Renobeskyttende effekt av Oridonin i en musemodell av akutt nyreskade via undertrykkelse av makrofag-involvert betennelse
Mar 17, 2022
INTRODUKSJON
Et viktig trekk ved akuttnyreskade(AKI) er den plutselige nedgangen inyrefunksjon. Det er et globalt helseproblem som har vakt stor bekymring i samfunnet. I følge statistikk lider rundt 13,3 millioner mennesker over hele verden av AKI hvert år, 85 prosent av dem er i utviklingsland, noe som vil drepe 1,7 millioner mennesker.1,2) Spesielt er AKI ikke en enkelt sykdom, og det kan være en komplikasjon av flere sykdommer. Normalt kan det være forårsaket av sepsis, sjokk, iskemi-reperfusjon og forgiftning. Etter langvarig utvikling har denne sykdommen en tendens til å utvikle seg til kronisknyresykdom,kongestiv hjertesvikt og sluttstadiumnyresykdom.3–5) Oppsummert kan AKI forårsake en enorm økonomisk belastning, og det vil praktisk talt øke den psykologiske og fysiske belastningen på pasientene.Nyreiskemi-reperfusjon anses for tiden å være den vanligste årsaken til AKI, og den oppstår vanligvis under traumer, kirurgisk reseksjon ellernyretransplantasjon. Makrofager er en av de viktigste inflammatoriske cellene som spiller en viktig rolle i AKI-progresjon. Mincle uttrykkes hovedsakelig på myeloide celler og nøytrofiler, spesielt på makrofager. Den har et høyt beholdt C-type lektindomene som er en viktig aktør innen antifungal immunitet. Mincle ble opprinnelig identitetsverifisert av Matsumoto som lipopolysakkarid (LPS) - et indusert protein som kan aktivere kjernefaktor-kappaB (NF-κB) via kort9-Bcl10-MALT1-signalering, noe som resulterer i dannelse av en effektiv T-hjelper 1 (Th1) og Th17 subtyper som fremmer uttrykket av inflammatoriske faktorer for å koble sammen medfødte og adaptive immunresponser.6) Nyere forskning har funnet at Mincle også kan gjenkjenne alle slags unormale stoffer i cellene, føle skade- relaterte signaler, og deretter svare på relevante svar. For eksempel kan Mincle binde seg til -GlcCer som er en allestedsnærværende intracellulær metabolitt fra skadede celler, aktiverer og induserer cytokiner og utløser antigenspesifikke T-celleresponser.7) Mincle er en reseptor som registrerer heterogen celledød, kan gjenkjenne den endogene liganden SAP130 frigitt av døde celler, induserer produksjonen av inflammatoriske cytokiner og driver nøytrofil infiltrasjon inn i skadet vev. M1 makrofager.6) Derfor kan målrettet mingleterapi være nøkkelen til behandling av AKI-sykdom.
CISTANCHE VIL FORBEDRE NYRE-/NYREFUNKSJONEN
Oridonin er en naturlig tetrasyklisk dipeptidforbindelse med kaurienskjelett ekstrahert fra London, som har et bredt spekter av biologiske funksjoner, inkludert antimikrobielle, anti-tumor, anti-inflammatoriske og anti-fifibrose. Mange typer forskning har rapportert antitumorpotensialet og mekanismen til disse naturlige diterpenoidene i en serie kreftcellelinjer.10,11) og det er bekreftet at Oridonin som anti-kreftmedisin for tiden gjennomgår kliniske fase I-studier i Kina. Men rollen til Oridonin inyresykdomrapporteres sjelden. Flere typer forskning har bekreftet at Oridonin kan redusere proteinuri ognyreskadei spontane lupus erythematosus musemodeller, og in vitro studier har funnet at Oridonin kan redusere sekresjonen av inflammatoriske cytokiner og den inflammatoriske responsen indusert av LPS etter behandling med Oridonin.12,13) I denne studien fokuserte vi på å avsløre potensialet til Oridonin i behandlingen av AKI, og om dens underliggende mekanisme er relatert til hemming av Mincle i makrofager. Denne studien kan gi sterke bevis for screening av AKI-terapi.
Nøkkelord:Oridonin; akutt nyreskade (AKI); makrofager; mincle; betennelse; nyrefunksjon
MATERIALER OG METODER DyrTrettiseks av C57BL/6 hannmus (i alderen 8–10 uker) ble hentet fra Beijing Vital River Laboratory Animal Technologies Co., Ltd. (Beijing, Kina), og holdt i en temperaturkontrollert og fuktighetskontrollert -kontrollert rom i Animal Experiment Center ved Southwest Medical University (henholdsvis 21,0 ± 2,0 grader og 65 ± 5 prosent). Alle mus ble stokastisk delt inn i tre grupper: Sham-gruppe, iskemi-reperfusjonsskade (IRI) modellgruppe (IRI-gruppe) og Oridonin-behandlet IRI-gruppe (OR-gruppe) (15 mg/kg). Før operasjonen ble mus bedøvet med en intraperitoneal injeksjon av 45 mg/kg natriumpentobarbital. AKI-musemodellen ble etablert ved å klemme tosidignyrearterier i 35 min. Mus i sham-gruppen ble kun eksponert bukhulen i 35 minutter, mens musene i OR-gruppen ble kontinuerlig administrert intragastrisk av Oridonin i 3 dager etter operasjonen, og de andre gruppene fikk samme volum saltvann som en kontroll. Musene ble avlivet med en intraperitoneal injeksjon av saltvannsfortynnet pentobarbitalnatrium (200 mg/kg) på den tredje dagen. Alle dyreforsøksprosedyrer ble utført i henhold til retningslinjene for laboratoriedyromsorg (tillatelsesnummer 201812-55).
CISTANCHE VIL FORBEDRE NYRE-/NYREFEILT
Kjemikalier og reagenserOridonin (BP1041, renhet større enn eller lik 95 prosent) ble oppnådd fra Biopurify phytochemicals Ltd. (Chengdu, Kina). NF-KB, p-AKT og induserbar nitrogenoksidsyntase (iNOS) antistoffer ble kjøpt fra Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA). Interleukin (IL)-1, tumornekrosefaktor (TNF)-, Mincle, p-NF-KB og AKT antistoffer ble kjøpt fra Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Totalt RNA-ekstraksjonssett ble oppnådd fra Tiangen Biochemical Technology (Beijing) Co., Ltd. (Beijing, Kina). Omvendt transkripsjonssett, sanntids PCR-sett levert av Shanghai Promega Bioproducts Co., Ltd. (Shanghai, Kina). LPS (Escherichia coli 055:B5) ble levert av Sigma Chemical (St. Louis, MO, USA). DNA-transfeksjonsreagens ble oppnådd fra Zeta Life (Zeta Life, USA).
Cellekultur og transfeksjonerRAW264.7-celler ble kjøpt fra Chinese Academy of Sciences Cell Bank (Shanghai, Kina), dyrket ved 37 grader i et miljø med 5 prosent CO2 i Dulbeccos modifiserte Eagle's medium (DMEM) høyglukosemedium. Fordøyelsen ble utført når cellene vokste til 80 prosent sammenløp. Hele eksperimentet brukte de logaritmiske vekstfasecellene. Overekspresjon av Mincle i RAW264.7-celler ble utført ved transfeksjon av Mincle-overekspresjonsplasmid (Genechem, Shanghai, Kina) til celler med Zeta Life Advanced DNA-transfeksjonsreagens. Morfologien og vekststatusen til cellene ble observert ved bruk av et lysmikroskop.
Celletellesett-8 (CCK-8) AnalyseTre tusen celler ble sådd i en 96-brønnplate med 6 replikatbrønner per gruppe. Deretter ble cellene sultet i et serumfritt medium i 24 timer, etterfulgt av behandling med et medikamentholdig medium i 24 timer. Etter å ha fjernet mediet, tilsett 100 µL 10 prosent CCK-8-reagens til hver brønn og inkuber i 3 timer. Celleoverlevelsesraten ble beregnet i henhold til absorbansverdien til hver brønn.
Vurdering av nyrefunksjonNivået av serumkreatinin og urea-nitrogen ble målt ved å bruke det passende settet (Jiancheng, Nanjing, Kina). Verdier er uttrykt som mmol/L serum.
Hematoxylin-Eosin (H&E) og periodisk syre-schiff (PAS) fargingDen innsamledenyrevev ble plassert i 4 prosent paraformaldehyd i 24 timer, og deretter plassert i etanolløsninger med forskjellige konsentrasjoner, og plassert i xylen- og voksblokker for innstøping. Før farging ble objektglassene satt inn i en 60 graders ovn i 2 timer, og deretter avvokset og rehydrert. Noen prøver ble farget med eosin- og hematoksylinpigmenter, andre prøver tilsetter perjodsyrealkohol og Schifffdye-løsning separat. Til slutt, observert og fotografert i et mikroskopkamera.
Enzym-linked immunosorbent assay (ELISA)Nivået av IL-1, IL-6 og TNF- i cellekultursupernatanten ble målt ved å bruke ELISA-sett (IL-1: Neobioscience, EMC001b; IL-6: Neobioscience , EMC004; TNF-: Neobioscience, 500850). Utfør prøvetesting i henhold til metoden gitt av reagensleverandøren, og beregn konsentrasjonsverdien for hver gruppe i henhold til standardkurven.
CISTANCHE VIL FORBEDRE NYRE-/NYRESMERTER
Western BlotAlle dyre- og celleprøver ble lysert i radioimmunutfellingsanalyse (RIPA) buffer på is og sentrifugert for å oppnå den tilsvarende proteinprøven. Coomassie brilliant blue assay ble brukt for å bestemme proteinkonsentrasjonen til hver prøve, og gelen ble kjørt med en viss mengde proteinprøver. Hver gruppe proteiner ble separert ved natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE), og deretter overført til polyvinylidendifluorid (PVDF)-membranen. Etter inkubering av membranen med primære antistoffer ved 4 grader over natten, ble de sekundære antistoffene inkubert ved romtemperatur i 1 time. Fargen på båndet er utviklet med en fargeutviklende løsning, og den grå intensiteten til båndet ble beregnet av Image J-programvaren.
Sanntids PCRTotalt RNA ble oppnådd i henhold til bruksanvisningen til Tiangen-settet, og det ble oppløst i enzymfritt vann. I henhold til de relevante instruksjonene bruker vi et revers transkripsjonssett for å syntetisere cDNA. RT-PCR-reaksjonsbetingelser ble utført som følger: 37 grader i 15 minutter, 95 grader i 5 minutter, og deretter 40 sykluser med
95 grader i 10 min, 95 grader i 15 s og 60 grader i 1 min. Det relative mRNA-ekspresjonsnivået til hvert gen ble normalisert i forhold til glyceraldehyd-3-fosfatdehydrogenase (GAPDH). Sekvensene av primere er vist i tabell 1.ImmunfluorescensfargingRAW264.7-celler ble fiksert i 4 prosent paraformaldehyd, deretter blokkert med bovint serumalbumin ved romtemperatur (rt) i 1 time, og inkubert med de tilsvarende primære antistoffene ved 4 grader over natten. Etter vask med fosfatbufret saltvann (PBS) i 3 ganger, ble cellene inkubert med sekundære antistoffer ved rt i 1 time. Kjernen ble farget med 4′-6-diamidino- 2-fenylindol (DAPI). Immunfluorescensbildene ble tatt med Nikon Eclipse-mikroskop (Nikon, Tokyo, Japan).Statistisk analyseStatistiske analyseresultater presenteres som gjennomsnitt ± standardavvik (SD), Sammenligninger mellom grupper ble utført ved bruk av enveis ANOVA, p< 0.05="" was="" considered="" significant.="" graphpad="" prism="" 7="" software="" was="" used="" to="" calculate="" data="" for="" statistical="">
RESULTATER
Oridonin-hemmet iskemi-reperfusjon-indusert nyreskade og betennelseFor å evaluere den beskyttende effekten av oridonin på AKInyreindusert av iskemi-reperfusjon, undersøkte vi blodkreatinin, urea-nitrogen ognyretubulær skadeindeks for mus i hver gruppe, så vel som uttrykket av inflammatoriske cytokiner i nyrevev og vurdertenyrepatologi ved H&E- og PAS-farging. Resultatet er vist i figuren at nivåene av serumkreatinin (fig. 1a) og ureanitrogen (fig. 1b) i AKI-modellgruppen ble redusert ved kontinuerlig injeksjon av Oridonin i tre dager. Tilsvarende viste den tubulære skadeindeksen at Oridonin sterkt reduserer tubulær nekrose inyreav AKI-mus (fig. 1c). Sanntids PCR-resultater viste at Oridonin signifikant nedregulerte mRNA-nivåene av IL-1, MCP-1 og F4/80 inyreav AKI-modellgruppen (fig. 1d–f). Dessuten viste resultatene av patologisk farging og immunfluorescens at Oridonin signifikant reduserte tubulær nekrose (fig. 1g) og proteinnivået av inflammatoriske cytokiner (fig. 1h) i AKI-mus, noe som effektivt forbedret nyreskade, noe som indikerer at Oridonin hadde betydelig anti-skade og antiinflammatoriske effekter på AKI-modellen.
Oridonin-hemmet Mincle/AKT/NF-KB-signalvei i nyre til AKI-musFor å belyse den terapeutiske mekanismen til Oridonin pånyrebetennelse, undersøkte vi videre aktiveringen av Mincle/AKT/NF-KB-signalering etter Oridonin-administrasjon. Western blot-resultater viste at Oridonin-intervensjon betydelig kan redusere ekspresjonen av betennelsesrelaterte proteiner IL-1 og iNOS i AKInyrerog redusere aktiveringen av AKT og NF-KB pathway proteiner (fig. 2a–e), noe som indikerer at Oridonin kan hemme IRI-indusert betennelse inyreav AKI. Spesielt viste sanntids PCR og Western blot-resultater at Oridonin effektivt reduserte mRNA- og proteinnivåene til Mincle inyreav AKI-modellen (fig. 2f, g). For å oppdage plasseringen av Mincle inyre, utførte vi immunfluorescens i hver gruppe (fig. 2h), viste resultatene at Mincle var lokalisert inyreinterstitium og samlokalisert med makrofagmarkør F4/80, noe som indikerer at Mincle hovedsakelig ble uttrykt inyremakrofager, og sterkt oppregulert etter AKI. Immuno-FL fluorescensresultater viste også at makrofag økte betydelig etter AKI, noe som tyder på den viktige rollen til makrofager i utviklingen av AKI. Spesielt hemmet Oridonin betydelig Mincle innyremakrofag av AKI-mus. Resultatene ovenfor indikerer at Oridonin kan forbedresnyrebetennelse og skade ved å hemme Mincle/AKT/NF-κB-signalering.
Oridonin gjenopprettet betydelig RAW264.7 makrofagmorfologiske endringer indusert av LPSFor å studere effekten av Oridonin på inflammatoriske makrofager, brukte vi LPS for å stimulere RAW264.7-celler til å konstruere eninflammatorisk cellemodell. Den kjemiske strukturen til Oridonin er vist i fig. 3a. Vi testet derfor toksisiteten til Oridonin ved forskjellige konsentrasjoner på RAW264.7-celler. CCK8-resultatene viser at når konsentrasjonen er 5 µM, har Oridonin ingen signifikant effekt på cellemorfologi (fig. 3b), som ble brukt i påfølgende in vitro-eksperimenter. Vi fant overraskende at Oridonin betydelig forbedret LPS-indusert makrofagmorfologi (fig. 3c), inkludert å redusere intracellulære vakuoler og gjøre cellene mer solide.
Oridonin undertrykte sekresjonen og uttrykket av inflammatoriske faktorer i LPS-stimulert RAW264.7Celler For å klargjøre den antiinflammatoriske effekten av oridonin på LPS-stimulerte RAW264.7-celler, brukte vi sanntids FL-fluorescerende PCR, ELISA og immunfluorescens for å måle de inflammatoriske faktorene som skilles ut av hver gruppe celler. Resultatene viste at Oridonin signifikant reduserte mRNA-nivåene av IL-1, IL-6, TNF-, iNOS og MCP-1 i LPS-stimulerte celler (fig. 4a–e). Videre nedregulerte Oridonin også signifikant sekresjonen av IL-1, IL-6 og TNF- i supernatanten i den inflammatoriske cellemodellen (fig. 4f–h) samt proteinnivåene av inflammatoriske cytokiner i LPS-stimulert makrofag (fig. 4i). Resultatene ovenfor viser at Oridonin har en åpenbar anti-inflammatorisk effekt i makrofager.
Oridonin blokkerte Mincle/AKT/NF-KB-signalveien i inflammatorisk makrofag in vitroMincle, som en reseptor for mønstergjenkjenning, er avgjørende for å fremme makrofagrelatert betennelse inyreav AKI. Ovennevnte dyreeksperimentresultater viste at Oridonin kan nedregulere uttrykket av Mincle inyreav AKI. Derfor undersøkte vi videre om Oridonin kan redusere mRNA- og proteinnivået til Mincle i den LPS-stimulerte makrofaginflammatoriske modellen. Resultatene av Western blot, immunfluorescens og sanntids-PCR viste at 5 µM Oridonin ikke bare signifikant reduserte mRNA-ekspresjonen (fig. 5c), men også nedregulerte proteinnivået til Mincle i inflammatorisk makrofag (fig. 5a, b) , d). Dessuten nedregulerte Oridonin proteinnivået til iNOS og fosforylert-AKT og NF-KB betydelig i LPS-behandlede RAW264.7-celler.
Overekspresjon av Mincle eliminerte den hemmende effekten av Oridonin på betennelse i LPS-stimulert RAW264.7-celleFor å bestemme om Mincle er hovedmålet for Oridonin for å hemme betennelse i makrofager, transfekterte vi RAW264.7-cellene med Mincle-overekspresjonsplasmid for å oppregulere uttrykket av Mincle. I henhold til resultatene av sanntids PCR og Western blot, ble det vist at mRNA- og proteinnivåene til Mincle i RAW264.7-celler ble økt etter transfeksjon (fig. 6a, b). Plasmidet ble deretter transfektert til de Oridonin-behandlede inflammatoriske cellene, og resultatene viste at ekspresjonen av Mincle også ble økt i cellene i denne gruppen (fig. 6c, d). Vektor ble transfektert i celler som den negative kontrollen. Resultatene av utvinningseksperimenter viste at overekspresjon av Mincle i Oridonin-behandlet inflammatorisk makrofag oppregulerte aktiveringen av AKT og NF-KB ved å øke fosforyleringsnivået av disse to proteinene (fig. 6d–g), noe som antydet at Oridonin hemmer betennelse i makrofager. kan gjennom nedregulere Mincle og dens nedstrøms AKT- og NF-κB-signalering. Dessuten viste sanntids PCR- og ELISA-resultatene at overekspresjon av Mincle gjenopprettet uttrykket og sekresjonen av cytokiner i Oridonin-behandlet inflammatorisk makrofag (fig. 6h–l). Resultatene ovenfor indikerte at Oridonin hemmer betennelse i makrofager ved å regulere Mincle/AKT/NF-KB-signalering.
DISKUSJON
AKI er et klinisk syndrom forårsaket av en rekke etiologier og patologiske mekanismer.Nyreiskemi-reperfusjonsskade er en vanlig patofysiologisk prosess i klinikker, og det er en av hovedårsakene til akuttnyreskade.14,15) Inflammatorisk respons er et komplekst nettverk involvert inyreparenkymale celler og residente immunceller, hvor makrofager spiller en viktig rolle inyreskade.16) På grunn av endringer i immunmikromiljøet vil makrofager polariseres i flere fenotyper, hovedsakelig delt inn i M1- og M2-typer. iNOS-uttrykk er et tegn på M1-typen. In vivo- og in vitro-studier fant begge at iNOS-ekspresjonen er økt i modellgruppen, og uttrykket avtar etter behandling. Makrofagindusert C-type lektin (Mincle) er en C-type lektinreseptor uttrykt på aktiverte makrofager og er genetisk lokalisert på mus 6F2 og humant kromosom 12P31. Noen studier har rapportert at Mincle deltar i initieringen av medfødt immunrespons ved å gjenkjenne patogenassosierte molekylære mønstergjenkjenningsreseptorer.17) Noen eksperimentelle studier har funnet at etter cerebral iskemisk skade hos mus, økt infiltrasjon av hvite blodceller i det skadde området kan føre til tap av nevroner i det vaskulære perfusjonsområdet, og knockout av Mincle kan betydelig
bremse den iskemiske skaden forårsaket av okklusjon av midtre cerebral arterie. Den siste forskningen avslører at Mincle kan fornemme døden tilnyretubulære epitelceller som kombineres med -glukosylceramid, akselererer den inflammatoriske responsen og forsinker elimineringen av betennelse.18) Studier vedr.nyresykdomer det samme som våre forskningsresultater som har vist at Mincle er sterkt uttrykt i både iskemi-reperfusjon og cisplatin-induserte AKI-modeller, og det er spesifikt uttrykt på M1--type makrofager. Oppsummert kan den målrettede Mincle-studien være en ny behandling for relaterte sykdommer forårsaket av inflammatoriske makrofager. Vår studie fant at uttrykket av Mincle er økt i AKI-musemodellen
konstruert ved iskemi-reperfusjon. I følge resultatene av immunfluorescens-samlokalisering, er Mincle hovedsakelig uttrykt pånyremakrofager av modellgruppen mus og er i samsvar med resultatene av Lans forskning. Mincle induseres spesifikt på M1-makrofager, der Mincle-sky-signalering fremmer og opprettholder inflammatoriske fenotyper av M1-makrofager ved akuttenyrebetennelse.6) Mincle tilhører C-type lektinreseptor (CLR) som kan gjenkjenne sopp og andre former for mikroorganismer eller aseptiske farer. De induserer betennelse gjennom linkerproteinet CARD9, etterfulgt av sammenstillingen av CARD9-Bcl10-komplekset og typisk NF-KB-regulering. Det er et regulatorisk forhold
mellom NF-κB og AKT protein.10,19) I inflammasjonsstudien av LPS-stimulerte makrofager er det verifisert at AKT og NF-KB uttrykk er økt. Deretter transfekterte vi høyekspresjonsplasmidet til Mincle inn i cellen som ble behandlet med medikamentintervensjon, og resultatene fant at signalveien til AKT og NF-KB-signalveien ble aktivert igjen. Det kan konkluderes med at Mincle kan påvirke proteinekspresjonen til denne veien. Det er imidlertid ikke klart hvordan Mincle oppregulerer disse to signalveiene, og det er ikke klart om proteinet aktiveres gjennom himmelbanen som den rapporterte forskningen sier.
Oridonin er en naturlig diterpenoid-forbindelse ekstrahert fra Orion, og den har et bredt spekter av farmakologiske effekter, inkludert anti-tumor, anti-inflammatorisk og nevrobeskyttelse. I forskningen på den nevrobeskyttende funksjonen til Oridonin fant Wens team at Oridonin kan blokkere insulinresistens ved å hemme autofagi for å forbedre kognitiv dysfunksjon.20) Lins team fant at Oridonin kan beskytte mot Parkinsons sykdom og anfall ved å redusere nevrooksidativt stress og andre nevrobeskyttende effekter. 21) Den mest grundig studerte er antitumoreffekten av Oridonin. Et forskerteam laget stoffet til inhalerbare partikler for å behandle ikke-småcellet lungekreftmodellmus, som viste sterk angiogenesehemmende effekt og pro-apoptotisk effekt og spilte en betydelig anti-krefteffekt.22) Oridonin kan også ha en anti-inflammatorisk effekt. effekt. Det kan hemme Notch-banen, indusere polarisering av makrofager for å bytte til en anti-inflammatorisk fenotype og undertrykke utbruddet av autoimmun neuritt.23)
Det kan også lindre utbruddet av artrose ved å hemme utskillelsen av betennelsesfaktorer og produksjonen av reduktiv oksidase.24) Noen studier har vist at Oridonin også har betydelige effekter på div.nyresykdommer. Studier har rapportert at Oridonin kan samarbeide med 5-fluorouracil (5-FU) for å utøve antitumoreffekter og øke 5-FUs cytotoksisitet inyrekreftceller.25) I følge in vivo-eksperimentresultatene fra denne studien, kan Oridonin redusere serumkreatinin-urea-nitrogenet betydelig hos mus med iskemi-reperfusjonsskade, og redusere dets patologiske skade betydelig. Resultatene viste også at Oridonin kan hemme den inflammatoriske aktiviteten relatert til å undertrykke AKT- og NF-κB-veien, som ligner på forskningsresultatene fra Oridonin-intervensjon ved diabetisk nefropati og samtidig kan redusere infiltrasjonen av inflammatoriske cytokiner og aktiviteten til toll- som reseptor 4 (TLR4)/NF-KB signalvei.26) Resultatene ovenfor antydet at Oridonin kan hemme Mincle og undertrykke AKT- og NF-KB-baneaktivitet. I in vitro-eksperimenter ble disse veiindikatorene økt i den LPS-stimulerte makrofagbetennelsesmodellen og også redusert med Oridonin. Resultatene av gjenopprettingseksperimenter viste at overekspresjon av Mincle i Oridonin-behandlet inflammatorisk makrofag økte aktivitetene til AKT- og NF-KB-signalering, noe som resulterte i oppregulering av uttrykk og sekresjon av inflammatoriske cytokiner i Oridonin-behandlede celler, noe som antydet at Oridonin hemmer betennelse i makrofag kan gjennom å undertrykke Mincle og AKT/NF-κB signalering
CISTANCHE VIL FORBEDRE NYRE-/NYREINFEKSJON
Det er mange måter å konstruere AKI-dyremodeller på, inkludert bilateral iskemi-reperfusjon, unilateral IRI med kontralateral nefrektomi, cisplatin, difteritoksin, LPS, aristolochic syre eller folsyre. Imidlertid kan injeksjonen av cisplatin ikke fullstendig simulere de kliniske pasientene. Modellen indusert ved injeksjon av difteritoksin har en tendens til å forlenge progresjonen avnyresykdom, som hovedsakelig kan føre tilnyrefifibrose og glomerulær sklerose, samt mild tubulær skade. Aristolochic acid nefropati er tubulointerstitiell nefritis, og folsyre er også en nefrotoksisitetsinduserer avnyrefifibrose, men den kliniske forekomsten av disse to er lav.27) IRI-indusert akuttnyreskadeer et globalt folkehelseproblem forbundet med høy sykelighet, dødelighet og helsekostnader. Derfor bruker vi iskemi-reperfusjon for å konstruere en akuttnyremodell av skademus. Flere studier har rapportert forskjellige tidspunkter for fastklemmingnyrearterie. Et forskerteam etablerte en IRI-dyremodell for å klemme bilateraltnyrepedikler av Sprague-Dawley (SD) rotter i 1 t.28) Et annet forskerteam klemte bilateraltnyrearterier i 45 minutter for å forberede en reperfusjonsmodell i Wistar-rotter. I tillegg ble det utført en studie med C57BL/6J-mus for å klemme de bilaterale nyrepediklene i 35 minutter for å bygge en modell.29) Basert på de tidligere eksperimentelle resultatene, er det funnet at reperfusjonen ble gjenopptatt etter den bilateralenyrearterien ble klemt i 20 minutter, og serumkreatininet returnerte til det normale grunnlinjenivået tre dager senere. Derfor valgte vi å klemme de bilaterale nyrearteriene i 35 minutter før reperfusjon, og endringene i serumkreatinin var stabile etter operasjon i tre dager. Under operasjonen kan vi observere at fargen pånyreskifter fra rosa til lys rød, som er forårsaket avnyrearterie vaskulær iskemi. Etter å ha fjernet klippet 35 minutter senere, kan vi observere at fargen pånyregår tilbake til normalen, ble IRI-AKI-modellen konstruert. Oppsummert viste dette funnet at Oridonin har en betydelig anti-inflammatorisk effekt, og kan beskytte nyrer i AKI mot skade, som hovedsakelig kan innebære å hemme Mincle og aktiviteten til dens nedstrøms signalering av NF-κB og AKT. Denne studien gir en ny potensiell mekanisme for Oridonin-behandling for AKI, som kan gi alternativer for klinisk behandling av AKI.
