DEL 2 Echinacosid hemmer glutamatfrigjøring ved å undertrykke spenningsavhengig Ca2 pluss inngang og proteinkinase C i rottecerebrokortikale nerveterminaler

For mer informasjon vennligst kontakt:Joanna.jia@wecistanche.com

KLIKK HER FOR DEL 1

3. Diskusjon

I denne studien, echinacoside, en aktiv forbindelse iHerba Cistanche, hemmet 4-aminopyridin-fremkalt glutamatfrigjøring i nerveterminalene i rottens hjernebark. De mulige underliggende mekanismene for echinacoside-mediert hemming av glutamatfrigjøring blir videre undersøkt og diskutert her.

Cistanche deserticola har mange effekter, klikk her for å vite mer

3.1. Mekanismer som ligger til grunn for Echinacosid-mediert hemming av glutamatfrigjøring Glutamatfrigjøring

fremkalt av 4-aminopyridin består av to komponenter: en fysiologisk relevant Ca2 pluss-avhengig komponent, som produseres gjennom eksocytose av synaptiske vesikler som inneholder glutamat; og en Ca2 pluss-uavhengig komponent, som stammer fra langvarig depolarisering som forårsaker en membranpotensial-mediert forskyvning av glutamattransportørens steady-state mot utadgående retning, og dermed påvirker cytosolisk glutamatutstrømning [31]. Her har vi observert detechinacosidehemmet ikke signifikant 4-aminopyridin-fremkalt glutamatfrigjøring i nærvær av et Ca2 pluss-fritt medium (Ca2 pluss -uavhengig frigjøring). Videre er det observertechinacoside-mediert hemming av 4-aminopyridin-fremkalt glutamatfrigjøring ble effektivt forhindret av bafilomycin A1 (som tømmer glutamatinnholdet i synaptiske vesikler), men ikke av DL-TBOA (som ikke-selektivt hemmer alle eksitatoriske aminosyretransportersubtyper). Disse resultatene tyder på detechinacosidepåvirker den Ca2 pluss-avhengige eksocytose av glutamatfrigjøring uten å påvirke den Ca2 pluss-uavhengige cytosoliske utstrømningen av glutamat gjennom reversering av den nerveterminale plasmamembranen glutamattransportør. I synaptiske terminaler stabiliserer Na pluss kanalinhibering eller K pluss kanalaktivering membraneksitabilitet og reduserte følgelig fremkalt Ca2 pluss inngang og nevrotransmitterfrigjøring [32,33]. Derfor er den potensielle mekanismen underliggendeechinacoside-mediert glutamatfrigjøringshemming innebærer en reduksjon i synaptosomal eksitabilitet. Denne muligheten er imidlertid uholdbar på grunnlag av to observasjoner: (1) 4-aminopyridin-fremkalt membranpotensialdepolarisering, målt med det membranpotensialsensitive fargestoffet DiSC3(5) ble upåvirket av tilsetning avechinacoside; og (2) echinakosid påvirket ikke 4-aminopyridin-fremkalt Ca2 pluss-uavhengig glutamatfrigjøring, en frigjøringskomponent som kun avhenger av membranpotensialet [31]. Hvis effekten ikke er forårsaket av synaptosomal eksitabilitetsundertrykkelse, kan den manifesteres gjennom en reduksjon i aktiviteten til Cav2.2 (N-type) og Cav2.1 (P/Q-type) Ca2 pluss-kanaler kombinert med glutamateksocytose i nerveterminaler [34–36]. Ved å bruke fura-2 demonstrerer vi detechinacosidereduserer den 4-aminopyridinfremkalte økningen i Ca2 pluss-konsentrasjonen betydelig. I tillegg viser våre data at den hemmende effekten avechinacosidepå 4-aminopyridin-fremkalt glutamat redusert fra 42,4 prosent ˘ 2,3 prosent til 12,1 prosent ˘ 3,9 prosent etter eksponering for en blokker av Cav2.2 (N-type) og Cav2.1 (P/Q-type) Ca2 pluss kanaler. Dessuten har vi observert detechinacosidefortsatte å signifikant hemme 4-aminopyridin-fremkalt glutamatfrigjøring i nærvær av intracellulær Ca2 pluss frigjøringshemmere. Disse resultatene indikerer at den samtidige undertrykkelsen av Cav2.2 (N-type) og Cav2.1 (P/Q-type) Ca2 pluss kanalaktivitet er den potensielle mekanismen som ligger til grunn.echinacoside-mediert glutamatfrigjøringshemming. Den kombinerte aktiveringen av Cav2.2 (N-type) og Cav2.1 (P/Q-type) Ca2 pluss kanalaktivitet kunne imidlertid ikke blokkere handlingen tilechinacosidehelt. Derfor kan andre uidentifiserte typer Ca2 pluss-kanaler eller andre presynaptiske veier være involvert i inhiberingen. For eksempel er GABAA-reseptorer tilstede på presynaptisk nivå, og deres aktivering har vist seg å hemme Ca2 pluss tilstrømning og frigjøring av glutamat [37]. I denne studien blokkerte ikke GABAA-reseptorantagonistene SR95531 og bicuculline echinacosid-mediert hemming av glutamatfrigjøring, noe som antyder at GABAA-reseptorer ikke er involvert i reduksjonen av spenningsavhengig Ca2 pluss-kanalaktivitet og i den påfølgende hemmingen av glutamatfrigjøring.

Ca2 pluss-inngang gjennom spenningsavhengige Ca2 pluss-kanaler aktiverer flere proteinkinaser assosiert med glutamatfrigjøring i nerveterminaler, inkludert mitogenaktivert proteinkinase, proteinkinase C og proteinkinase A. Her viser vi at proteinkinase C-hemmere effektivt antagoniserteechinacoside-mediert hemming av glutamatfrigjøring; ikke desto mindre var den mitogenaktiverte proteinkinasehemmeren PD98059 eller proteinkinase A-hemmeren H89 ineffektive. Dessuten det. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1006 8 av 13 4-aminopyridin-indusert fosforylering av proteinkinase C redusert i synaptosomer etter forbehandling medechinacosidei en konsentrasjon som er effektiv for å hemme frigjøring av glutamat. Derfor er signalveien tilechinacoside-mediert glutamatfrigjøringshemming kan involvere proteinkinase C. Proteinkinase C er et viktig intracellulært signalsystem som er tilstede på presynaptisk nivå og har en avgjørende rolle i nevrotransmittereksocytose. For eksempel blir flere synaptiske proteiner involvert i den synaptiske vesikkelhandelen eller rekruttering og eksocytose, slik som det myristoylerte alaninrike C-kinasesubstratet, fosforylert av proteinkinase C [38,39]. Denne fosforyleringsprosessen kan økes ved depolarisasjonsstimulert Ca2 pluss-inngang, noe som letter glutamatfrigjøring [40]. Derfor kan vi med rimelighet spekulere i at den hemmende effekten avechinacosidepå Ca2 pluss-inngang observert her kan redusere proteinkinase C-aktivitet og følgelig frigjøring av glutamat.

3.2. Terapeutiske implikasjoner

Eksitotoksisitet, en patologisk prosess forårsaket av overdreven glutamatfrigjøring og glutamatreseptoraktivering, er hovedårsaken til nevronal død ved akutte og kroniske hjernesykdommer som hjerneslag, traumatisk hjerneskade, Parkinsons og Alzheimers sykdommer [13,41], og terapeutiske strategier involverer glutamatfrigjøringshemming kan være lovende nevrobeskyttende strategier for behandling av slike sykdommer.Echinacosidehar blitt bekreftet å penetrere blod-hjerne-barrieren (BBB) ​​og viser nevrobeskyttende effekter i forskjellige in vivo-modeller av nevrotoksisitet [8,10–12,42]. Selv om mekanismen for disse nevrobeskyttende effektene ikke er fullstendig forstått, har flere mulige mekanismer blitt rapportert, inkludert inflammatorisk responshemming, mitokondriell funksjonsstabilisering, antioksidasjon, frie radikaler og etterligning av nevrotrofisk funksjon [5,9,12,42]. I den nåværende studien kan echinacosides evne til å redusere glutamatfrigjøring fra nerveterminaler også delvis forklare dens nevrobeskyttende mekanisme. Hvorvidt denne effekten bidrar til det tilsynelatende terapeutiske potensialet til echinacoside ved hjernesykdommer assosiert med glutamateksitotoksisitet, krever imidlertid ytterligere forskning.

4. Materialer og metoder

4.1. Kjemikalier

Fura-2-acetoksymetylester (Fura-2-AM) og 3',3',3'-dipropyltiadikarbocyaninjodid[DiSC3(5)] ble kjøpt fra Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). ω-konotoksin MVIIC, rottlerin,2-[1-(3-dimetylaminopropyl)indol-3-yl]-3-(indol-3-yl)maleimid ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahydro-13-metyl-5-okso-12H-indolo[2,3-a]pyrrolo[3,{ {27}}c]karbazol-12-propaannitril (Go6976) og N-[2-(p bromocinnamylamino)etyl]-5-isokinolinsulfonamid (H89) ble kjøpt fra TocrisBioscience (Bristol, Storbritannia). Echinakosid, dantrolen, DL-treo-beta-benzyl-oksyaspartat (DL-TBOA),7-klor-5-(2-klorfenyl)-1,5-dihydro -4,1-benzotiazepin-2(3H)-on (CGP37157), 2-(2-amino-3-metoksyfenyl)-4 H-1-benzopyran-4-on) (PD98059), etylenglykol bis(-aminoetyleter)-N,N,N1,N1-tetraeddiksyre (EGTA) og alle andre reagenser ble kjøpt fra Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).

4.2. Dyr

To måneder gamle Sprague-Dawley hannrotter ble brukt. Dyrene ble holdt under standardiserte miljøforhold (22 ˘ 1 ˝C; 50 prosent relativ fuktighet; 12 timers lys/mørke-syklus) og tillot ubegrenset tilgang til mat og vann. Dyrene ble drept ved halshugging og hjernebarken ble raskt fjernet ved 4 ˝C. De eksperimentelle prosedyrene ble godkjent av Fu Jen InstitutionalAnimal Care and Utilization Committee (A10259), i samsvar med National Institutes of Health Guide for Care and Use of Laboratory Animals. Alle anstrengelser ble gjort for å minimere dyrs lidelse og å bruke et minimum antall dyr som er nødvendig for å gi pålitelige resultater.

4.3. Synaptosomale preparater

Synaptosomer ble renset fra hjernebarken til rotter på diskontinuerlige Percoll-gradienter som beskrevet tidligere [43,44]. Kort fortalt ble vevet homogenisert i et medium som inneholdt 0,32 M sukrose (pH 7,4), homogenatet ble sentrifugert i 10 min ved 3000ˆ g (5{{25) }}00 rpm i en JA 25.5 rotor; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, USA) og 4 ˝C, og supernatanten ble sentrifugert igjen i 12 minutter ved 14 500ˆ g ( 11,000 rpm i en JA 25.5 rotor). Pelleten ble forsiktig resuspendert i 0,32 M sukrose (pH 7,4), og en alikvot av denne synaptosomale suspensjonen (2 mL) ble plassert på en 3 mL Percoll diskontinuerlig gradient inneholdende 0,32 M sukrose, 1 mM EDTA, 0,25 mM DL-dl-dithioth 3 prosent, 10 prosent og 23 prosent Percoll (pH 7,4). Etter sentrifugering ved 32.500ˆ g (16.500 rpm i en JA 20.5 rotor) i 7 minutter ved 4˝C, ble synaptosomene gjenvunnet fra mellom 10 prosent og 23 prosent Percoll-båndene, og de ble fortynnet i et sluttvolum på 30 ml. av HEPES buffermedium (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHC03, 1 mM MgCl2¨ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM glukose og 10 mM HEPES (pH 7,4)). Etter ytterligere sentrifugering ved 27,000ˆ g (15 000 rpm i en JA 25.5) i 10 minutter, ble synaptosompelleten resuspendert i 3 ml HEPES-buffermedium, og proteininnholdet ble bestemt ved bruk av en Bradford-analyse. Til slutt ble 0,5 mg av synaptosomsuspensjonen fortynnet i 10 ml HEPES buffermedium og sentrifugert ved 3000ˆ g (5000 rpm i en JA 20.1 rotor) i 10 minutter. Supernatanten ble kastet, og pelletene som inneholdt synaptosomer ble lagret på is og brukt innen 4–6 timer.

4.4. Glutamatfrigjøring

Glutamatfrigjøring ble analysert ved online fluorimetri som beskrevet tidligere [45,46]. Synaptosomale pellets ble resuspendert i HEPES buffermedium (0,5 mg/ml) og preinkubert ved 37 ˝C i 10 minutter i nærvær av 16 µM bovint serumalbumin for å binde eventuelle frie fettsyrer frigjort fra synaptosomer under preinkubering. En 2-mL alikvot av synaptosomene ble overført til en omrørt kyvette som inneholdt 2 mM NADP pluss, 50 enheter glutamatdehydrogenase og 1,2 mM CaCl2, og FL-fluorescensen til NADPH ble målt i en Perkin-Elmer LS{{ 14}} spektrofluorimeter (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA) ved eksitasjons- og emisjonsbølgelengder på henholdsvis 340 og 460 nm. Siden synaptosomer ikke er mottagelig for elektrisk stimulering, ble kaliumkanalblokkeren 4-aminopyridin brukt for å stimulere frigjøring av glutamat. 4-aminopyridin destabiliserer membranpotensialet og antas å forårsake repeterende spontan Na pluss kanalavhengig depolarisering som nærmer seg in vivo depolarisering av den synaptiske terminalen som fører til aktivering av spenningsavhengige Ca2 pluss kanaler og nevrotransmitterfrigjøring [47 ]. Data ble innhentet med 2 s intervaller. En standard av eksogent glutamat (5 nmol) ble tilsatt ved slutten av hvert forsøk. Verdien av FL-fluorescensendringen produsert av standardtilsetningen ble brukt til å beregne det frigjorte glutamatet som nanomol glutamat per milligram synaptosomalt protein (nmol/mg). Frigjøringsverdier oppgitt i teksten er nivåer oppnådd ved steady-state etter 5 min med depolarisering (nmol/mg/5 min). Kumulative data ble analysert ved hjelp av Lotus 1-2-3-regneark (IBM, White Plains, NY, USA) og MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.5. Plasmamembranpotensial

Plasmamembranpotensialet ble bestemt med et membranpotensialfølsomt fargestoff, DiSC3(5) [48]. Synaptosomer ble resuspendert i HEPES buffermedium, og 2 ml alikvoter ble overført til en omrørt kyvette som inneholdt 5 µM DiSC3(5) ved 37 ˝C i et Perkin–Elmer LS-55 spektrofluorometer (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). Etter å ha tillatt blandingen å ekvilibrere i 3 minutter, ble FL-fluorescensen bestemt ved eksitasjons- og emisjonsbølgelengder på henholdsvis 646 og 674 nm. Data ble samlet inn med 2 s intervaller. Kumulative data ble analysert ved bruk av MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) og uttrykt i FL-fluorescensenheter.

4.6. Cytosolisk Ca2 pluss konsentrasjon ([Ca2 pluss]C)

[Ca2 pluss ]C ble målt med Ca2 pluss-indikatoren fura-2. Synaptosomer (0,5 mg/mL) ble preinkubert i HEPES-buffermedium inneholdende 5 µM fura-2 og 0.1 mM CaCl2, i 30 minutter ved 37 ˝C i en omrørt test rør. Etter fura{12}}-lasting ble synaptosomer sentrifugert i en mikrosentrifuge i 30 s ved 3000ˆ g (5000 rpm). De synaptosomale pellets ble resuspendert i et HEPES-buffermedium, og den synaptosomale suspensjonen ble omrørt i en termostatert kyvette i et Perkin-Elmer LS-55-spektrofluorometer (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). CaCl2 (1 mM) ble tilsatt etter 3 minutter og ytterligere tilsetninger ble gjort etter ytterligere 10 minutter. Fluorescensdata ble akkumulert ved eksitasjonsbølgelengder på 340 og 380 nm (emisjonsbølgelengde 505 nm) med 2 s intervaller. [Ca2 pluss]C (nM) ble beregnet ved å bruke kalibreringsprosedyrer [49] og ligninger beskrevet tidligere [50]. Kumulative data ble analysert ved bruk av MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.7. Western Blotting

Synaptosomer ble homogenisert i en lyseringsbuffer (10 mM HEPES-buffer, pH 7,4), 1 prosent Triton X-100 og proteaseinhibitorblanding. Lysater ble avklart ved sentrifugering, og proteinkonsentrasjonen ble bestemt ved bruk av et proteinanalysesett (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Like mengder proteiner ble separert ved natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE) og overført til nitrocellulosemembranen. Membranene ble blokkert med Tris-bufret saltvann som inneholdt 5 prosent lettmelk og inkubert med passende primært antistoff (fosfo-proteinkinase C (panne), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, USA) over natten kl. 4 ˝C. Etter tre vaskinger i Tris-bufret saltvann ble membranen deretter behandlet med det sekundære pepperrotperoksidase-konjugerte antistoffet (1:3000) i 1 time ved romtemperatur. Membranene ble deretter vasket minst tre ganger med Tris-bufret saltvann og visualisert ved bruk av det forbedrede kjemiluminescenssystemet (Amersham, Buckinghamshire, UK). En aliquot av prøver ble lastet og sondert med et anti-PKC-antistoff for påvisning av PKC som en belastningskontroll. Nivået av ekspresjon eller fosforylering ble vurdert ved båndtetthet, som ble kvantifisert ved densitometri. Densitometrisk kvantifisering av bånd ble analysert ved bruk av Syngene programvare (Synoptics, Cambridge, Storbritannia).

4.8. Statistisk analyse

Data ble hentet fra et enkelt synaptosomalt preparat og var ikke uavhengige av hverandre. For å teste betydningen av effekten av et medikament versus kontroll, ble en to-halet Students t-test brukt. Når en ekstra sammenligning var nødvendig (som for eksempel om en ny behandling påvirket virkningen av echinacosid), ble en enveis ANOVA etterfulgt av Tukeys test brukt. Analyse ble fullført via programvare SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Data er uttrykt som gjennomsnittlig ˘ SEM; signifikans ble evaluert til p < 0.05="" for="" alle="" statistiske="">

5. Konklusjoner

Dette er den første studien som viser detechinacosidehemmer glutamatfrigjøring fra cerebrokortikale synaptosomer hos rotter ved å redusere Ca2 pluss tilstrømning gjennom Cav2.2 og Cav2.1 kanaler, og denne frigjøringshemmingen er sannsynligvis avhengig av undertrykkelsen av proteinkinase C-banen, i det minste delvis. Det nåværende funnet er verdifullt fordi det gir en ny innsikt i virkningsmekanismene til echinacoside i hjernen.

Anerkjennelser:Dette arbeidet ble støttet av et stipend fra departementet for vitenskap og teknologi (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Forfatterbidrag:Tzu Yu Lin og Su Jane Wang unnfanget og designet eksperimentene; Cheng Wei Lu utførte eksperimentene; Cheng Wei Lu og Shu Kuei Huang analyserte dataene; Su Jane Wang skrev avisen.

Interessekonflikter:Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.

Interessekonflikter: Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.

Referanser

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Analyse av fenyletanoidglykosider avHerba cistancheav RP-HPLC. Acta Pharm. Synd. 1997, 32, 294-300.

2. Dalby-Brown, L.; Barrett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Synergistiske antioksidative effekter av alkamider, koffeinsyrederivater og polysakkaridfraksjoner fra Echinacea purpurea på in vitro-oksidasjon av humane lipoproteiner med lav tetthet. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 9413-9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Immunmodulering mediert av en urtesirup som inneholder et standardisert Echinacea-rotekstrakt: En pilotstudie i friske mennesker på cytokin-genuttrykk. Phytomedicine 2014, 21,1406-1410. [CrossRef] [PubMed]

4. Han, WJ; Fang, TH; Tu, PF Forskningsfremgang på farmakologiske aktiviteter av echinacoside. Kina J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476-479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF.; Jiang, Y; Li, ZB; Wang, YH Echinacoside redder SHSY5Y nevronale celler fra TNFalfa-indusert apoptose. Eur. J. Pharmacol. 2004, 505,11-18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro nevrobeskyttende aktiviteter av fenyletanoidglykosider fra Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH Echinacoside Beskytter mot 6-Hydroksydopamin-indusert mitokondriell dysfunksjon og inflammatoriske responser i PC12-celler ved å redusere ROS-produksjon. Evid. Basert komplement. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Forbigående eksponering for echinakosid er tilstrekkelig til å aktivere Trk-signalering og beskytte nevronceller fra rotenon. J. Neurochem. 2013,124, 571-580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Nevroprotektive effekter av echinacoside i muse-MPTP-modellen av Parkinsons sykdom. Eur. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y; Tu, PF.; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Effekter av echinacoside på histiosentrale nivåer av aktiv masse hos okklusjonsrotter i midtre cerebral arterie. Biomed. Environ. Sci. 2012, 25, 238-244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Reversering av vandige ekstrakter avCistanche tubulosafra atferdsmessige mangler i Alzheimers sykdomslignende rottemodell: Relevans for amyloidavsetning og sentral nevrotransmitterfunksjon. BMC-komplement. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Nevrotrofiske og nevroredningseffekter av Echinacoside i den subakutte MPTP-musemodellen for Parkinsons sykdom. Brain Res. 2010, 1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamat som en nevrotransmitter i hjernen: en gjennomgang av fysiologi og patologi. J. Nutr. 2000, 130, 1007S-1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; Nei, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK Koenzym Q10 hemmer glutamateksitotoksisitet og oksidativt stress-mediert mitokondriell endring i en musemodell av glaukom. Undersøk. Oftalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993-1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Kalsium og eksitotoksisk nevronal skade. Ann. NY Acad. Sci. 1994, 747,162-171. [CrossRef] [PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamatreseptorer, nevrotoksisitet og nevrodegenerasjon. Pflugers. Arch. 2010, 460, 525-542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Molekulære mekanismer for glutamatreseptor-mediert eksitotoksisk nevronal celledød. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107-129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Nevrobeskyttelse av glutamatreseptorantagonister mot anfallsindusert eksitotoksisk celledød i den aldrende hjernen. Exp. Neurol. 2010, 224, 207-218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpoui; S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Nevrobeskyttende effekter av NMDA og gruppe I metabotropiske glutamatreseptorantagonister mot nevrodegenerasjon indusert av homocystein i rottehippocampus: In vivo-studie. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551-557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Rollen til eksitotoksisitet i nevrodegenerativ sykdom: implikasjoner for terapi. Pharmacol. Ther. 1999, 81,163-221. [CrossRef]

21. Muir, KW Glutamatbaserte terapeutiske tilnærminger: Kliniske studier med NMDA-antagonister. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 53-60. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sanchez-Prieto, J.; Gandia, L.; Garcia, AG; Jordan, J.; Hernandez-Guijo, JM Neuroprotectant minocycline deprimerer glutamatergisk nevrotransmisjon og Ca2 pluss-signalering i hippocampale nevroner. Eur. J. Neurosci. 2007, 26, 2481-2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantine deprimerer glutamatfrigjøring gjennom hemming av spenningsavhengig Ca2 pluss inngang og proteinkinase C i rotte hjernebarkens nerveterminaler: En NMDA-reseptoruavhengig mekanisme. Neurochem. Int. 2010, 57,168-176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Ikke-konkurrerende metabotropisk glutamat 5-reseptorantagonist (E)-2-metyl-6- styryl-pyridin (SIB1893) deprimerer glutamatfrigjøring gjennom hemming av spenningsavhengig Ca2 pluss-inngang i cerebrokortikale nerveterminaler hos rotter (synaptosomer). J. Pharmacol. Exp. Ther. 2004, 309, 951-958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR.; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA En rask metode for isolering av synaptosomer på Percoll-gradienter. Brain Res. 1986, 372,115-129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE proteinavhengig glutamatfrigjøring fra astrocytter. J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Glutamatbaserte terapeutiske tilnærminger: Målretting mot glutamattransportsystemet. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6,103-107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Det sarkoplasmatiske retikulum Ca2 pluss kanal/ryanodinreseptor: Modulering av endogene effektorer, medikamenter og sykdomstilstander. Pharmacol. Rev. 1997, 49,1-51. [PubMed]

29. Fan, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Proteinkinase C delta-mediert cytotoksisitet av 6-hydroksydopamin via vedvarende ekstracellulær signalregulert kinase 1/2-aktivering i PC12-celler. Neurol. Res. 2014, 36, 53-64. [CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Muller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, en ny proteinkinasehemmer. Biochem. Biofys. Res. Commun. 1994, 199, 93-98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, DG; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Kalsiumavhengig og uavhengig frigjøring av glutamat fra synaptosomer overvåket ved kontinuerlig fluorometri. J. Neurochem. 1987, 49, 50-57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Koblingen av nevrotransmitterreseptorer til ionekanaler i hjernen. Science 1988, 241, 545-551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Presynaptisk hemming av fremkalt nevrotransmitterfrigjøring. Trender Neurosci. 1997, 20, 204-212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Farmakologisk karakterisering av presynaptiske kalsiumkanaler ved bruk av subsecond biokjemiske målinger av synaptosomal nevrosekresjon. Neuropharmacology 1995, 34, 1469-1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Differensiell kobling av N- og P/Q-type kalsiumkanaler til glutamateksocytose i hjernebarken hos rotter. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29-32. [CrossRef]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Presynaptisk modulering av glutamatfrigjøring retter seg mot forskjellige kalsiumkanaler i cerebrokortikale nerveterminaler hos rotter. Eur. J. Neurosci. 1997, 9, 2009-2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Long, P; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN nerveterminal GABAA-reseptorer aktiverer Ca2 pluss /Calmodulin-avhengig signalering for å hemme spenningsstyrt Ca2 pluss tilstrømning og glutamatfrigjøring. J. Biol. Chem. 2009,284, 8726-8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Vinkel, JM; Svart, ED; Joyal, JL; Sekker, DB; Madara, JL PKC-avhengig regulering av transepitelial motstand: Roller til MLC og MLC kinase. Er. J. Physiol. 1999, 277, C554-C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peters, C. Reguleringen av nevrotransmittersekresjon av proteinkinase C. Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125-155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, DG; Pocock, JM Fosforylering av synapsin I og MARCKS i nerveterminaler formidles av Ca2 pluss-inngang via en Aga-GI-sensitiv Ca2 pluss-kanal som er koblet til glutamateksocytose. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [CrossRef]

41. Obrenovitch, TP; Urenjak, J. Endret glutamatergisk overføring ved nevrologiske lidelser: Fra høy ekstracellulær glutamat til overdreven synaptisk effekt. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39-87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinacoside hemmer amyloid fibrillering av HEWL og beskytter mot Ap-indusert nevrotoksisitet. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243-253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulin hemmer frigjøringen av glutamat i cerebrokortikale nerveterminaler hos rotter. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233-243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidin hemmer glutamatfrigjøring og utøver nevrobeskyttelse mot eksitotoksisitet indusert av kainsyre i hippocampus til rotter. Nevrotoksikologi 2015,2015,157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, DG; Sihra, TS Synaptosomer har en eksocytotisk pool av glutamat. Nature 1986, 321, 772-773. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, et antihistaminlegemiddel, hemmer glutamatfrigjøring i cerebrokortikale nerveterminaler hos rotter. Eur. J. Pharmacol. 2014, 734, 67-76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG Repeterende handlingspotensialer i isolerte nerveterminaler i nærvær av 4-aminopyridin: Effekter på cytosolisk fri Ca2 pluss og glutamatfrigjøring. J. Neurochem. 1989,53,1693-1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Ionisk avhengighet av membranpotensial og glutamatreseptorkoblede responser i synaptoneurosomer målt med et cyaninfargestoff, DiSC2(5). J. Neurochem. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Localized Ca2 plus-inngang påvirker fortrinnsvis proteindefosforylering, fosforylering og glutamatfrigjøring. J. Biol. Chem. 1992, 267,1983-1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY En ny generasjon av Ca2 pluss-indikatorer med sterkt forbedrede fluorescensegenskaper. J. Biol. Chem. 1985, 260,3440-3450. [PubMed]