Forebyggende effekter av fenyletanolglykosider fra Cistanche Tubulosa

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Shu-Ping You, et al

Abstrakt

Bakgrunn:Cistanchetubulosaer en tradisjonell kinesisk urtemedisin som er mye brukt for å regulere immunitet.Fenyletanoildglykosider(CPhGs) fra denne planten er de primært effektive materialene. Målet med denne studien var å evaluere de forebyggende og terapeutiske effektene av CPhG på BSA-indusert leverfibrose hos rotter og relaterte molekylære mekanismer som involverer hepatiske stellatceller. Biejiarangan (BJRG), en annen tradisjonell kinesisk urtemedisin, ble brukt som en positiv kontroll.

Metoder:I in vivo-eksperimenter ble 75 SD-rotter tilfeldig delt inn i 6 grupper: normal (destillert vann-behandlet), modell (BSA-behandlet), positivt medikament (BSA-behandlet pluss BJRG 600 mg/kg/dag) og BSA-behandlet pluss CPhG-grupper (125, 250 og 500 mg/kg/dag). Lever- og miltindekser, serumnivåer av aspartataminotransferase (AST), alaninaminotransferase (ALT), heksadekensyre (HA), laminin (LN), type III prokollagen (PCIII), type IV-kollagen (IV-C), hydroksyprolin (Hyp) ), og transformerende vekstfaktor 1 (TGF- 1) ble målt i rottelever. Histopatologiske karakterer for leverfibrose ble vurdert for hver gruppe ved å bruke H&E og Massons trikromfarging. Uttrykket av TGF- 1, kollagen I (Col-I) og kollagen III (Col-III) ble bestemt ved en immunhistokjemisk fargingsmetode. Disse effektene ble videre evaluert in vitro ved å bestemme ekspresjonsnivåer av NF-KB p65 og Col-I ved kvantitative sanntids PCR-analyser. Col-I proteinekspresjon ble også undersøkt ved western blotting.

Resultater: Alle dosegrupper (125, 250 og 500 mg/kg/dag) med CPhG reduserte lever- og miltindeksen signifikant, reduserte ALT, AST, HA, LN , PCIII, IV-C serumnivåer, TGF- 1-innhold (P < 0.01,="" p="">< 0.01="" og="" p="">< 0.01),="" og="" hyp="" innhold.="" cphgs="" lindret="" også="" markant="" hevelsen="" av="" leverceller="" og="" forhindret="" effektivt="" hepatocyttnekrose="" og="" inflammatorisk="" celleinfiltrasjon.="" immunhistokjemiske="" resultater="" viste="" at="" cphg="" reduserte="" uttrykket="" av="" tgf-="" 1="" signifikant="" (p="">< 0,01,="" p="">< 0,01="" og="" p="">< 0,01),="" col-i="" og="" col-iii.="" in="" vitro-effektene="" av="" cphgs="" (100,="" 75,="" 50="" og="" 25="" ug/ml)="" på="" hsc-t6="" viste="" at="" cphgs="" signifikant="" reduserte="" mrna-ekspresjon="" av="" nf-kb="" p65="" og="" col-i,="" og="" cphgs="" nedregulerte="" også="">

Konklusjoner:CPhG-er har en betydelig antihepatisk fibroseeffekt, og kan brukes som hepatobeskyttende midler for behandling av leverfibrose.

Nøkkelord:hepatisk fibrose,Cistanche tubulosa,Fenyletanoildglykosid,Chemokine BSA, forebygging og terapi

FenyletanoildglykosidiCistanchetubulosa

Bakgrunn

Hepatisk fibrose er en sårhelingsrespons på alvorlig leverskade som oppstår i patogenesen av kronisk kepatitt indusert av forskjellige faktorer. Disse faktorene er virusinfeksjon, alkoholmisbruk, kolestase og metabolske og autoimmune sykdommer [1–3]. Progressiv akkumulering av ekstracellulær matrise (ECM) og redusert remodellering forstyrrer leverens normale arkitektur, noe som resulterer i hepatisk fibrose [4]. Leverfibrose er kritisk ved kronisk leversykdom og utvikler seg ofte til irreversibel cirrhose og karsinogenese. For tiden er det ingen metoder eller effektive medisiner for behandling av leverfibrose. Derfor haster det å finne et legemiddel mot hepatisk fibrose som vil dempe utviklingen av leverskade til fibrose og kreft.

CistanchetubulosaW (av familien Orobanchaceae) er en parasittisk plante som er mye dyrket i den sørlige regionen Xinjiang i Kina [5]. Folk bruker det vanligvis for å styrke nyrene, gi næring til blodet, slappe av tarmen og forsinke alderdommen. Det er offisielt oppført i den kinesiske farmakopéen [6].Cistanchetubulosainneholder en rekke aktive komponenter. Disse inkludererFenyletanoildglykosider(CPhG), iridoider og polysakkarider. Som en av mange aktive komponenter iCistanchetubulosa, CPhGshave viste overbevisende antioksidant-, anti-tretthets-, nevrobeskyttende og anti-inflammatoriske effekter i både in vivo- og in vitro-studier [7]. De siste årene har det blitt rapportert at CPhG har hepatobeskyttende effekter. Potensielle mekanismer som ligger til grunn for disse effektene er fjerning av frie radikaler, beskyttelse av levermembraner, immunregulering, hemming av apoptose, inhibering av uttrykket av HBsAg og HBeAg, og hemming av HBV DNA-replikasjon og andre [8–11]. Imidlertid tar få studier i litteraturen for seg den antihepatiske fibroseeffekten av GPhCs. Derfor hadde denne studien som mål å undersøke den antihepatiske fibroseeffekten av GPhCs ved å bruke en modell av bovint serumalbumin (BSA) indusert hepaticfibrose hos rotter. Beslektede molekylære mekanismer ble undersøkt i HSC-T6-celler.

Metoder

Kjemikalier og reagenser

Et Hydroxyproline-sett (alkalisk hydrolyse) (Lot:20140616) ble kjøpt fra Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Kina). Rotte TGF- 1 sandwichELISA-sett (parti: 238240615) ble kjøpt fra Lianke Biotech Co., Ltd. (Kina). Kanin Anti-CollagenI antistoff (parti: 140619), Rabbit Anti-Collagen III antistoff (parti: 980788 W), og Rabbit Anti-TGF- 1 antistoff (parti: 140619) ble levert av Beijing BiosynthesisBiotechnology Co., LTD ( Kina). Vedlagt normalsaueserum (arbeidsvæske) (parti: WP141214), PV-6000(parti: WK141225) og DAB-sett (parti: K136621D) ble kjøpt fra Zhongshan Golden Bridge BiotechCo., Ltd. (Kina). Påvisning av primære antistoffer ble utført ved å bruke 2. Antistoffløsning (Alk-Phos.Conjugated, Anti-rabbit) og 2. Antistoffløsning (Alk-Phos. Conjugated, Anti-mus) (parti: 272387) kjøpt fra Invitrogen Company (USA) .

Bovint serumalbumin (BSA) (parti: SLBG8239V) ble kjøpt fra Sigma (USA). Før bruk ble BSA fremstilt ved 18 g/L i vanlig saltvann, bakteriene fjernet ved filtrering og BSA lagret ved 4 grader. Freunds ufullstendige adjuvans som inneholdt 1 g lipid fra sauehår (Lot: AF0220LA14, Shanghai yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (Kina,) ble blandet med 2 g flytende parafin (Lot:20130815, Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd. (Kina,),sterilisert i en dampautoklav og lagret ved 4 grader. Det positive medikamentet BJRG ble oppnådd som Biejiarangan-tabletter fra Inner Mongolia Furui Medical Science Co., Ltd.(Kina). destillert vann med en konsentrasjon på 600 mg/kg.

Fenyletanoild glykosidiCistanchehar forebyggende effekt

Plantematerialer

Cistanche tubulosa(Orobanchaceae-familien) ble kjøpt fra Minfeng-regionen i Xinjiang i Kina. Materialet ble autentisert av forsker Jun Zhao, Key Laboratory for Uighur Medicine, Institute of Materia Medica i Xinjiang. Voucherprøver ble deponert i Instituttet for Materia Medica i Xinjiang.

Utarbeidelse av CPhGs

Tørkede og skivede jordstengler avCistanchetubulosa(6,0 kg) ble fortløpende ekstrahert under tilbakeløp tre ganger med 70% etanol, og løsningsmidlet ble fjernet for å gi etanolekstraktet. Etanolekstrakter ble renset ved å bruke AB-8-harpiks for å oppnåfenyletanoidglykosider(CPhGs). Stamløsninger av CPhGs brukt for forskjellige dosegrupper i dyrestudier (henholdsvis 500 mg/kg, 250 mg/kg og 125 mg/kg) ble oppløst i 0,5 prosent (5 g/L) karboksymetylcellulose ( natriumsalt).

Kvantifisering av CPhGs

Innholdet av to komponenter (echinakosid og akteosid) i CPhG-ene ble bestemt ved HPLC ved å bruke en tidligere rapportert metode (Zhang et al. 2004)[12]. HPLC ble utført ved å bruke en Shimadzu LC-10AHPLC utstyrt med en UV-detektor. HPLC-kolonnen var en Phenomenex Gemini ODS-kolonne (250 × 4,6 mm, 5 μm). Den isokratiske mobile fasen besto av metanol-acetonitril-1 prosent eddiksyre (15:10:75, v/v/v). Elueringen var i 40 minutter og strømningshastigheten ble holdt ved 0,6 ml/min. Kolonnetemperaturen ble holdt konstant på 30 grader. UV-deteksjon var ved 334 nm.

Dyr og HSC-T6-cellelinje

[Grade SPF] sunne voksne Sprague-Dawley (SD) hannrotter (180–220 g) ble kjøpt fra Xinjiang MedicalUniversity Animal Center, lisensnr.: SCXK (New)2011–0004. Rotter ble matet med spesifikt patogenfri (SPF) chow. Alle prosedyrene knyttet til dyreforsøkene ble godkjent av Animal Ethics Committee of First Affiliated Hospital ved Xinjiang Medical University. Rotter ble holdt i bur under kontrollerte miljøforhold (25 grader og en 12 timers lys/mørke syklus) og hadde fri tilgang til standard rottepelletmat og springvann. Rotter ble akklimatisert før behandling.

En udødeliggjort rottehepatisk stellatecellelinje, HSC-T6, ble oppnådd fra Wuhan Procell Gene BiotechnologyCo., LTD. (Wuhan, Kina). HSC-T6-celler ble dyrket i Dulbecco's Modified Eagle's Medium (High Glucose) (DMEM, Beijing, Kina) supplert med 10 prosent føtalbovint serum (Gibco, Sør-Amerika), 100 IE/ml penicillin og 100 ug/ml streptomycin (Beijing, Kina) ) i avfuktet inkubator ved 37 grader med 5 prosent CO2.

BSA-indusert leverskade og behandlinger

Syttifem SD-rotter ble tilfeldig delt inn i seks grupper: Normal (behandlet med destillert vann), modell (BSA-behandlet), positivt medikament (BSA-behandlet pluss BJRG 600 mg/kg/dag) , og BSA-behandlede pluss CPhG-grupper (125, 250, 500 mg/kg/dag). BSA-behandlede pluss CPhG-grupper (125, 250, 500 mg/kg/dag) hadde 13 rotter i hver gruppe, og den andre gruppen hadde 12 rotter i hver gruppe. Den BSA-induserte leverskademodellen er delt inn i primær sensibilisering etterfulgt av et immunologisk angrep) [13]. Bortsett fra den normale gruppen, ble de andre gruppene administrert flere subkutane injeksjoner med 0,5 ml (9 mg/ml) BSAfreunds ufullstendige adjuvans på dag 1, dag 15, dag 22, dag 29 og dag 36 for primær sensibilisering. Syv dager etter den femte injeksjonen ble blod oppnådd gjennom ratretinal vene plexus og testet for serumalbuminantistoffer. BSA-antistoff i rotteserum ble påvist ved hjelp av dobbel agar-diffusjonsmetode. Angrepsinjeksjonen ble utført ved å administrere 0,4 ml BSA i normal saltvann var gjennom kaudalvenen i BSA-antistoffpositive rotter to ganger i uken i ti ganger. Konsentrasjonene og injeksjonstidene var 5.00, 5.50, 6.00, 6.50,7.00, 7.50, 8.50, 9.00, 9.50 og 10.00 g/L på dag 46 , henholdsvis dag 50, dag 53, dag 57, dag 60, dag 64, dag 67, dag 71, dag 74 og dag 78. I normalgruppen ble normalt saltvann brukt til immunologisk primære (sensibilisering) og sekundære (angrep) injeksjoner i stedet for BSA, og andre tilstander var de samme som i modellgruppen.

Den normale gruppen fikk oralt destillert vann med en dose på 10 ml/kg/dag. Modellgruppen ble oralt administrert 10 ml/kg/dag 0,5 prosent CMC-Na-løsning. Den positive medikamentgruppen ble oralt administrert 600 mg/kg/dag BJRG. De BSA-behandlede pluss CPhG-gruppene (125 250 og 500 mg/kg/dag) ble gitt oralt henholdsvis 125, 250 og 500 mg/kg/dag CPhG. Rotter med daglig dosering fortsatte i to uker etter siste injeksjon.

Etter forsøksperioden ble rottene fastet i 12 timer før 10 prosent kloralhydrat og deretter umiddelbart avlivet. Serumprøver ble samlet fra hver rotte som ble brukt umiddelbart. Lever ble høstet for to formål: (1) konservering i flytende nitrogen for Hyp kits og (2) fiksering i 10 prosent formaldehyd for histologiske og immunhistokjemiske undersøkelser. Hele varigheten av dyrestudiene var 93 dager.

Fenyletanoild glykosidiCistanchehar forebyggende effekt

Lever- og miltindekser

Leveren og milten ble dissekert ved laparotomi og vasket med 4 grader normalt saltvann. Etter å ha absorbert overflødig vann med filterpapir, ble leveren og milten veid for å beregne de tilsvarende indeksene: Relativ organvekt=organmasse (g)/individuell kroppsmasse (g) × 100 prosent [14].

Analyse av markører for leverfibrose

Den beskyttende effekten av CPhG mot BSA-indusert leverskade ble evaluert ved å måle ALT og AST (Mind ray automatic biochemical analyzer, A086A0182). Utviklingen av leverfibrose og effekten av behandlingen ble bestemt ved å undersøke HA, LN, PC III og IV-C (Chemiluminescence analyzer, TaiGeKeXin, MP2808).

Hypinnhold og TGF- 1-analyse

Nivået av Hyp i levervev ble bestemt ved en spektrofotometrisk metode i henhold til settets instruksjoner. Nivået av Hyp ble uttrykt som Hyp (ug)/protein (mg). Hyp (ug/mg)=(Målt OD - blank OD)/(standard OD blank OD)×5 (ug/ml) × 10/våt vevsvekt (ml/mg). Den hepatiske konsentrasjonen av TGF- 1 ble påvist ved å bruke ELISA-sett i henhold til produsentens instruksjoner. Den hemmende effekten av CPhG på fibrose ble bekreftet av ekspresjonsnivåene av TGF- 1.

Histopatologisk undersøkelse

Levervevet i samme del av venstre lapp ble reseksjonert og fiksert i 10 prosent formaldehydløsning. Vev ble farget med konvensjonell H&E- og Masson'strichrome-farging for å observere histopatologiske endringer under et lysmikroskop. Ekspresjon av kollagen type I, kollagen type III og TGF- 1 i levervev ble analysert ved immunhistokjemisk farging [15].

Semi-kvantitativ immunhistokjemi ble utført i henhold til rapporterte metoder [16, 17]. Følgende klassifikasjoner ble brukt for TGF- 1 positive celler: "-" indikerer nesten ingen uttrykk, 20=l; " pluss " indikerer positive celler individuelt samlet i lesjonsområdet, 21=2; " pluss pluss " indikerer positive celler i små grupper samlet rundt lesjonsområdet, 22=4; " pluss pluss pluss " indikerer spredte positive celler uttrykt som 23=8. Resultatene representerer en hierarkisk integrasjon. Kollagen type I og kollagen type III kromogene grad og omfang ble konvertert til CRI for statistisk analyse (kromogent grad × kromogent område). Den kromogene graden er delt inn i svak "pluss", moderat "pluss pluss", og sterk "pluss pluss pluss". Det kromogene området er delt inn i " pluss ", dets kromogene område < visning="" 1/4;="" "="" pluss="" pluss="" ",="" dets="" kromogene="" synsområde/4-2/4;="" "="" pluss="" pluss="" pluss="" ",="" dets="" kromogene="" synsområde="" 2/4-3/4;="" "="" pluss="" pluss="" pluss="" pluss="" ",="" dets="" kromogene="" område=""> 3/4. Blindscoring ble utført av to personer der " pluss " er 1; " pluss pluss "er 2, " pluss pluss pluss " er 3, og " pluss pluss pluss pluss " er 4. Tre mikroskopobservasjonsfelt (forstørrelse × 200) ble tilfeldig valgt for hver seksjon, med gjennomsnittsnivået til prøvene brukt som en semi-kvantitativt nivå.

Celleeksperimenter

HSC-T6-celler ble sådd ut i en 96-brønnplate. Til å begynne med ble celler dyrket med DMEM som inneholdt 1 0 prosent FBS i 48 timer. Mediet ble deretter erstattet med DMEM uten FBS for å sulte cellene i 12 timer. Cellene ble deretter dyrket med DMEM som inneholdt 5,0 ng/mLTGF- 1 (uten FBS) i 24 timer. Til slutt, forskjellige konsentrasjoner av CPhG (100 ug/ml, 50 ug/ml og 25 ug/ml), akteosid (6 ug/ml, 3 ug/ml og 1,5 ug/ml), andechinacosid (500 ug/ml, 250 ug/ml, og 125 ug/ml) ble utført i platen i firedoble brønner og inkubert i 48 timer.

Sanntids PCR-analyse

mRNA-ekspresjonsnivået til NF-KB, p65 og kollagenI ble bestemt ved sanntids-PCR. For å bestemme mRNA-uttrykk i HSC-T6-celler, ble cellene (4 × 105 celler) sådd i seks-brønns plater med 3 mL DMEM med 10 prosent FBS og inkubert over natten ved 37 grader og 5 prosent CO2, hvoretter cellekulturmedier ble skiftet toserumfritt DMEM. Deretter CPhGs (100 ug/ml, 50 ug/ml og 25 ug/ml), acteosid (6 ug/ml, 3 ug/ml og 1,5 ug/ml) og echinacosid (500 ug/ml, 250 ug) /ml og 125 ug/ml) ble tilsatt til brønnene. Etter 48 timers inkubasjon med CPhG-er eller monomere sammensetninger, ble totalt RNA ekstrahert ved bruk av TRIzol-reagens (Invitrogen, USA) og omrørt kraftig med kloroform i 15 s. Etter å ha stått ved romtemperatur i 3 minutter, ble lysatet sentrifugert ved 12,000 x g i 15 minutter ved 4 grader. RNA i den vandige fasen ble utfelt med isopropanol, og den øvre vandige fasen ble overført til et nytt mikrosentrifugerør. RNA ble presipitert ved å tilsette 0,75 prosent etanol, hvoretter mikrosentrifugerøret og sentrifugerte ved 12,000 x g ved 4 grader i ikke mer enn 5 minutter. Supernatanten ble fjernet og RNA ble tørket ved romtemperatur i 5–10 minutter. Spesifikke sett med primere (Sangon, Shanghai, Kina) som ble brukt til amplifikasjon av rotte-aktin [GenBank: NM_031144.3], Collagen I [GenBank: NM_ 053304.1] og NF- κB p65[GenBank: NM_199267.2] gener ble designet ved bruk av Batch Primer 3. Fremover (FW) og revers (RV) primere var som følger: Kollagen I (FW: GGA GAGAGC ATG ACC GAT GG, RV: GGG ACT TCT TGAGGT TGC CA), NF-κB p65 (FW: CAT ACG CTG ACCCTA GCC TG, RV: TTT CTT CAA TCC GGT GGCGA), -aktin (FW: TAA GGC CAA CCG TGA AAA GATG, RV: AGA GGC ATA CAG GGA CAA CAC A). Resultatene ble normalisert til mRNA av housekeepinggene -actin som en intern kontroll og presenteres som relative mRNA-nivåer

Reaksjoner ble utført med 8 μL IQ SYBR GreenSupermix, 1 μL 10 pM primerpar, 8,5 μL destillert vann og 2,5 μL cDNA. Hver polymerasekjedereaksjon ble utført under følgende forhold: 95 grader i 3 minutter, deretter 40 sykluser på 10 s ved 95 grader, 30 s ved 55 grader og 10 s ved 55 grader – 95 grader for forlengelse, etterfulgt av enkeltfluorescensmåling. De endelige resultatene ble beskrevet med de relative verdiene (2-ΔΔCt). Beregning og analyse ble utført av iQ5 Real-Time PCR Detection System.

Western blot-analyse

Kollagen I (Abcam, Cambridge, Storbritannia, art.nr.: ab34710)proteinekspresjonsnivåer ble bestemt ved Westernblotting [med -actin (Lot: 60008-1-lg; Proteintech, Kina) som en husholdningskontroll. Helcelleekstrakter ble fremstilt ved å bruke Radioimmunoprecipitation assay (RIPA) (Thermo Scientific, USA) buffer med 1 prosent Haltprotease inhibitor cocktail (Thermo Scientific, USA) og 1 prosent Halt fosfatase inhibitor cocktails (Thermo Scientific, USA). Proteinkonsentrasjonen ble målt og kvantifisert ved Bradford-metoden [18]. Protein (10–50 ug) ble separert på en 10 prosent SDS-PAGE gel og overført til PVDF-membraner (Millipore, USA). Membraner ble blokkert i 1 time ved romtemperatur med 5 prosent BSA, og de primære antistoffene (Anti-Collagen I antistoff, 1:200 fortynning eller muse-mAb av -aktin, 1:5000 fortynning) ble inkubert ved 4 grader over natten. Den tilsvarende Alk-Phos. konjugerte sekundære antistoffer ble inkubert ved romtemperatur. Til slutt ble membranene vasket tre ganger med 1 × Tris-HClsaline med 0,1 prosent Tween 20, og signalene ble skannet og visualisert av GEL DOC XR Imaging System (Bio-Rad). Densitometrisk analyse ble utført på proteinene av interesse og normalisert til -aktin av GEL DOCImage Studio programvare (Bio-Rad). -aktin ble brukt som internkontroll.

Statistisk analyse

Shapiro-Wilk normalitetstesten og Levenes varianshomogenitetstest ble brukt for å verifisere normalitet og varianshomogenitet. Variansanalyse (ANOVA) etterfulgt av Tukeys post hoc-test ble brukt for å identifisere statistiske forskjeller inhomogene, normalfordelte data. Kruskal-Wallis ikke-parametriske test ble brukt til å analysere data som ikke er normalfordelte eller homogene. Resultatene ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Signifikansen ble satt til P < 0.05.="" alle="" data="" ble="" analysert="" av="" spss="" 16.0-programvare="" (xinjiang="" medical="">

Resultater

Kvantitativ bestemmelse av CPhGsCPhGs iCistanchetubulosainneholder toFenyletanoildglykosider, echinakosid og acteosid, og deres innhold i CPhG-ene ble bestemt ved HPLC-analyse (fig. 1) til å være henholdsvis 42,71 ± 0.42 prosent og 14.27 ± 0.18 prosent.

Lever- og miltindekser

Som tabell 1 ble vist, var lever- og miltindeksene for modellgruppen signifikant forhøyet [P < 0.01,p="">< 0,05].="" lever-="" og="" miltindeksene="" for="" det="" positive="" legemidlet="" bjrg="" og="" cphgs="" ved="" forskjellige="" dosegrupper="" var="" signifikant="" redusert="" sammenlignet="" med="" modellgruppen="" [pliver="0.004," pliver="0.003," pliver="0.004," pliver="0.005;" pspleen="0.017," pspleen="0.027," pspleen="0.024,PSpleen=0.070," henholdsvis].="" lever-="" og="" miltindeksene="" var="" lavere="" enn="" for="">

Effekter av CPhG på ALT, AST aktiviteter og leverfibrosemarkører

I denne studien ble serumnivåene av leverenzymene AST og ALT betydelig økt i modellgruppen, noe som gjenspeiler hepatocellulær skade i BSA-induserte leverfibroserotter. Eksperimentene viste imidlertid at behandling med BJRG (600 mg/kg) og CPhGs (125, 250 og 500 mg/kg) reduserte betydelig AST[PAST < 0,001,="" past="">< 0,001,="" past="">< 0,001,="" past="">< 0,001,="" respektivt]="" og="" alt="" [palt="0.117," palt="0.139," palt="0.189" ,="" palt="0.255," henholdsvis]="" nivåer="" i="" leverfibrosrater.="" (tabell="">

Nivåene av HA, LN, PC og IV-C i modellrotter var signifikant økt [PHA < 0.001,="" pln="">< 0.{{39}="" }01,="" ppciii="0.002," henholdsvis="" piv-c="">< 0,001].="" sammenlignet="" med="" modellgruppen,="" nivåene="" av="" henholdsvis="" ha="" [pha="0.009," pha="0.007," pha="0.009," pha="0.023]," ln="" [pln="0.011," pln="0.004," henholdsvis="" p="" ln="0.026," p="" ln="0.069]," pc="" iii[p="" pciii="" {{26="" }}.006,="" henholdsvis="" p="" pciii="0.067," p="" pciii="0.136," p="" pciii="0.296]" og="" iv-c="" [p="" iv-c="">< 0,001,="" henholdsvis="" p="" iv-c="">< 0,001,="" p="" iv-c="">< 0,001,="" p="" iv-c="">< 0,001]="" hos="" rotter="" ble="" markant="" redusert="" av="" bjrg="" (600="" mg/kg)="" og="" cphg="" ved="" forskjellige="" dosegrupper="" (125,="" 250="" og="" 500="" mg/kg)="" )="" (tabell="">

Hypinnhold og TGF- 1

Kollageninnhold ble også påvist ved å måle Hyplevels i levervev. Som vist i tabell 4, var gjennomsnittlig Hyp-nivå i modellgruppen signifikant høyere enn normalgruppen, men det ble markant redusert i BJRG-gruppen og de forskjellige CPhGs-dosegruppene.

Leverkonsentrasjonen av TGF{{0}} i modellgruppen hos rotter var signifikant økt [P < 0.001].="" sammenlignet="" med="" modellgruppen,="" tgf-="" 1-nivåer="" av="" det="" positive="" stoffet="" og="" de="" forskjellige="" cphg-dosegruppene="" ble="" markert="" redusert="" [p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" p="" tgf-="" 1="">< 0.001,p="" tgf{{10="" }}="">< 0,001,="" henholdsvis="" ptgf-="" 1="">< 0,001].="" resultatene="" er="" oppsummert="" i="" tabell="">

Histopatologisk undersøkelse

Observasjoner av normale levervevsseksjoner farget med H&E og Massons trikrom viser distinkte hepatiklobuler og hepatiske sinusoider. Levervevsstrukturen hos modellrottene var forstyrret, og levervevet og leversinusoidene ble erstattet av en stor mengde bindevev. Imidlertid ble mer normal cytoarkitektur og mindre bindevev påvist i behandlingsgruppen enn de i modellgruppen.

H&E-farging

I normalgruppen ble hepatisk lobule strukturell integritet uten unormale portalområder og leversinusoider observert. Leverstrengene var ordnet på en ryddig måte, med kjernen rund og klar. Kjernene er lokalisert i midten av cellen, med rikelig cytoplasma. Bare portalområdet har en liten mengde fibrøst vev (fig. 2a).

I modellgruppen ble den lobulære strukturen alvorlig skadet. Leverceller viste mild vannaktig degenerasjon, for det meste ballongdegenerasjon og/eller fettdegenerasjon. Dannelsen av inflammatorisk celleinfiltrasjon, omfattende fibrøs vevshyperplasi, dannelsen av et stort antall av fibrøs septum, delte lobuler og betydelig levercelleproliferasjon ble også observert. Disse observasjonene bekreftet suksessen med etableringen av dyremodellen for rotteimmunskade. leverfibrose (fig. 2b).

Sammenlignet med modellgruppen var det en reduksjon i inflammatorisk celleinfiltrasjon i de forskjellige CPhG-ene. Det ble også observert mindre nekrose og fettdegenerasjon av leverceller samt lindring av fibrose. CPhG reduserte signifikant patologien til BSA-indusert leverfibrose hos rotter, lindret hevelsen av leverceller og forhindret effektivt hepatocyttnekrose og inflammatorisk celleinfiltrasjon, noe som tyder på at CPhGs utøver en beskyttende effekt på BSA-indusert rotteleverfibrose. (Fig. 2c–f ).

Massons trikromfarging

I normalgruppen var levervevet normalt. Det hepatiske portalområdet viste et lite antall blåkollagenfibre, og levervevet var normalt strukturert (fig. 3a). Sammenlignet med levervevet i den normale gruppen, prolifererte fibrøst vev av den sentrale brosjyren og utvidet seg til leverparenkymet. Kollagenfibre utvidet og koblet sammen og omsluttet hele lobulen og omringet den sentrale venen. Disse effektene, sammen med hepatocyttfibrose, lobulær strukturell skade, periportal fibrose og pseudolobuledannelse (fig. 3b) ga bevis på at modellen ble etablert.

Sammenlignet med modellgruppen var kollagenfibrene i den positive medikamentkontrollgruppen mildt utvidet utover fra det perifere portalområdet (fig. 3c). Sammenlignet med modellgruppen ble kollagenfibrene i de forskjellige CPhG-dosegruppene betydelig redusert, fiberproliferasjon ble hemmet og spredning av fibrøst vev i leverparenkymet betydelig redusert. Disse resultatene antydet at CPhGs beskyttet rotter fra BSA-indusert leverfibrose (fig. 3d–f).

Immunhistokjemisk farging

Det er viktig at uttrykket av kollagen type I og kollagen type III spiller viktige roller i utviklingen av leverfibrose, og deres generering og avsetning i levervevet kan tjene som en viktig determinant for effekten av antihepatisk fibrose. Resultatene er oppsummert i tabell 5.

Kollagen type I

Den normale gruppen uttrykte kollagen type I hovedsakelig blodkar og portalområdet. Modellgruppen høyuttrykt kollagen type I vaskulær fibrose i portalområder. I rommet til Disse ble kollagen type I-farging observert som en strek eller som en flekkvis fordeling. Kollagen-innkapslet fibroussepta for å danne pseudolobule. I disse eksperimentene ble det dannet færre fibrøse skillevegger for BJRJ (600 mg/kg) og forskjellige dosegrupper av CPhGs (125, 250 og 500 mg/kg) [PCol I= 0.002, PCol I {{6 }}.001, henholdsvis PCol I=0.023 og PCol I=0.044]. De semikvantitative resultatene viste at uttrykket av deres kollagen type I var betydelig lavere sammenlignet med modellgruppen (fig. 4).

Kollagen type III

Kollagen type III ble svakt uttrykt i normalgruppen, og perifere områder rundt portalen og levervenene viste en liten mengde fine gule i stedet for kontinuerlige fibre (fig. 5a). I modellgruppen viste kollagenfibre brede og tykke snorer, noe som indikerer sterkt uttrykk, hovedsakelig lokalisert i portal- og fibrøst vevsområde (fig. 5b).

Kollagenfibre av BJRJ (600 mg/kg) og forskjellige dosegrupper av CPhGs (125, 250 og 500 mg/kg) var filamentøse og fordelt rundt de sentrale venene og portalområdene. Sammenlignet med modellgruppen var kollagenfibrene betydelig redusert, fargingen var blek og tynn, og immunhistokjemisk farging var svakt positiv (fig. 5c–f). Disse semikvantitative resultatene viser at de positivt uttrykte cellene i de positive og forskjellige dosegruppene [PCol III=0.015, PCol III=0.001, PColIII=0.010 og PCol III=0.037, henholdsvis] var forskjellige fra de i modellgruppen.

TGF- 1

Det var lite uttrykk for TGIF- 1 i normale rotteleverceller. Ekspresjonen var begrenset til et lite antall interstitielle celler (fig. 6a). I modellgruppen var TGF- 1-ekspresjonen vidt distribuert i portalområdet, fibrøse rom, hepatiske stellatceller, inflammatoriske celler, sinusveggen og cytoplasma. Et spesielt portalområde viste et sterkt positivt uttrykk med brungul farging (fig. 6b)

Det var en liten mengde uttrykk i portalområdet og fibrøse skillevegger av BJRJ (600 mg/kg) og forskjellige dosegrupper av CPhGs (125, 250 og 500 mg/kg). Graden av positiv farging i disse gruppene ble betydelig redusert sammenlignet med modellgruppen. Farging i de interstitielle cellene i de fibrøse septaene og cytoplasmaet til inflammatoriske celler ble redusert (fig. 6c–f). Semikvantitative resultater viste at BJRJ og forskjellige dosegrupper av CPhGs [P TGF- 1=0.001, P TGF- 1 < 0.001,="" p="" tgf-="" 1="0.009," ptgf-="" 1="0." 004,="" henholdsvis]="" var="" signifikant="" sammenlignet="" med="">

Som nevnt tidligere i artikkelen, er TGF- 1 et viktig cytokin i patofysiologien til leverfibrose, og stimulerer produksjonen av ekstracellulær matrise [19]. Vi viste at nivået av TGF- 1 økte i modellgruppen på en måte som samsvarer med alvorlighetsgraden av leverfibrose. Ekspresjonsnivåene av TGF- 1 i leveren var i samsvar med serumTGF- 1-nivåer. Dette indikerer at CPhG-er signifikant kan redusere leverfibrose på grunn av TGF- 1-ekspresjon ved å delta i syntesen og nedbrytningen av ECM.

Uttrykket av kollagen type I, kollagen type III og TGF- 1 kan oppdage den patologiske prosessen med hepatisk fibrose. Ekspresjonsnivåene deres i behandlingsgruppene ble betydelig redusert og illustrerte at CPhGs kan forbedre kollagenaseaktiviteten, opprettholde den dynamiske likevekten i leverens ECM-syntese og nedbrytning, og dermed forsinke og forhindre dannelsen av leverfibrose.

NF-KB p65 og kollagen I uttrykk etter medikamentintervensjon i HSC-T6 celler

For å karakterisere signaler om leverfibrose, ble to viktige regulatoriske gener i leveren bestemt via RT-PCR-analyse. Dataene viste at tHSC-T6-celler fra kontrollgruppen hadde lavere nivåer av NF κB og kollagen type I mRNA. Motsatt induserte TGF- 1 HSC-T6-celler til å markert oppregulere NF-KB (P < 0.01)="" og="" col-i="" (p="">< 0,01)="" mrna,="" med="" nivåer="" høyere="" enn="" de="" i="" kontrollgruppen.="" i="" nærvær="" av="" forskjellige="" konsentrasjoner="" av="" cphgs,="" resultatene="" av="" nf-kb="" p65="" [p="" nf-kb="0.001" for="" 100="" ug/ml,="" p="" nf-kb="0.002" for="" 75="" ug/ml="" ,="" p="" nf-kb="0.007" for="" 50="" ug/ml,="" og="" p="" nf-kb="0.012" for="" henholdsvis="" 25="" ug/ml]="" og="" col-i="" [p="" col-i="" {{32="" }}.006,="" henholdsvis="" p="" col-i="0.009," p="" col-i="0.014," p="" col-i="0.019]" viste="" reduserte="" uttrykk="" for="" disse="" mrna-ene="" (="" fig.="">

Western blot-analyse av kollagen I-nivå etter medikamentintervensjon i HSC-T6-celler

Figur 8 viser kollagen I-proteinekspresjonsnivåene i HSC-T6-celler i de forskjellige eksperimentelle gruppene. Kollagen I-proteinekspresjonsnivået ble betydelig redusert i de forskjellige dosegruppene av CPhGs (100 ug/ml, 75 ug/ml, 50 ug/ml, og 25 ug/ml) sammenlignet med TGF- 1-gruppen.

Diskusjon

CPhGs er et fenyletanoidglykosid isolert og renset fra rhizomet til Cistanche, som brukes som en tradisjonell kinesisk urtemedisin. De siste årene har CPhGshad vist seg å ha en kraftig evne til å forebygge leverskader [20]. Derfor hadde vi som mål å undersøke om CPhG-er har hemmende effekter på hepatittfibrose ved BSA-indusert leverfibrose hos rotter. BJRG brukes ofte som et terapeutisk legemiddel for leverfibrose i Kina. Den er laget av skilpaddeskall. Radix PaeoniaRubra, Cordyceps Sinensis, Radix isatidis, etc. har effekten av å fylle opp Qi og blod, lindre tretthet, mykne noder. I tillegg viser tidligere studier at det har den åpenbare funksjonen å blokkere tidlig leverfibrose, hemme spredningen av fettlagrende celler og redusere kollagensyntesen [21]. Derfor ble BJRG brukt som et positivt medikament i denne studien.

De patologiske endringene av leverfibrose hos rotter indusert av BSA-injeksjoner er lik de ved humanportal cirrhose [22]. CPhGs lindret doseavhengig graden av leverfibrose og hemmet HSC-transformasjon til myofibroblastlignende celler, reduserte de forhøyede nivåene av serum ALT, AST, HA, LN, CIV, TGF- 1 og leverindeksen, og undertrykte markant ekspresjon av kollagen. I, kollagen III og TGF- 1 i levervev.

Stadiene av leverfibrose er korrelert med disserumnivåene av HA, LN og IV-C, som som markører kan spille en rolle i å oppdage graden av leverfibrose [23]. Det har blitt rapportert at HA er hovedressursen til den ekstracellulære matrisen. IV-C som det essensielle elementet i basalmembranen vil syntetiseres rikelig og avsettes tungt i de tidligere fasene av levercirrhose. Serumnivåene av LN og IV-C er indeksene for omsetningshastigheten til basalmembranen og viser graden av fibrose i portalområdet og sinusformede kapillærer [24]. PC III er en markør ved diagnostisering av leverfibrose og tidlig skrumplever, men dens sensitivitet og spesifisitet er ikke høy, og det er ingen signifikant forskjell mellom de ulike stadiene offibrose i mange referanser [24, 25]. Denne studien oppnådde et lignende resultat.

I tillegg viser H&E og Massons trikromfargede seksjonsobservasjoner normalt levervev med distinkte hepatiske lobuler og hepatiske sinusoider. Levervevsstrukturen i modellgruppen var forstyrret, og levervevet og leversinusoid ble erstattet av store mengder bindevev. Imidlertid ble det observert betydelig forbedring i behandlingsgruppene sammenlignet med modellgruppen.

Viktigere er at kollagen type I og kollagen type III uttrykk spiller viktige roller i utviklingen av leverfibrose, hvis blokkering kan forhindre og behandle leverfibrose. Derfor kan generering og avsetning i levervevet av kollagen type I og kollagen type III tjene som en viktig determinant for anti-hepatisk fibrose-effekt. TGF- 1 er også et viktig profibrogent cytokin ved leverskader, og det er biologisk aktivt med flere farmakologiske virkninger[26]. En balanse mellom disse handlingene er nødvendig for å opprettholde vevshomeostase. Det avvikende uttrykket av TGF 1 er involvert i patogenesen av leversykdommer [27, 28]. Det er kjent at TGF- 1 er et avgjørende cytokin som er involvert i de tidlige stadiene av leverfibrose. Oksidativ stress utløser TGF- 1, noe som resulterer i at sistnevnte stimulerer ECM-produksjon og avsetning [29]. Derfor er en av de effektive strategiene for å produsere antihepatisk fibrosemedisin å identifisere anti-TGF{11}}-midler. Immunhistokjemisk analyse viste at uttrykkene av kollagen type I, kollagen type III og TGF- 1 kunne oppdage den patologiske prosessen med hepatisk fibrose. Ekspresjonene av kollagentype I, kollagen type III og TGF- 1 i behandlingsgruppene er redusert, som var betydelig lavere spesielt i høydose CPhGs behandlingsgruppen, og antydet at CPhGs er en effektiv kollagen type I, kollagen type III , og TGF- 1-hemmer. Antagelig kan CPhG forbedre kollagenaseaktiviteten, opprettholde den dynamiske likevekten til ECM-syntese og nedbrytning, og dermed forsinke og forhindre dannelsen av leverfibrose.

CPhGs kunne ikke bare forbedre BSA-indusert hepaticfibrose hos rotter, men kan også være assosiert med å hemme aktiveringen av HSC in vitro. HSC-aktivering antas å representere det avgjørende trinnet i fibrogenese. I denne studien illustrerte resultatene at administrering av CPhGs fra 25 til 100 ug/ml bemerkelsesverdig svekket den reduserte NF-KB p65, kollagen I mRNA-ekspresjonen og kollagen I-proteinekspresjonen i HSC.

NF-KB spiller en viktig rolle i å modulere immunresponsen på infeksjon eller stimuli [30]. Oppbygging av NF-KB i leverceller kan resultere i rekruttering av inflammatoriske cytokiner/mediatorer, og dermed indusere fibroseutvikling [31, 32]. Dessuten er kollagen også en sensitiv indeks som reflekterer fibrosenivået og står for omtrent 50 prosent av det totale proteinet i den fibrøse leveren [33]. Som et resultat postulerte vi at den molekylære mekanismen mot leverfibrose er knyttet til CPhGs-mediert inaktivering av NF-KB-ekspresjon, der fordelen bidrar til synergistiske roller for å dempe immunotoksisitet og betennelsesstress i BSA-lesjonert levervev, som ytterligere korrigerer dysamelioratetabolisme i leverfunksjonen.

Konklusjoner

Avslutningsvis indikerer våre studier at CPhG-er signifikant demper omfanget av leverfibrose indusert av BSA hos rotter. Mekanismen kan i det minste delvis skyldes den hemmende effekten av CPhG på sammensetningen av ECM og stimulering av nedbrytningen av ECM, og/eller ved direkte hemming av syntesen av kollagen type I, kollagen type III og ekspresjonen av TGF{{0 }}. Derfor forventet vi at CPhG kan brukes i helseprodukter eller i kliniske medisiner for forebygging av human leverfibrose. Fremtidige studier er nødvendige for å fastslå effekten av CPhGs som et potent anti-hepaticfibrose-medisin.

Forkortelser

CPhGs: anolglykosider fra cistanche;

BSA: Bovint serumalbumin;

HSC-T6: Hepatiske stellatceller;

Hyp: Hydroksyprolin;

BJRG: CompoundBiejiarangan tabletter;

TGF- 1: Transformerende vekstfaktor 1;

ALT: Alaninaminotransferase;

AST: Aspartataminotransferase;

HA: Hyaluronsyre;

LN: laminin; PC III: Type III prokollagen;

IV-C: Type IV kollagen;

NF-KB: Kjernefaktor kappa-lettkjede-forsterker av aktiverte B-celler;

RT-PCR: Reverstranskriptase-polymerasekjedereaksjon;

SDS-SIDE: Natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektroforese.

Konkurrerende interesser

Forfatterne erklærer at de ikke har noen konkurrerende interesser

Forfatteres bidrag

TL, JZ, SPY, LM, MT og SLZ unnfanget og designet eksperimentene. SPY, TL og JZ analyserte dataene. SPY og JZ skrev manuskriptet. TL,LM og JZ gjennomgikk manuskriptet. Alle forfattere leste og godkjente det endelige manuskriptet.

Bekreftelse

Denne forskningen ble støttet av National Natural Science Foundationof China (81260624). Forfatterne vil gjerne uttrykke sin oppriktige takk til professor Tao Liu for hans foreslåtte forbedringer for skrivingen av denne artikkelen.

Forfatterdetaljer

1Institutt for toksikologi, School of Public Health, Xinjiang MedicalUniversity, nr. 393 Xinyi Road, Urumqi 830011Xinjiang Uyghur Autonomous Region, Kina. 2Key Laboratory for Uighur Medicine, Institute of MateriaMedica of Xinjiang, Urumqi 830004, Kina. 3Nei. 140 Xinhua South Road, Tianshan-distriktet, Urumqi 830000 Xinjiang Uyghur autonome region, Kina.

Klikk her for å sjekkeCistanchetubulosaProdukter

Referanser
1. Cohen-Naftaly M, Friedman SL. Nåværende status for nye antifibrotiske terapier hos pasienter med kronisk leversykdom. Ther Adv Gastroenterol. 2011;4(6):391–417.
2. Puche JE, Saiman Y, Friedman SL. Hepatiske stellatceller og leverfibrose. Compr Physiol. 2013;3(4):1473–92.
3. Hernandez-Gea V, Friedman SL. Patogenese av leverfibrose. Annu Rev Pathol. 2011;6:425–56.
4. Sohrabpour AA, Mohamadnejad M, Malekzadeh R. Gjennomgangsartikkel: reversibiliteten til cirrhosis. Aliment Pharmacol Ther. 2012;36(9):824–32.
5. Raven PH, Zhang LB, Ventenat O. Kinesisk vitenskapsakademi. 23. utg. Kina: Redaksjonskomité for Flora of China; 2013. s. 1–16.
6. Den kinesiske farmakopékommisjonen til Folkerepublikken Kinas sanitærdepartementet. Kinesisk farmakopé, del 1. Kina: Chemical Industry Publishing House; 2010. s. 126.
7. Yan GH, Tian JH, Long BW, Li N. Forskning fremgang avfenyletanoidglykosiderfraCistanchetubulosa. Central South Pharm. 2012;10:692–5.
8. Li J, Huang D, He L. Effekt av Rou Cong Rong (Herba Cistanches Deserticolae) på reproduksjonstoksisitet hos mus indusert av glykosid av Leigongteng (Radix et Rhizoma Tripterygii). J Tradit Chin Med. 2014;34(3):324–32.
9. Xing Y, Liao J, Tang Y, Zhang P, Tan C, Ni H, et al. ACE, og blodplateaggregasjonshemmere fra Tamarix hohenackeri Bunge (vertsplante tilHerbaCistancher) vokser i Xinjiang. Pharmacogn Mag. 2014;10(38):111–7.
10. Jia Y, Guan Q, Jiang Y, Salh B, Guo Y, Tu P, et al. Forbedring av dekstransulfat-natrium-indusert kolitt hos mus med echinacoside-anriket ekstrakt avCistanchetubulosa. Phytother Res. 2014;28(1):110–9.
11. Wong HS, Ko KM. Herba Cistanches stimulerer cellulær glutationredoks-syklus av reaktive oksygenarter generert fra mitokondriell respirasjon i H9c2-kardiomyocytter. Pharm Biol. 2013;51(1):64–73.
12. Zhang SJ, Liu L, Yu JY. ARP: En RP-HPLC-metode for samtidig bestemmelse av echinacosid og acteosid i Herbie Cistanches. Chin Pharm J 2004; 39(10): 740-741.
13. Zhu QG, Fang BW, Zhu QN, Wu HS, Fu QL. Studiet av immunitetsleverfibrose-dyremodellen indusert av bovint serumalbumin. Chin J Pathol. 1993;22:121–2.
14. Qin DM, Wen ZP, Nie YR, Yao GM. Effekt av Cichorium glandulosum-ekstrakter på CCl4-indusert hepatisk fibrose. Iran Røde Halvmåne Med J. 2013;15, e10908.
15. Niu HM, Zeng DQ, Long CL, Peng YH, Wang YH, Luo JF, et al. Clerodane diterpenoider og prenylerte flavonoider fra Dodonaea viscosa. J Asian Nat Prod Res. 2010;12(1):7–14.
16. Li WW, Song XW, Wang HW, Shen BS, Wang QC. Korrelasjon av NF-KB og patologisk stadie av leverfibrose hos pasienter med kronisk hepatitt B. Chin J Immunol. 2013;29(3):251–4.
17. Zhang GL, Shi XF, Ran CQ, Xu M, Zhu ZJ. Effekter av totale saponiner av Panax notoginseng mot leverfibrose hos rotter. Acta Academiae Medicinae Militaris tertiær. 2007;29:2212–4.
18. Rossi O, Maggiore L, Necci F, Koberling O, MacLennan CA, et al. Sammenligning av kolorimetriske analyser med kvantitativ aminosyreanalyse for proteinkvantifisering av generaliserte moduler for membranantigener (GMMA). Mol Biotechnol. 2015;57(1):84–93.
19. Dang SS, Li YP. Fremskritt i å forstå rollen til transformerende vekstfaktor- 1 i patogenesen av leverfibrose. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi. 2010;18:1631–6.
20. Zhao J, Liu T, Ma L, Yan M, Zhao Y, Gu Z, et al. Beskyttende effekt av akteosid på immunologisk leverskade indusert av Bacillus Calmette-Guerin pluss lipopolysakkarid. Planta Med. 2009;75(14):1463–9.
21. Yang FR, Fang BW, Lou JS. Effekter av Fufang Biejia Ruangan-piller på hepatisk fibrose in vivo og in vitro. World J Gastroenterol. 2013;19(32):5326–33.

22. Liu P, Fang BW, Liu C. Rollen til å transformere vekstfaktor 1 og dens reseptor i immunologisk indusert leverfibrogenese hos rotter og effekten av cordyceps polysakkarid på dem. Chin J Hepatol. 1998;6:232-3.

23. Xu GG, Luo CY, Wu SM, Wang CL. Forholdet mellom iscenesettelsen av hepatiskfibrose og nivåene av serumbiokjemi. HBPD INT. 2002;1:246–8.Du et al. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences (2015) 23:52 Side 12 av 13

24. Liu J, Wang JY, Lu Y. Serumfibrosemarkører ved diagnostisering av leverfibrose. HakeJ Intern Med. 2006;145:475–7.

25. Li CZ, Wan MB, Zeng MD, Mao YM, Fan ZP, Cao AP, et al. En foreløpig studie av kombinasjonen av ikke-invasive parametere i diagnosen leverfibrose. Chin J Hepatol. 2001;9:261–3.

26. Chen YL, Li ZY. Forholdet mellom TGF- 1, PDGF-BB, CTGF og kronisk hepatitt B med fibrose. Chin J Diffic Compl Cas. 2010;9:19–20.

27. Sferra R, Vetuschi A, Catitti V, Ammanniti S, Pompili S, Melideo D, et al. Boswellia serrata og Salvia miltiorrhiza-ekstrakter reduserer DMN-indusert leverfibrose hos mus ved TGF-beta1-nedregulering. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2012;16(11):1484–98.
28. Liu L, Li XM, Chen L, Feng Q, Xu LL, Hu YY, et al. Effekten av Gypenosider på TGF- 1/Smad-veien i leverfibrose indusert av karbontetraklorid hos rotter. Intern J Integr Med. 2013;1:1–6.
29. Zhang BJ, Xu D, Guo Y, Ping J, Chen LB, Wang H. Beskyttelse med en antioksidantmekanisme av berberin mot rotteleverfibrose indusert av flere hepatotoksiske faktorer. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2008;35(3):303–9.
30. Tornatore L, Thotakura AK, Bennett J, Moretti M, Franzoso G. Den kjernefysiske faktor kappa B-signalveien: integrering av metabolisme med betennelse. Trender Cell Biol. 2012;22(11):557–66.
31. Luedde T, Schwabe RF. NF-KB i leverbindende skade, fibrose og hepatocellulært karsinom. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2011;8(2):108–18.
32. Petrasek J, Csak T, Szabo G. Toll-lignende reseptorer ved leversykdom. Adv Clin Chem. 2013;59:155–201.
33. Wang Y, Cheng M, Zhang B, Nie F, Jiang H. Kosttilskudd av blåbærjuice øker hepatisk uttrykk av metallothionein og demper leverfibrose hos rotter. PLoS One. 2013;8, e58659.