MRNA-uttrykksmønstre i rottehjernen etter dobbelt tilbakekalling av frykt- og belønningsbasert sosialt ervervet informasjon(2)

Bue i tilbakekallingen av direkte og sosialt ervervede fryktassosiasjoner.

Vår evne til å tolke funnene våre angående rottene våre som gjennomgår tilbakekalling av frykt tilegnet via direkte læring, er betydelig hjulpet av hvor godt karakterisert systemet som ligger til grunn for fryktinnlæring og -gjenkalling. En rekke av områdene vi undersøkte er involvert i frykt- eller utryddelseslæring (sistnevnte som vi ville anta ble initiert i Demonstrators, ettersom de hadde gjennomgått en ikke-forsterket CS-presentasjon under FCbP), spesielt ACC, PLC og ILC30–32 ,37. Selv om en litt mindre forskningsgruppe er tilgjengelig angående de nevrale mekanismene til sosial frykt, antyder de foreslåtte modellene for sosial fryktlæring at lignende systemer ligger til grunn for sosial og direkte fryktlæring28. Funnene våre indikerer ingen generell rolle for ACC, PLC eller ILC i verken tilbakekalling av en sosialt ervervet fryktforening eller en direkte ervervet fryktassosiasjon (selv om se også "Diskusjon" av kjønnsforskjeller i PLS-aktivitet nedenfor). Imidlertid, som dekket i forrige avsnitt, indikerer dette sannsynligvis bare at Arc ikke fungerer som en pålitelig indikator på aktivitet i dette tilfellet. Undersøkelse av disse områdene etter oppkjøp av frykt vil sannsynligvis fortelle en annen historie. Tøff eksplisitt forskning på Arc-aktivitet etter tilbakekalling av frykt er begrenset, det er noe tidligere forskning å trekke fra. Chia og Otto35 fant at kondisjoneringsrotter i spor frykt hadde signifikant høyere Arc-proteinekspresjon i både dorsal og ventral hippocampus sammenlignet med ubetingede kontroller. Spesielt ble Arc kvantifisert ved Western Blot-analyse av den homogeniserte ventrale og dorsal hippocampus i dette eksperimentet, så presis lokalisering av hippocampus aktivitet var ikke tilgjengelig. Disse funnene indikerer sannsynligvis at, som i STFP, kan transkripsjon av bue bli indusert i visse områder av hippocampus ved 48-h-tidspunktet for tilbakekalling av et signal om fryktminne. Våre nullresultater kan også potensielt skyldes mislykket tilbakekalling fra observatørers side, da i motsetning til tidligere studier i laboratoriet vårt12–14,26 så vi ikke høyere frysing til CS hos observatører sammenlignet med kontroller. Hvorvidt dette faktisk skyldes mislykket tilbakekalling hos observatører eller på grunn av vår enkelt CS tilbakekallingsprosedyre og forhåndseksponering av kontroller til CS er ikke klart.

Hva gjør cistanche - forbedre hukommelsen

Potensiell rolle til den ventrale orbitofrontale cortex i tilbakekalling av sosialt ervervet informasjon.

I en landemerkestudie har Lesburguères et al.24. var i stand til å demonstrere at mens dorsal hippocampal (dHPC) aktivitet var nødvendig for anskaffelse og kortsiktig tilbakekalling av en ervervet STFP, ble STFP-minnet til slutt overført til OFC for langtidslagring. I tillegg har Lesburguères et al. var i stand til å demonstrere at merking av nevroner i den orbitofrontale cortex under STFP-erverv er nødvendig for langsiktig lagring av sosialt overførte matpreferanser, og at interferens med OFC-aktiviteten etter anskaffelse svekker minnet 30 dager etter anskaffelse (selv om se også38). Disse funnene antyder kommunikasjon mellom dHPC og OFC i de første dagene eller ukene etter STFP-anskaffelse og pågående omorganisering av OFC på dette tidspunktet for å imøtekomme den langsiktige lagringen av STFP-minnet. Mens mangelen på generelle forskjeller i ventral eller lateral OFC Arc-uttrykk mellom demonstranter, kontroller og observatører i denne studien ville utfordre den tolkningen, oppdaget vi en signifikant negativ korrelasjon mellom vårt kombinerte mål på generell sosial læringsytelse og dual-Arc-uttrykkende celler i VOC. Videre ble denne korrelasjonen ikke observert mellom en lignende beregning dannet for demonstranter basert på valgtestytelse og frysing til CS. Siden avhengighet av sosialt ervervet informasjon kan betraktes som å velge mellom potensielt upålitelig sosial informasjon og farene ved å lære gjennom direkte erfaring, kan denne tilsynelatende hemmende rollen til stemmen i uttrykket av sosialt ervervet informasjon være knyttet til OFCs bredere rolle i verdi. -basert beslutningstaking39–42.

Cistanche deserticola-eksperiment

Kjønnsforskjeller i Arc-transkripsjon.

flere statistiske og metodiske årsaker. For det første, vår tidvis lave prøvestørrelse for hunner, med gruppestørrelse for kombinasjoner av kjønn/tilstand som strekker seg fra n=2 til n=9 etter fjerning av rotter uten nok levedyktige seksjoner (men spesielt en n)<5 was only present for female Controls in the vOFC and lOFC and female Demonstrators and Observers in the lOFC, see Table S5 for specific group sizes). Additionally, our lack of entirely undisturbed controls means that we have no way to determine whether these sex differences are the result of baseline or task-specific differences in Arc mRNA production. Finally, because the pre-in situ PFA wash was not introduced until all female sections had been processed, this difference in tissue processing might have affected the overall stain. That said, if this were the case, we might expect to see a broader and more consistent effect of sex across regions and types of Arc expression (nuclear, cytoplasmic, and dual). As it is, 18 regions/cellular areas of Arc expression combinations are examined, and only 10 display a significant overall effect of sex. Furthermore, this effect is not uniform in its direction, with males displaying greater overall Arc expression in 5 cases and females displaying greater expression in the other 5. Regardless, we feel that our findings here should serve only to inform possible future research into sex differences in Arc expression. As it is, the limitation of the current study would make drawing definitive conclusions regarding sex effects on Arc expression inappropriate. This should be kept in mind in reading the following discussion.

Selv om det har vært lite undersøkelser av kjønnsforskjeller i Arc-uttrykk, er det noen funn som indikerer at hunnrotter uttrykker mer Arc i visse områder av dorsal hippocampus etter gjentatt eksponering for et relativt beriket miljø43, selv om en trend i motsatt retning også har vært. observert hos rotter testet uten forutgående atferdsintervensjon43. Funnene våre kan indikere at kjønnsforskjeller i Arc-transkripsjon er tilstede etter visse generelle atferdsoppgaver eller opplevelser. I CG1-regionen av ACC fant vi at menn totalt sett hadde flere celler aktive på begge tidspunktene, muligens på grunn av høyere baseline arktranskripsjon i ACC hos menn eller økt transkripsjon etter kontekstendringer/gjeneksponering (hjemmebur → STFP testrom → kondisjoneringskammer) ettersom det er noen bevis – selv om det er begrenset – for en rolle til ACC i langsiktig tilbakekalling av kontekstuelle minner44. Hannrotter viste også høyere kjernefysiske og doble buetall i ILC. Dette kan forklares av rollen til ILC i utryddelse og frykthemming31,45,46 og observerte svekkelser i hemming og utryddelse av lært frykt hos kvinner47–49. Hvis dette er tilfelle, reiser det spørsmålet om hvorfor ingen generelle forskjeller ble observert mellom kontroll-, observatør- og demonstratorrottene våre hvis bueuttrykk ble utløst av CS-utløst infralimbisk aktivitet.

Hunnene viste høyere nivåer av Arc-uttrykk for alle tellinger i vCA3. Forskjellen i nukleærtall kan potensielt ha vært et resultat av større aktivering etter eksponering for CS eller gjeneksponering for kondisjoneringskammeret hos kvinner, mens de høyere nivåene av cytoplasmatisk bueuttrykk i vCA3 etter matoppgaven kan indikere kjønnsforskjeller i rollen til Arc i vCA3 enten anerkjennelsen av "kjent" mat (selv for observatører vil duften være kjent på grunn av deres tidligere interaksjon med demonstranten) eller belønning/generelle fullendte prosesser. Den kvinnen viste også betydelig høyere dobbelmerking i vCA3 - selv om denne effekten var liten - kan også indikere generaliserte økninger i vCA3 Arc-transkripsjon hos kvinner. Hunnrotter viste også høyere nukleær Arc-transkripsjon i vOFC og høyere doble nivåer av Arc mRNA i lOFC, selv om disse resultatene er vanskeligere å tolke på grunn av det lave antallet kvinnelige kontrollrotter hvis hjernevev var intakt nok til å ta OFC-teller (n=2 og 3 for henholdsvis lateral og ventral OFC). Data fra de tilgjengelige kontrollrottene indikerer en mulig kjønnsmediert økning i OFC Arc mRNA-produksjon, men det er like mulig at denne effekten ikke vil vedvare med en høyere n. Spesielt har noen tidligere forskning indikert strukturelle forskjeller i OFC og funksjonelle forskjeller i OFC-mediert atferd mellom kvinnelige og mannlige gnagere50–52.

Cistanche ekstrakt pulver

Muligens våre mest interessante kjønnsforskjeller i Arc mRNA ble oppdaget i PLC. Men, hanner viste generelt høyere antall celler som uttrykker Arc i cytoplasmaet og i både cytoplasma og kjerne (dobbelt uttrykk) enn kvinner. Vi fant også at mens mannlige demonstranter og observatører ikke viste økninger i buetranskripsjon over kontroller på tidspunktet for fryktgjenkalling, viste kvinnelige demonstranter betydelig høyere kjernefysisk buetranskripsjon enn kontroller mens kvinnelige observatører falt midt mellom de to. Denne kjønnseffekten kan være drevet av de nevnte underskuddene observert i lært frykthemming og utryddelse som er observert hos kvinner 47–49, ettersom tidligere forskning har antydet at PLS er kritisk involvert i å stimulere fryktadferd45,53,54. Videre har flere studier implisert forskjeller i PLS-signalering og struktur som potensielle drivende faktorer for disse kjønnsspesifikke svekkelsene i frykthemming og utryddelse55–58. Selv om vi ikke fant noen signifikant forskjell i kvinnelig og mannlig fryseatferd til signalet, kan oppreguleringen av Arc mRNA som svar på en ikke-forsterket frykt assosiert CS hos spesifikt kvinnelige demonstranter være en indikasjon på differensiell nevral restrukturering i PLS som til slutt kan føre til kjønnsforskjeller i fryktuttrykk.

Konklusjoner

Selv om funnene fra denne studien ikke utvidet vår forståelse av hjernemekanismene involvert i gjenfinning av sosialt ervervede minner så mye som vi hadde håpet, gir resultatene våre noen potensielle innsikter om kjønnsforskjeller i Arc-uttrykk, så vel som rollen (eller mangel på samme) av Arc i langtidsminne. Våre funn tyder på at - i det minste i prefrontal cortex og vCA3 - induksjon av hjerneaktivitet gjennom tilbakekalling av sosialt ervervet informasjon ikke ser ut til å være tilstrekkelig til å forårsake økninger i Arc-uttrykk i forhold til de som er forårsaket av testprosedyren alene. Imidlertid er gyldigheten av denne takeawayen sikkert stilt spørsmål ved de usikre resultatene av våre atferdstester, ettersom dårlig oppbevaring av sosialt ervervet informasjon kan være skyld i denne mangelen på effekt. Vi teoretiserer at dette kan være fordi minimal nevral restrukturering utløses når en tilbakekalling skjer før systemkonsolidering. Ytterligere forskning på rollen til Arc-proteinet i tilbakekallingsprosesser for sosial læring er fortsatt berettiget gitt at atferdsresultatene våre ikke viser sosial læring hos observatørrotter. Fremtidig forskning som undersøker overlapping i de nevrale mekanismene som styrer ulike former for sosial læring kan også ha nytte av inkludering av dyr som gjennomgår anskaffelsesprosedyrer og dyr som gjennomgår fjerngjenkallingsprosedyrer, ettersom disse tidspunktene kan være mer sannsynlig å indusere plastisitetsendringer og dermed endringer i bueuttrykk. .

Cistanche-tilskudd i nærheten av meg - Forbedre hukommelsen

Klikk her for å se produkter fra Cistanche Improve Memory

【Be om mer】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Metoder

Emner. Forsøkspersonene var hann- og kvinnelige Sprague-Dawley-rotter oppdrettet internt i Animal Resource Center ved University of Texas i Austin. Syv hekkepar produserte forsøkspersonene for kohort 1 (n=27 hunner, n=36 hanner), og åtte hekkepar produserte forsøkspersonene for kohort 2 (n=27 hanner, ingen hunner). Kvinnelige oppdrettere var Sprague-Dawley-rotter (mellom 215 og 260 g ved ankomst) hentet fra Charles-Rivers (Wilmington, MA, USA) mens hannoppdrettere var Sprague-Dawley-rotter (mellom 230 og 300 g ved ankomst) hentet fra Harlan (nå) Envigo) (Houston, TX, USA). Alle rottene ble holdt sammen med en burkamerat av motsatt kjønn inntil hunnen viste tydelige tegn på graviditet, da hunnene ble holdt enkeltvis. Valper ble avvent til triader av søsken av samme kjønn på post-natal dag 21 (P21) for å sikre sosial frykt læring26. Reserveunger ble avvent til triader eller dyader med ubeslektede rotter og brukt i andre eksperimenter ved University of Texas i Austin. Hunnunger fra vårt andre kohortkull ble brukt i andre eksperimenter. Valper fikk lov til å modnes med minimale forstyrrelser bortsett fra rutinemessige dyreholdsprosedyrer (f.eks. bytte av bur) inntil tilvenningsprosedyrer (hunn-triader) eller dominansvurderingsprosedyrer (hann-triader) startet (dominansprosedyrer og resultater beskrevet i tilleggsmateriale). Kohort 1-rotter startet prosedyrer mellom P106–P112 dagers alder og kohort 2-rotter startet mellom P99–P118 dagers alder. Alle forsøkspersonene ble holdt på en 12-t omvendt mørk-lys-syklus med lys av klokken 15.00. Alle eksperimentelle prosedyrer ble fullført under forsøkspersonenes mørkesyklus under rødt lys. Alle deler av dette eksperimentet ble utført i samsvar med National Institutes of Health Guide for Care and Use of Experimental Animals og ble godkjent for bruk av University of Texas i Austin Animal Care and Use Committee.

Apparater og stimuli. Fryktkondisjonering. Alle fryktkondisjonerings- og fryktkondisjonerings-by-proxy-prosedyrer ble fullført i standardkondisjoneringskamre (30,48 cm×25,4 cm×30,48 cm) konstruert av klare plexiglassvegger foran og bak, to stålvegger på siden, og et plexiglasstak med en hull i midten. Gulvet i kammeret var en rad av rustfrie stålstenger koblet til en sjokkgenerator (Coulbourn Instruments, Allentown, PA). Alle kamre var innelukket i akustiske isolasjonsbokser (Coulbourn Instruments) og opplyst med et internt rødt lys. Atferd ble registrert av lukkede kretskameraer (Panasonic™ WV-BP334) montert over kondisjoneringskamrene med linsen satt inn gjennom hullet i plexiglasstaket. Kamrene ble tørket helt ned med 70 prosent alkoholløsning mellom hvert forsøksperson. All stimuluslevering ble kontrollert ved hjelp av Freeze Frame-programvaren (Coulbourn Instruments). CS var en 20 stein (5 kHz, 80 dB) og, i prosedyrer med flere CS-presentasjoner, et variabelt inter-trial intervall (ITI) på gjennomsnittlig 180 s. Den ubetingede stimulusen (US) var et 1 mA sjokk som var 500 ms i varighet og avsluttet med den betingede stimulusen.

Sosial overføring av matpreferanse. Alle STFP-prosedyrer fant sted i et rom ved siden av rommet som inneholdt kondisjoneringskamrene. Nye dietter ble sammensatt ved å blande 100 g pulverisert 5LL2 Purina-gnagermat med enten 1 g McCormick malt kanel (diett Cin) eller 2 g Hershey kakaopulver (diet Co). Vanlig diett, som ble gitt til alle rotter under matrestriksjonsperioden og til kontrollrotter på den siste dagen av eksperimentelle prosedyrer, var uforfalsket pulverisert 5LL2 Purina-gnagermat. Alle pulveriserte chows – både under matrestriksjoner og eksperimentelle prosedyrer – ble presentert i hengende matkopper som ble laget av 4 oz. glasskrukker og 12-gauge ståltråd. Matkopper ble skylt og deretter tørket av med en 70 prosent etanolløsning før de ble vasket grundig med såpe og vann mellom hver bruk. Alle fullendte faser av STFP-eksperimentelle prosedyrer fant sted i standard rottebur (26,7 cm × 48,3 cm × 20,3 cm), med hver rotte som mottok et ferskt bur. Interaksjonsfasen (STFP-anskaffelsesfasen) fant sted i en stor plastbeholder (50,5 cm×39,4 cm×37,5 cm) med flisgulv som ble skiftet ut mellom hver gruppe. Plastbinger ble tørket grundig ned med Windex mellom hver økt.

Oversikt over eksperimentelt design og sosiale læringsprosedyrer.

(Se fig. 2 for en grafisk oversikt).

Alle rottene ble matbegrenset i fem dager og vant til håndtering og rommet der STFP-prosedyrer skulle finne sted i fire dager rett før dag 1 av eksperimentelle prosedyrer. Mens tilvenningsprosedyrene ble avsluttet før dag 1 av de eksperimentelle prosedyrene, fortsatte matrestriksjonen til slutten av eksperimentet. En rotte fra hver triade ble tildelt en av tre tilstander: Demonstrator, Observatør eller Kontroll. Kohort 2 hanntriader hadde blitt vurdert for dominans og alle viste et klart hierarki og ble tildelt slik at den dominerende rotten var demonstranten og en underordnet var observatøren for å forbedre sosial overføring av frykt13. Individuelle triader ble videre tilfeldig delt inn i grupper der demonstranten og observatøren ville motta en valgtest ved STFP tilbakekalling (Choice) og grupper der de bare ville motta den demonstrerte maten (Cin).

På dag 1 av den eksperimentelle prosedyren ble rotter som ble tildelt demonstrasjonstilstanden flyttet til fryktkondisjoneringskamre og tillatt å tilvenne seg i 10 minutter før de ble utsatt for 3 CS-er som avsluttet med et smertefullt sjokk (se "Apparat og stimuli" for detaljer). Etter prosedyrer for fryktkondisjonering ble dem-demonstratorer flyttet tilbake til sitt opprinnelige hjemmebur. På dag 2 av eksperimentelle prosedyrer, 24 timer etter fryktkondisjonering, ble demonstranter returnert til kondisjonskamrene med burkameraten tildelt observatørtilstanden og satt gjennom FCbP-prosedyren (fig. 2). Umiddelbart etter FCbP-prosedyren ble observatørrotter returnert til hjemmeburet mens demonstranter ble flyttet til et tilstøtende rom og gitt 1 time til å konsumere pulverisert chow smaksatt med kanel. Etter at det hadde gått en time, ble observatører flyttet til en interaksjonsboks med demonstrantene og tillatt å samhandle med dem i 30 minutter for å tillate anskaffelse av en sosialt overført matpreferanse. Tidligere forskning fra laboratoriet vårt har validert disse tidspunktene som tilstrekkelige for STFP-overføring33. Etterpå ble observatørrotter returnert til hjemmeburet mens demonstratorrotter ble flyttet til enkelthus for å forhindre ytterligere STFP-overføring til observatøren eller kontrollen. På dag 3 av eksperimentelle prosedyrer ble kontrollrotter flyttet til kondisjoneringskamre alene, og etter 10 minutters tilvenning til kammeret ble det presentert tre 20 s CS-er uten medfølgende sjokk. Dette ble gjort på en egen dag for å minimere muligheten for at langvarige alarmferomoner – som er kjent for å bli frigjort av rotter som svar på truende stimuli og påvirker spesifikk læring59 – fortsatt er tilstede i kammeret.

På den siste dagen av eksperimentet, dag 4, ble det igangsatt en tilbakekalling for både sosialt overført matpreferanse og fryktkondisjonering/fryktkondisjonerende by-proxy-minner. Alle observatører og demonstranter fra triader tildelt Choice-betingelsen fikk 10 minutter ad libitum tilgang til både kanel- og kakao-favoriserte dietter, mens observatører og demonstranter fra triader tildelt Cin-tilstanden fikk 10 minutter ad libitum tilgang til kanel-dietten- bare. I alle triader ble kontrollrotter gitt 10 minutter ad libitum tilgang til vanlig pulverisert chow. Umiddelbart etter dette ble rottene returnert til hjemmeburet og forlatt uforstyrret i en 10-minutt før de ble flyttet tilbake til laboratorierommet og plassert i kondisjoneringskamrene. Alle rottene ble deretter gitt en 3-min tilvenningsperiode til kammeret før de ble presentert med en enkelt 20 s CS. 5 minutter etter slutten av CS ble alle rottene avlivet via injeksjon av en pentobarbital og fenytoinløsning (Euthasol; Virbac Animal Health) og perfusert. Hjernene deres ble senere behandlet for Arc mRNA-uttrykk. Gitt tidsforløpet til vår terminale prosedyre og den kjente migrasjonstidsrammen for Arc mRNA28, vil økt cytoplasmatisk ekspresjon av Arc mRNA skyldes STFP-gjenkallingsprosedyrer, mens kjernefysisk ekspresjon vil skyldes FC/FCbP-gjenkallingsprosedyrer, med celler som viser dobbel aktivering blitt aktivert i begge tidsrammer (se fig. 1; se også "vevsanalyse" for detaljer om vevsbehandling og prosessering).

Ørken levende cistanche

Prosedyrer.

Tilvenning og matrestriksjoner. All tilvenning fant sted like før den første dagen med eksperimentelle prosedyrer. Tilvenning besto av at hvert bur med rotter ble flyttet inn i rommet der alle STFP-eksperimentelle prosedyrer skulle finne sted og fikk tilvenne seg til rommet i 15 minutter. I løpet av denne perioden ble hver rotte plukket opp og håndtert av eksperimentatoren som ville kjøre atferd i 2 minutter for å venne dem til håndtering og den personen. Alle tilvenningsprosedyrer fant sted i et mørkt rom under rødt lys, og alle rottene fikk 4 dagers tilvenning. Matrestriksjonen begynte dagen før tilvenningen begynte og vedvarte til slutten av eksperimentet. Ved starten av matrestriksjonen ble matpelletene som alle forsøkspersoner hadde spist fjernet fra buret. Deretter fikk alle bur daglig ad libitum tilgang til en hengende krukke full av ren, pulverisert Purina 5LL2 diett i hjemmeburet i 1 time. Rotter ble veid daglig fra begynnelsen av matrestriksjonen inntil eksperimentet var over for å sikre ikke noe uvanlig vekttap.

Atferdsscoring.

All atferdsscoring for dette eksperimentet ble fullført ved bruk av Behavioral Observation Research Interactive Software (BORIS)60.

Fryktkondisjonering ved-sosial kontaktscoring via proxy. Tidligere forskning fra laboratoriet vårt har indikert at det er en sterk sammenheng mellom mengden frykt vist av observatører ved langtidshukommelsestesten og tiden brukt på å samhandle med deres demonstrator under CS hos menn13 og etter CS hos kvinner14,26. Som sådan ble videoer av den sosiale tilegnelsesfasen av fryktkondisjonering ved hjelp av proxy vurdert for sosial interaksjon mellom observatøren og demonstranten for hver 20--periode under CS-presentasjonen og 20--perioden umiddelbart etter hver CS-presentasjon for å gi en sekundær indeks for fryktinnhenting. Sosial kontakt ble skåret når observatør- og demonstratorrotter tok kontakt på annet vis enn i forbifarten under cue-perioden (under CS-kontakt) eller i 20-sek. etter CS (post CS-kontakt). Prosentandelen av hver scoringsperiode brukt i kontakt med demonstranten ble beregnet. Data for prosentvis kontakt i cue-perioden for menn og data for prosentkontakt umiddelbart etter cue-perioden for kvinner ble trukket og kombinert til et enkelt "relevant kontakt"-mål som skal brukes i alle endelige statistiske analyser.

Valgprøvescore. Videoer av valgtesten for å starte en tilbakekalling av en sosialt overført matpreferanse ble skåret for hvor lang tid en gitt rotte brukte på å samhandle med en matkopp basert på om den inneholdt den demonstrerte/allerede konsumerte dietten (dietten Cin) eller romanen. diett (diet Co). Dette ble gjort som et potensielt sekundært mål på matpreferanse, da vi forventet at på grunn av at valgtesten var unormalt kort (10 minutter) av nødvendighet, kunne vi kanskje ikke oppdage preferanser basert på mengden spist alene. Interaksjon med matkoppen ble skåret for når en rotte var fysisk i kontakt med og ikke aktivt beveget seg bort fra koppen (dvs. forpoter i kontakt med glasset, hodet inne i glasset, klatret på toppen av glasset eller spiste aktivt. fra krukken). For statistisk analyse beregnet vi prosenten av tiden brukt på å samhandle med en kopp som inneholder en gitt diett basert på den totale tiden brukt på å samhandle med begge koppene (f.eks. for diett Cin, Prosent av tid= TimeDiet Cin/ (TimeDiet) Co pluss TimeDiet Cin)). Hele 10-min valgtestøkten ble scoret for alle rottene som gjennomgikk den.

Vevsanalyse.

For å minimere nedbrytningen av mRNA av ribonuklease (RNase), ble alt utstyr og overflater som ble brukt under hjerneforberedelse og prosessering desinfisert regelmessig med enten RNase AWAY™ (Termo Scientity; Waltham, MA, USA) eller RNAseZap™ (Ambion; Grand Island, NY , USA).

Hjerneforberedelse. Umiddelbart etter eutanasi ble forsøkspersoner perfusert intrakardialt ved bruk av en 4 prosent paraformaldehyd (PFA) løsning. Hjerner ble deretter fjernet og nedsenket i 4 prosent PFA for å tillate etterfiksering i 24–48 timer. Når postfikseringen var fullført, ble hjerner overført til en løsning av 30 prosent sukrose i fosfatbufret saltvann for kryobeskyttelse. Når hjernen hadde sunket til bunnen av hetteglasset, noe som indikerte tilstrekkelig sukroseopptak for kryobeskyttelse, ble de flash-frosset i pulverisert tørris og flyttet til en -80 graders fryser for oppbevaring frem til seksjonering. Hjerner ble deretter seksjonert koronalt på en glidende mikrotom ved 30 µm tykkelse i seks serier (så påfølgende seksjoner i en enkelt serie var 180 µm fra hverandre) og umiddelbart montert og tillatt å lufttørke før de ble plassert i et vakuumkammer med fuktighetssvamper der de ble plassert la tørke helt i 24 timer. Bare hippocampale seksjoner (omtrent -3,2 til -5,2 fra bregma) eller prefrontale regioner (omtrent pluss 3,7 til pluss 1,4 fra bregma) som inneholdt interesseområdene ble seksjonert og behandlet. Monterte seksjoner ble deretter plassert i en forseglet RNase-fri lysbildeboks og lagret ved – 80 grader frem til behandling.

Vevsbehandling. Alle prosedyrer ble modifisert fra protokollene brukt i Lee et al.61 og Petrovich et al.62. Før vevsbehandling ble en cRNA-probe for Arc-mRNA konstruert med utgangspunkt i et plasmid som inneholdt et cDNA i full lengde (~3.0 kbp) av Arc-transkriptet. For å lage proben ble DNA først kuttet ved å blande plasmidet med en 10 x fordøyelsesbuffer (NEBufer; Biolabs; Ipswich, MA, USA), et 10 x EcoRI restriksjonsenzym (Biolabs) og renset nukleasefritt vann før det ble inkubert ved 37 grader i 2 timer. Riktig kutting av DNA ble verifisert ved hjelp av elektroforese, hvoretter DNA ble renset over natten i etanol. Etter rensing ble DNA-pelleten spunnet ut i en sentrifuge, vasket i EtOH, fullstendig tørket og resuspendert i en TE-buffer. For å verifisere at DNA var riktig linearisert, beregne buekonsentrasjon og sjekke at ingen forurensninger var tilstede, ble en prøve av DNA testet via spektrofotometri (Nanodrop Lite; Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Den Digoxigenin (DIG)-merkede proben ble transkribert ved å kombinere det lineariserte DNAet med RNase-fritt vann, en 10 × transkripsjonsbuffer (Ambion), RNAse-blokk (Ambion), DIG RNA-merkingsblanding (Roche Applied Science; Indianapolis, IN, USA) , og en T7 RNA-polymerase (Ambion) før løsningen inkuberes ved 37 grader i 2 timer. Til slutt ble proben fortynnet i nukleasefritt vann og renset i en mini Quick-Spin-kolonne (Roche).

Når cRNA-proben var konstruert, ble objektglass som inneholdt vev fra hannrottene nedsenket i 4 0 minutter i en 4 prosent PFA-løsning for å øke vevsintegriteten gjennom in situ-prosessering. Vev fra hunnrotter ble behandlet uten denne PFA-vasken. Objektglassene ble deretter vasket og inkubert i en proteinase K (PK) buffer ved 37 grader før de ble behandlet med en 0,5 prosent eddiksyreanhydrid/1,5 prosent trietanolaminløsning inneholdende iseddik for permeabilisering. Objektglassene ble deretter vasket i en saltvanns-natriumcitratbuffer (SSC) før de ble dehydrert ved nedsenking i stigende konsentrasjoner av etanol og lufttørket. Til slutt ble hvert objektglas dekket med 300 µL av en hybridiseringsbuffer som inneholdt gjær-tRNA (Invitrogen; Carlsbad, CA, USA), laksesperm-DNA (Ambion), ditiotreitol (Sigma; St. Louis, MO, USA) og cRNA-sonden (1:100). Hvert objektglass ble deretter dekkglasset og forseglet rundt kantene med DPX-monteringsmiddel (Electron Microscopy Sciences; Hatfield, PA, USA) før det ble inkubert i hybridiseringsløsningen i 20 timer ved 60 grader. Spesielt beskyttet dekkglasset vevet mot enhver direkte kontakt med DPX-monteringsmidlet, så senere fjerning av den herdede DPX forårsaket ingen skade på vevet.

Når hybridiseringen var fullført, ble dekkglass forsiktig fjernet, og objektglass ble inkubert i en 4xSSC-buffer blandet med natriumtiosulfat (ST) ved 60 grader i en time før de ble behandlet med en etylendiamintetraeddiksyrebasert løsning for å hemme RNAse-aktivitet ved 37ºC. Etter dette ble objektglass vasket i synkende konsentrasjoner av SSC-løsning blandet med ST igjen ved 60 grader. Vevet ble deretter vasket i en vaskemiddelløsning (Tween20) før det ble farget med PerkinElmer TSA Fluorescein-systemet (NEL701001KT; PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Objektglass ble plassert i et fuktig kammer og behandlet med en blokkeringsbuffer etterfulgt av et anti-DIG-HRP-konjugat i 2 timer. Objektglass ble deretter kort vasket i vaskemiddelløsningen før de ble returnert til et mørkt fuktig kammer og belagt med en løsning som inneholdt fluoresceintyramidreagens (FITC) og fikk sitte i 30 minutter. Til slutt ble objektglassene vasket, lufttørke og dekkglasset med et monteringsmiddel som inneholdt kjernefysisk flekken 4′,6-diamidino-2-phenylinodole (DAPI) (Vectashield; Vector Lab, Burlingame, CA, USA) . Objektglassene ble lagret i mørket ved – 20 grader frem til bildebehandling.

Bildebehandling. All avbildning ble fullført ved bruk av et Axio Scope A1-mikroskop (Zeiss; Tornwood, NY, USA). Regioner av interesse ble identifisert via DAPI-farging ved bruk av et 10×-objektiv ved hjelp av Paxinos og Watson-hjerneatlas63 og deretter avbildet under et 40×-objektiv (faktisk forstørrelse~900×). Bilder ble tatt for både DAPI- og FITC-flekker og senere fargelagt og slått sammen automatisk ved hjelp av en tilpasset makro i ImageJ-programvaren med FIJI (NIH, Bethesda, MD). På grunn av vevsnedbrytning som skjedde gjennom in situ, var ikke alle seksjoner eller områder av potensiell interesse levedyktige. Som sådan kunne ikke bilder z-stables pålitelig og ble i stedet tatt på et enkelt plan. Følgende regioner ble avbildet og talt: den prelimbiske cortex (pluss 3,72 til pluss 2,52 fra bregma), den infralimbiske cortex (pluss 3,52 til pluss 2,2 fra bregma), den laterale (pluss 3,72 til pluss 3,2 fra bregma) og ventral (pluss 3,72 til pluss 3,0 fra bregma) orbitofrontal cortex, CG1-regionen av den fremre cingulate cortex (pluss 3,72 til pluss 2,52 fra bregma), og CA3-regionen av den ventrale hippocampus (- 4,3 til - 4,8 fra bregma) (fig. S6). Til tross for at amygdalkjernene også var av spesiell interesse for deres veletablerte rolle i fryktlæring, hadde den nevnte vevsskaden en tendens til å være spesielt alvorlig i dette området. Som sådan var vi ikke i stand til å få en prøvestørrelse stor nok til å inkludere den regionen (minst 6 levedyktige bilder/region var nødvendig for at en rotte skulle inkluderes i den statistiske analysen av et gitt område).

Tellingene ble fullført region for region, og alle bildefiler ble tildelt en tilfeldig numerisk kode for å blinde eksperimentatoren som fullførte tellingene fra alle detaljer angående bildet på tidspunktet for tellingen. Alle celletall ble tatt i ImageJ med FIJI-pakken og ble laget ved hjelp av celletelleverktøyet. Celler ble talt for kjernefysisk og cytoplasmatisk bue-mRNA-ekspresjon separat, og celler som viste overlappende uttrykk ble regnet som dobbeltuttrykk. De endelige tellingene for nukleære Arc-uttrykkende og cytoplasmatiske Arc-uttrykkende celler inkluderte bare de cellene som bare uttrykker i den regionen (dvs. inkluderte ikke dobbeltuttrykkende celler). Fulle tellinger for DAPI-fargede celler ble tatt og prosenten av celler som viste ekspresjon i hvert gitt område ble beregnet etterfulgt av gjennomsnittlig prosentandel av celler som viste hver type aktivering i individuelle rotter. For å forhindre at score til rotter med større antall bilder har en uforholdsmessig effekt på statistikken vår, og for å forhindre en oppblåsing av prøvestørrelse, ble bare disse gjennomsnittene brukt i vår endelige analyse.

Statistisk analyseoversikt. Alle statistiske analyser ble fullført ved bruk av R-kodingsprogramvaren. Hele koden er fritt tilgjengelig for å se på vårt datalager på https://dataverse.tdl.org/dataverse/MonflsFearMemoryLab. Med mindre annet er oppgitt, ble grensen for at en test skulle anses som statistisk signifikant satt til p<0.05. All of our Arc results, unless otherwise mentioned, were tested for significance using a series of two-way ANOVAs (type 2) containing sex and condition as between-subject variables (Sex and Condition) with an individual ANOVAs run for each area of expression (nucleus, cytoplasm, and dual). Similarly, a series of one-way ANOVAs were run with a combined variable containing the food task (diet Cin only or Choice test for Demonstrators and Observers; plain chow only for all Controls) for each area of expression. Sex was not included as a secondary variable as the relatively low number of female rats made sample sizes too small for certain condition/food task combinations. When ANOVA assumptions were violated, data were transformed using either a log(y+1) function or by taking the inverse square root. As these transforms did not always succeed in bringing ANOVAs in line with assumptions, Kruskal-Wallace tests were performed on datasets where transforms were not effective. Pairwise t-tests were performed for posthoc analyses against a Bonferroni-corrected alpha value when ANOVAs indicated a significant effect of condition (α=0.017) or a significant sex and condition interaction (α=0.008; conditions tested against each other within each sex-only) with between-group effect sizes calculated using Cohen's d. To provide a better gauge of variability for our smaller group sizes, the MSError obtained from our ANOVA was used in the denominator of post hoc t-tests. Effect sizes for ANOVAs were calculated using the standard partial η2 formula and for Kruskal-Wallace tests using the formula η2 H =(H − k+1)/(n – k). For simplicity of data presentation, unless the addition of the food task grouping variable resulted in a significant effect or unless a significant contribution of sex was detected all data were presented graphically split up by area of expression and overall experimental condition only. Any rats that had fewer than 6 viable images counted in a given brain region were excluded from the analysis for that area.

Bivariate korrelasjoner ble beregnet for observatør- og demonstratorrotter for å vurdere potensielle forhold mellom atferdsmål og buecelletall for ekspresjon som skjedde på passende tidspunkt (f.eks. cytoplasmatisk bueteller for prosent av spist kanel). Pearsons korrelasjonskoeffisienter ble brukt hvis ingen uteliggere i noen av datasettene ble oppdaget med en Grubbs-test. Hvis uteliggere ble oppdaget, ble Spearmans korrelasjonskoeffisient brukt i stedet. For å måle om et forhold mellom sosial læring og Arc i dobbeltuttrykkende celler i Observers, ble en samlet metrikk for sosial læring – referert til herfra og ut som den sosiale læringsmetrikken (SLM) – beregnet ved å ta gjennomsnittet av de standardiserte skårene ( z-score) for prosentandelen av totalt spist som var den demonstrerte maten og prosentandelen av tiden brukt i kontakt med demonstranten under FCbP sosial læringsfase under CS-presentasjonen (menn) eller etter CS-presentasjonen (kvinner). Spesielt ble prosent frysing til signalet på den siste dagen ikke brukt for observerrotter fordi resultatene våre og resultatene av vårt oppfølgingseksperiment (se tilleggsmateriale) indikerte at betingelsene for vår atferdstestprosedyre resulterte i en viss fryseatferd selv i Kontrollrotter – i det minste hos hanner – og som sådan er de kanskje ikke den beste målestokken for styrken til den sosialt ervervede fryktresponsen. Som sådan, gitt våre tidligere funn om at interaksjoner med demonstratoren under eller etter CS (avhengig av kjønn) forutså senere frysing til cue12–14, ble interaksjon med demonstranten på det kjønnspassende tidspunktet testet for korrelasjoner mot atombueaktivitet heller enn å fryse til køen på den siste dagen for Observer-rotter. For demonstranter ble en lignende beregning beregnet basert på standardisert frysing til signalet på siste dag og prosentandelen av totalt spist som var den kjente dietten (Diet Cin) og sjekket mot dual Arc-aktivitet. For å korrigere for de flere testene som ble kjørt på hvert atferdsdatasett (6, for hver hjerneregion), ble den kritiske p-verdien for korrelasjoner Bonferroni justert til 0.0083.

Referanser

1. Dawson, G., Meltzof, AN, Osterling, J., Rinaldi, J. & Brown, E. Barn med autisme klarer ikke å orientere seg mot naturlig forekommende sosiale stimuli. J. Autism Dev. Uorden. 28, 479-485 (1998).

2. Zeeland, AAS-V., Dapretto, M., Ghahremani, DG, Poldrack, RA & Bookheimer, SY Belønningsbehandling i autisme. Autisme Res.

3, 53–67 (2010). 3. Chevallier, C., Kohls, G., Troiani, V., Brodkin, ES & Schultz, RT Teorien om sosial motivasjon om autisme. Trender Cogn. Sci. 16, 231–239 (2012).

4. Öst, L.-G. Måter å tilegne seg fobier og utfall av atferdsbehandlinger. Oppførsel. Res. Ter. 23, 683-689 (1985).

5. Ollendick, TH & King, NJ Opprinnelsen til barndomsfrykt: En evaluering av Rachmans teori om frykttilegnelse. Oppførsel. Res. Ter. 29, 117-123 (1991).

6. Merckelbach, H., Arntz, A. & de Jong, P. Conditioning experiences in edder phobics. Oppførsel. Res. Ter. 29, 333-335 (1991).

7. Jeon, D. et al. Observasjonsfryktlæring involverer defekt smertesystem og Cav1.2 Ca2 pluss-kanaler i ACC. Nat. Neurosci. 13, 482–488 (2010).

8. Yusufshaq, S. & Rosenkranz, JA Sosial isolasjon etter avvenning svekker observasjonsfryktkondisjonering. Oppførsel. Brain Res. 242, 142–149 (2013).

9. Kavaliers, M., Choleris, E. & Colwell, DD Lære av andre for å takle bitende fluer: Sosial læring av fryktindusert betinget analgesi og aktiv unngåelse. Oppførsel. Neurosci. 115, 661–674 (2001).

10. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. Lære å frykte og takle en naturlig stressfaktor: Individuelt og sosialt ervervet kortikosteron og unngåelsesreaksjoner på bitende fluer. Horm. Oppførsel. 43, 99–107 (2003).

11. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. Slektskap, fortrolighet og sosial status modulerer sosial læring om "mikrorovdyr" (bitende fluer) hos hjortemus. Oppførsel. Ecol. Sosiobiol. 58, 60–71 (2005).

12. Bruchey, AK, Jones, CE & Monfls, M.-H. Fryktkondisjonering ved proxy: Sosial overføring av frykt under minneinnhenting. Oppførsel. Brain Res. 214, 80–84 (2010).

13. Jones, CE & Monfls, M.-H. Dominansstatus forutsier overføring av sosial frykt hos laboratorierotter. Anim. Cogn. 19, 1051–1069 (2016).

14. Agee, LA, Jones, CE & Monfls, M.-H. Ulike effekter av fortrolighet/slektskap i sosial overføring av fryktassosiasjoner og matpreferanser hos rotter. Anim. Cogn. 22, 1013–1026 (2019).

15. Mitchell, CJ, Heyes, CM, Gardner, MR & Dawson, GR Begrensninger for en toveis kontrollprosedyre for undersøkelse av imitasjon hos rotter: Luktsignaler på manipulandum. QJ Exp. Psychol. B 52, 193–202 (1999).

16. Galef, BG & Wigmore, SW Overføring av informasjon om fjerntliggende matvarer: En laboratorieundersøkelse av 'informasjonssenter'-hypotesen. Anim. Oppførsel. 31, 748-758 (1983).

17. Galef, BG, Mason, JR, Preti, G. & Bean, NJ Karbondisulfid: Et semiokjemisk medierende sosialt indusert diettvalg hos rotter. Physiol. Oppførsel. 42, 119-124 (1988).

18. Galef, BG En casestudie i atferdsanalyse, syntese og oppmerksomhet på detaljer: Sosial læring av matpreferanser. Oppførsel. Brain Res. 231, 266–271 (2012).

19. Posadas-Andrews, A. & Roper, TJ Sosial overføring av matpreferanser hos voksne rotter. Anim. Oppførsel. 31, 265-271 (1983).

20. Countryman, RA, Orlowski, JD, Brightwell, JJ, Oskowitz, AZ & Colombo, PJ CREB-fosforylering og c-Fos-uttrykk i hippocampus til rotter under anskaffelse og tilbakekalling av en sosialt overført matpreferanse. Hippocampus 15, 56–67 (2005).

21. Boix-Trelis, N., Vale-Martínez, A., Guillazo-Blanch, G., Costa-Miserachs, D. & Martí-Nicolovius, M. Effekter av nucleus basalis magnocellularis-stimulering på en sosialt overført matpreferanse og c. -Fos uttrykk. Lære. Mem. 13, 783–793 (2006).

22. Ross, RS & Eichenbaum, H. Dynamikk av hippocampus og kortikal aktivering under konsolideringen av et ikke-romlig minne. J. Neurosci. 26, 4852–4859 (2006).

23. Smith, CA, Countryman, RA, Sahuque, LL & Colombo, PJ Tidskurs for Fos-uttrykk i rottehippocampus og neocortex etter anskaffelse og tilbakekalling av en sosialt overført matpreferanse. Neurobiol. Lære. Mem. 88, 65–74 (2007).

24. Lesburguères, E. et al. Tidlig merking av kortikale nettverk er nødvendig for dannelsen av varig assosiativt minne. Science 331, 924–928 (2011).

25. Knapska, E. et al. Overføring av emosjonell informasjon mellom emner fremkaller spesifikke mønstre for amygdalaaktivering. Proc. Natl. Acad. Sci. 103, 3858–3862 (2006).

26. Jones, CE, Riha, PD, Gore, AC & Monfls, M.-H. Sosial overføring av Pavlovsk frykt: Fryktkondisjonerende byproxy hos relaterte hunnrotter. Anim. Cogn. 17, 827–834 (2014). 27. Twining, RC, Vantrease, JE, Love, S., Padival, M. & Rosenkranz, JA En intra-amygdala-krets regulerer spesifikt læring av sosial frykt. Nat. Neurosci. 20, 459–469 (2017).

28. Olsson, A., Knapska, E. & Lindström, B. Te nevrale og beregningssystemer for sosial læring. Nat. Rev. Neurosci. 21, 197–212 (2020).

29. Guzowski, JF, McNaughton, BL, Barnes, CA & Worley, PF Miljøspesifikk uttrykk for det umiddelbare tidlige genet Arc i hippocampale nevronale ensembler. Nat. Neurosci. 2, 1120-1124 (1999).

30. Kim, JJ & Jung, MW Nevrale kretser og mekanismer involvert i Pavlovsk fryktkondisjonering: En kritisk gjennomgang. Neurosci. Biobehav. Rev. 30, 188–202 (2006).

31. Laurent, V. & Westbrook, RF Inaktivering av den infralimbiske, men ikke den prelimbiske cortex, svekker konsolidering og gjenfinning av fryktutryddelse. Lære. Mem. 16, 520–529 (2009).

32. Tovote, P., Fadok, JP & Lüthi, A. Neuronale kretsløp for frykt og angst. Nat. Rev. Neurosci. 16, 317–331 (2015).

33. Agee, LA & Monfls, M.-H. Effekten av demonstratorens pålitelighet og nylig av den siste demonstrasjonen på anskaffelse av en sosialt overført matpreferanse. R. Soc. Åpne Sci. 5, 172391 (2018).

34. Nikolaienko, O., Patil, S., Eriksen, MS & Bramham, CR Arc protein: En fleksibel hub for synaptisk plastisitet og kognisjon. Semin. Cell Dev. Biol. 77, 33–42 (2018).

35. Chia, C. & Otto, T. Hippocampal Arc (Arg3.1) uttrykk induseres av minnegjenkalling og kreves for hukommelsesrekonsolidering i sporfryktkondisjonering. Neurobiol. Lære. Mem. 106, 48–55 (2013).

36. Pilarzyk, K. et al. Tap av funksjon av fosfodiesterase 11A4 viser at nyere og fjerntliggende langtidsminner kan kobles fra. Curr. Biol. 29, 2307-2321.e5 (2019).

37. Jones, CE Te Sosial overføring av assosiativ frykt hos gnagere—individuelle forskjeller i fryktkondisjonering av Proxy Vol. 17 (Springer, 2021).

38. Smith, CA, East, BS & Colombo, PJ Te orbitofrontal cortex er ikke nødvendig for anskaffelse eller fjerngjenkalling av sosialt overførte matpreferanser. Oppførsel. Brain Res. 208, 243–249 (2010).

39. Rudebeck, PH, Walton, ME, Smyth, AN, Bannerman, DM & Rushworth, MFS Separate nevrale veier behandler ulike beslutningskostnader. Nat. Neurosci. 9, 1161–1168 (2006).

40. Rolls, ET & Grabenhorst, F. Te orbitofrontal cortex og utover: Fra affekt til beslutningstaking. Prog. Neurobiol. 86, 216–244 (2008).

41. Wallis, JD Cross-arts studier av orbitofrontal cortex og verdibasert beslutningstaking. Nat. Neurosci. 15, 13–19 (2012).

42. Izquierdo, A. Funksjonell heterogenitet innen rotte orbitofrontal cortex i belønningslæring og beslutningstaking. J. Neurosci. 37, 10529–10540 (2017).

43. Randesi, M. et al. Kjønnsforskjeller etter kronisk stress i uttrykket av opioid-, stress- og nevroplastisitetsrelaterte gener i rottehippocampus. Neurobiol. Stress 8, 33–41 (2018).

44. Maren, S., Phan, KL & Liberzon, I. Te kontekstuell hjerne: implikasjoner for fryktkondisjonering, utryddelse og psykopatologi. Nat. Rev. Neurosci. 14, 417–428 (2013).

45. Vidal-Gonzalez, I., Vidal-Gonzalez, B., Rauch, SL & Quirk, GJ Mikrostimulering avslører motstridende påvirkninger av prelimbisk og infralimbisk cortex på uttrykket av betinget frykt. Lære. Mem. 13, 728–733 (2006).

46. ​​Sierra-Mercado, D., Padilla-Coreano, N. & Quirk, GJ Dissociable roller av prelimbiske og infralimbiske cortex, ventral hippocampus og basolateral amygdala i uttrykk og utryddelse av betinget frykt. Neuropsychopharmacology 36, 529–538 (2011).

47. Baran, SE, Armstrong, CE, Niren, DC, Hanna, JJ & Conrad, CD Kronisk stress og kjønnsforskjeller ved tilbakekalling av fryktkondisjonering og utryddelse. Neurobiol. Lære. Mem. 91, 323–332 (2009).

48. Greiner, EM, Müller, I., Norris, MR, Ng, KH & Sangha, S. Kjønnsforskjeller i fryktregulering og belønningssøkende atferd i en frykt-sikkerhet-belønningsdiskrimineringsoppgave. Oppførsel. Brain Res. 368, 111903 (2019).

49. Day, HLL & Stevenson, CW Det nevrobiologiske grunnlaget for kjønnsforskjeller i lært frykt og dens hemming. Eur. J. Neurosci. 52, 2466–2486 (2020).

50. van Hasselt, FN et al. Individuelle variasjoner i mødreomsorg tidlig i livet korrelerer med beslutningstaking senere i livet og c-fos-uttrykk i de prefrontale underregionene til rotter. PLoS ONE 7, e37820 (2012).

51. Bayless, DW & Daniel, JM Kjønnsforskjeller i myelinassosierte proteinnivåer innenfor og tetthet av projeksjoner mellom den orbitale frontale cortex og dorsale striatum hos voksne rotter: Implikasjoner for hemmende kontroll. Nevrovitenskap 300, 286–296 (2015).

52. Orsini, CA & Setlow, B. Kjønnsforskjeller i dyremodeller for beslutningstaking. J. Neurosci. Res. 95, 260–269 (2017).

53. Corcoran, KA & Quirk, GJ Aktivitet i den prelimbiske cortex er nødvendig for uttrykk for lært, men ikke medfødt. Frykter. J. Neurosci. 27, 840–844 (2007).

54. Burgos-Robles, A., Vidal-Gonzalez, I. & Quirk, GJ Vedvarende betingede responser i prelimbiske prefrontale nevroner er korrelert med fryktuttrykk og utryddelsessvikt. J. Neurosci. 29, 8474–8482 (2009).

55. Fenton, GE et al. Vedvarende prelimbisk cortexaktivitet bidrar til økt innlært fryktuttrykk hos kvinner. Lære. Mem. 21, 55–60 (2014).

56. Fenton, GE, Halliday, DM, Mason, R., Bredy, TW & Stevenson, CW Kjønnsforskjeller i lært fryktuttrykk og utryddelse involverer endrede gamma-oscillasjoner i den mediale prefrontale cortex. Neurobiol. Lære. Mem. 135, 66–72 (2016).

57. Kirry, AJ et al. Hypofyse-adenylat-cyklase-aktiverende polypeptid (PACAP)-signalering i den prefrontale cortex modulerer cued frykt-læring, men ikke romlig arbeidsminne, hos hunnrotter. Neuropharmacology 133, 145–154 (2018).

58. Day, HLL, Suwansawang, S., Halliday, DM & Stevenson, CW Kjønnsforskjeller i auditiv fryktdiskriminering er assosiert med endret medial prefrontal cortexfunksjon. Sci. Rep. 10, 6300 (2020).

59. Kikusui, T., Takigami, S., Takeuchi, Y. & Mori, Y. Alarmferomon forbedrer stressindusert hypertermi hos rotter. Physiol. Oppførsel. 72, 45–50 (2001).

60. Friard, O. & Gamba, M. BORIS: En gratis, allsidig åpen kildekode-programvare for hendelseslogging for video/lydkoding og live observasjoner. Metoder Ecol. Evol. 7, 1325–1330 (2016). 61. Lee, HJ, Haberman, RP, Roquet, RF & Monfls, M.-H. Ekstinksjon og gjenfinning pluss utryddelse av betinget frykt aktiverer differensielt den mediale prefrontale cortex og amygdala hos rotter. Front. Oppførsel. Neurosci. 9, 1–10 (2016).

62. Petrovich, GD, Holland, PC & Gallagher, M. Amygdalar og prefrontale veier til lateral hypothalamus aktiveres av en innlært pekepinn som stimulerer spising. J. Neurosci. 25, 8295–8302 (2005).

63. Paxinos, G. & Watson, C. Te rottehjerne i stereotaksiske koordinater: hardt omslag. (Elsevier, 2006).