Polyfenolrikt ekstrakt av Ocimum Gratissimum-blader forhindret giftige effekter av cyklofosfamid på nyrefunksjonen til Wistar-rotter
Feb 21, 2022
For mer ta kontakt med:oscar.xiao@wecistanche.com
Abstrakt
Bakgrunn:Cyklofosfamid (CP) er en av de potente og rimelige kjemoterapiene som brukes i kliniske omgivelser mot en rekke svulster. Imidlertid begrenser dens assosiasjon til nefrotoksisitet dens terapeutiske bruk. Ocimum gratis simum leaf er en medisinsk plante med mange farmakologiske og terapeutiske effekter, som antioksidanter, anti-inflammasjon og anti-apoptotiske egenskaper.
Metoder: Denne studien ble designet for å evaluere den beskyttende effekten av Ocimum gratissimum (OG) mot CP-indusert nyredysfunksjon hos rotter. Rotter ble forhåndsbehandlet med 400 mg/kg kroppsvekt permisjonsekstrakt av Ocimum gratissimum (Ocimum G.) i 4 dager, og deretter ble 50 mg/kg kroppsvekt CP administrert samtidig fra dag 5 til dag 7 sammen med Ocimum G. Markører for nyrefunksjon og oksidativt stress, mat- og vanninntak, elektrolytter, aldosteron, leukocyttinfltasjon, betennelse og histopatologisk endring ble evaluert.
Resultater:Åpenbar nyrebetennelse og nyreskader ble observert i CP-behandlede grupper. Imidlertid forhindret administrasjon av permisjonsekstrakt av Ocimum G. oksidativt stress, nyreskader, svekket betennelse, økt aldosteronproduksjon og redusert natriumion- og vanntap hos rotter. Plasmakreatinin-, urea- og urinalbuminkonsentrasjonen ble normalisert etter administrering av Ocimum G. ekstrakt hos rotter behandlet med CP. Ocimum G. reduserte også plasmakonsentrasjonene av Interleukin-(IL)-6, C-reaktivt protein og aktiviteten til myeloperoksidase og malondialdehyd hos CP-behandlede rotter.
Konklusjon: Ocimum G. forhindret nyreskade og forbedret nyrefunksjonen via inhibering av inflammasjon og oksidant-indusert CP-toksisitet. Effekten av Ocimum G. er relatert til tilstedeværelsen av ulike fytokjemikalier i planten.
Nøkkelord:Antioksidant, kreatinin, cyklofosfamid, blad Ocimum gratissimum, nyre, natrium.
Bakgrunn
Cyklofosfamid (CP) er en antineoplastisk forbindelse som er assosiert med nitrogensennep. Det brukes i kliniske omgivelser for å behandle et bredt spekter av kreftsykdommer og i immunsuppressiv terapi etter organtransplantasjoner, behandling for autoimmune lidelser som revmatoid artritt, Wegeners granulomatose og nefritisk syndrom hos barn [1]. Uavhengig av det brede spekteret av klinisk bruk av stoffet, er CP kjent for å forårsake en rekke doseavhengige organskader, som derfor begrenser dets terapeutiske bruk i kliniske omgivelser. Siden det var kjent for å være gunstig ved behandling av nefrotisk syndrom hos barn [1], ble det omvendt rapportert i noen tidligere studier å indusere urinblæreskade [2, 3] og forårsake nyretoksisitet når det brukes uhensiktsmessig på grunn av bruk av CP overdose [4–6]. Te CP aktiv metabolitt, 4-Hydroxycyclophospha-mide, er delvis tautomerisert til aldosfosfamid, som igjen brytes ned av fosfatase i sirkulasjonen og levende celle og gir opphav til to cytotoksiske metabolitter, fosforamidsennep og akrolein [6]. Den terapeutiske virkningen av fosforamidsennep har tidligere blitt rapportert å være ansvarlig for antitumoreffekter [6], mens akrolein er ansvarlig for cytotoksiske effekter av CP, slik som hemorragisk blærebetennelse under medikamentadministrasjonen [2, 7]. Den CP-toksiske metabolitten skader det levende vevet ved å redusere det endogene antioksidantsystemet i vevet gjennom generering av reaktive oksygenfrie radikaler som er mutagene for levende celler. Administrering av en høy dose CP er rapportert å øke lipidperoksidasjonen og forårsaker en reduksjon i de endogene enzymatiske og ikke-enzymatiske antioksidantene [7, 8]. Tidligere studier har beskrevet fordelaktig bruk av antioksidanter sammen med kjemoterapi for å forhindre stoffets bivirkninger på kroppsvevet [7, 9, 10]. Antioksidantmidlene som kolaviron viste seg å være effektive i forebygging av CP-kardiotoksisitet hos rotter [11]. Dermed er kombinasjonen avantioksidantmiddelsammen med kjemoterapi medikamenter kan være en potensiell terapeutisk tilnærming for å forhindre eller stoppe den cytotoksiske utviklingen av CP. Ocimum gratissimum (Ocimum G.) er en familie av Lamiaceae som tilhører urteaktige plantearter. Det er kjent som nellik eller afrikansk basilikum i mange land i tropiske områder (Asia, India, Brasil og Vest-Afrika, etc). Den finnes i stor utstrekning i Nigeria [12]. Mange stater i dette landet (Nigeria) brukte Ocimum G. som saus og grønnsakssuppe. Det er funnet at blader og blomster av Ocimum G. har polyfenoler og andre bioaktive forbindelser [13, 14]. Ocimum gratissimum-planter brukes til å behandle ulike sykdommer som diaré, ulcerøs kolitt, feber og katarr [14–17]. Planten har mange farmakologiske fordeler på grunn av dens antiinflammatoriske, antioksidative, antibakterielle, antidiabetiske og antimalariaegenskaper [14, 18–20]. Den antimikrobielle aktiviteten til Ocimum G.-ekstraktet har blitt testet in vitro mot forskjellige menneskelige patogener som Klebsiella pneumonia, Staphylococcus aureus, Escherichia, Vibro spp, Enterobacter spp, Enterococcus faecalis, etc. Den antifungale aktiviteten til den essensielle oljen i Ocimum G ekstrakter har blitt notert in vitro [19, 21, 22], og Ocimum G. har blitt brukt som en myggappellant [23]. En fersk dyrestudie antydet betydningen av den beskyttende effekten av Ocimum G.-ekstrakter i forebygging av blodtrykksuregelmessigheter mot koboltklorid-toksisitet [24] i tillegg til å dempe hjerteabnormaliteter assosiert med leverfibrose ved å nedregulere interleukinet-6 signalvei [25] eller ved å indusere antioksidanteffekter [26]. Vandig bladekstrakt av Ocimum G.-blader viste antioksidanteffekter mot koboltklorid-indusert kardio-nyreskade [24] og forhindret magesår ved å redusere magesyresekresjon og sårdannelse [27]. Dessuten viste ursolsyre fra Ocimum G.-ekstrakter anti-sickling aktivitet [28] og anticancer [29, 30]. Videre har de essensielle oljene til Ocimum G. vist seg å utvise endotelavhengige, vasorelakserende egenskaper hos rotter [31]. In vivo og in vitro studier har evaluert eugenol, en medisinsk bestanddel av Ocimum G., for å senke blodsukkernivået via hemming av alfa-glukosidase [32]. Mer så, en klinisk studie etablerte den farmakologiske tilstrekkeligheten til Ocimum G. til å vise lignende aktivitet som klorheksidin mot plakk og gingivitt [33]. Med alle disse egenskapene til Ocimum G., antok vi at Ocimum G. kan være et mulig terapeutisk middel når det skal brukes sammen med CP for å forhindre eller stoppe CP-bivirkninger. Denne studien ble derfor designet for å undersøke de gunstige effektene av et polyfenolrikt ekstrakt av Ocimum gratissimum-blader på CP-indusert nefrotoksisitet hos Wistar-hannrotter.
Materialer og metoder
Cyklofosfamid (200 mg/10 ml) injeksjon ble anskaffet fra Celon Laboratory (Hyderabad, India); ketaminhydroklorid (50 mg/10 ml) injeksjon ble kjøpt fra Popular Pharmaceuticals Ltd., (Gazipur, Bangladesh); Analysesett for biokjemiske parametere ble hentet fra Randox Laboratories Limited, (Crumlin, Storbritannia), etc. 1-difenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), metanol, natriumkarbonat, Trolox og Folin-Ciocâlteu-reagens ble kjøpt fra Merck & Co., Kenilworth, NJ, USA. Instrumentene som brukes inkluderer gasskromatografi-massespektrometer (GCMS-QP2010 SE, Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan), og ultrafiolett-synlig spektrofotometer (Beckman, DU 7400, USA), Soxhlet-apparat, rotasjonsfordamper, mikroskop (Olympus CH; Olympus , Tokyo, Japan); kamera (Leica DM 750).
Fremstilling av polyfenolekstrakt av Ocimum gratissimumblader
Ocimum gratissimum-bladene ble samlet fra en hage ved Usi, Ekiti-staten, Nigeria. Relevante institusjonelle tillatelser til å samle inn Ocimum gratissimum ble innhentet. Denne studien er i samsvar med internasjonale, nasjonale og/eller institusjonelle retningslinjer for bruk av ulike deler av anlegget. Eksemplene av planten ble autentisert av Mr. Omole, kurator ved Herbarium of Botany Department, Obafemi Awolowo University, Ile-Ife, hvor et kupongprøve (1945) ble deponert i Herbarium of University. Det polyfenolrike ekstraktet ble hentet fra Ocimum G.-bladene (900g) i henhold til våre tidligere ekstraksjonsmetoder av planten [14]. Metanol ble brukt for å oppnå det endelige ekstraksjonsproduktet, polyfenolrikt ekstrakt av Ocimum gratissimum (PREOG) blader under redusert trykk ved 40 grader ved bruk av en rotasjonsfordamper. Det resulterende ekstraktkonsentrat ble frysetørket ved hjelp av en frysetørking. Resten (8{{40}},85 g) ble oppbevart i petriskåler med et tettsittende deksel og lagret ved -20 grader til det var nødvendig for studien. Det oppnådde OG-ekstraktet ble oppløst i vann (0,2 ml/administrasjon) og gitt til rotter i henhold til den beregnede dosen. Gasskromatografi-massespektrometrianalyse av (GC-MS) OG-ekstrakter Den kjemiske sammensetningen av det oppnådde ekstraktet ble kontrollert ved bruk av gasskromatografi-massespektrometri (GC-MS). Chavez et al. [34] metoden ble tatt i bruk med en liten modifikasjon. En kapillærkolonne med smeltet silika (filmtykkelse på 30×0,25 HP-5Ms, 0,25μm) som inneholdt helium som bærergass (1/ml strømningshastighet) ble brukt for bestemmelse av forbindelsene. 40 graders ovnstemperatur ble stilt inn og holdt i 5 minutter, og deretter økt gradvis med 3 grader/min opp til 270 grader. 60:1 ble satt som et delt forhold. En temperatur på 180 grader ble satt for koblingsdelene og ionekildene, og en grensesnitttemperatur på 240 grader ble satt for massespektrometeret. For ioniseringsenergimengden ble 70 eV brukt, mens elektronpåvirkningsmodusen (EI) ble valgt for å produsere stabile og reproduserbare massespektre, og et verdiområde på 50–650m/z ble brukt for kjøring av prøver. MS-forsinkelsestiden før skanning var 5 minutter. De oppnådde forbindelsene ble vist i tabell 2. Bestemmelse av totalt fenolinnhold Det totale fenolinnholdet (TPC) i ekstraktene ble evaluert ved bruk av Folin-Ciocâlteu-teknikken som beskrevet av Gulcin et al. [35], med noen få modifikasjoner. Kort fortalt ble 100 μL (0,5 mg/ml) av de polyfenolrike ekstraktene av Ocimum G. plassert i separate vanlige rør. Omtrent 500 μL (1 prosent v/v) av Folin-Ciocâlteu fenolreagens ble tilsatt til hvert rør som inneholdt Ocimum G.-ekstraktet, og rørene fikk stå i 5 minutter. og deretter vortex. Etter å ha latt stå i 5 minutter, ble ca. 400 μL (20 prosent vekt/vekt) natriumkarbonat tilsatt til alikvotene, som deretter ble inkubert i mørket ved romtemperatur i 90 minutter. For fargeutviklingen. Absorbansen til hver blanding ble evaluert med et ultrafiolett-synlig spektrofotometer (Beckman, DU 7400, USA) ved 765 nm. Natriumkarbonatløsning uten tilsetning av Folin-Ciocâlteu fenolreagens ble brukt som blindprøve. For kalibreringskurven ble gallussyrestandarder brukt. TPC-er for prøvene ble bestemt fra den lineære regresjonen av gallussyrestandardene. Resultatene ble representert som gallussyreekvivalenten (GAE) per gram tørrvekt av Ocimum gratissimum-ekstrakt (mg GAE/g). Prosedyren ble utført i tre eksemplarer (n=3). DPPH friradikalfangende assay. Den frie radikalfangende aktiviteten til ekstraktet ble bestemt i henhold til metoden beskrevet av RakMai et al. [36], med små modifikasjoner. Omtrent 2mL DPPH-metanolløsning (180μmol/L) ble tilsatt og blandet med ekstraktet ved 0,1mg/ml. Prøvene ble inkubert i mørket ved 25 grader. Absorbansen til prøven ble bestemt ved bruk av et spektrofotometer ved 517 nm ved forskjellige tidsintervaller mellom 0 og 60 minutter. Alikvoter av ekstraktene uten tilsetning av DPPH-metanolløsning ble brukt som blindprøver. Trolox, en syntetisk analog avvitaminE, ble brukt som en positiv kontroll. Ligningen nedenfor ble brukt for å evaluere renseegenskapene til ekstraktene. Prosedyren ble utført i tre eksemplarer (n=3). Der en prøve er et ekstrakt pluss DPPH, er Ablank kun ekstraktet, A-kontroll er absorbansen til kontrollløsningen (som bare inneholder DPPH). Dyrepleie Tjueåtte (28) Wistar hannrotter som veide 120-180 g ble brukt til studien. De ble anskaffet fra Animal Holding ved College of Health Sciences, Obafemi Awolowo University, Ile-Ife. Alle rottene ble holdt i konvensjonelle bur i 1 uke for å akklimatisere seg til miljøtilstanden ved 28-32 grad og de fikk ha fri tilgang til diett og rent drikkevann. Eksperimentet ble godkjent av Health Research Ethics Committee (HREC) ved Obafemi Awolowo University og studien er beskrevet i samsvar med ARRIVE-retningslinjene (dyr i forskning: rapportering in vivo-eksperiment) [37].
Cistanche for anti-fatigue
Histopatologiske studier
Vevet ble kuttet i {{0}}μm tykke seksjoner av en mikrotom, festet på objektglassene og farget med PAS. Lysbildene ble observert under et lysmikroskop (Olym pus CH; Olympus, Tokyo, Japan) og mikrofotografier ble tatt med et Leica DM 750-kamera ved ×400 mag-varsler. Nyrevevsseksjonen ble vurdert av en sertifisert patolog som ble blindet for den eksperimentelle protokollen. Glomerulær skade ble skåret mellom grad 0 og 4 ved evaluering av mesangial proliferasjon, basal membrantykkelse og fibrinoidforandringer. Tubulær skade ble skåret mellom grad 0 og 4 ved evaluering av vakuolar degenerasjon, deskvamering, tubulær degenerasjon, proksimal tubulær nekrose og gipsdannelse. Tubulointerstitielle inflammatoriske infiltrater ble skåret mellom grad 0 og 2 ved evaluering av mangfoldet av inflammatoriske celler i mediet og tilstedeværelsen av infiltrater i tubuli epitel (tabell 1) [44]. En total nyreskadescore på 0–2 representerte ingen/mild nefrotoksisitet, 3–6 moderat nefrotoksisitet og 7–10 alvorlig nefrotoksisitet [44].
Resultater
Gasskromatografi-massespektrometrianalyse, fenolinnhold og DPPH-rensende kapasitet til Ocimum gratissimum bladekstrakt GC–MS analyse avslørte noen bioaktive forbindelser av Ocimum gratissimum bladekstrakt (tabell 2). Det polyfenoliske innholdet i ekstraktet ble gjenkjent ved å bruke Folin-Ciocâlteu-metoden (tabell 2). Totalt fenolinnhold (TPC) (80.36±0.50mg GAE/100g) oppnådd i Ocimum G.-ekstrakt avslørte at Ocimum gratissimum-ekstrakt er rikt på fenolisk innhold. DPPH-fjerningskapasiteten til ekstraktet ble også evaluert ved å beregne IC50-verdien, som er relatert til mengden ekstrakt som er i stand til å fjerne 50 prosent av de frie radikalene i reaksjonsblandingen. IC50-verdien (22,12±0,43mg/ml) til ekstraktet var høy, og dette anga den høyeantioksidantaktiviteten til Ocimum gratissimum blader. Dermed ble funksjonen til plantens høye fenolinnhold vist i dens evne til å fange frie radikaler (tabell 2).
Effekt av PREOG og cyklofosfamid på kreatininclearance
En signifikant reduksjon i nyrekreatininclearance ble observert i gruppen alene med CP sammenlignet med kontrollen (p<0.05). however,="" the="" preog-treated="" groups="" revealed="" a="" significant="" increase="" in="" the="" creatinine="" clearance="" when="" compared="" with="" cp="" alone="" treated="" group=""><0.05)>
Diskusjon
I den nåværende studien er det indikasjoner på forhøyede nivåer i parameterne for oksidativt stress som lipidperoksidasjon, hydrogenperoksid (H2O2) og nitrogenoksid (NO), noe som tyder på at membranlipidene og proteinet i nyrene til rottene behandlet med CP alene ble skadet. Også aktivitetene til antioksidantenzymer som superoksiddismutase og katalase og nivået av ikke-enzymatisk antioksidant, redusert glutation ble redusert i gruppen som ble behandlet med CP alene. Nedgangen i antioksidanter i nyrecellene til rottene behandlet med CP alene var en indikasjon på redoks-homeostase-ubalanse. CP har tidligere vist seg å indusere oksidativ skade, betennelse og cellenekrose eller apoptose etter aktivering og fremme av reaktive oksygenarter (ROS) via metabolitten, akrolein [7, 11, 14], som deretter utløser deaktivering og reduksjon avantioksidantforsvarkapasiteten til de berørte organismene [10, 11, 45]. I denne studien oppveier overproduksjonen av ROS det endogeneantioksidantkapasitet, utløser oksidativt stress, og skader deretter nyrecellene til de CP-behandlede rottene som ble gjenspeilet av de økte nivåene av markører for oksidativt stress og reduserte nivåer avantioksidantparametre. Histologisynet til disse rottene viste også glomerulær skade og tubulær nekrose av nyrecellene. Videre fremkaller redoksubalanse proinflammatoriske cytokiner overproduksjon [3, 14]. Den observerte overproduksjon av ROS utløste lipidperoksidasjon og mobilisering av proinflammatoriske cytokiner og samtidig utøvd inflammatorisk nyrecelleskade. IL-6-vurderingen i denne studien var signifikant forhøyet hos CP-behandlede rotter, noe som indikerer oksidativt stressangrep og betennelse i nyrecellene. IL-6-økning har vist seg å utløse og/eller stimulere leveren til å initiere akuttfaserespons som resulterer i en økning i sirkulerende C-reaktivt protein (CRP) produksjon og andre bioaktive mediatorer [46]. CRP var signifikant økt hos CP-behandlede rotter og det forhøyede nivået av denne biomarkøren var en indikasjon på et tidlig forsvarssystem mot infeksjoner, informasjon og vevsskade [47, 48]. Forhøyelsen av CRP-nivået i denne studien bekreftet ytterligere betennelse hos rottene behandlet med CP alene. CP har blitt observert å utløse reduksjonen av nyrens endogene antioksidanter som overutnyttelse av GSH av nyrene på grunn av akkumulering av cyklofosfamidmetabolittprodukter i nyrenes tubulære celler [9]. Som et resultat av denne prosessen kunne nyrene til rotter behandlet med CP alene øke immunresponsen mot cellene, noe som senere resulterte i betennelse som vist ved forhøyelsen av plasma-CRP. I enighet har CP potensialet til å indusere betennelse og sannsynlig immunologisk skade i nyrene til CP-behandlede rotter.
Konklusjon
Avslutningsvis viste resultatene fra de nåværende funnene at polyfenolrikt ekstrakt av Ocimum gratissimum forhindret uønskede bivirkninger av CP på nyrefunksjonen via redusert oksidativt stress, forhindret overproduksjon av pro-inflammatoriske cytokiner og leukocyttinfltasjon og forbedring av antioksidantenzymatisk aktiviteten til nyrevevet. Dessuten ble det bekreftet at CP induserte reduksjon i aldosteronsekresjon, og muliggjorde overdreven natrium- og vanntap gjennom urin hos rottene. Ekstrakt av Ocimum G. forbedret imidlertid nyrefunksjonen økte aldosteronproduksjonen, og forhindret overdreven natrium- og vanntap hos CP-behandlede rotter. Tilstedeværelsen av polyfenol og antioksidanter i bladene til Ocimum gratissimum gjør den til en perfekt kandidat for behandling og/eller forebygging av den nefrotoksiske effekten av cyklofosfamid.
Referanser
1. Chabner BA, Ryand DP, Pax-Ares L, Garcis-Carbonero, Calaresi P. Anti-neoplastiske midler. I: Harnam JG, Libmirde LE, redaktører. Goodman og Gilman er det farmakologiske grunnlaget for terapi. 10. utg. New York: McGraw Hill; 2001. s. 1389–459.
2. Chabner BA, et al. Antineoplastiske midler. I: Brunton LL, Lazo JS, Parker KL, redaktører. Goodman og Gilman er det farmakologiske grunnlaget for terapi. 11. utg. New York: McGraw Hill; 2006. s. 1322–8. 1694.
3. Ge B, Yang D, Wu X, Zhu J, Wei W, Yang B. Cytobeskyttende effekter av glycyrrhetinic acid liposom mot cyklofosfamid-indusert blærebetennelse gjennom å hemme inflammatorisk stress. Int Immunopharmacol. 2018;54:139–44.
4. Sinanoglu O, Yener AN, Ekici S, Midi A, Aksungar FB. De beskyttende effektene av spirulina i cyklofosfamid-indusert nefrotoksisitet og urotoksisitet hos rotter. Basic Transl Sci. 2012.
5. Caglayan C, Temel Y, Kandemir FM, Yildirim S, Kucukler S. Naringin beskytter mot cyklofosfamid-indusert levertoksisitet og nefrotoksisitet gjennom modulering av oksidativt stress, inflammasjon, apoptose, autofagi og DNA-skade. Environ Sci Pollut Res Int. 2018;25(21):20968–84.
6. Zhang J, Tian Q, Yung S, Chuen S, Zhou S, Duan W, et al. Metabolisme og transport av oksazafosforiner og de kliniske implikasjonene. Drug Metab Rev. 2005;37:611–703.
7. Famurewa AC, Edeogu CO, Ofor FI, Besong EE, Akunna GG, Maduagwuna EK. Nedregulering av redoksubalanse og iNOS/NF-ĸB/caspase-3-signalering med sinktilskudd forhindrer urotoksisitet av cyklofosfamid-indusert hemorragisk cystitt hos rotter. Life Sci. 2021;266:118913.
8. Oyagbemi AA, Omobowale TO, Saba AB, Olowu ER, Dada RO, Akinrinde AS. Gallinsyre forbedrer cyklofosfamid-indusert nevrotoksisitet hos Wistar-rotter gjennom frie radikaler som fjerner aktivitet og forbedring av antioksidantforsvarssystemet. J Diet Suppl. 2016;13:402–19.
9. Abraham P, Isaac B. Effektene av oral glutamin på cyklofosfamid-indusert nefrotoksisitet hos rotter. Hum Exp Toxicol. 2010;30(7):616–23.
10. Sherif IO. Nevrobeskyttende mekanisme avquercetinmot cyklofosfa-mus-indusert urotoksisitet: effekt på oksidativt stress og inflammatoriske markører. J Cell Biochem. 2018;119(9):7441–8. 11. Omole JG, et al. Beskyttende effekt av kolaviron på cyklofosfamid-indusert hjertetoksisitet hos rotter. J Evid Basert Integr Med. 2018;23:1
11. Efraim KD, Jacks TW, Sodipo OA. Histopatologiske studier på toksisiteten til Ocimum gratissimum etterlater ekstrakt på noen organer hos kaniner. Afr J Biomed Res. 2003;6:21–5.
12. Akinmoladun AC, Ibukun EO, Emmanuel A, Obuotor EM, Farombi EO. Fytokjemisk bestanddel og antioksidantaktivitet av ekstrakt fra bladene til Ocimum gratissimum. Sci Res essays. 2007;2:163–6.
13. Alabi QK, Akomolafe RO, Omole JG, Adefsayo MA, Ogundipe OL, Aturamu A, et al. Polyfenolrikt ekstrakt av Ocimum gratissimum-blader lindrer kolitt ved å dempe tykktarmsslimhinneskade og regulere pro-inflammatorisk cytokinproduksjon og oksidativt stress hos rotter. Biomed Pharmacother. 2018;103:812–22.
14. Ofah VN, Chikwendu UA. Antidiarréeffekter av Ocimum gratissimum bladekstrakt hos forsøksdyr. J Etnopharmacol. 1999;68:327–30.
