Studie om nevroendokrin-immun funksjon av Cistanche Deserticola og dens risvinsdampende produkter i glukokortikoid-indusert rottemodell-Ⅱ

3.2.4. Immunhistokjemi

Nevronal apoptose kontrolleres av mange apoptotiske og antiapoptotiske gener, hovedsakelig det apoptosefremmende genet Bax og de antiapoptotiske genene til Bcl-2-genfamilien. Bcl-2 er lokalisert i reaktive oksygenproduserende organeller som mitokondriene, endoplasmatisk retikulum og kjernemembraner. Bcl-2 har liten innvirkning på frie oksygenradikaler, men kanforhindre oksidativ skade i cellene. Bax transporterer fra cytoplasma til mitokondriell membran, endrer mitokondriell membranstruktur og fremmer frigjøring av cytokrom c og induksjon av apoptose.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FOR FORBEDRING AV SEKSUELL FUNKSJON PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Det var et uttrykk i binyrens cytoplasma av Bax- og Bcl-2-protein. Fargingen viste alle gule partikler. Sammenlignet med BC-gruppen, økte den gjennomsnittlige optiske tettheten til Bax-proteinet i MC-gruppen betydelig (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Figur 5(b) viser at sammenlignet med den for BC-gruppen, sank den gjennomsnittlige optiske tettheten av Bcl-2-protein i MC-gruppen signifikant (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Caspase-3-proteinet er hovedsakelig lokalisert i cytoplasmaet i sin opprinnelige form i normalt vev og har lavt uttrykk. Positive signaler er blekgule eller brungule. Sammenlignet med BC-gruppen, økte uttrykket av caspase-3 i MC-gruppen betydelig (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

I normalt vev ble uttrykket av Fas-genet redusert, og det positive signalet for in situ hybridisering var brungult. Som vist i figur 5(d), sammenlignet med BC-gruppen, økte den gjennomsnittlige optiske tettheten til Fas-protein i MC-gruppen (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

FasL-proteinet er hovedsakelig lokalisert i cellemembranen eller cytoplasmaet, og dets positive signaler er brune. Sammenlignet med BC-gruppen, økte den gjennomsnittlige optiske tettheten til FasL-genet i MC-gruppen betydelig (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Resultatene viste at CD og WCD kunneinduserer apoptose i inflammatoriske cellerog redusere binyreskade ved å fremme uttrykket av FasL-proteinet og binding til Fas-proteinet, aktivere kaspase-3-protein og utløse en kaspase-kaskade. Effekten av WCD-HD-gruppen var best.

3.3. Bestemmelse av immunfunksjon

3.3.1. Immunorganindeks

Sammenlignet med BC-gruppen, sank thymus-koeffisienten og miltindeksen til MC-gruppen betydelig (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FOR FORBEDRING AV SEKSUELL FUNKSJON PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. Påvisning av undergrupper av T-lymfocytter i perifert blod

Prosentandelen av CD4+-celler i øvre venstre kvadrant og CD8+-celler i høyre nedre kvadrant i BC og hver medikamentgruppe var høyere enn i MC-gruppen. Sammenlignet med BC-gruppen, sank forholdet mellom CD4+ThCD8+ betydelig i MC-gruppen (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Bestemmelse av nivået av IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α og IFN-C i serum

Figur 8 viser at sammenlignet med BC-gruppen, økte nivået av IL-6, TNF- og IFN-c signifikant (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Resultater av Lymus vevsmikroskopobservasjonseksperiment

Figur 9 viser at i BC-gruppen var et stort antall lymfocytter tilstede. Lymfocytter og retikulocytter var løst anordnet i midten med spredte runde eller ovale tymocytter. Det var ingen nekrose, ingen inflammatorisk celleinfiltrasjon og ingen unormale forandringer.

MC-gruppen viste en stor mengde lymfoid nekrosevev, med et uordnet arrangement av lymfocytter og retikulocytter i sentrum. Runde eller ovale tymocytter forsvant, massiv celledegenerasjon eller nekrose var tydelig, og det var inflammatorisk celleinfiltrasjon med unormale patologiske endringer.

I CD-gruppene var de morfologiske egenskapene til lymfocytter normalisert, og arrangementet av sentrale lymfocytter og retikulocytter var nesten normalt. Runde eller ovale tymocytter hadde kommet seg, men et lite antall degenerative eller nekrotiske lymfocytter og infiltrerende inflammatoriske celler var igjen.

I WCD-gruppene og PC-gruppen ble de morfologiske egenskapene til lymfocytter bedre reparert. Lymfocyttene og retikulocyttene i midten var godt justert, de runde eller ovale tymocyttene var nesten normale, men det gjensto et lite antall infiltrerende og degenerative lymfocytter.

3.4. CaM-proteingenuttrykk

RQ-verdi (CaM mRNA-aktin mRNA) ble ansett for å undersøke ekspresjonen av CaM mRNA. RQ for BC-gruppen var 1. Ekspresjonen av CaM mRNA i hypothalamus i MC-gruppen økte betydelig (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Diskusjon

Den kinesiske farmakopéen [2] registrerer at CD og WCD kan brukes i klinikken som hovedtyper av avkoksstykker. Etter å ha blitt dampet med risvin, denantialdring og tonifiserende nyre-yang-effekterble forbedret. Gjennom UPLC-QqQ-MS oppdaget vi de kvantitative endringene i den kjemiske materialbasen under prosessen med risvindamping. Iridoidglykosidene var ustabile og innholdet av disse glykosidene gikk ned, og ble til og med upåviselig. Innholdet av fenyletanolglykosider endret seg også, noe som kunne indusere endringer i farmakodynamikken og den kliniske effekten.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FOR FORBEDRING AV SEKSUELL FUNKSJON PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Den klassiske nyre-yang-mangelmodellen ble replikert ved subkutan injeksjon av kortikosteron [19]. Overdose kortikosteron kan hemme hemmeligheten til CRH i hypothalamus. I mellomtiden ble hemmeligheten til ACTH også hemmet. Nivået av binyrebarkhormon gikk ned, og dermed ble funksjonen til HPA-aksen redusert. Hypofunksjon av HPA-aksen er et vanlig kjennetegn ved nyre-yang-mangel [20]. Da viser rottene "uttømming"-fenomener og symptomene stemmer overens med nyre-yang-mangel på klinikken.

I MC-gruppen sank nivået av CRH, ACTH, T og CORT i rotteserum signifikant (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Modulering av andelen Bcl-2-familiemedlemmer er en av kjernemekanismene som FasThFasL formidler dødsreseptorveien med, og Bcl-2-familien regulerer mitokondriebanen [21]. Apoptose-hemmende faktor Bcl-2 og apoptoseinduserende faktorer, som Bax, tilhører alle Bcl-2-familien [22]. Celleapoptose kan bestemmes av det relative forholdet mellom apoptoseinhiberende faktorer og apoptoseinduserende faktorer [23]. Mitokondrier har funksjonen som sentrale sjekkpunkter for mange former for apoptose [24]. Denne studien viste at CD-MD og WCD kunne utlede uttrykket av Bax og øke Bcl-2 tilforbedre nyre-yang-mangelen. Fas er den viktigste dødsreseptoren som induserer apoptose ved ligering med Fas-liganden (FasL) [25]. Uttrykket av Fas og FasL i MC-gruppen økte, mens dette uttrykket økte betydelig i WCD-MD-gruppen (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Mangel på immunfunksjon er en av de viktige manifestasjonene av nyre-yang-mangel [28]. I denne studien fant vi at indeksen til milten og thymus i WCD-MD-gruppen kom seg betydelig (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

HPA-aksen er det viktigste regulatoriske systemet fordi det regulerer glukokortikoidsekresjon og det endokrine systemet for å opprettholde den sekretoriske funksjonen til binyrebarken [32]. Overekspresjon av CaM mRNA i hypothalamusvev var relatert til mangel på nyre yang. CD og WCD kan blokkere kalsiumkanalene, hemme CaM-mRNA-ekspresjon i hypothalamus og redusere kalsiumtilstrømningen, og dermed redusere Ca2+·CaM-kompleksaktiviteten.

Dannelsen av nyre-yang-mangel er en kronisk sykdomsutviklingsprosess. Nyre er ikke lenger et rent anatomisk begrep, og det er en generell betegnelse for nevroendokrine-immunitet og genitourinære systemer. Neuroendocrine-immune (NEI) nettverk er et viktig integrert reguleringssystem [33]. CD og WCD kan regulere funksjonen til HPAT-aksen og forbedre utvinningen av nyre-yang-mangel. Dette resultatet gir det eksperimentelle grunnlaget for klinisk forebygging og behandling av nyre-yang-mangel.