Del 1 Genetiske polymorfismer av MnSOD endrer virkningen av miljømessig melamin på oksidativt stress og tidlig nyreskade hos pasienter med kalsiumurolithiasis

Abstrakt

Miljøeksponering for melamin øker risikoen for oksidativt stress og tidlig nyreskade. Mangansuperoksiddismutase (MnSOD), glutationperoksidase og katalase kan beskytte nyrene mot oksidativt stress og opprettholde normal funksjon. Vi evaluerte om deres enkeltnukleotidpolymorfismer (SNP-er) kunne modifisere melamins effekter. Totalt 302 pasienter diagnostisert med kalsiumurolithiasis ble registrert. Alle pasienter ble gitt én-punkts urinprøver over natten for å måle deres melaminnivåer, urinbiomarkører for oksidativt stress og nyretubulær skade. Medianverdier ble brukt til å dikotomisere nivåer i høye og lave. Personer som bar T-allelen til rs4880 og høye melaminnivåer hadde en 3,60 ganger større risiko for høye malondialdehydnivåer enn de som bar C-allelen til rs4880 og lave melaminnivåer etter justering. Personer som bar G-allelen til rs5746136 og høye melaminnivåer hadde 1,73 ganger større risiko for høye N-Acetyl- -D-glukosaminidasenivåer enn de som bar A-allelen til rs5746136 og lave melaminnivåer. Avslutningsvis påvirker SNP-ene til MnSOD, rs4880 og rs5746136 risikoen for henholdsvis oksidativt stress og nyretubulær skade hos pasienter med kalsiumurolithiasis. I sammenheng med høye urinmelaminnivåer ble deres effekter på oksidativt stress og nyretubulær skade ytterligere økt.

Nøkkelord

mangan superoxide dismutase; genetisk polymorfisme; melamin; nyreskade; oksidativt stress; kalsium urolithiasis.

Klikk her for å få Cistanche-ekstraktet

Introduksjon

Melamin er et syntetisk kjemikalie som brukes til å produsere en rekke kommersielle dagliglivsprodukter, inkludert husholdningsartikler, benkeplater, tekstiler, lim og flammehemmere [1,2]. Fordi det har et høyt nitrogeninnhold, har det blitt misbrukt i dyrefôr og melk for å villedende heve proteininnholdet [1,2]. De negative effektene av melamineksponering vakte oppmerksomhet over hele verden etter den skandaløse tilsetningen til dyrefôr, som førte til døden til tusenvis av kjæledyr i USA i 2007, samt morsmelkerstatning, noe som resulterte i urolithiasis hos mer enn 50,{{6 }} barn og seks dødsfall i Kina i 2008 [1,2]. Til dags dato forblir melamin allestedsnærværende i miljøet vårt. Flere studier har påvist melamin i vann, jord, avlinger, daglige matvarer og dyrevev [3–5], og andre har påvist det i de fleste urinprøver fra flere generelle populasjoner fra forskjellige land [6–9].

Etter melamininntak vil nitti prosent av den opprinnelige formen skilles ut i urinen innen 24 timer, så nyrene kan være mer mottakelige for melamin [1]. I tillegg til effekten av høye doser melamin på akutt nefrotoksisitet hos barn i 2008, har langvarig lavdoseeksponering for melamin vært knyttet til risikoen for nyrekomplikasjoner, inkludert steindannelse og forverring av nyrefunksjonen hos voksne [10– 12]. En sannsynlig mekanisme for at kronisk lavdoseeksponering av melamin kan føre til tidlig nyreskade og steindannelse er dens negative effekt på nyretubuli, som ble funnet av to av våre menneskelige studier på melamin servisearbeidere [13] og voksne pasienter med kalsiumurolithiasis [13] 14]. Vi utførte også en in vitro-studie ved å bruke humane proksimale tubulære HK-2-celler og fant at melamin kunne indusere renal tubulær skade ved å øke oksidativt stress [15]. I to nyere menneskelige studier fant vi også at eksponering for melamin økte urinbiomarkørene for oksidativt stress, malondialdehyd (MDA) og 8-oxo-20 -deoksyguanosin (8-OHdG), med MDA medierer 36–53 prosent av den totale effekten av melamin på en biomarkør for renal tubulær skade, N-Acetyl- -D-glukosaminidase (NAG) [16]. Disse funnene tyder på at eksponering for lavdose miljømelamin kan øke oksidativt stress og ytterligere risikoen for tidlig nyreskade hos mennesker.

Oksidativt stress oppstår når dannelsen av prooksidanter eller reaktive oksygenarter (ROS) overskrider den endogene antioksidantkapasiteten. Nyrene våre er spesielt følsomme for oksidativt stress, som antas å være en viktig faktor i initiering, utvikling og progresjon av de fleste nyresykdommer [17,18]. Årsaken til oksidativt stress i nyrene kan være assosiert med interaksjoner mellom medisinske sykdommer og miljøeksponering for kjemikalier som melamin [16]. Endogene antioksidantsystemer inkludert mangansuperoksiddismutase (MnSOD), glutationperoksidase (GPX1) og katalase (CAT) har vist seg å beskytte nyrene mot oksidativt stress og deretter bidra til å opprettholde normal funksjon [18]. MnSOD kan dekomponere giftige ROS, og superoksidanioner, til hydrogenperoksid, som deretter omdannes til ikke-giftig vann og oksygen av GPX1 og CAT i mitokondriene [18]. Flere enkeltnukleotidpolymorfismer (SNP) av disse antioksidantenzymgenene har vært assosiert med forskjellige sykdommer [19], inkludert nyresykdommer [20–22].

Siden miljøgiftassosiert nyreskade kan være påvirket av genetiske faktorer [23], er det mulig at SNP-ene til antioksidantenzymgener (f.eks. MnSOD, GPX1, CAT) kan endre effekten av miljøeksponering for melamin på risikoen for oksidativt stress og renal tubulær skade hos mennesker. For å finne det ut, valgte vi fem kandidat-SNP-er av antioksidantenzymgener (MnSOD: rs4880 og rs5746136, GPX1: rs1800668, CAT: rs1001179 og rs769217), hvorav de fleste har vært knyttet til hver nyresykdom, [20-222]. virkningene deres når de kombineres med miljøeksponering for melamin på 8-OHdG og MDA, to biomarkører for oksidativt stress, og NAG, en biomarkør for nyretubulær skade, i urin.

Cistanche tubulosa og Cistanche piller

Materialer og metoder

1. Emner

Totalt ble 309 pasienter diagnostisert med kalsiumurolithiasis i øvre urinveier registrert mellom november 2010 og januar 2015. De detaljerte studiedesignene og protokollene for deres inkludering ble beskrevet tidligere [14,16]. Kort fortalt var alle pasienter fra Kaohsiung Medical University-tilknyttede sykehus i det sørvestlige Taiwan. De kvalifiserte pasientene var personer over eller lik 20 år som hadde blitt diagnostisert med urolithiasis i øvre urinveier ved radiografi eller ultrasonografi, og som hadde gitt steinprøver bekreftet å ha kalsiumkomponenter ved infrarød spektroskopianalyse (Spectrum RX I Fourier Transform -Infrarødt system, PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Ingen av deltakerne ble ved røntgen funnet å ha radiolucente steiner eller ved klinisk vurdering å ha urinsyre eller cystinsteiner.

Pasienter ble ekskludert hvis de hadde en historie med kronisk urinveisinfeksjon, kronisk diaré, gikt, hyperparathyroidisme, renal tubulær acidose, nyresvikt eller kreft. Alle forsøkspersoner som regelmessig hadde tatt vitamin D, kalsiumtilskudd, diuretika eller kaliumsitrat mer enn én gang per uke innen seks måneder før diagnosen urolithiasis eller intervju ble også ekskludert. Studieprotokollen ble godkjent av Institutional Review Board of KMUH og alle kvalifiserte pasienter ga signerte informerte skriftlige samtykkeskjemaer. Denne studien fulgte retningslinjene til STREGA [24] (se Supplerende materialer Tabell S1).

2. Innsamling av kliniske data og biologiske prøver

Ved innleggelse fikk alle deltakerne blodprøver og en-punkts morgenurinprøver etter faste over natten og før behandling av urolithiasis for biokjemiske og genetiske analyser. De svarte også på et strukturert spørreskjema for å samle inn demografiske data, medisinsk historie og rusbruk (sigarett, alkohol og betel quid) [14,16]. Deltakerne ble definert som sigarettrøykere, alkoholdrikkere eller betel-quid-tyggere hvis de regelmessig hadde røykt mer enn eller lik 10 sigaretter per uke, hadde konsumert alkoholholdig drikke mer enn eller lik 1 gang per uke, eller hadde tygget mer enn eller likt. lik 7 betel pund per uke, henholdsvis, i minst seks måneder. Nåværende brukere var de som fortsatt praktiserte vanene ovenfor innen ett år før diagnosen urolithiasis eller intervjuet [11,25].

Klinisk informasjon, inkludert steinplassering, steinnummer, steindiameter og steinepisoder, ble også samlet inn ved hjelp av spørreskjema og videre gjennomgått ved hjelp av pasientenes medisinske diagrammer av en urolog (C.-CL) som ikke var klar over eksponeringen av interesse, inkludert melamin og biomarkører for oksidativt stress (8-OHdG og MDA) og renal tubulær skade (NAG) i urin og genotyping av antioksidantenzymgener.

Cistanche kapsler

3. Analyser av melamin, biomarkører for oksidativt stress (MDA og 8-OHdG) og nyretubulær skade (NAG) i urin

Urinmelamin ble målt ved hjelp av en isotopisk væskekromatografi-tandem massespektrometrimetode (LC-MS/MS) (API40{{20}}0Q, Applied Biosystems/MDS SCIEX , Concord, Vaughan, ON, Canada) [13]. Urin MDA ble målt ved hjelp av høyytelses væskekromatografi med fluorescens (HPLC-FL) deteksjon i en omvendt-fase kolonne (Luna C18, 250 × 4,6 nm) [26]. Urin 8-OHdG ble målt ved hjelp av en validert metode for online solid-fase ekstraksjon (SPE) LC-MS/MS [27]. De detaljerte metodene ble beskrevet tidligere [14,16]. Deteksjonsgrensene (LOD) for urinmelamin og biomarkører for oksidativt stress var 0,4 ng/ml for melamin, 0,02 µmol/L for MDA og 0,01 ng/ml for 8-OHdG. Alle urinmålinger av MDA og 8-OHdG var påvisbare. Derimot var 31 (10,0 prosent) av de 309 urinmelaminmålingene under LOD og ble erstattet med LOD/√ 2.

Urin-NAG ble målt ved bruk av et NAG-analysesett (Diazyme Laboratory, Poway, CA, USA) [13,14]. Alle urin NAG-målinger var påvisbare. Urinkreatinin ble analysert ved spektrofotometri (U-2000; Hitachi, Tokyo, Japan) satt til en bølgelengde på 520 nm for å måle kreatinin-pikratreaksjonen [14]. Målingen av alle biokjemiske parametere ovenfor ble utført av to forskjellige laboratorieteknikere blindet for hverandres funn, studiedesign og deltakerinformasjon.

4. Genotyping av fem SNP-er

DNA ble ekstrahert fra perifert fullblod ved bruk av et Puregene DNA Isolation Kit (Gentra Systems Inc., Minneapolis, MN, USA). De fem SNP-ene (MnSOD-rs4880, MnSODrs5746136, GPX1-rs1800668, CAT-rs1001179 og CAT-rs769217) ble analysert ved bruk av et assay-on-demand SNPlied-genotyping-sett for et TaqMan-genotypingsystem 5' , Foster City, CA, USA). Kort fortalt inneholdt SNP-amplifikasjonsanalyser inkludert 10 ng prøve-DNA i 25 µL reaksjonsløsning 12,5 µL av 2× TaqMan® Universal PCR-blanding (Applied Biosystems), mens 1,25 µL forhåndsutviklet assay-reagens fra SNP-genotypingsproduktet (Applied Biosystems) inneholdt to primere. To MCB-Taqman-sonder ble utført etter instruksjonene fra produsenten. Polymerasekjedereaksjoner (PCR) ble utført ved bruk av et ABI Prism 7500 Sequence Detection System (Applied Biosystems) [28,29]. Disse genotypene ble bekreftet ved direkte sekvensering etter fullskala genotyping. Tilfeldig ble ~10 prosent av studieprøvene (30 tilfeller) gjentatt for kvalitetskontroll, med resultatene som viste 100 prosent nøyaktighet.

Fordelene med Cistanche

5. Statistiske analyser

Kvantitative data ble uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik (SD) eller medianer med interkvartile områder (IQR), og kategoriske data ble presentert som tall (n) og prosenter. Hardy-Weinberg-likevekten for fordeling av genotyper ble kontrollert ved hjelp av kjikvadrattesten.

Melaminnivåer i urin og biomarkører i urin (MDA, 8-OHdG, NAG) ble korrigert av kreatininverdier i urinen før videre analyser. Etter korreksjon ble urinbiomarkører for oksidativt stress (MDA og 8-OHdG) og renal tubulær skade (NAG) dikotomisert i høy eller lav ved å bruke deres medianverdier [14,16]. Enkle logistiske regresjonsmodeller ble først brukt for å evaluere assosiasjonene mellom genotyper av antioksidantenzymgener og urinbiomarkører for oksidativt stress og nyretubulær skade. Hvis en signifikant sammenheng ble notert i den innledende analysen, ble de kombinerte effektene mellom genotyper av antioksidantenzymgener og urinmelaminnivåer dikotomisert etter medianverdier testet videre ved flere logistiske regresjonsanalyser etter justering for kovariater, som alder, kjønn, BMI, pedagogisk nivå, personlige vaner, steinantall, steinstørrelse, steinplassering og komorbiditeter. Alle statistiske analyser ble utført ved bruk av SAS statistiske pakke. Alle p-verdier var tosidige og ansett som signifikante hvis<0.05.

6. Sensitivitetsanalyse

For å undersøke robustheten til funnene våre, utførte vi sensitivitetsanalyser for å sammenligne resultatene når urinmelaminnivåer ble delt inn i tertiler. Videre sammenligner vi også funnene ved å bruke en ny metode for kovariatjustert standardisering pluss kreatininjustering for å korrigere urinkonsentrasjon og kompliserte konfunderende strukturer [14,30].

Referanser

1. Hau, AK; Kwan, TH; Li, PK Melamin toksisitet og nyre. J. Am. Soc. Nephrol. 2009, 20, 245–250. [CrossRef]

2. Bhalla, V.; Grimm, PC; Chertow, GM; Pao, AC Melamin nefrotoksisitet: En ny epidemi i en globaliseringstid. Nyre Int. 2009, 75, 774–779. [CrossRef]

3. Qin, Y.; Lv, X.; Li, J.; Qi, G.; Diao, Q.; Liu, G.; Xue, M.; Wang, J.; Tong, J.; Zhang, L.; et al. Vurdering av melaminforurensning i avlinger, jord og vann i Kina og risiko for melaminakkumulering i dyrevev og produkter. Environ. Int. 2010, 36, 446–452. [CrossRef]

4. Zhu, H.; Kannan, K. Forekomst og distribusjon av melamin og dets derivater i overflatevann, drikkevann, nedbør, avløpsvann og svømmebassengvann. Environ. Forurense. 2020, 258, 113743. [CrossRef]

5. Zhu, H.; Kannan, K. Melamin og cyanursyre i matvarer fra USA og deres implikasjoner for menneskelig eksponering. Environ. Int. 2019, 130, 104950. [CrossRef]

6. Panuwet, P.; Nguyen, JV; Wade, EL; D'Souza, PE; Ryan, PB; Barr, DB Kvantifisering av melamin i human urin ved bruk av kationbyttebasert høyytelses væskekromatografi-tandem massespektrometri. J. Chromatogr. B Anal. Teknol. Biomed Life Sci. 2012, 887–888, 48–54. [CrossRef]

7. Lin, Y.-T.; Tsai, M.-T.; Chen, Y.-L.; Cheng, C.-M.; Hung, C.-C.; Wu, C.-F.; Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Shiea, J.; Chen, BH; et al. Kan melaminnivåer i 1-punkturinprøver over natten forutsi det totale forrige 24-timers melaminutskillelsesnivået hos skolebarn? Clin. Chim. Acta 2013, 420, 128–133. [CrossRef]

8. Sathyanarayana, S.; Flynn, JT; Messito, MJ; Gross, R.; Whitlock, KB; Kannan, K.; Karthikraj, R.; Morrison, D.; Huie, M.; Christakis, D.; et al. Eksponering for melamin og cyanursyre og nyreskade hos amerikanske barn. Environ. Res. 2019, 171, 18–23. [CrossRef]

9. Shi, X.; Dong, R.; Chen, J.; Yuan, Y.; Long, Q.; Guo, J.; Li, S.; Chen, B. En vurdering av melamineksponering hos voksne Shanghai og dens assosiasjon med matforbruk. Environ. Int. 2020, 135, 105363. [CrossRef]

10. Wu, C.-F.; Liu, C.-C.; Chen, B.-H.; Huang, S.-P.; Lee, H.-H.; Chou, Y.-H.; Wu, W.-J.; Wu, M.-T. Urinmelamin og voksen urolithiasis i Taiwan. Clin. Chim. Acta 2010, 411, 184–189. [CrossRef]

11. Liu, C.-C.; Wu, C.-F.; Chen, B.-H.; Huang, S.-P.; Goggins, W.; Lee, H.-H.; Chou, Y.-H.; Wu, W.-J.; Huang, C.-H.; Shiea, J.; et al. Lav eksponering for melamin øker risikoen for urolithiasis hos voksne. Nyre Int. 2011, 80, 746–752. [CrossRef]

12. Tsai, Y.-C.; Wu, C.-F.; Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Lin, Y.-T.; Chiu, Y.-W.; Hwang, S.-J.; Chen, H.-C.; Wu, M.-T. Urinmelaminnivåer og progresjon av CKD. Clin. J. Am. Soc. Nephrol. CJASN 2019, 14, 1133–1141. [CrossRef]

13. Wu, C.-F.; Peng, C.-Y.; Liu, C.-C.; Lin, W.-Y.; Pan, C.-H.; Cheng, C.-M.; Hsieh, H.-M.; Hsieh, T.-J.; Chen, BH; Wu, M.-T. Eksponering for omgivende melamin og urinveisbiomarkører for tidlig nyreskade. J. Am. Soc. Nephrol. 2015, 26, 2821–2829. [CrossRef] [PubMed]

14. Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Wu, C.-F.; Tsai, Y.-C.; Huang, S.-P.; Lee, Y.-C.; Huang, T.-Y.; Shen, J.-T.; Chou, Y.-H.; Huang, C.-N.; et al. Urinær utskillelse av melamin og økte markører for nyretubulær skade hos pasienter med kalsiumurolithiasis: en tverrsnittsstudie. Environ. Forurense. 2017, 231, 1284–1290. [CrossRef]

15. Hsieh, TJ; Hsieh, PC; Tsai, YH; Wu, C.; Liu, C.; Lin, M.; Wu, M. Melamin induserer human nyreproksimal tubulær celleskade via transformerende vekstfaktor-beta og oksidativt stress. Toxicol. Sci. 2012, 130, 17–32. [CrossRef]

16. Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Wu, C.-F.; Lee, C.-H.; Tsai, Y.-C.; Huang, T.-Y.; Wen, S.-C.; Lee, C.-H.; Chien, T.-M.; Lee, Y.-C.; et al. Sammenheng mellom miljøeksponering av melamin, biomarkører for oksidativt stress og tidlig nyreskade. J. Hazard Mater. 2020, 396, 122726. [CrossRef] [PubMed]

17. Gorin, Y. Nyren: Et organ i frontlinjen av oksidativt stress-assosierte patologier. Antioksid. Redokssignal. 2016, 25, 639–641. [CrossRef]

18. Ratliff, BB; Abdulmahdi, W.; Pawar, R.; Wolin, MS oksidantmekanismer ved nyreskade og -sykdom. Antioksid. Redokssignal. 2016, 25, 119–146. [CrossRef]

19. Crawford, A.; Fassett, RG; Geraghty, DP; Kunde, DA; Ball, MJ; Robertson, IK; Coombes, JS Forholdet mellom enkeltnukleotidpolymorfismer av antioksidantenzymer og sykdom. Gene 2012, 501, 89–103. [CrossRef] [PubMed]

20. Crawford, A.; Fassett, RG; Coombes, J.; Kunde, D.; Ahuja, K.; Robertson, IK; Ball, MJ; Geraghty, D. Glutathione peroxidase, superoxide dismutase og catalase genotyper og aktiviteter og progresjon av kronisk nyresykdom. Nephrol. Slå. Transplantasjon. 2011, 26, 2806–2813. [CrossRef]

21. Kidir, V.; Uz, E.; Yigit, A.; Altuntas, A.; Yigit, B.; Inal, S.; Uz, E.; Sezer, MT; Yilmaz, HR Mangansuperoksiddismutase, glutationperoksidase og katalasegenpolymorfismer og kliniske utfall ved akutt nyreskade. Ren. Mislykket. 2016, 38, 372–377. [CrossRef] [PubMed]

22. Ewens, KG; George, RA; Sharma, K.; Ziyadeh, FN; Spielman, RS Vurdering av 115 kandidatgener for diabetisk nefropati ved overføring/ulikevektstest. Diabetes 2005, 54, 3305–3318. [CrossRef]

23. Lash, LH Miljømessige og genetiske faktorer som påvirker nyretoksisitet. Semin. Nephrol. 2019, 39, 132–140. [CrossRef]

24. Little, J.; Higgins, JPT; Ioannidis, JPA; Moher, D.; Gagnon, F.; von Elm, E.; Khoury, MJ; Cohen, B.; Davey-Smith, G.; Grimshaw, J.; et al. Styrking av rapporteringen av genetiske assosiasjonsstudier (STREGA): En utvidelse av STROBE-erklæringen. Nynne. Genet. 2009, 125, 131–151. [CrossRef]

25. Liu, C.-C.; Huang, S.-P.; Wu, WJ; Chou, Y.-H.; Juo, S.; Tsai, L.-Y.; Huang, C.-H.; Wu, M.-T. Virkningen av sigarettrøyking, alkoholdrikking og betel-quid-tygging på risikoen for kalsiumurolithiasis. Ann. Epidemiol. 2009, 19, 539–545. [CrossRef] [PubMed]

26. Hsu, KC; Hsu, PF; Chen, YC; Lin, H.; Chen, HP; Huang, Y. Oksidativt stress under bakterievekst karakterisert ved mikrodialyseprøvetaking kombinert med HPLC/fluorescensdeteksjon av malondialdehyd. J. Chromatogr. B Anal. Teknol. Biomed Life Sci. 2016, 1019, 112–116. [CrossRef] [PubMed]

27. Hu, CW; Chao, MR; Sie, CH Urinanalyse av 8-oxo-7,8-dihydroguanin og 8-oxo-7,8-dihydro-2'- deoksyguanosin ved isotopfortynning LC-MS/MS med automatisert fastfaseekstraksjon: Studie av 8-okso-7,8-dihydroguaninstabilitet. Free Radic. Biol. Med. 2010, 48, 89–97. [CrossRef]

28. Liu, C.-C.; Lee, Y.-C.; Huang, S.-P.; Cheng, K.-H.; Hsieh, T.-J.; Huang, T.-Y.; Lee, C.-H.; Geng, J.-H.; Li, C.-C.; Wu, WJ Hepatocyte Nuclear Factor-4alpha P2-promotervarianter er assosiert med risikoen for metabolsk syndrom og testosteronmangel hos aldrende taiwanske menn. J. Sex Med. 2018, 15, 1527–1536. [CrossRef]

29. Liu, C.-C.; Huang, S.-P.; Tsai, L.-Y.; Wu, WJ; Juo, S.-HH; Chou, Y.-H.; Huang, C.-H.; Wu, M.-T. Effekten av osteopontin-promoter polymorfismer på risikoen for kalsiumurolithiasis. Clin. Chim. Acta 2010, 411, 739–743. [CrossRef]

30. O'Brien, KM; Upson, K.; Cook, NR; Weinberg, CR Miljøkjemikalier i urin og blod: Forbedring av metoder for kreatinin- og lipidjustering. Environ. Helseperspektiv. 2016, 124, 220–227. [CrossRef]

Chia-Chu Liu 1,2,3,4, Chia-Fang Wu 1,5, Yung-Chin Lee 2,3,6, Tsung-Yi Huang 2, Shih-Ting Huang 1,7, Hsun-Shuan Wang 6, Jhen-Hao Jhan 6, Shu-Pin Huang 2,3, Ching-Chia Li 2,3, Yung-Shun Juan 2,3, Tusty-Jiuan Hsieh 1,7, Yi-Chun Tsai 1,8,9, Chu- Chih Chen 1,10 og Ming-Tsang Wu 1,11,12,13,

1 Forskningssenter for miljømedisin, Kaohsiung Medical University, Kaohsiung City 807, Taiwan; ckliu0204@gmail.com (C.-CL); cfwu27@nuu.edu.tw (C.-FW); u107800006@kmu.edu.tw (S.-TH); hsiehjun@kmu.edu.tw (T.-JH); 920254@kmuh.org.tw (Y.-CT); ccchen@nhri.edu.tw (C.-CC)

2 Avdeling for urologi, Kaohsiung Medical University Hospital, Kaohsiung Medical University, Kaohsiung City 807, Taiwan; 890197@kmuh.org.tw (Y.-CL); 970417@kmuh.org.tw (T.-YH); shpihu@kmu.edu.tw (S.-PH); 850144@kmuh.org.tw (C.-CL); 840066@kmuh.org.tw (Y.-SJ)

3 Institutt for urologi, School of Medicine, College of Medicine, Kaohsiung Medical University, Kaohsiung City 807, Taiwan

4 Avdeling for urologi, Pingtung sykehus, helse- og velferdsdepartementet, Pingtung City 900, Taiwan

5 International Master Program of Translational Medicine, National United University, Miaoli 360, Taiwan

6 Avdeling for urologi, Kaohsiung kommunale Siaogang sykehus, Kaohsiung by 812, Taiwan; 940199@kmuh.org.tw (H.-SW); 1030398@kmuh.org.tw (J.-HJ)

7 Graduate Institute of Medicine, College of Medicine, Kaohsiung Medical University, Kaohsiung City 807, Taiwan

8 Institutt for indremedisin, avdelinger for nefrologi og allmennmedisin, Kaohsiung Medical University Hospital, Kaohsiung Medical University, Kaohsiung City 807, Taiwan

9 Institutt for indremedisin, School of Medicine, College of Medicine, Kaohsiung Medical University, Kaohsiung City 807, Taiwan

10 avdeling for biostatistikk og bioinformatikk, Institute of Population Health Sciences, National Health Research Institutes, Miaoli 350, Taiwan

11 Environmental and Occupational Medicine and Graduate Institute of Clinical Medicine, Kaohsiung Medical University, Kaohsiung City 807, Taiwan

12 Department of Family Medicine, Kaohsiung Medical University Hospital, Kaohsiung Medical University, Kaohsiung City 807, Taiwan

13 Institutt for folkehelse, College of Health Sciences, Kaohsiung Medical University, Kaohsiung City 807, Taiwan