Sarmentosamid, en antialdringsforbindelse fra en marin-avledet Streptomyces Sp. APmarine042

Nøkkelord:cistanche; Streptomycessp. APmarine042;anti-aldring; MMP-1; UVB; TNF-

Klikk her for å få mer informasjon om Cistanche For Aging Skin-Care

1. Introduksjon

Hudaldringinduseres av to hovedprosesser, som er et resultat av indre og ytre faktorer.Ekstrinsisk aldringer først og fremst forårsaket av eksponering for miljøfaktorer som luftforurensning [1] og ultrafiolett (UV) stråling [2]. UV-lys er sammensatt av UVA (315–400 nm), UVB (280–315 nm),og UVC (200–280 nm), hvorav UVB-stråler er kjent for å penetrere epidermis og bidra til hudenfotoaldring [3]. UVB-indusert hudfotoaldring forårsaker DNA-skade [4] og reaktive oksygenarter(ROS) generasjon [5] og forstyrrer den ekstracellulære matrisen [6]. Iboende aldring er forårsaket av det naturligekonsekvenser av fysiologiske endringer, som genetiske faktorer, hormoner og metabolske prosesser [7]. Dessuten inflammatoriske cytokiner, slik som tumornekrosefaktor-alfa (TNF ), interleukin 1 alfa/beta(IL-1 / ), og interleukin 6 (IL-6), øker kronisk med alderen. Spesielt tumornekrosefaktor- (TNF ) er kjent for å akselerere nedbrytningen av ekstracellulær matrise (ECM) komponenter viaoppregulerende uttrykk og aktivitet av matrisemetalloproteinaser (MMP) i eldre hud [8]. MMP-1 erhovedsakelig frigitt av fibroblaster i dermis, og utskilt MMP-1 er ansvarlig for nedbrytningenav dermalt kollagen, som støtter hudens struktur og funksjon. Derfor modulering av MMP-1uttrykk i dermale fibroblaster kan være et lovende mål for utvikling av anti-aldringkosmetiske ingredienser.

Tidligere studier har rapportert at UVB-stråling induserer ROS (produksjon av reaktive oksygenarter og fører til aktivering av intracellulære signalveier og transkripsjonsfaktorer (f.eks. AP-1, NF-kB) [9. Disse transkripsjonsfaktorene reguleres av mitogen -aktiverte proteinkinasesMAPKs), som induserer MMP-1 og proinflammatoriske cytokiner. Det er tre distinkte MAPK-familier involvert i UVB/ROS-stimuli: ekstracellulære signalregulerte kinaser (ERK), c-Jun N-terminal

kinase (NK), og p38. Vår studie identifiserte en Streptomyces sp. APmarine042-ekstrakt som viste en kraftig hemmende effekt på MMP-1-ekspresjon. Etterpå ble en MMP-1-hemmende forbindelse identifisert i denne Streptomyces sp. APmarine042-ekstrakt og dets kjemiske struktur ble identifisert via NMR-analyseassistanse (1), en forbindelse med en heksadienamiddel 101. Vi undersøker deretter videre om denne forbindelsen hemmet MMP-1-ekspresjon i UVB-bestrålt og TNFa-indusert human dermal fibroblaster så vel som dens rolle i reguleringen av underliggende signalveier. I tillegg undersøkte vi the antioksidantaktivitet av cistanche(1) via en 2,2-difenyl-1-picrylhydrazyl(DPPHI)radikal rensende analyse.

2. Resultater og diskusjon

2.1. cistanche (1) Isolasjon og identifikasjon

cistanche (1) ble isolert gjennom en kombinasjon av HPLC-UV og bioaktivitetsveiledet isolasjon. Basert på sammenligningen mellom NMR-data (tilleggsmaterialer) for forbindelsen identifisert i denne studien (heretter referert til som forbindelse 1") med de av tidligere rapporterte forbindelser, ble forbindelse 1 identifisert som cistanche. Den optiske rotasjonsverdien til forbindelse 1 var også i samsvar med tidligere rapporter, som ytterligere støttet den sammensatte 1-hjelpen (figur 1).

2.2. Cytotoksiske effekter av cistanche (1) på humane dermale fibroblaster

For å undersøke de cytotoksiske effektene av cistanche ble normale humane dermale fibroblaster (NHDFor humane forhudsfibroblastceller (Hs68)) behandlet med cistanche i forskjellige konsentrasjoner (6, 12, 25, 50, 100 ug/ml) i 24 timer, hvoretter cellen tellesett-8 (CCK-8)-analyse ble utført for å kvantifisere cellelevedyktighet. Vannløselig tetrazoliumsalt (WST-8) i CCK-8-løsning ble redusert av dehydrogenaseaktiviteter i celler for å gi et gulfarget formazan-fargestoff, hvis mengde var proporsjonal med antall levende celler. Som vist i figur 2, forårsaket ikke cistanche observerbare cytotoksiske effekter i verken NHDF- eller Hs68-celler ved konsentrasjoner fra {{15} } ug/ml

Figur 2. Cellelevedyktighetstest av cistanche på fibroblaster. (ab) Cellelevedyktigheten tilcistanche-behandletnormale humane dermale fibroblaster (NHDF) (a) og humane forhudsfibroblastceller (Hs68) (b) celler etter 24 timer ble målt ved CCK (celletellesett)-analyse. * p < 0.05, ** p < 0,01 vs. ubehandlet gruppe).

2.3. cistanche (1) Hemmer MMP-1-ekspresjon og sekresjon i UVB-bestrålte NHDF-celler

Deretter ble NHDF-er i fravær og tilstedeværelse av UVB-stråling (25 mJ/cm2) behandlet med cistanche (2,5 ug/mL) i korte perioder, og relative MMP-1 mRNA-ekspresjonsnivåer ble kvantifisert via kvantitativ sanntid PCR-analyse. cistanche ble funnet å nedregulere MMP-1 mRNA-nivåer med opptil 16 prosent og 17 prosent i fravær (Figur 3a) og tilstedeværelse (Figur 3bof UVB, henholdsvis. UVB-stråling, en stor ytre risikofaktor for aldring av huden, kan penetrere epidermis og nå øvre dermis, noe som resulterer i generering av reaktive oksygenarter (ROS)MMP-produksjon og kollagensyntese nedregulering. Derfor forsøkte vår studie å undersøke om cistanche-hemmet MMP{12}}-sekresjon i UVB-bestrålt NHDF-celler. Sekresjonsnivåene av MMP-1 i cellekulturmedier ble målt via ELISA, og de relative mengdene av MMP-1utskillelse ble normalisert til otal protein i helcellelysater, som ble målt via en bicinchoninisk syre (BCA) protein kvantifiseringsanalyse. UVB-bestråling (25 mJ/cm2) økte MMP-1utskillelsen bemerkelsesverdig (8.3- ganger) sammenlignet med den ikke-UVB-bestrålte gruppen (Figur 3c) og cistanche -hemmet MMP-1-sekresjon i UVB-bestrålte NHDF-celler på en doseavhengig måte.

Figur 3. Effekt av cistanche på metalloproteinase-1 (MMP-1) uttrykk i UVB-bestrålte NHDFer. (a,b) De relative mRNA-nivåene av MMP-1 i NHDF-celler bestrålte UVB (25 mJ/cm2) eller behandlet med cistanche (2,5 ug/mL) i 16 timer. RPLPO-genet ble brukt som en intern kontroll. * p < {{10}}.05.*** p < 0.001 (C) Etter UVB-bestråling (25 mJ/cm2) , ble cistanche i serumfrie medier behandlet i 48 timer, og deretter ble de relative sekresjonsnivåene av MMP-1 i cellekulturmedier analysert ved ELISA### p < 0,001 (vs. ikke-UVB kontrollgruppe); ** p < 0,01; *** p < 0,001 (UVB-bestrålt kontrollgruppe).

Spør om mer:

E-post:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: pluss 86 15292862950