Del 1: Magnesiumutstrømning fra Drosophila Kenyon-celler er kritisk for normal og diettforbedret langtidshukommelse

for mer informasjon:Ali.ma@wecistanche.com

Vennligst klikk her til del 2

Yanying Wu1, Yosuke Funato2, Eleonora Meschi1, Kristijan D Jovanoski1, Hiroaki Miki2, Scott Waddell1*

1Centre for Neural Circuits and Behaviour, University of Oxford, Tinsley Building, Oxford, Storbritannia; 2Department of Cellular Regulation, Research Institute for Microbial Diseases, Osaka University, Suita, Japan

Abstrakt kosttilskudd av magnesium (Mg2 pluss) kan forbedrehukommelsehos unge og gamle rotter.Hukommelse-økende kapasitet ble i stor grad tilskrevet økninger i hippocampus synaptisk tetthet og forhøyet ekspresjon av NR2B-underenheten til NMDA-type glutamatreseptor. Her viser vi at Mg2 pluss fôring også forbedrer langsiktighukommelsei Drosophila. Normal og Mg2 pluss - forbedret fluehukommelsevirker uavhengig av NMDA-reseptorer i soppkroppen og krever i stedet ekspresjon av en konservert CNNM-type Mg2 pluss -efflux-transportør kodet av det uutvidede (uex) genet. UEX inneholder et antatt syklisk nukleotidbindende homologidomene og dets mutasjon skiller en viktig rolle for uex fra en funksjon ihukommelse. Dessuten er UEX-lokalisering i Kenyon-celler (KC-er) i soppkroppen endrethukommelse-defekte fluer som har mutasjoner i cAMP-relaterte gener. Funksjonell avbildning antyder at UEX-avhengig effluks er nødvendig for langsom rytmisk vedlikehold av KC Mg2 plus. Vi foreslår at regulert neuronal Mg2 pluss effluks er kritisk for normal og Mg2 pluss-forsterkethukommelse.

Klikk for åCistanche vitaminbutikk og Cistanche for minne

Introduksjon

Magnesium (Mg2 pluss) spiller en kritisk rolle i cellulær metabolisme og anses å være en essensiell kofaktor for mer enn 350 enzymer (Romani og Scarpa, 2000; Vink og Nechifor, 2011). Som et resultat er endringer av Mg2 pluss homeostase assosiert med et bredt spekter av kliniske tilstander, inkludert de som påvirker nervesystemet, slik som glaukom (DeToma et al., 2014), Parkinsons sykdom (Hermosura et al., 2005; Hermosura og Garruto, 2007; Lin et al., 2014; Shindo et al., 2016), Alzheimers sykdom (Andrasi et al., 2000; Andra´si et al., 2005; Cilliler et al., 2007; Durlach et al. ., 1997; Glick, 1990; Lemke, 1995; Chui et al., 2011; Vural et al., 2010), angst (Sartori et al., 2012), depresjon (Whittle et al., 2011; Murck, 2002; Murck, 2013; Rasmussen et al., 1990; Ghafari et al., 2015), og utviklingshemming (Arjona et al., 2014).

Kanskje overraskende kan øke hjernens Mg2 pluss gjennom kosthold forbedre nevronal plastisitet oghukommelseytelsen til unge og eldre gnagere, målt i en rekke adferdsoppgaver (Slutsky et al., 2010; Landfield og Morgan, 1984; Mickley et al., 2013; Abumaria et al., 2013). I tillegg reduserte forhøyet Mg2 pluss kognitive underskudd i en musemodell av Alzheimers sykdom (Li et al., 2013) og økte utryddelsen av fryktminner (Abumaria et al., 2011). Disse tilsynelatende gunstige effektene har ført til forslaget om at kosttilskudd Mg2 pluss kan ha terapeutisk verdi for pasienter med en rekkehukommelse-relaterte problemer (Billard, 2011).

Til tross for et stort antall potensielle steder for Mg2 pluss handling i hjernen, erhukommelse-forbedrende egenskap hos gnagere har i stor grad blitt tilskrevet økninger i hippocampus synaptisk tetthet og aktiviteten til N-metyl-D-aspartat glutamatreseptorer (NMDAR). Ekstracellulær Mg2 pluss blokkerer kanalporen til NMDAR og hemmer derved passasjen av andre ioner (Mayer et al., 1984; digest Det velkjente ordtaket "du er hva du spiser" oppsummerer perfekt konseptet om at kostholdet vårt kan påvirke både vår mentale og fysisk helse. Vi vet at mat som er bra for hjertet, som nøtter, fet fisk og bær, også er bra for hjernen. Vi vet også at vitaminer og mineraler er avgjørende for god helse generelt. Men er det noen bevis at økt inntak av spesifikke vitaminer eller mineraler kan bidra til å øke hjernekraften din?

Selv om det kan høres nesten for godt ut til å være sant, er det noen bevis på at dette er tilfelle for minst ett mineral, magnesium. Studier på gnagere har vist at tilsetning av magnesiumtilskudd til mat forbedrer hvor godt dyrene utfører hukommelsesoppgaver. Både unge og gamle dyr har godt av ekstra magnesium. Selv eldre gnagere med en tilstand som ligner på Alzheimers sykdom viser mindrehukommelsetap når du får magnesiumtilskudd. Men hva med andre arter?

Wu et al. viser nå at magnesiumtilskudd også øker minneytelsen hos fruktfluer. En gruppe fluer ble fôret med standard maismel i flere dager, mens den andre gruppen fikk maismel supplert med magnesium. Begge gruppene ble deretter opplært til å assosiere en lukt med en matbelønning. Fluer som hadde fått ekstra magnesium viste seg bedrehukommelsefor lukten ved testing 24 timer etter trening.

Wu et al. viser at magnesium blir bedrehukommelsei fluene via en annen mekanisme enn den som er rapportert tidligere for gnagere. Hos gnagere økte magnesium nivåene av et reseptorprotein for en hjernekjemikalie kalt glutamat. I fruktfluer derimothukommelseboost var avhengig av et protein som transporterer magnesium ut av nevronene. Mutante fluer som manglet denne transportøren viste hukommelsessvekkelser. I motsetning til vanlige fluer, viste de uten transportør ingen hukommelsesforbedring etter å ha spist magnesiumanriket mat. Resultatene tyder på at transportøren kan hjelpe til med å justere magnesiumnivået inne i hjernecellene som svar på nevral aktivitet.

Mennesker produserer fire varianter av denne magnesiumtransportøren, hver kodet av et annet gen. En av disse transportørene har allerede vært involvert i hjernens utvikling. Funnene til Wu et al. tyder på at transportørene også kan virke i den voksne hjernen for å påvirke kognisjon. Ytterligere studier er nødvendig for å teste om målretting av magnesiumtransportøren til slutt kan holde lovende for behandlinghukommelsesvekkelser.

Bekkers og Stevens, 1993; Jahr og Stevens, 1990; Nowak et al., 1984). Viktigere er at tidligere nevronal depolarisering, drevet av andre transmitterreseptorer, er nødvendig for å frigjøre Mg2 pluss-blokken på NMDAR og tillate glutamat-styrt Ca2 pluss tilstrømning. NMDAR spiller derfor en viktig rolle i nevronal plastisitet som en potensiell hebbisk tilfeldighetsdetektor. Akutt økning av ekstracellulær Mg2 pluss konsentrasjon ([Mg2 pluss]e) innenfor det fysiologiske området (0,8–1,2 mM) kan motvirke induksjon av NMDAR-avhengig langsiktig potensering (Dunwiddie og Lynch, 1979; Malenka et al., 1992; Malenka og Nicoll, 1993; Slutsky et al., 2004). I motsetning til dette fører økning av [Mg2 pluss]e i flere timer i neuronale kulturer til forbedring av NMDAR-medierte strømmer og tilrettelegging av uttrykket av LTP (Slutsky et al., 2004). De forsterkende effektene av økt [Mg2 pluss]e ble også observert in vivo i hjernen til rotter matet med Mg2 pluss -L-treonat (Slutsky et al., 2010). Hippocampale nevronale kretser gjennomgår homeostatisk plastisitet (Turrigiano, 2008) for å imøtekomme den økte [Mg2 pluss]e ved å oppregulere uttrykket av NR2B-underenhetsholdige NMDARer (Slutsky et al., 2004; Slutsky et al., 2010). Den høyere tettheten av hippocampussynapser med NR2B-holdige NMDARer antas å kompensere for den kroniske økningen i [Mg2 pluss]e ved å forsterke NMDAR-strømmer under burst-firing. Til støtte for denne modellen viser mus som er genetisk konstruert for å overuttrykke NR2B forbedret hippocampus LTP og atferdsmessighukommelse(Tang et al., 1999).

Olfactoryhukommelsei Drosophila involverer en heterosynaptisk mekanisme drevet av forsterkning av dopaminerge nevroner, noe som resulterer i presynaptisk depresjon av kolinerge forbindelser mellom luktaktivert soppkropp (MB) Kenyonceller (KCs) og nedstrøms soppkroppsutgangsneuroner (MBONs) (Schwaerzel et al., 2003., 2003. ; Aso et al., 2010; Aso et al., 2012; Claridge-Chang et al., 2009; Burke et al., 2012; Liu et al., 2012; Plac¸ais et al., 2013; Owald et al. ., 2015; Hige et al., 2015; Barnstedt et al., 2016; Parisse et al., 2016; Aso et al., 2014; Oswald og Waddell, 2015). I tillegg formidles luktinformasjon til KCs ved kolinerg overføring fra luktprojeksjonsnevroner (Yasuyama et al., 2002; Leiss et al., 2009). Selv om det kan tenkes at glutamat leveres til MB-nettverket via en ennå ikke identifisert rute, er det foreløpig ingen åpenbar plassering for NMDAR-avhengig plastisitet i den kjente arkitekturen til de kolinerge input- eller outputlagene (Barnstedt et al., 2016) ). Fluen gir derfor en potensiell modell for å undersøke andre mekanismer som kosttilskudd Mg2 pluss kan forbedrehukommelse.

De forsterkende effektene av dopamin avhenger av dopaminreseptoren Dop1R D1- (Kim et al., 2007; Qin et al., 2012; Handler et al., 2019), som er positivt koblet med cAMP-produksjon (Tomchik) og Davis, 2009; Boto et al., 2014). Dessuten identifiserte tidlige studier i Drosophila at henholdsvis dunce- og rutabaga-kodet cAMP-fosfodiesterase og type I Ca2 pluss-stimulert adenylatcyklase er avgjørende for lukten.hukommelse(Dudai et al., 1976; Byers et al., 1981; Dudai og Zvi, 1984; Chen et al., 1986; Livingstone et al., 1984; Levin et al., 1992). Studier i pattedyrceller har vist at hormoner eller midler som øker cellulært cAMP-nivå ofte fremkaller en betydelig Na pluss-avhengig ekstrudering av Mg2 pluss inn i det ekstracellulære rommet (Romani og Scarpa, 1990b; Romani og Scarpa, 1990a; Romani og Scarpa, 2000; Vink og Nechifor, 2011; Vormann og Gu¨nther, 1987). Det er imidlertid uklart om Mg2 pluss ekstrudering spiller noen rolle i minneprosessering.

Her viser vi at Drosophila langsiktighukommelse(LTM) kan forbedres med kosttilskudd Mg2 pluss tilskudd. Vi finner at det uforlengede (uex) (Maeda, 1984; Coulthard et al., 2010) genet, som koder for en funksjonell flueortolog av pattedyret Cyclin M2 Mg2 pluss -efflux transporter (CNNM) proteiner, er kritisk forhukommelse-forbedrende egenskapen til Mg2 pluss. UEX-funksjon i MB KC-er er nødvendig for LTM, og funksjonell restaurering av uex avslører at MB er nøkkelstedet for Mg2 pluss-avhengig minneforbedring. Kronisk endring av cAMP-metabolisme ved å introdusere mutasjoner i dnc- eller rut-genene endrer den cellulære lokaliseringen av UEX. Dessuten kobler mutering av det konserverte sykliske nukleotidbindende homologi (CNBH) domenet i UEX en viktig rolle for uex fra dens funksjon i minnet. UEX-drevet Mg2 pluss efflux er nødvendig for sakte rytmisk vedlikehold av KC Mg2 pluss nivåer, noe som antyder en potensiell rolle for Mg2 pluss fluks i minnet.

Resultater

Mg2 pluss fôring forbedrer LTM av villtype fluer

Tidligere studier rapporterte at fôring av rotter med mat som inneholder en høy konsentrasjon av Mg2 pluss - forbedret deres lærings- og hukommelsesevne (Slutsky et al., 2010; Landfield og Morgan, 1984; Abumaria et al., 2011; Mickley et al., 2013; Abumaria et al., 2013). Vi testet derfor om lignende effekter finnes hos fluer ved å mate dem med mat som inneholder en høy konsentrasjon av Mg2 pluss før trening. Overraskende nok viste villtypefluer som ble matet i 4 dager før trening med mat supplert med ekstra magnesiumklorid (MgCl2) betydelig forbedret 24-timers hukommelsesytelse. Minneforbedring avhenger av konsentrasjon og var maksimal når maten ble supplert med 80 mM MgCl2 (Figur 1A). Umiddelbar minneytelse var ikke åpenbart forbedret (figur 1B). Den forsterkende effekten av MgCl2 ble også observert hos fluer matet med magnesiumsulfat (MgSO4), men ikke kalsiumklorid (CaCl2) (figur 1C). I tillegg resulterte fôring av fluer i 4 dager med mat som inneholdt mellom 5 og 80 mM strontiumklorid (SrCl2) i høye nivåer av dødelighet, og fluer som overlevde 5 mM SrCl2-fôring viste ikke forbedret umiddelbar eller 24 timers minneytelse (data ikke vist) . De minneforbedrende effektene kan derfor spesifikt tilskrives kosttilskudd av divalent Mg2 pluss.

Mg2 pluss -forbedret minne er uavhengig av NMDAR i soppkroppene

Siden magnesium-L-treonat forbedret hukommelse hos rotter var korrelert med en oppregulering av hippocampus NR2B-underenhetsholdige NMDARer (Slutsky et al., 2010), testet vi for endringer i glutamatreseptoruttrykk i fluer matet med MgCl2. RT-qPCR-analyser avslørte ikke en signifikant forskjell i forekomsten av mRNA for de antatte NMDA (Nmdar1, Nmdar2), AMPA (GluRIA) eller kainat-type (GluRIIA) reseptorer i hoder tatt fra fluer matet i 4 dager med 80 mM MgCl2 versus de som ble matet med 1 mM MgCl2 (figur 1D).

Vi testet deretter direkte om Mg2 pluss-forbedret minne krevde NMDAR-funksjon, ved å slå ned ekspresjonen av Nmdar1- eller Nmdar2-genene ved å bruke transgen UAS-drevet RNA-interferens

Figur 1. Kosttilskudd Mg2 pluss tilskudd forbedrer Drosophilas langtidshukommelse. (A) Villtypefluer ble trent og testet for 24 timers appetittvekt etter 1–5 dager med ad libitum fôring på mat supplert med Mg2 pluss. Hukommelsen ble betydelig forbedret hos fluer som ble matet i 4 dager med 80 mM MgCl2, sammenlignet med de som ble matet med 1 mM. 80 mM MgCl2 ga marginalt høyere ytelse enn 50 mM eller 100 mM og ble derfor ansett som optimal (stjerner angir p<0.05, t-test="" between="" 1="" mm="" and="" 80="" mm="" groups="" for="" each="" time="" point,="" n="6–8)." (b)="" 4="" days="" of="" 80="" mm="" mgcl2="" food="" did="" not="" enhance="" immediate="" memory.="" (c)="" appetitive="" 24="" hr="" memory="" was="" enhanced="" by="" feeding="" wild-type="" flies="" for="" 4="" days="" with="" mgcl2="" and="" mgso4,="" but="" not="" cacl2.="" asterisks="" denote="" significant="" differences=""><0.05, anova,="" n="6)" between="" mg2+="" fed="" and="" plain="" groups.="" (d)="" rt-qpcr="" showed="" no="" significant="" differences="" in="" glutamate="" receptor="" mrna="" expression="" between="" 1="" mm="" and="" 80="" mm="" fed="" flies="" (t-test,="" n="5)." (e)="" c739-gal4;="" uas-magfret-1="" flies="" were="" fed="" for="" 4="" days="" on="" food="" supplemented="" with="" mg2+.="" brains="" were="" dissected="" and="" fixed="" and="" a="" fluorescence="" emission="" ratio="" measurement="" (citrine/cerulean)="" was="" taken="" as="" an="" indicator="" of="" [mg2+]i.="" the="" magfret="" signal="" was="" significantly="" greater="" in="" the="" ab="" lobes="" of="" flies="" fed="" with="" 80="" mm="" mgcl2="" than="" those="" fed="" with="" 1="" mm="" mgcl2=""><0.05, t-test,="" n="52–60)." unless="" otherwise="" noted,="" all="" data="" are="" mean="" ±="" standard="" error="" of="" the="" mean="" (sem).="" asterisks="" denote="" significant="" differences=""><0.05), individual="" data="" points="" displayed="" as="" open="">

Nettversjonen av denne artikkelen inkluderer følgende figurtillegg for figur 1:

Figur supplement 1. Nedbrytning av N-metyl-D-aspartat glutamatreseptor (NMDAR) i sopplegemer svekker ikke Mg2 pluss -forbedret hukommelse.

(RNAi)-konstruksjoner (Dietzl et al., 2007; Perkins et al., 2015). Av de to uavhengige UAS-Nmdar1R-NAi- og fire UAS-Nmdar2RNAi-linjene vi testet, viste bare én Nmdar1RNAi (BDSC 25941)-linje, når drevet i alle nevroner av neuronalt Synaptobrevin (nSyb)-GAL4, betydelig redusert 24-timers minneytelse, som sammenlignet med heterozygote kontrollfluer (Figur 1—Figur supplement 1A). I motsetning til dette, svekket ikke mer selektiv ekspresjon av denne UAS-Nmdar1RNAi i LTM-relevante ab KC-er ved bruk av c739-GAL4 signifikant 24-timers minneytelse (figur 1 – figurtillegg 1B). Dessuten beholdt fluer som uttrykker Nmdar1RNAi i ab-nevroner robust Mg2 pluss-forbedret minne (figur 1-figur supplement 1C). Disse resultatene tyder på at Mg2 pluss-forbedret hukommelse ikke endrer uttrykket av glutamatreseptorer, eller krever NMDAR-funksjon i ab KCs.

Mg2 pluss-konsentrasjonen i ab-neuroner er forhøyet hos fluer matet med høy Mg2 pluss. Vi brukte MagFRET, den første genetisk kodede fluorescerende Mg2 plus-sensoren (Lindenburg et al., 2013), for å teste om Mg2 pluss fôring endret den intracellulære Mg2 pluss-konsentrasjonen ([Mg2) pluss ]i). Vi konstruerte fluer med et UAS-MagFRET-1-transgen og kombinerte det med c739-GAL4 for å uttrykke MagFRET- 1 i ab KCs. Vi sammenlignet FRET-signalene i fikserte hjerner fra c739; UAS-MagFRET-1-fluer matet med enten 1 mM eller 80 mM MgCl2-fôr i 4 dager. MagFRET-signalet var signifikant høyere i både a- og b-sikkerhetene til ab KCs til fluer matet med 80 mM, enn i de som ble matet med 1 mM (figur 1E). Dette resultatet indikerer at Mg-mating øker neuronal [Mg2 pluss]i. Gitt affiniteten til MagFRET-1 (Kd=148 mM) og ~50 prosent økning i FRET-signal ved Mg2 pluss-binding (Lindenburg et al., 2013), anslår vi at ~8 prosent forbedring av MagFRET-signalet målt i fluer matet 80 mM MgCl2 tilsvarer omtrent en 50 mM økning av ab KC [Mg2 pluss ]i i gjennomsnitt.

Den uutvidede kodede CNNM-type Mg2 plus-transportøren har en rolle i minnet

Vi identifiserte unextended (uex; Maeda, 1984; Coulthard et al., 2010) som en genforandrende appetittvekkende olfaktorisk LTM, forsterket med en sukrosebelønning. Fluer med uexMI01943 MiMIC-innsetting (Venken et al., 2011) viste en sterk defekt i 24-timers hukommelsen, men deres ytelse umiddelbart etter trening var umulig å skille fra villtypekontroller. Mer detaljert analyse av uexMI01943-fluer avslørte et jevnt forfall av hukommelse som først ble betydelig forskjellig fra villtypefluer 12 timer etter trening (figur 2A). Ingen hukommelsesfeil var tydelig i heterozygote uexMI01943/plus-fluer, noe som viser at denne antatte kjønnsallelen er recessiv.

uex vekket oppmerksomheten vår fordi det er enkeltflueortologen til de fire humane CNNM-genene som koder for Mg2 pluss-transportører (Ishii et al., 2016), og den inneholder også et antatt CNBH-domene som er strukturelt relatert til de i syklisk nukleotid-styrt. kanaler (Zagotta et al., 2003; Flynn et al., 2007; Kesters et al., 2015). Justering av UEX-sekvensen på 834 aminosyrer med CNNM1-4 avslører spesielt høy sekvenskonservering med CNNM2 og CNNM4 i DUF21-, CBS-paret og CNBH-domenene (figur 2 – figurtillegg 1A–C). Vi antok derfor at UEX hadde potensialet til å koble de minneforbedrende effektene av kosttilskudd Mg2 pluss med cAMP-avhengig nevronal plastisitet.

Although uexMI01943 is assigned to the uex gene, the MiMIC element is annotated to lie 17 kb downstream of the uex coding region (Venken et al., 2011; Figure 2B). RYa (Yoon et al., 2016) is the next nearest gene to uexMI01943 but is >230 kb lenger unna. Vi bekreftet først MiMIC-plasseringen ved invers PCR (Attrill et al., 2016). Viktigere, ingen ekstra MiMIC-innsetting ble oppdaget i disse fluene. Vi testet deretter om uexMI01943 var ansvarlig for minnedefekten ved nøyaktig å fjerne MiMIC-elementet ved Minos transposase-mediert eksisjon (Arca et al., 1997; figur 2 - figur supplement 2A og B). MiMIC-fjerning i uexMI01943.ex1 og uexMI01943.ex2 fluer gjenopprettet normal 24-timers minneytelse, noe som viser at MiMIC-innsettingen er nødvendig for uexMI01943hukommelsedefekt (figur 2C).

Både qRT-PCR av mRNA og western blot-analyse av proteinekstrakter fra fluehoder klarte ikke å avsløre en signifikant forskjell i uex/UEX-uttrykk i uexMI01943-fluer. Vi brukte derfor CRISPR for å introdusere et stoppkodon i det femte kodende eksonet til uex-lokuset (figur 2B og figur 2 – figur supplement 2C). Fluer som var homozygote for den resulterende uexD-mutasjonen var ikke levedyktige som voksne, og døde på larvestadiet. I kontrast var heterozygote uexMI01943/uexD-fluer levedyktige, men deres 24-timers appetittvekkendehukommelsevar betydelig svekket (figur 2D). Disse dataene viser at uex er et essensielt gen og at uexMI01943 er en levedyktig hypomorf allel av uex.

Vi testet også aversivenhukommelseytelsen til uexMI01943 mutante fluer. Homozygote uexMI01943 fluer utstilt umiddelbarthukommelsesom ikke kunne skilles fra det til heterozygote og villtype kontroller (figur 2E). Imidlertid ble deres 24-timers hukommelse, dannet etter enten fem forsøk med aversiv avstandstrening (Tully et al., 1994; Jacob og Waddell, 2020), eller ett forsøk med fastetilrettelagt trening (Hirano et al., 2013), betydelig svekket. (Figur 2E). Disse eksperimentene antyder at uexMI01943-fluer er mer generelt kompromittert i deres evne til å danne LTM. Med mindre annet er spesifisert, alle etterfølgende analyser avhukommelsei denne studien bruker appetittfull sukker-belønnet condition.

Figur 2. uexMI01943 mutante fluer har defekte langsiktigehukommelse(LTM). (A) Appetitiv hukommelsesbevaring ble testet på forskjellige tidspunkter etter trening. Fluer homozygote for uexMI01943 viste en signifikant defekt i hukommelsen fra 12 timer etter trening, sammenlignet med ytelsen til heterozygote uexMI01943/plus og villtype kontrollfluer (s.<0.05, anova,="" n="6–10)." (b)="" the="" uex="" locus="" lies="" on="" chromosome="" 2r="" between="" 3,900,285="" and="" 3,949,425="" (light="" blue="" bar).="" the="" four="" alternate="" uex="" transcripts,="" uex-re,="" uex-rg,="" uex-rh,="" and="" uex-rf,="" all="" encode="" the="" same="" protein.="" the="" uexmi01943="" mimic="" (blue="" triangle)="" resides="" ~17="" kb="" downstream="" of="" the="" uex="" coding="" region.="" the="" crispr/cas9="" edited="" uexd="" allele="" replaces="" a="" 3047="" bp="" fragment,="" including="" exon="" 7="" of="" uex="" with="" a="" stop="" signal="" (termination="" codon="" in="" all="" three="" reading="" frames)="" and="" a="" gfp="" cassette,="" truncating="" the="" uex="" reading="" frame="" (dark="" blue="" bar).="" (c)="" precise="" excision="" of="" the="" uexmi01943="" mimic="" restores="" normal="" 24="" hr="" memory="" to="" uexmi01943.ex1="" and="" uexmi01943.ex2="" flies=""><0.05, anova,="" n="8–11)." (d)="" uexd="" fails="" to="" complement="" the="" 24="" hr="">hukommelsedefekt på uexMI01943 (s<0.05, anova,="" n="6–8)." (e)="" flies="" homozygous="" for="" uexmi01943="" showed="" a="" significant="" defect="" in="" aversive="" ltm,="" as="" figure="" 2="" continued="" on="">

Figur 2 fortsatte

sammenlignet med ytelsen til heterozygote uexMI01943/plus og villtype kontrollfluer (p<0.05, anova,="" n="8–12)." an="" ltm="" defect="" was="" also="" observed="" following="" five="" cycles="" of="" aversive="" spaced="" training="" and="" a="" 16="" hr="" fasting="" facilitated="" one-cycle="" training="" protocol.="" immediate="" aversive="">hukommelsevar upåvirket i uexMI01943 homozygote mutantfluer.

Nettversjonen av denne artikkelen inkluderer følgende kildedata og figurtillegg for figur 2:

Kildedata 1. Tabell over sukker- og luktsensoriske skarphetskontroller for alle atferdseksperimenter i dette manuskriptet.

Figurtillegg 1. Konservering av UEX med dets ortologer.

Figurtillegg 2. Konstruksjonsskjemaer for uex Minos eksisjon og opprettelse av uexD-allelen.