Fytokjemisk screening og østrogen aktivitet av totale glykosider av Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrakt

Gjennom flere tiår har det vært kontinuerlige anstrengelser for å forbedre kvaliteten på menneskeliv. Postmenopausalt syndrom er en alvorlig bekymring for kvinners helse. Hormonell terapi er for tiden bærebjelken i behandlingen for denne tilstanden. Imidlertid kan denne behandlingen føre til østrogenmisbruk, som fører til uønskede reaksjoner og bivirkninger. Som et resultat har hormonbehandling vært mislykket i å lindre postmenopausalt syndrom.Cistanche deserticolaer en klassisk styrkende urt i tradisjonell kinesisk medisin. Det viser betydelig østrogen aktivitet. De viktigste aktive forbindelsene til denne urten er glykosider. I et tidligere eksperiment ble tre viktige faktorer som bidrar til det totale glykosidutbyttet, akteosidutbyttet og østrogenaktivitet identifisert, nemlig elueringsmiddelkonsentrasjon, pH og elueringsvolum. I dette eksperimentet ble en optimal renseprosess bestemt ved bruk av en sentral komposittdesign-respons overflatemetodikk for å oppnå glykosider fra denne urten. En eluentkonsentrasjon (etanol) på 85 prosent og volum på 25 BV ved en pH på 11 ble funnet å være optimal. 21 aktive forbindelser ble identifisert ved en høyytelses væskekromatografi/kvadrupol time-of-flight massespektrometrianalyse. Denne studien gir verdifull innsikt for videre dyptgående forskning som evaluerer de østrogene aktivitetene til totale glykosider avCistanche deserticola.

Nøkkelord: Sentral komposittdesign; Cistanche deserticola totale glykosider; LC/Q-TOF-MS; rensing teknologi; livmorveksttest.

Introduksjon

Cistanche deserticolaer en spiselig, klassisk styrkende urt. Den ble først nevnt i Shen Nongs urteklassiker og ble vervet i toppkarakteren. Det er en varm urt og søt. Den har en rekke medisinske egenskaper, som næring av lever og nyre, styrking av muskler og bein, og forbedring av immunregulering sammen med anti-aldring og anti-tumor aktiviteter [1-4]. Noen naturlige forbindelser har blitt isolert og identifisert fra ekstraktene av denne urten, de viktigste er fenyletanoidglykosider, lignanoider, iridoider, polysakkarider og alkaloider [5-8].

Legemidlene hentet fra medisinplanter inneholder forskjellige aktive forbindelser, som primært er ansvarlige for deres terapeutiske virkninger. Effekten av det samme legemidlet hentet fra forskjellige plantekilder kan variere på grunn av forskjellene i typen og mengden av aktive forbindelser som er tilstede i det. Derfor er det viktig å identifisere og kvantifisere alle de aktive forbindelsene som er tilstede i legemidlene hentet fra medisinske planter. Det samme gjelder C. deserticola. Responsoverflatemetodikk er en eksperimentell metode for å undersøke interaksjonen mellom ulike faktorer samtidig [9-10]. Den kan brukes til optimalisering av ekstraksjonsparametere for fytofarmasøytiske midler og kvantitativ estimering av aktive forbindelser i legemidler. Central composite design (CCD) er en av de eksperimentelle designene som er nyttige i responsoverflatemetodikk. Sammenlignet med ortogonale og ensartede design har CCD høyere presisjon og bedre forutsigbarhet [11].

Det postmenopausale syndromet kan redusere livskvaliteten hos kvinner betydelig. Normalt brukes østrogen til å behandle denne tilstanden. Imidlertid kan langvarig bruk av østrogen føre til misbruk, og dermed forårsake ulike bivirkninger og bivirkninger. Derfor er det viktig å velge en alternativ behandling, fortrinnsvis et urtemedisin som inneholder østrogen som en aktiv ingrediens for behandling av postmenopausalt syndrom [12-13].

I et foreløpig eksperiment ble strukturene til ulike naturlige forbindelser oppnådd fra C. deserticola identifisert ved bruk av massespektrometri (MS) [14]. Det ble bekreftet at glykosider er de viktigste aktive forbindelsene som har betydelig østrogen aktivitet [14-15]. For å utvikle en sikker og effektiv østrogenaktiv ingrediens i et nytt medikament, er det nødvendig med en grundig undersøkelse av TGCD etter rensing. I denne studien ble CCD først brukt for å optimalisere rensingen av de totale glykosidene av C. deserticola (TGCD). Deretter ble livmorveksttesten brukt til å evaluere de østrogene aktivitetene til det samme glykosidet. Høyytelses væskekromatografi/quadrupol time-of-flight massespektrometri (HPLC/Q-TOF-MS) ble brukt for kvalitativ analyse av forbindelsene til TGCD etter rensing. Denne prosessen ble brukt for å eksplisitt demonstrere tilstedeværelsen av forskjellige aktive forbindelser med østrogen aktivitet i TGCD. Dette kan samtidig gi grunnlaget for klinisk bruk ved postmenopausalt syndrom som erstatter østrogen.

Eksperimentell prosedyre

Instrumenter

Agilent 1290 HPLC-system (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA), Agilent 6530 series quadrupol time-of-flight LC/MS (Q-TOF) system (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) og Chemical HPLC{ {5}}D-arbeidsstasjoner ble brukt som kromatografiske instrumenter for databehandling. Milli-Q ultrarent vann ble brukt til hele studien. AR1140 elektronisk analytisk balanse (Ohaus International Ltd.); 680 mikroplateleser (Bio-Rad Corporation); og 64R høyhastighets sentrifuge (Beckman Coulter Allegra) ble brukt til prøvepreparering.

Legemidler og kjemikalier

C. deserticola ble kjøpt fra narkotikamarkedet og identifisert av prof. Zhang Delian (Harbin University of Commerce, Kina). Standard dietylstilbestrol (99 prosent ren, lot nr. 60518) ble kjøpt fra Dr. Ehrenstorfer (Tyskland). Andre standarder akteosid (111530-200505) og echinakosid (111670-200503) ble hentet fra National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, Beijing, Kina. Renheten til hver standard var > 98 prosent. Acetonitril (ACN), metanol og maursyre (MS-kvalitet) ble kjøpt fra Thermo Scientific Pierce (Rockford, IL, USA). Ultrarent vann ble oppnådd fra Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd. (Hangzhou, Kina). Alle kommersielt tilgjengelige reagenser var av analytisk kvalitet.

Fremstilling av totale glykosider av C. deserticola renseløsning

Etter nedsenking i 75 prosent etanol i 12 timer, ble råpulveret av C. deserticola (100 g) ekstrahert med 800 ml 75 prosent (v/v) etanol ved 80 grader i 150 minutter under tilbakeløp. Den ble deretter filtrert gjennom et dobbeltdekksfilter og deretter ekstrahert med 800 ml 75 prosent etanol to ganger i ytterligere 150 minutter. Deretter ble filtratene kombinert og konsentrert i vakuum ved 45 grader. Ekstraktet ble oppnådd ved å fjerne løsningsmidlet. En viss mengde destillert vann ble tilsatt ekstraktet for å oppnå en konsentrasjon på 0,5 g/ml, som ble brukt til å screene renseprosessen.

For adsorpsjon ved bruk av AB-8 makroporøs harpiks ble pH i testprøveløsningen justert til 11. Først ble 2 BV-destillert vann brukt for å vaske bort urenhetene. Deretter ble elueringsmidlet ved en konsentrasjon på 25 BV 85 prosent etanol eluert og samlet. Til slutt ble den oppsamlede rensede eluenten slått sammen. En viss mengde destillert vann ble tilsatt ekstraktet for å oppnå en konsentrasjon på 1,5 g/ml, som ble brukt til intragastrisk administrering. For positiv kontroll ble dietylstilbestrol-løsning (20 ug/ml) fremstilt med dietylstilbestrol-pulver.

I henhold til rensingsforholdet ({{0}}.6), ble en viss mengde av ekstraktet (tilsvarer 1 g C. deserticola) overført til en 10 mL målekolbe, oppløst i 50 prosent (v/v) metanolløsning i et ultralydbad i 5 minutter og fortynnet til 10 ml. Den medisinske løsningen ble oppnådd etter filtrering av supernatanten gjennom en 0,45 μm filtermembran. Acteosid og echinacosid (1 mg hver) ble blandet og oppløst fullstendig i en 10 ml 50 prosent (v/v) metanolløsning. Til slutt ble standardløsningen filtrert gjennom et 0,45 μm Millipore-filter før analyse.

LC-MS forhold

Kromatografiseparasjon ble utført i et HPLC-system (Agilent 129{{10}}), utstyrt med et kvaternært løsningsmiddeltilførselssystem, vakuumavgasser og fotodiodearraydetektor. MS/MS-analyse ble utført i et instrument Agilent-1290 HPLC/6530 Q-TOF-MS-system, utstyrt med en elektrosprayioniseringskilde i både positiv og negativ ionemodus. En Waters Symmetry shield RP C18 kolonne (4,6 × 250 mm, 5 μm) (Waters Corporation, Milford, MA, USA) ble brukt for separasjon. Den mobile fasen omfattet 0,2 prosent maursyre vandig løsning (v/v) (A) og ACN (B), og den ble pumpet med en strømningshastighet på 0,5 ml/min. Injeksjonsvolumet for hver prøve var 10 μL. Gradientelueringsprogrammet var som følger: 5–23 prosent B i 0–35 minutter, 23–25 prosent B i 35–65 minutter og 25–5 prosent B i 65–70 minutter. Kolonnetemperaturen ble holdt ved 30 grader. Kromatogrammene ble overvåket og registrert ved 330 nm. Forstøvningsgasstrykket ble satt til 30 Psi, og kapillærspenningen var 3,5 kV. Strømningshastigheten for tørr gass var 8 l/min ved en temperatur på 30 grader. Temperaturen til kappegass ble satt til 400 grader ved en strømningshastighet på 12 l/min. Kollisjonsenergien ble satt til 10–20 eV for lavenergiskanninger og 30–50 eV for høyenergiskanninger. Massespektradataene ble registrert innenfor skanningsområdet 50–1000 Da i skanningsmodus for positive og negative ione. I denne studien ble en rask og effektiv sammenligning mellom TGCD og standardene utført under samme LC-MS-tilstand.

Uterus vekst test

Dette ble utført i strengt samsvar med anbefalingene i veiledningen for stell og bruk av forsøksdyr fra National Institutes of Health. Alle eksperimentelle prosedyrer ble gjennomgått og godkjent av Animal Ethical Committee ved Harbin University of Commerce, Kina.

Umodne Kunming hunnmus (ca. 21 dager etter fødselen, avvent) som veide 12 ± 2 g, ble kjøpt fra Changchun National Biological Industry Base Laboratory Animal Center (Changchun, Kina). Musene ble holdt i et temperaturregulert rom (22 ± 2 grader) med mat og vann ad libitum. Dyreforsøk ble startet etter fem dager med akklimatisering. Musene fastet over natten med vann ad libitum før intragastrisk administrering av testløsningen.

Musene ble tilfeldig delt inn i 22 grupper, med 10 dyr i hver gruppe. De ble administrert eksperimentelle legemidler av samme volum to ganger om dagen (morgen og kveld) i fire dager som følger:

Gruppe 1: Intragastriske totale glykosider av C. deserticola renseløsning (20 ml/kg), (løsningsvolum/ musevekt),

Gruppe II: Intragastrisk destillert vann (negativ kontrollgruppe), og

Gruppe III: Intragastrisk dietylstilbestrol (20 ug/ml) (positiv kontrollgruppe).

På den femte dagen ble alle musene ofret. Livmorene ble umiddelbart fjernet og veid og livmorkoeffisientene ble beregnet.

Statistisk analyse

En tosidet t-test med parvise prøver ble brukt for å identifisere statistisk signifikante forskjeller i de ulike parameterne i de forskjellige eksperimentelle gruppene. Analysen ble utført ved bruk av SPSS statistisk programvare (SPSS for Windows v21.0, SPSS Inc., USA). Forskjellene ble ansett som statistisk signifikante ved et 95 prosent konfidensnivå (p <>

Resultater og diskusjon

Linearitet og korrelasjon av utbytte av akteosid og totale glykosider

Den lineære regresjonsligningen for akteosid-utbyttet var y {{0}}x – 14,75 (der x er konsentrasjonen av akteosid, og y er dets tilsvarende toppareal) med en korrelasjonskoeffisient på r=1 i konsentrasjonsområdet 0.12−{{10}},72 mg/mL. Dette indikerte en lineær kalibreringskurve. Den lineære regresjonsligningen for det totale glykosideutbyttet var y=26.074x pluss 0,0866 (der x er konsentrasjonen av totale glykosider, og y er dets tilsvarende toppareal) med en korrelasjonskoeffisient på r { {12}}.9982 i konsentrasjonsområdet 0,013–0,065 mg/mL. Dette indikerte også en lineær kalibreringskurve.

Metodologisk undersøkelse

Presisjonen, reproduserbarheten, stabiliteten og gjenvinningen av prøvene ble undersøkt i den metodiske undersøkelsen. I presisjonsforsøket var det relative standardavviket (RSD) for akteosid og totale glykosider henholdsvis 1,43 prosent og 0.05 prosent. I reproduserbarhetseksperimentet var RSD for akteosid og totale glykosider henholdsvis 0,10 prosent og 1,44 prosent. I 24 timers stabilitetsforsøket var RSD for akteosid og totale glykosider henholdsvis 0,14 prosent og 0,90 prosent. I utvinningsforsøket var utvinningen av akteosid 100,50 prosent med en RSD på 2,08 prosent, mens gjenvinningen av totale glykosider var 99,12 prosent med en RSD på 1,65 prosent. Alle RSD-verdiene var mindre enn 3 prosent. Disse resultatene viste god presisjon og reproduserbarhet. I tillegg var prøven stabil i 24 timer. Resultatene av utvinning er også innenfor det tillatte området (95–105 prosent). Derfor kan denne metoden brukes for bestemmelse av akteosid og totalt glykosideutbytte etter rensing.

Enkeltfaktorundersøkelse av TGCD

Rensingen av TGCD ved bruk av makroporøs harpiks kan påvirkes av mange faktorer, som harpikstype, statiske adsorpsjonsfaktorer (adsorpsjonstid, lekkasjekonsentrasjon og pH i prøveløsningen) og elueringsforhold (strømningshastighet, volum og konsentrasjon). Ved å bruke adsorpsjonskapasitet og hastigheter for desorpsjon og eluering av TGCD som indekser, ble den eksperimentelle tilstanden bestemt basert på resultatene av enkeltfaktoreksperimenter. Ved bruk av makroporøs adsorpsjonsharpiks av typen AB-8 ble følgende optimale forhold bestemt: 0,5 mg/mL prøveløsning, pH på 10, statisk adsorpsjonstid på 8 timer, 2 BV destillert vann for vasking av urenheter, 20 BV 80 prosent etanol som elueringsmiddel, og en strømningshastighet på 0,5 BV/min. De spesifikke resultatene er vist i figur 1−7.

CCD for optimalisering av TGCD renseteknologi

Basert på resultatene av enkeltfaktorundersøkelsen, ble tre faktorer som signifikant påvirket rensemetoden valgt som indekser, nemlig pH i prøveløsningen (x1), eluentkonsentrasjon (x2) og eluentvolum (x3). I henhold til CCD-prinsippet har hver faktor fem nivåer. Maksimums- og minimumsnivåene for disse ulike faktorene ble satt i henhold til resultatene fra det foreløpige eksperimentet. Faktornivåene er vist i tabell 1 og de eksperimentelle resultatene er vist i tabell 2.

De totale glykosidene og akteosid-utbyttene ble bestemt for å optimalisere rensemetoden for TGCD. For det første ble de totale glykosidene og akteosid-avlingene satt til de numeriske kriteriene for ønskelighet (d) mellom {{0}}-1. Deretter ble den totale ønskeligheten (OD) [OD=(d1, d2, d3,....,dn)1/n, hvor n er indekstallet] beregnet. SPSS21.{{10}} programvare og designekspertprogramvare ble brukt for multippel lineær regresjon og binomial tilpasning av uavhengige variabler og OD, med p < 0.05="" ble="" vurdert="" en="" statistisk="" signifikant="" standard="" for="" ligningen.="" ligningen="" med="" en="" større="" r-verdi="" (multippelkorrelasjonskoeffisient)="" ble="" valgt="" som="" best="" passende="" modell.="" den="" multivariate="" lineære="" ligningen="" er="" representert="" som="" y="–" 1.02="" –="" 0.131x1="" pluss="" 0.034x2="" pluss="" 0,012x3="" (r="" {{="" 25}}.55,="" s="0.004)." den="" binomiale="" ligningen="" er="" y="–" 21,92173="" –="" 0,74079x1="" pluss="" 0,62914x2="" pluss="" 0,041161x3="" pluss="" 0,014972x1x2="" pluss="" 2,06050*10-4x1x52}x{9.52}x{9.52}x{9.52}x{9.52}="" pluss="" {56}}.78730="" ×="" 10-3x22="" -="" 2.89446="" ×="" 10-3x32="" (r="0.91," s="0.012)." det="" kan="" sees="" fra="" ligningene="" ovenfor="" at="" korrelasjonskoeffisienten="" til="" den="" multivariate="" lineære="" regresjonsligningen="" er="" lavere.="" korrelasjonen="" mellom="" de="" uavhengige="" og="" avhengige="" variablene="" er="" svært="" lav,="" og="" den="" ble="" ansett="" som="" ugunstig="" å="" bruke="" i="" den="" lineære="">

Men korrelasjonskoeffisienten til den binomiale ligningen var høy, og det resulterte i en god tilpasning. Derfor ble den binomiale modellen valgt. Basert på en omfattende analyse av overflatefiguren og konturkartet kombinert med de eksperimentelle dataene (OD-verdi nær {{0}}.6), ble det optimale området for rensemetoden oppnådd. Fra figur 8 kan det sees at den maksimale OD-verdien ble generert når pH i prøveløsningen (A) var i området 9-10, og elueringsmiddelkonsentrasjonen (B) var i området 79-85 prosent. . Figur 9 viser at den maksimale OD-verdien ble oppnådd når pH-verdien til prøveløsning (A) var i området 9-10, og elueringsvolumet (C) var i området 20-25 BV. Figur 10 viser at den maksimale OD-verdien ble oppnådd når eluentkonsentrasjonen (B) var i området 80–85 prosent, og elueringsvolumet (C) var i området 20–25 BV. Fra en omfattende analyse av disse dataene ble pH i prøveløsningen, elueringsmiddelkonsentrasjon og elueringsvolum bestemt til å være i området henholdsvis 9-10, 80-85 prosent og 20-25 BV. Basert på den multivariate binomiale ligningen for variable derivatresultater og optimalt skjema, ble den beste TGCD-rensemetoden funnet å være ved en eluentkonsentrasjon (etanol) på 85 prosent og et volum på 25 BV ved en pH på 11. Den tilsvarende OD-verdien var 0,8332 , og det totale glykosideutbyttet var 73,0339 prosent. Det visuelle inntrykket fra figurene 8-10 identifiserer den beste metoden for å være den der interaksjoner mellom de to faktorene ble vurdert, selv om den beste metoden utledet fra formelen gjenkjenner den der interaksjoner mellom de tre faktorene ble inkludert. De to resultatene var forskjellige, og den optimale rensemetoden ble ansett å være med en eluentkonsentrasjon (etanol) på 85 prosent og et volum på 25 BV ved en pH på 11.

Måling av livmorvekst

Livmorkoeffisienten til hver gruppe er vist i tabell 3. Sammenlignet med den negative kontrollgruppen var resultatene for de andre gruppene signifikant forskjellige. Det ble funnet at TGCD oppnådd fra 20 forskjellige rensemetoder alle utøvde østrogene virkninger.

Bekreftende eksperiment

De omfattende resultatene av CCD- og livmorveksttesten viste at den optimale rensemetoden ble ansett å være med en eluentkonsentrasjon (etanol) på 85 prosent og et volum på 25 BV ved en pH på 11.

valideringsprosessen var gjennomsnittlig utbytte av totale glykosider 70,9150 prosent. Gjennomsnittlig avvik mellom predikerte og faktiske verdier var 2,1180 prosent. Derfor kan det antydes at forutsigbarheten og den eksperimentelle troverdigheten til denne modellen er god.

Identifikasjon av TGCD etter rensing

Basert på retensjonstid og MS-data ble 21 naturlige bestanddeler spekulert, inkludert campneosid 1, 2'-acetylacteosid, cistanosid A, cistanosid B, syringalid A 3'- - L-rhamnopyranosid, tubulosid A, tubulosid B, salidrosid, cistanosid G, teniposidsyre, decaffeoylacteosid, 8-epilogansyre, echinacosid, cistanosid F, cistantubulosid B1, isoacteosid, acteosid, cis-acteosid, kankanosid E, osmanthusid B og cistanoside C og MS/cistanoside C. MS-informasjon, formel og spekulerte forbindelser er vist i tabell 4.

Q-TOF-MS er spesielt egnet for strukturell identifikasjon av komplekse molekylære komponenter i legemidler og mat fordi det kan gi mulige elementære sammensetninger gjennom nøyaktig molekylmasse og strukturelle egenskaper til fragmentionene. For å etablere en systematisk strukturell karakterisering ble Q-TOF-MS, MS-data, databasesøking og publisert referanselitteratur også brukt for identifikasjon. Molekylformelen til hver målkomponent ble utledet fra moderionet, og den ble matchet med de kjente forbindelsene. Denne formelen kan bestemmes videre fra dets relaterte fragmentioner. For eksempel viste topp 5 et dominerende deprotonert ion ved m/z 654 (C30H38O16), som var identisk med grunnstoffsammensetningen til campneosid 1. Tapet av caffeoyl ble dannet fra et fragmention ved m/z 493, og tapet av rha-delen ble dannet fra et fragmention ved m/z 347.

Konklusjon

Ved å bruke en LC-Q-TOF-MS-teknologi er en enkel og robust kvalitativ analysemetode for TGCD utviklet og fullt validert. Valideringsdataene for screening og identifisering av naturlige forbindelser fra TGCD var tilfredsstillende. 21 bioaktive forbindelser fra TGCD ble spekulert som følger: salidrosid, cistanosid G, geniposidinsyre, decaffeoylacteosid, campneosid 1, 8-epilogansyre, 2'-acetylacteosid, cistanosid A, cistanosid B, syringalid{ A3' }}L-rhamnopyranosid, echinacosid, cistanosid F, cistantubulosid B1, isoacteosid, acteosid, tubulosid A, cis-acteosid, kankanosid E, osmanthusid B, cistanosid C og tubulosid B. Den strukturelle karakteriseringen av disse kan gi en eksperimentell karakterisering av disse. deres kvalitetskontroll og videre klinisk anvendelse på grunn av deres østrogene aktivitet. Dette kan tilby et nytt og forbedret terapeutisk alternativ for behandling av postmenopausalt syndrom, og dermed unngå bivirkninger og uønskede reaksjoner av østrogenbehandling.

Forkortelser

TGCDCistanche deserticolatotale glykosider LC/Q-TOF-MS væskekromatografi/kvadrupol time-of-flight massespektrometri

RSM-responsoverflatemetodikk

CCD sentral komposittdesign

MS massespektrometri HPLC/Q-TOF-MS Høyytelses væskekromatografi/ quadrupol time-of-flight massespektrometri

ACN Acetonitril

BV sengevolum

OD samlet ønskelighet

LC-MS væskekromatografi-massespektrometri

Q-TOF-MS kvadrupol time-of-flight massespektrometri

TCM tradisjonelle kinesiske medisiner

RSD relativt standardavvik

Anerkjennelser

Dette prosjektet ble støttet av National Natural Science Foundation of China (nr. 81073015), Nature Scientific Foundation of Heilongjiang Province (ZD2017014), Young innovativ talent training plan of the College in Heilongjiang Province (UNPYSCT- 2017209). Forfatterne erklærer at det ikke er noen interessekonflikt angående publisering av denne artikkelen.

Interessekonflikt

Forfatterne oppgir ingen interessekonflikt.

Referanser

[1] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y., Tu PF, Phenylethanoid glykosider med anti-inflammatoriske aktiviteter fra stilkene til Cistanche deserticola dyrket i Tarim-ørkenen, Fitoterapia, 2013, 89, {{4} }.

[2] Guo Y., Cao L., Zhao Q., Zhang L., Chen J., Liu B., Zhao B., Foreløpige karakteriseringer, antioksidanten og hepatobeskyttende aktivitet til polysakkarid fra Cistanche deserticola, International Journal of Biological Macromolecules , 2016, 293, 678-685.

[3] Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y., Tu PF, Anti-inflammatoriske iridoider fra stilkene til Cistanche deserticola dyrket i Tarim-ørkenen, Chinese Journal of Natural Medicines, 2016, 14, 61-65.

[4] Peng F., Chen J., Wang X., Xu C., Liu T., Xu R., Changes in Levels of Phenylethanoid Glycosiders, Antioxidant Activity, and Other Quality Traits in Cistanche deserticola Slices by Steam Processing, Chemical og Pharmaceutical Bulletin (Tokyo), 2016, 64, 1024-1030.

[5] Wang T., Zhang X., Xie W., Cistanche deserticola YC Ma, "Desert Ginseng": en anmeldelse, The American Journal of Chinese Medicine, 2012, 40, 1123-1141.

[6] Song Y., Song Q., Li J., Zhang N., Zhao Y., Liu X., Jiang Y., Tu P., En integrert strategi for å kvantitativt skille kamille mellomCistanche deserticolaog C. tubulosa ved bruk av høyytelses væskekromatografi-hybrid trippel kvadrupol lineær ionefelle-massespektrometri, Journal of Chromatography A, 2016, 1429, 238-247.

[7] Li Y., Peng Y., Wang M., Zhou G., Zhang Y., Li X., Rask screening og identifisering av forskjellene mellom metabolitter avCistanche deserticolaog C. tubulosa vannekstrakt hos rotter ved UPLC-Q-TOF-MS kombinert mønstergjenkjenningsanalyse, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2016, 131, 364-372.

[8] Li WL, Sun XM, Song H., Ding JX, Bai J., Chen Q., HPLC/Q-TOF-MS-basert identifikasjon av absorberte bestanddeler og deres metabolitter i rotteserum og urin etter oral administrering av Cistanche deserticola-ekstrakt, Journal of Food Science, 2015, 80, H2079-2087.

[9] Almasi A., Dargahi A., Mohamadi M., Biglari H., Amirian F., Raei M., Fjerning av Penicillin G ved kombinasjonen av sonolyse og fotokatalytisk (sono-fotokatalytisk) prosess fra vandig løsning: prosessoptimalisering ved bruk av RSM (Respons Surface Methodology), Electron Physician, 2016, 8,

[10] 2878-2887. Hou W., Zhang W., Chen G., Luo Y., Optimalization of Extraction Conditions for Maximal Phenolic, Flavonoid and Antioxidant Activity from Melaleuca bract data Leaves Using the Response Surface Methodology, PloS One, 2016, 11,

[11] e0162139. Pooralhossini J., Ghaedi M., Zanjanchi MA, Asfaram A., Valget av ultralydsassistert ekstraksjon kombinert med spektrofotometrisk for rask bestemmelse av gallussyre i vannprøver: Sentral komposittdesign for optimalisering av prosessvariabler, Ultrasonics Sonochemistry, 2017, 34 , 692- 699.

[12] Han L., Boakye-Yiadom M., Liu E., Zhang Y., Li W., Song X., Fu F., Gao X., Strukturell karakterisering og identifikasjon av fenyletanoidglykosider fraCistanches deserticola YC Maav UHPLC/ESI-QTOF-MS/MS, Phytochemical Analysis, 2012, 23, 668-676.

[13] Lu D., Zhang J., Yang Z., Liu H., Li S., Wu B., Ma Z., Kvantitativ analyse av Cistanches Herba ved bruk av høyytelses væskekromatografi kombinert med diodearraydeteksjon og høy- oppløsningsmassespektrometri kombinert med kjeometriske metoder. Journal of Separation Science, 2013, 36, 1945-1952.

[14] Li WL, Chen Q., Yang B., Gao S., Zhang JJ, Screening av fyto-østrogene effektive ekstrakter og dose avCistanche deserticola, Kinesiske urtemedisiner, 2013, 5, 292-296.

[15] Li YP, Huang FR, Dong J., Xiao C., Xian RY, Ma ZG, Zhao J., Rapid Identification of Cistanche via Fluorescence Spectrum Imaging Technology Combined with Principal Components Analysis and Fisher Distinction, Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi, 2015, 35, 689-694.