammensatt av mRNA-molekyler som inneholder et antigen-RNA omgitt av 3′, poly-A hale og 5′ termini og mangler kravet til transkripsjon. (Zhang et al. 2019). Flere RNA-vaksiner gjennomgår selvamplifisering kjent som ny teknologi under utvikling. Følgelig kan RNA-molekylet replikeres og oversettes i verten etter levering, til tross for muligheten for naken RNA-ustabilitet, og dermed øke ekspresjonen av immunogene peptider (Pardi et al. 2018; Zhang et al. 2019; Wadhwa et al. 2020) . mRNA brytes ned av allestedsnærværende ribonuklease-enzymer (Wadhwa et al. 2020; Xu et al. 2020). Tilsetningen av en 3′ poly-A hale og en 5′–7-metylguanosinhette er avgjørende for å øke stabiliteten og translasjonen av mRNA i cytosolen (Gallie 1991; Schlake et al. 2012). Strategier for å øke vaksineopptak og ekspresjon er hovedsakelig evaluert for DNA-vaksiner enn for RNA-vaksiner, da DNAet krever å krysse to cellemembraner for å nå kjernen. I motsetning trenger RNA-en til cytoplasmaet gjennom en enkelt membran (Rauch et al. 2018). DNA-strukturen har sammenlignelig høyere stabilitet. Over 7 år ble det funnet at plasmid-DNA forble intakt uten forskjell med nylig tilført DNA holdt ved -20 grader (Walther et al. 2013; Pushparajah et al. 2021). Lav pH og temperatur er avgjørende for å opprettholde DNA-integriteten i lang tid. Motsatt er RNA ekstremt temperaturfølsomt og må holdes ved -70 grader i det enzymfrie mediet for å øke halveringstiden (Jones et al. 2007).

Utfordringer med å utvikle nukleinsyrebaserte vaksiner

Det er velkjent at covid-19-vaksiner må være effektive og beskyttende nok (Graham 2020) og fremkalle langvarig immunitet. Årlig vaksinasjon kan imidlertid være mulig basert på årlige influensavaksineerfaringer (Randolph og Barreiro 2020; van Riel og de Wit 2020). Å utvikle covid-19-vaksinen byr på utfordringer selv med nye plattformer. Til tross for den høye immunogenisiteten og beskyttelsen til spikeproteinvaksinen mot coronavirus, skaper forekomsten av mutasjoner bekymringer og gjenoppstår viruset. Derfor er prognosen for tidspunktet og stedet for sykdomsopptreden sammen med nøyaktig adopsjon av målproteinsekvensen det fremste stadiet i utviklingsprosessen som krever riktig implementering av kliniske studier (Lurie et al. 2020). Hovedutfordringen med DNA-vaksiner er å fremkalle relativt lavere immunresponser hos mennesker og store dyr enn i smådyrsystemer (Grunwald og Ulbert 2015; Suschak et al. 2017). Det er bemerkelsesverdig at ytterligere utfordringer gjenstår angående covid{10}}-vaksiner, som beskyttelsesholdbarhet, effektivitet i spesifikke undergrupper, forebygging av virusoverføring og offentlig aksept (Pushparajah et al. 2021). Den forsinkede antigenekspresjonen i selvamplifiserende mRNA-vaksiner kan begrense disse vaksinenes effektivitet. Denne plattformen gir imidlertid høyere utbytte og gir dermed ekvivalent beskyttelse ved betydelig lavere doser (Vogel et al. 2018; Strizova et al. 2021).

Nylige fremskritt innen COVID-19 DNA- og mRNA-vaksiner

I vaksineutvikling mot COVID{{0}} har en rekke studier fokusert på mRNA-vaksineplattformer (Verbeke et al. 2021) som har ført til godkjenning av flere vaksiner (Vitiello og Ferrara 2{{ 94}}21) slik som de fra Moderna og Pfizer/BioNtech-selskaper. Moderna-vaksinen inkluderer hele kodingen av COVID-19 spike glykoprotein-mRNA, mens Pfizer/BioNtech inneholder RBD-mRNA-sekvensen (Brüssow 2020). Pfizer/BioNTech- og Moderna-vaksinenes effektivitetsnivåer inkluderer henholdsvis 95 % og 94,5 % (Rauch et al. 2021; Widge et al. 2021). Moderna-vaksinelagringstemperaturen er mellom -25 grader og -15 grader, mens den for Pfzer-vaksinen er mellom -80 grader og -60 grader (Meo et al. 2021; Rauch et al. 2021). Sammenlignet med Moderna-vaksinen har Pfizer/BioNTech-vaksine lavere kostnader og bivirkninger (Rauch et al. 2021). En annen mRNA-vaksine mot COVID-19 ble utviklet av kinesiske forskere og brukte termostabil (minst én uke ved 25 grader) RBD-kodende mRNA (Brüssow 2020). I en annen undersøkelse har CureVac blitt brukt som den konstruerte full-lengde S-protein-mRNA-plattformen for utvikling av COVID-19-vaksine med substitutter i to prolinrester for å forbedre proteinstabiliteten (Rauch et al. 2021). Ruklanthi de Alwis et al. (2021) utviklet en selvtranskriberende og replikerende mRNA-vaksine for COVID-19 ved bruk av S-protein i full lengde og et replikon (de Alwis et al. 2021) med potensiale for bruk som en effektiv og sikker enkeltdosevaksine for å bekjempe covid- 19 (de Alwis et al. 2021). På samme måte ble et selvforsterkende RNA som koder for COVID-19 S-proteinet innkapslet i en lipid-nanopartikkel (LNP) brukt og skisserte høye titere av antistoff- og cellulære immunresponser (McKay et al. 2020). Noen DNA-vaksinkandidater som S-, N- og M-proteinbaserte vaksiner er utviklet for SARS-CoV. Blant disse har den S-proteinbaserte DNA-vaksinen effektivt indusert en beskyttende effekt mot COVID-19-infeksjon, muligens på grunn av S-proteinets vitale rolle i reseptorbinding (Zhao et al. 2020). INO-4800 er en COVID-19 DNA-vaksinekandidat som koder for COVID-19 S-proteinet (Sarwar et al. 2020; Smith et al. 2020). De prekliniske resultatene hos mus og marsvin viste humorale og cellulære immunresponser. I fase I kliniske studier ble to doser INO-4800 injisert via ID-banen, supplert med EP via CELLECTRA®2000 Inovio Pharmaceutical (Diehl et al. 2013; Amante et al. 2015). En fullstendig immunrespons ble forklart basert på antistoff- og cellulære responser hos 34 av de 36 deltakerne i deres fase I kliniske studie. Ti rapporterte bivirkninger (AE) ble observert uten noen alvorlige bivirkninger (SAE) (fase). En fase I/II klinisk studie ble lansert for å evaluere immunogenisiteten, sikkerheten og toleransen til INO- 4800 (Tebas et al. 2019). INO-4800 har lignende lagringsforhold (Smith et al. 2020), med håp om enklere distribusjon av vaksine. I tillegg har noen andre grupper av COVID-19 DNA-vaksiner lansert forsøk. I juni 2020 lanserte en fase I og IIa klinisk studie for GX-19 rekruttering. En DNA-vaksine, AG0301-COVID-19, produsert av samarbeidsforsøkene fra Osaka University (Japan), Takaro Bio og AnGes, lanserte rekruttering til fase I og II kliniske studier i juli 2020 for å vurdere dens immunogenisitet og sikkerhet (Speiser og Bachmann 2020). Fase I og II kliniske studier for å evaluere immunogenisiteten og sikkerheten til tre doser ZyCoV-D ble utført (Kumar et al. 2021). Denne orale vaksinen kodet for spikeprotein i plasmid-DNA, dynamisk forsterket i den levende Bifidobacterium longum, en godt anerkjent intestinal probiotisk bakterie. En annen fase I klinisk studie ble lansert for å vurdere CORVax12, en DNA-vaksine som koder for spikeproteinet. Effektiviteten til elektroporert CORVax12 alene eller i kombinasjon med et annet plasmid som koder for interleukin 12 (IL-12) ble undersøkt. En rekke COVID-19 mRNA-vaksiner er under utvikling og har avslørt lovende resultater (Leitner et al. 1999; Croyle et al. 2001). En mangfoldig tilnærming til å utvikle RQ3013-VLP (som koder for S-, E- og M-proteiner) var effektiv in vivo ved bruk av en mRNA-cocktail. Denne mRNA-vaksinen ble integrert med endrede nukleosider og deretter pakket i LNP og avdekket evnen til å fremkalle sterke cellulære og humorale immunresponser hos mus (Le et al. 2020; Lu et al. 2020a). En konstruert arginyl-glycyl-asparaginsyre (RGD) domene DNA-vaksine i to doser på 60 µg ved bruk av elektroporering forbedret effekten i BALB/cJ-mus (Guo et al. 2021). IM + jet-injeksjonen av en DNA-vaksine i en enkeltdose (0,2 mg) kunne immunisere de syriske hamsterene (Brocato et al. 2021). En annen DNA-vaksine som bruker S-proteinet som ble utsatt i tre doser, beskyttet Rhesus-makakene (Yadav et al. 2021). Fusjonen av RBD til hepatitt B-viruset preS1 aminoterminal og IM-injeksjon i tre doser (uke 0, 2 og 4) i C57BL/6-mus provoserte humorale og cellulære immunresponser (Jeong et al. 2021). I tillegg stimulerte IM-injeksjonen av S-proteinplasmid-DNA og S1-underenhet (rekombinant protein) i tre doser ved uke 0, 2 og 8 i Rhesus-makaker de nøytraliserende antistoffene (Prompetchara et al. 2021). IM+EP-injeksjonen av S-protein i tre doser (uke 0, 2 og 4) i ICR-mus stimulerte humorale og cellulære responser (Li et al. 2021). Andre DNA-vaksiner i kliniske studier har inkludert S-protein i fase I/II i juni 2022 (NCT04445389, IM-rute hos voksne i alderen 18–50 år), juli 2021 (NCT04463472, IM-rute hos voksne i alderen 20–60 år), September 2021 (NCT04527081, IM-rute hos voksne på 20–65 år), og fase I (NCT04336410, ID-rute hos 18 år og eldre), februar 2022 (NCT04334980, oral hos voksne med 18 år og eldre) (juni 2021) NCT04591184, IM-rute hos voksne 18–84 år). I tillegg inkluderte mRNA-vaksiner i kliniske studier de i fase II i november 2021 (NCT04515147, IM, 18–60 år), fase II-III i desember 2022 (NCT04368728, IM hos voksne 18–85 år) og fase I i juni 2021 (NCT04566276, IM hos voksne 18–75 år). COVID-eVax var en RBD-basert vaksine som fremkalte tilstrekkelig immunrespons hos mus, ildere og rotter etter 38 dager (Conforti et al. 2022). To (X-19 og GX-19N) DNA-vaksiner som koder for spike- og nukleokapsidproteiner ble evaluert i fase I-studier blant voksne i alderen 19–49 år, og de bindende antistoffene kunne påvises ved den andre vaksinasjonsdosen. Sikkerheten og toleransen til disse vaksinene ble bekreftet, der GX-19N induserte høyere nivåer av T-celler og antistoffresponser (Ahn et al. 2022). En Xcl1-SARS-CoV-2 spikefusjons-DNA-vaksine fremkalte en høyere rate av antistoff- og T-cellemediert respons sammenlignet med et plasmidholdig spikegen enkeltvis in vitro og in vivo (Qi et al. 2022). En nylig bakuloviral COVID-19 Delta DNA-vaksine kunne beskytte 100 % av musene mot COVID-19 (Jang et al. 2023). Et lineært DNA (linDNA) som koder for SARS-CoV-2 RBD (Lin-COVIDeVax) var i stand til å fremkalle antistoff- og T-celleresponser og gi sikkerhet og manglet bivirkninger (Conforti et al. 2023). Tabell 1 representerer kliniske studier og godkjente nukleinsyrebaserte vaksiner mot covid-19. I følge oppdaterte data har 229, 820, 324 personer mottatt covid-19-vaksiner over hele verden, blant dem har de fra afrikanske land hatt lavere vaksinasjonsfrekvens (https://www.usnews.com/news/coronavirus-and -vaccine-news, https://www.bloomberg.com/graph ics/covid-vaccine-tracker-global-distribution/). Følgelig er vaksinasjonsraten assosiert med de økonomiske forholdene i ulike regioner/områder.

Potensielle sikkerhetsproblemer for covid-19-vaksiner

Overvåking av sikkerhet i hver utviklet forebyggende eller profylaktisk vaksine er en av de essensielle aspektene. Bruk av giftige kjemikalier eller cellekultur er ikke nødvendig i produksjonsprosesser for mRNA-vaksine, derfor kjent som en sikker plattform. Den korte produksjonstiden reduserer også risikoen for kontaminering av mikroorganismer (Wang et al. 2020). De vanligste rapporterte effektene inkluderer hodepine, tretthet og andre systemiske alvorlige hendelser, som feber, frysninger, myalgi, oppkast, magesmerter og sjeldne diarérapporter. Det er imidlertid ikke observert dødsfall hos mottakere av mRNA-vaksine (Chapin-Bardales et al. 2021; Skowronski og De Serres 2021). Noen systemiske bivirkninger, som anafylaksi, rapporteres vanligvis hos personer med en historie med allergi og er estimert til 2,5–11,1 tilfeller per million doser (Shimabukuro et al. 2021). Sterk immunrespons hos personer yngre enn andre kan føre til høye systemiske hendelser og flere bivirkninger rapporteres etter injeksjon av en andre vaksinedose sammenlignet med den første dosen (Male 2021; Skowronski og De Serres 2021). I tillegg er smerter på injeksjonsstedet, rødhet og hevelse rapportert som de mest lokale bivirkningene (Anand og Stahel 2021). Basert på tilstrekkelig bevis fra godkjente mRNA-vaksiner inkludert Pfizer/BioNTech og Moderna, er det ikke påvist risiko for spontanaborter i svangerskapet (rate =0%) (Male 2021). Merkbart at DNA-vaksiner er trygge nok, men ikke alltid immunogene; derfor trenger tilstrekkelig immunrespons ytterligere doser. Den humorale immunresponsen har ikke vært konsistent i menneskelige forsøk, mens cellulær immunitet synes mer vanlig. Følgelig er sikkerheten til DNA-vaksiner blant eldre og yngre populasjoner mer gunstig (Ledgerwood et al. 2011; Houser et al. 2018; Carter et al. 2019). Sikkerhetsbekymringene antyder mulig integrering av transfektert DNA i kimlinje og somatiske celler til verten. I disse tilfellene forekommer muligens dysregulering av genuttrykk sammen med flere betydelige mutasjoner. Ikke desto mindre brukes vanligvis bare ekstrakromosomale og mangelfulle kromosomale integreringsplasmider i utvikling av DNA-vaksine. Dessuten forblir de fleste plasmider på administrasjonsstedet (Schalk et al. 2006). En nylig systematisk gjennomgang og metaanalyse viste at mRNA-vaksiner er assosiert med høyere uønskede hendelser sammenlignet med andre plattformer (Kouhpayeh og Ansari 2022). Nylig ble et sjeldent tilfelle av BNT162b2 mRNA-vaksine-assosiert myositt observert hos en 34-år gammel kvinne (Magen et al. 2022). DNA-metylering og tilsvarende epigenetiske endringer forstyrrer også effekten av DNA- og mRNA-vaksiner (Pang et al. 2022). Merkbart flere godkjente nukleinsyrevaksiner (ZyCoV-D, DNA-plasmidvaksine brukt intradermalt, India), BNT162b2 (mRNA, 2 doser, Tyskland), mRNA- 1273 (Moderna, USA, 2 doser), ARCoV (WALVAX, Kina) og kliniske studier inkludert 302-COVID19 (DNA-plasmidvaksine, fase II/III intramuskulær, Japan), INO-4800 (DNA-plasmid, fase II/III, intradermal, Kina), GX{{36 }}N (DNA-vaksine, Genexine, fase II/III), Covigenix VAX-001 (DNA-vaksine, Entos Pharmaceuticals, fase I/II, intramuskulær), COVID-eVax (DNA-vaksine, fase I/II, intramuskulær , Roma) og bacTRL-Spike (DNA-vaksine, fase I, oral, Symvivo) er utviklet (Sheridan 2021; Liu og Ye 2022a). Disse vaksinene har stimulert både humoral og cellulær immunitet bortsett fra GX-19N og AG0302- COVID-19. Noen bivirkninger av covid-19-nukleinsyrebaserte vaksiner inkluderer smerte, lymfadenopati, erytem, ​​rødhet, hevelse, kvalme, tretthet, artralgi, myalgi, feber, hjertestans, hjerneslag, overfølsomhetsreaksjon, alkoholisk leversykdom, Bells parese. , paroksysmal ventrikkelarytmi og død (Norquist et al. 2012; McNeil og DeStefano 2018; Baden et al. 2021; Momin et al. 2021; Liu og Ye 2022b, 2022a).

Fenyletanolglykosid er den viktigste aktive komponenten i Cistanche deserticola

Konklusjon

Den raske COVID-19-pandemien har skapt et udekket behov for å utvikle effektive vaksiner for å forhindre sykdommen. Selv om DNA-vaksiners immunogenisitet hos dyr er akseptabel, er klinisk validering berettiget hos mennesker. RNA-vaksiner kan gi passende immunologiske egenskaper og betydelige fordeler i forhold til DNA-vaksiner. Problemer med den ustabile naturen til RNA har blitt løst ved å bruke passende lagringsmetoder og formuleringer for å stoppe nedbrytningen. Vaksinesikkerhet er også viktig og kan ikke kompromitteres for større effektivitet. Det finnes godkjente nukleinsyrebaserte vaksiner for å kontrollere spredningen av covid-19. Oppfølgingen av deltakere skal videreføres. Det er behov for læring om bivirkningene til nukleinsyrebasert covid-19-vaksine. Videre er revurdering av vaksiner og utvikling av polyvalente vaksiner, eller pan-koronavirusstrategier, lovende med tanke på gjenoppkomsten av nye varianter av bekymring.

Tabell 1 Kliniske studier og godkjente covid-19-vaksiner og deres egenskaper

Referanser

Abdelmageed MI et al (2020) Design av en multiepitopbasert peptidvaksine mot E-proteinet til humant COVID-19: en immuninformatikktilnærming. Int J Biomed Clin Anal. https://doi.org/ 10.1155/2020/2683286

Abera G, Berhanu G, Tekewe A (2012) Ribozymes: nukleinsyreenzymer med potensielle farmasøytiske anvendelser: en gjennomgang. Pharmacophore 3:164–178

Ahn JY et al (2022) Sikkerhet og immunogenisitet til to rekombinante DNA COVID-19-vaksiner som inneholder de kodende regionene til piggen eller piggen og nukleokapsidproteinene: en midlertidig analyse av to åpne, ikke-randomiserte fase 1-forsøk hos friske voksne. Lancet Microbe 3:e173–e183. https://doi.org/10.1016/ S2666-5247(21)00358-X

Aihara H (1998) Miyazaki J. genoverføring til muskel ved elektroporasjon in vivo. Nat Biotechnol 16:867–870. https://doi.org/10. 1038/nbt0998-867

Alberer M et al (2017) Sikkerhet og immunogenisitet av en mRNA-rabiesvaksine hos friske voksne: en åpen, ikke-randomisert, prospektiv, første-i-menneskelig klinisk fase 1-studie. The Lancet 390:1511–1520.https://doi.org/10.1016/s0140-6736(17)31665-3

Amante DH et al (2015) Hudtransfeksjonsmønstre og ekspresjonskinetikk for elektroporasjonsforbedret plasmidlevering ved bruk av CELLECTRA-3P, en bærbar neste generasjons dermal elektroporasjonsenhet. Human Gen Therapy Methods 26:134–146. https:// doi.org/10.1089/hgtb.2015.020

Anand P, Stahel VP (2021) Gjennomgå sikkerheten til Covid-19 mRNA-vaksiner: en gjennomgang. Pasient Saf Surg 15:20. https://doi.org/10.1186/ s13037-021-00291-9

Baden LR et al (2021) Effektiviteten og sikkerheten til mRNA-1273 SARS CoV-2-vaksinen. N Engl J Med 384:403–416. https://doi.org/10. 1056/NEJMoa2035389

Becker PD, Noerder M, Guzmán CA (2008) Genetisk immunisering: bakterier som DNA-vaksineleveringsbærere. Hum Vaccin 4:189–202.https://doi.org/10.4161/hv.4.3.6314

Borah P et al (2021) Perspectives on RNA-vaksinekandidater for COVID-19. Foran Mol Biosci. https://doi.org/10.3389/fmolb. 2021.635245

Brocato RL et al (2021) Beskyttende effekt av en SARS-CoV-2 DNA-vaksine i villtype og immunsupprimerte syriske hamstere. Npj Vaccines 6:1–7.https://doi.org/10.1038/s41541-020-00279-z

Brüssow H (2020) Arbeider mot en covid{1}}-vaksine. Environ Microbiol 22:4071–4084. https://doi.org/10.1111/1462-2920. 15225

Buchholz UJ et al (2004) Bidrag fra de strukturelle proteinene til alvorlig akutt respiratorisk syndrom koronavirus til beskyttende immunitet. Proc Natl Acad Sci 101:9804–9809. https://doi.org/ 10.1073/pnas.0403492101

Campbell JD (2017) Development of the CpG adjuvant 1018: a case study. Vaksineadjuv. https://doi.org/10.1007/ 978-1-4939-6445-1-2

Carter C et al (2019) Sikkerhet og immunogenisitet av sesongmessig infuenza hemagglutinin DNA-vaksine etterfulgt av trivalent inaktivert vaksine administrert intradermalt eller intramuskulært hos friske voksne: En åpen randomisert fase 1 klinisk studie. PLoS One 14:e0222178. https://doi.org/10.1371/ journal.pone.0222178

Chapin-Bardales J, Gee J, Myers T (2021) Reaktogenisitet etter mottak av mRNA-baserte COVID-19-vaksiner. JAMA. https://doi. org/10.1001/jama.2021.5374

Chen Y, Cheng L, Lian R, Song Z, Tian J (2021) COVID-19-vaksineforskning fokuserer på sikkerhet, effekt, immunoinformatikk og vaksineproduksjon og -levering: en bibliometrisk analyse basert på VOSviewer. Biosci-trender. https://doi.org/10.5582/bst.2021. 01061

Choi Y, Chang J (2013) Virale vektorer for vaksineapplikasjoner. Clin Exp Vaccine Res 2:97.https://doi.org/10.7774/cevr.2013.2.2.97

Chowdhury MA, Hossain N, Kashem MA, Shahid MA, Alam A (2020) Immunrespons in COVID-19: A review. J Infisere folkehelsen. https://doi.org/10.1016/j.jiph.2020.07.001

Coban C, Kobiyama K, Jounai N, Tozuka M, Ishii KJ (2013) DNA-vaksiner: en enkel DNA-sensingsak? Hum Vaccin Immunother 9:2216–2221.https://doi.org/10.4161/hv.25893

Conforti A et al (2022) COVID-eVax, en elektroporert DNA-vaksinekandidat som koder for SARS-CoV-2 RBD, fremkaller beskyttende respons i dyremodeller. Mol Ther 30:311–326. https://doi. org/10.1016/j.ymthe.2021.09.011

Conforti A, Sanchez E, Salvatori E, Lione L, Compagnone M, Pinto E et al (2023) En lineær DNA-vaksinekandidat som koder for SARS CoV-2-reseptorbindingsdomenet fremkaller kraftig immunrespons og nøytraliserende antistoffer hos huskatter. Mol Ther-Metho Clinic Dev 28:238–248. https://doi.org/10.1016/j.omtm.2022. 12.015

Croyle M, Cheng X, Wilson J (2001) Utvikling av formuleringer som forbedrer fysisk stabilitet av virale vektorer for genterapi. Gene Ther 8:1281–1290.https://doi.org/10.1038/sj.gt.3301527

Cu Y et al (2013) Forbedret levering og styrke av selvforsterkende mRNA-vaksiner ved elektroporering in situ. Vaksiner 1:367–383. https://doi.org/10.3390/vaccines1030367