Studie om separasjon og immunkompetanse av vannekstrakt av polysakkarid fra Cistanche Tubulosa

for mer informasjon:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan·Maimaitiaili1,LI Yang1,YAO Jun1,YUAN Jie2

(1. School of Pharmacy, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Kina;2. Collage of Houbo, Xinjiang Medical University, Xinjiang Klamayi 834000, Kina）

ABSTRAKT MÅL:For å isolere vannekstraktet avpolysakkarider fra Cistanche tubulosaog for å undersøke deres immunkompetanse in vitro. METODER: AB{{{{30}}}} makroporøs adsorpsjonsharpiks ble brukt for å avfarge C. tubulosa polysakkarid. Avfargingsprosessen ble optimalisert ved en ortogonal test med retensjonshastighet og avfargingshastighet av polysakkarid som omfattende poengsum, og ved å bruke adsorpsjonshastighet, avfargingstid, prøvekonsentrasjon som faktorer. Verifikasjonstestene ble utført. DEAE-650M ionebytterkolonne ble brukt til å separere vannekstraktet av avfarget C. tubulosa-polysakkarid. CCK-8-analyse ble brukt for å oppdage effekten av forskjellige konsentrasjoner av polysakkarid (6.25-100 ug/mL) før og etter isolering på spredningshastigheten til musemakrofag RAW264.7. Griess-metoden og ELISA-analysen ble tatt i bruk for å oppdage effekten av lav, middels og høy konsentrasjon av polysakkarid (12,5,25,50 ug/mL) på frigjøring av NO,IL-6 og TNF- i LPS-induserte RAW264.7-celler. RESULTATER: I den optimale avfargingsprosessen av AB-8 makroporøs adsorpsjonsharpiks var adsorpsjonsstrømningshastigheten 1,2 BV/t, avfargingstiden var 9 timer, og prøvekonsentrasjonen var 25 mg/ml. Den omfattende poengsummen for 3 ganger med verifiseringstester var henholdsvis 63,43％,63,29％ og 63,34％, med et gjennomsnitt på 63,35％（RSD＝0.11％ ,n＝3）. Ett nøytralt polysakkarid (CTZ) og 5 syrer polysakkarider (CT1, CT2, CT3, CT4, CT5) ble isolert fra polysakkaridet til C. cistanche, innholdet var 299,2,168.0,123.6,541. 11,2 mg/g. Sammenlignet med kontrollgruppe, 6. 25-100 ug/mL CTZ (bortsett fra 6,25 μ g/mL), CT2, CT4, CT5 og 6,25 μ g/mL CTC (polysakkaridet før separasjon) kan øke spredningshastigheten betydelig. av RAW264.7-celler（P＜{{80}}.05）, mens 6.25-100 ug/mL CT1,CT3 og 50 ug/mL CTC kunne redusere spredningshastigheten til RAW264. 7 celler (P＜0,05). Sammenlignet med LPS-gruppen ble frigjøringen av NO betydelig redusert i lav-, middels og høykonsentrasjonsgrupper av CTC, CT2, CT3 og CT5, CTZ lavkonsentrasjonsgruppe (P＜0,05), mens de ble økt betydelig i høykonsentrasjonsgrupper av CT1 og CT4 （P＜0,05）. Frigjøringen av IL-6 (bortsett fra CT1-høykonsentrasjonsgruppen og CT5-lavkonsentrasjonsgruppen) og TNF- (unntatt CT1-middelkonsentrasjonsgruppen) ble betydelig redusert i lav-, middels- og høykonsentrasjonsgruppene (P＜0,05) ）. KONKLUSJONER: Den optimaliserte avfargingsteknologien til makroporøs adsorpsjonsharpiks er stabil og gjennomførbar i studien. Ett nøytralt polysakkarid og 5 sure polysakkarider kan isoleres fra vannekstrakt av C. tubulosa polysakkarider, hvorav CT2 polysakkarid har den sterkere antiinflammatoriske evnen.

SØKEORD:Cistanche tubulosa polysakkarid; Avfarging;Separasjon;Immunkompetanse

Cistanche tubulosaer en tørr, kjøttfull stilk med skjellblader avCistanche tubulosa (Schenk) Wightav Lidanaceae-familien. Moderne studier har vist at Cistanche Tubula inneholder fenetylalkoholglykosider, iridoidglykosider, lignaner, polysakkarider, alkaloider og andre biologisk aktive stoffer, som har afrodisiakum, avføringsmiddel, leverbeskyttende og antialdringsegenskaper. , Anti-fatigue forbedret immunitet og nootropiske effekter [1-4], kan brukes til klinisk behandling av mangel på nyre yang, mangel på essens og blod, impotens og infertilitet, svakhet i midje og knær, svakhet i muskler og bein, tørre tarmer og forstoppelse [5].

Klikk for å Cistanche herba-produkter

Vannekstraktet avCistanche tubulosa polysakkarider brungul. Det forrige eksperimentet til vår forskningsgruppe fant at i tillegg tilCistanche tubulosa polysakkarid, inneholder vannekstraktet også ikke-målkomponenter som vannløselige pigmenter og proteiner. Dette bidrar til separasjon og rensing av polysakkarider. Biologisk aktivitetsforskning har skapt store vanskeligheter. Den tradisjonelle organiske løsemiddelavfargingsbehandlingen vil ødelegge den kjemiske strukturen til målkomponenten i råekstraktet, og redusere den farmakologiske aktiviteten til personen, og introduksjonen av skadelige ingredienser til menneskekroppen [6]. Makroporøs adsorpsjonsharpiks er et vanlig materiale for avfarging av polysakkarider i kinesisk medisinekstrakter. Det er et kostnadseffektivt polymeradsorpsjonsmateriale med stabile fysiske og kjemiske egenskaper. Den kan målrettes ved dens selektive adsorpsjons- og siktytelse for pigmentkomponenter. For å fjerne pigmentene i ekstraktene fra tradisjonell kinesisk medisin kan det i tillegg regenereres ved sylting og alkalisk vasking, så det er mye brukt [7]. Denne studien har til hensikt å bruke makroporøs adsorpsjonsharpiks for å avfarge vannekstraktet av Cistanche Tubula polysakkarid, og bruke ortogonalt eksperiment for å optimalisere avfargingsforholdene; etter avfarging av ekstraktet, i henhold til den forskjellige typen av gruppen som bæres av polysakkaridet, er det planlagt å bruke Metoden for ionebytter kolonnekromatografi skiller ytterligere de nøytrale og sure polysakkaridkomponentene i polysakkaridet avCistanche tubulosa.

Studier har vist detcistanche plantepolysakkarider har immunmodulerende effekter og er naturlige immunmodulatorer som kan aktivere komplementsystemet og immunceller som T/B-lymfocytter, makrofager, naturlige dreperceller (NK), og kan også fremme en rekke frigjøring av cytokiner, og fremme produksjonen av antistoffer osv. [8-11]. Lipopolysakkarid (LPS) kan aktivere den inflammatoriske signalveien til makrofager, indusere nitrogenoksid (NO) og pro-inflammatoriske cytokiner som interleukin 6 (IL-6) og tumornekrosefaktor-alfa (TNF-). Syntese og frigjøring, og utløser derved en rekke inflammatoriske reaksjoner i kroppen [12]. Denne studien har til hensikt å etablere en LPS-indusert mus RAW264.7 makrofag betennelsesmodell, med utgangspunkt i effekten av Cistanche Tubula polysakkarid på makrofagproliferasjon, inflammatorisk faktorsekresjon og NO-produksjon, og foreløpig evaluering av dens effekt på immunaktiviteten til kroppen Den tar sikte på å gi et teoretisk grunnlag for dybdestudier av det antiinflammatoriske virkestoffgrunnlaget tilCistanche tubulosapolysakkarid og utviklingen av dets polysakkaridressurser.

Foreløpige studier har funnet at når polysakkaridene i Cistanche cistanche ekstraheres med vann, vil flere vannløselige stoffer løses opp sammen, noe som påvirker renheten tilcistanche cistanche polysakkarider. Derfor kan ytterligere separasjon og rensing av dem legge grunnlaget for studiet av polysakkaridmateriale og biologisk aktivitet. Den makroporøse adsorpsjonsharpiksmetoden er en vanlig brukt avfargingsmetode [17-19]. Siden det fortsatt er uklart om pigmentsammensetningen iCistanche tubulosa, så forskningsgruppen brukte statiske adsorpsjonseksperimenter for å screene den mest egnede makroporøse adsorpsjonsharpiksen AB-8 fra makroporøse adsorpsjonsharpikser med forskjellige polariteter. Polysakkaridet til Cistanche deserticola har god retensjonsevne. For å oppnå en bedre avfargingseffekt er denne forskningen basert på tidligere forskning og brukte ortogonale eksperimenter for å bestemme avfargingsprosessen (vasking. Desorpsjonsstrømningshastigheten, avfargingstid og prøvemassekonsentrasjon) er blitt optimalisert. Som et resultat var den optimale avfargingsmetoden for polysakkaridet til Cistanche tubulosa en elueringsstrømhastighet på 1,2 BV/t, en avfargingstid på 9 timer og en prøvemassekonsentrasjon på 25 mg/ml. Resultatene fra verifikasjonsforsøket viser at avfargingsmetoden er gjennomførbar.

Renheten og typen av naturlige polysakkarider er viktige faktorer som påvirker aktiviteten. Derfor er relevant forskning på isolasjons- og rensemetoder for polysakkarider fortsatt i fokus for forskningsarbeidet med naturlige aktive polysakkarider. De vanligste metodene for separering av polysakkarider inkluderer utfelling, gelkromatografi, anionbytterkromatografi, makroporøs harpikskolonnekromatografi og ultrafiltrering [20]. På grunn av de forskjellige sammensetningene av monosakkarider har polysakkarider forskjellige ladningsegenskaper. De kan deles inn i nøytrale polysakkarider og sure polysakkarider. Nøytrale polysakkarider er polymerer sammensatt av to eller flere forskjellige sukkerbaserte monomerer som ikke inneholder organiske syrer. Sure polysakkarider er mer komplekse enn nøytrale polysakkarider når det gjelder sammensetning og struktur, bortsett fra at de inneholder mer enn to sukkerbaserte monomerer. , Inneholder også uronsyre mono Body [21]. Anionbytterkolonnekromatografi bruker forskjellen i ladning av polysakkarider for å skille nøytrale polysakkarider fra sure polysakkarider [22]. Av denne grunn brukte denne studien en DEAE-650M-ionebytterkolonnekromatografikolonne for å separere Cistanche Tubula-polysakkarider, og totalt 1 nøytralt polysakkarid og 5 syrepolysakkarider ble separert. Makrofager er immunkompetente celler som kan regulere immunitet ved å oppsluke og drepe patogene mikroorganismer. Studier har vist at når menneskekroppen stimuleres av patologisk eller mekanisk skade, kan en medikamentintervensjon aktivere makrofager for å øke den fagocytiske kapasiteten til makrofager indusert av LPS, og dermed hemme produksjonen av NO og en rekke inflammatoriske celler som IL{{ 9}} og TNF-faktor sekresjon, og beskytter derved verten mot patogener [23]. For dette formål testet denne studien effekten av forskjellige Cistanche tubulosa-polysakkarider på spredningshastigheten til RAW264.7-celler, samt effekten på LPS-induserte makrofager for å frigjøre NO, IL-6 og TNF-. Som et resultat, innenfor massekonsentrasjonsområdet på 12,5, 25 og 50 ug/mL, fremmet det ikke bare spredningen av RAW264.7-celler, men hemmet også spredningen av RAW264.7-celler betydelig.

Depolysakkarid av Cistanche tubulosai RAW264.7-celler indusert av LPS til å frigjøre NO, er IL-6 og TNF- CT2. Relevante studier har vist at monosakkaridsammensetningen og molekylvekten til polysakkarider vil påvirke densimmunmodulerendeaktivitet. Monosakkarider som galaktose, arabinose, mannose og glukose er positivt korrelert med immunaktiviteten til polysakkarider [24]. Polysakkarider med større molekylvekter kan inneholde høyere multiple svært repeterende knuter struktur, kan krysskoble plasmamembranoverflatereseptorer i flere retninger, og spesifiktforbedre det immunmodulerendeeffekt [25]. Derfor kan monosakkaridsammensetningen til det sure polysakkaridet CT2 i denne studien inneholde spesielle monosakkarider eller multiple monosakkarider som er positivt relatert til immunaktivitet, og molekylvekten kan være større enn nøytrale polysakkarider og andre sure polysakkarider, men ytterligere forskning er nødvendig for å bekrefte . Oppsummert er den optimaliserte makroporøse adsorpsjonsharpiksavfargingsprosessen i denne forskningen stabil og gjennomførbar; 1 nøytralt polysakkarid og 5 syrepolysakkarider kan separeres fra vannekstraktet av Cistanche cistanche cistanche, blant annet den immunologiske aktiviteten til det sure polysakkaridet CT2 Stronger. Denne studien kan legge det eksperimentelle grunnlaget for utvikling og utnyttelse av Cistanche Tubula polysakkarider.