Studie om antioksidantaktivitetene til fenyletanoidglykosider fra Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li et al (Sentrallaboratoriet ved Changchun Normal University, Changchun, Jilin 130032)

Abstrakt[Mål] ​​Forskningen hadde som mål å systematisk studere antioksidantaktivitetene til fenyletanoidglykosider fraCistanchedeserticola. [Metode] To modellsystemer, friradikal 2,2-difenyl-l-picrylhydrazyl (DPPH ') analysen og fotokjemiluminescens (PCL) analysen, ble brukt for å måle antioksidantaktiviteten til C. deserticola ekstraktet, acteosid, isoacteosid og echinacosid. [Resultat] Resultatene viste at det totale fenolinnholdet (TPC) i echinacosid, acteosid, isoacteosid og 80 prosent etanolekstrakt av C. deserticola var 753,95, 659,94, 356,14 og 14,73 mg gallussyre/g prøve. C. deserticola-ekstraktet viste sterk antioksydaktivitet i PCL-eksperimentet, etterfulgt av echinacosid, acteosid og isoacteosid. Echinakosid viste imidlertid sterk antioksidantaktivitet i DPPH-eksperiment, etterfulgt av akteosid, isoakteosid og C. deserticola-ekstraktet.

[ Konklusjon ]Denne forskningen kan gi referanser for farmakologi og biologisk aktivitetsstudie av fenyletanoidglykosider fra C. deserticola.

Stikkord Cistanche deserticola ; Acteosid ; Isoacteosid ; Echinacoside ; Antioksidant aktivitet; DPPH ; PCL

Cistanche (Cistanche deserticolaYC Ma.) er en plante avCistancheslekt (Oro-banehaeeeae) avCistancheslekt (Cistanche). Den tørkede kjøttfulle stilken til Cistanche med skjellete blader. Et stort antall studier har funnet at de viktigste aktive ingrediensene i Cistanche-planter er fenetylalkoholglykosidforbindelser. . Fenyletanolglykosidforbindelse tilhører en slags polyfenolforbindelse, som er vidt distribuert i mange typer planter. Farmakologiske teststudier har vist at disse forbindelsene har et bredt spekter av farmakologiske og biologiske aktiviteter, slik som antihepatotoksin, antiinflammatorisk, smertestillende og antioksidantaktivitet. Blant dem er det mest slående at fenoksyetanolglykosidforbindelsen har veldig god antioksidantaktivitet. Forfatteren utførte hovedsakelig en systematisk analyse av antioksidantaktiviteten til fenetylalkoholglykosidforbindelsene iCistanche, ved bruk av to antioksidanter in vitro-evalueringsmetoder, nemlig Photoehemilumineseence (PCL) og 2,2-diphenyl-1-pieryl-hydroxyl (DPPH') To forskjellige systemer ble brukt for å måle antioksidantaktiviteten til de 80 prosent etanolekstrakt avCistanche, ergosterosid, isoergoside, ogechinacoside.

1 Materiale og metoder

1.1 Prøver og reagenser

Cistanche (Cistanche deserticola)medisinske materialer ble kjøpt fra Beijing Tongrentang Pharmacy.Ergosterosid, isoergoside,echinacoside, Folin. Ciocalteu-reagens, gallussyre, 2,2-difenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH.), etc. ble kjøpt fra SigmaChemicalCo. Company (St. Louis, Mo). Løsningsmidlet brukt for PCL-analyse ble levert av Analytik Jena AG (Berlin, Tyskland). Andre reagenser er alle analytiske reagenser (produsert av Beijing Chemical Plant). Vannet er ultrarent vann (18,2 nPa).

1.2 Prøveekstraksjon

Vei nøyaktig 2.0005g avCistancheprøvepulver, bruk 50rnl av 80 prosent etanol for ultralydekstraksjon ved romtemperatur i 0,5 timer, ekstraher to ganger, filtrer prøveløsningen, rotasjonsinndamp til tørrhet (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche deserticola.

1.3 Bestemmelse av det totale polyfenolinnholdet i prøven

Det totale fenolinnholdet i prøven bestemmes ved hjelp av F{{0}}lin-Ciocaheu-metoden, og resultatet uttrykkes som milligram gallussyre per gram ekstrakt. Ta en prøveløsning med en viss konsentrasjon på 0.2rnI (for å få absorbansen til å falle på standardkurven), tilsett 1 ml Folin-Ciocaheu-reagens med en konsentrasjon på 0.5mol/L, og tilsett deretter 0,8 ml av en natriumkarbonatløsning med en konsentrasjon på 7,5 prosent for å blande godt, Plassert ved romtemperatur i 0,5 timer, og målt deretter absorbansen ved 765 nm (ultrafiolett-synlig spektrofotometer: DU800, Beckman Couher, Inc. USA). Bruk gallussyreløsning (massekonsentrasjonsområdet er 0.02-0.20me,/m1) for å lage standardkurven, og alle testene gjentas to ganger.

1.4 Antioksidantaktivitet in vitro analyse

1.4.1 PCL-metodebestemmelse.

Testen brukte Photochem@(Berlin, Tyskland) ultrarask antioksidant og automatisk analysator for frie radikaler. Prinsippet er å generere frie radikaler ved fotokjemisk metode og bruke kjemiluminescensmetoden for å oppdage frie radikaler. I eksperimentet ble en fotosensibilisator med fotokjemisk eksitasjonseffekt brukt for å eksitere reaksjonsmolekylene, slik at under påvirkning av den ultrafiolette lampen skjedde oksidasjonsreaksjonen 1000 ganger raskere enn normale forhold, og de frie radikalene ble raskt generert." Velg PCL-ACW-Kit-metoden Mål antioksidantaktiviteten til de vannløselige komponentene i psyllium-delprøvene. Pipetter 1.0ml reaksjonsbuffer (inkludert konsentrasjonen av 0.1moL/L natriumkarbonat, pH-verdi på 10,5 og konsentrasjonen på 0.1mmol/LNA, én EDTA, 1,5 ml ACW-fortynningsmiddel (vann) ), konsentrasjon 1mmol/LLumino1) fungerer som en fotosensibilisator for å eksitere reaksjonsmolekylene, slik at frie radikaler raskt dannes, og samtidig som et fotokjemiluminescerende stoff. Både prøven og standarden er 10 "l. Ved å måle forskjellige konsentrasjoner (0,5, 1,0, 2,0 og 3,0 nmol/L) av L. Standardkurveligningen for askorbinsyre er Y=24.640Ox pluss 2.9311, R²=0.9969. Det er nødvendig å fortynne prøven eller standardløsningen i testen slik at tidsintervallet for etterslep faller innenfor det lineære området til standardkurven. Photochem genererer standardkurven og tester antioksidantaktiviteten til prøven automatisk, og antioksidantaktiviteten til prøven tilsvarer L． Beregnet av antall nanomol askorbinsyre.

1.4.2 DPPH-metodebestemmelse.

Diphenylpicrylhydrazino radikal [DPPH ·] er et stabilt nitrogensentrert radikal med maksimal absorpsjon ved en bølgelengde på 515nm. [DPPH ·] metanolløsning er lilla, og konsentrasjonen har et lineært forhold til absorbans." Etter å ha tilsatt antioksidanter til [DPPH ·] metanolløsning, kan antioksidanter kombineres med [DPPH ·] frie radikaler eller erstatte dem for å lage [DPPH ·] ] Antallet frie radikaler avtar, og fargen på løsningen blir lysere, noe som manifesteres av den kontinuerlige reduksjonen i absorbansen ved bølgelengden 515 nm til den når stabilitet." I testen ble det brukt etanol i stedet for metanol. Vei [DPPH ·] nøyaktig og konfigurer konsentrasjonen til 0. [DPPH ·] etanolløsning av 0.040 76mg/ml, standardkurven for [DPPH ·] oppnås: Y: 18.032x-0.0016 , R=0.9993. Metoden for å måle restmengden av frie radikaler viser til litteraturen [16]. Bruk etanol som løsningsmiddel, tilbered forskjellige konsentrasjoner av prøve og standardløsning, ta henholdsvis 0,1 ml prøve eller standardløsning, og tilsett 3,9 ml [DPPH·] standardløsning med en massekonsentrasjon på 2,5 mg/L (brukes nå) ), erstatte prøveløsningen med etanol som en blindprøve. Rist den blandede løsningen, bruk en kyvette til å måle absorbansen til forskjellige tider ved en bølgelengde på 515nm, og konverter den til massekonsentrasjonen av [DPPH·] i henhold til standardkurven for å beregne resthastigheten til [DPPH·]. I henhold til resthastigheten til [DPPH ·] og den tilsvarende mengden av tilsatt prøve, kan det tegnes en kurve for fjerning av [DPPH -] frie radikaler fra prøven. I henhold til forholdskurven mellom massekonsentrasjonen til [DPPH ·] og absorbansen, kan absorbansen målt etter tilsetningen av frie radikal-fjerneren konverteres til massekonsentrasjonen til [DPPH ·] for å beregne [DPPH ·] etter tilsetning av frie radikaler. Beregningsformelen for resthastigheten er som følger: [DPPH ·]REM=[DPPH·]/[DPPH·]r=0×100 prosent der [DPPH·] er massekonsentrasjonen til DPPH · på et bestemt tidspunkt i frie radikalers fjerningsprosessen, [DPPH·]:. Er den opprinnelige massekonsentrasjonen av DPPH·. I henhold til antall tilsatt antioksidanter og resthastigheten til [DPPH ·], lages forholdskurven mellom de to, og regresjonsligningen kan oppnås gjennom lineær regresjonsanalyse. I henhold til regresjonsligningen kan antioksidantdosen når resthastigheten på [DPPH ·] er 50 prosent beregnes. Halv hemning. I henhold til [DPPH·]-kurven for frie radikaler for forskjellige konsentrasjoner av prøver eller standarder, beregne mengden EC av prøven når den opprinnelige massekonsentrasjonen av [DPPH·] reduseres til 50 prosent (steady-state). Jo mindre EC, jo evne til å fjerne frie radikaler Jo sterkere." Test 3 ganger parallelt.

cistanche

2 Resultater og analyse

2.1 Bestemmelse av totalt polyfenolinnhold i prøven Ved bestemmelse av totalt polyfenolinnhold vil det totale polyfenolinnholdet påechinacosideer den høyeste, som er 753,95 mg gallussyre/g. Etterfulgt av ergosteroidglykosider, isoergosteroidglykosider og råekstrakter avCistanche, som var henholdsvis 468,3, 356,14 og 14,73 mg gallussyre/g.

2.2 Bestemmelse av prøvens antioksidantaktivitet

2.2.1 Resultat av PCL-ACW-metodebestemmelse. I PCL-ACW antioksidanttesten er antioksidantkapasiteten på 1txgCistanchemedisinsk materiale tilsvarer antioksidantkapasiteten til 15,68nmol L-askorbinsyre; 1 gechinacosidetilsvarer antioksidantkapasiteten på 14,03nmol askorbinsyre Aktivitet: 1txgergosterosider ekvivalent med 11,44 nmolL en antioksidantkapasitet til askorbinsyre; 1Ixg isomergosterosid tilsvarer antioksidantaktiviteten til 8,24nmol askorbinsyre.

2.2.2 Måleresultater for DPPH-metoden. Det kan ses av tabell 1 at det er ryddet. Rekkefølgen på evnen til frie radikaler erergosterosid, echinacoside, isoergoside og råekstraktet avCistanche, blant hvilke ergo side ogechinacosidehar stort sett samme antioksidantkapasitet i DPPH-testen. Det kan sees av dette. Fordi forskjellige in vitro antioksidanttestsystemer brukes til å måle prøver, er mekanismen for antioksidanteffekter forskjellig, og resultatene kan være inkonsekvente. Dette er også verifisert i testen. Derfor er det nødvendig å velge andre antioksidantanalysesystemer for ytterligere verifisering.

echinacosie

referanser

[1] Yang Cuiping, Su Weiwei. Forskningsfremgang for kjøttsuppe[J]·Chinese Medicinal Materials, 2001, 24(12): 907-909.

[2]Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei Forskningsfremgang på de kjemiske bestanddelene i Cistanche-planter[J].Chinese Herbal Medicine,2003,34(5):473 -476.

[3]HIROMI KOBAYASHI,HIROKO KARASAWA JOSHIO MIYASE. Studier av bestanddelene Cistanchis Herba. HI. Isolering og strukturer av nye fenylpropanoidglykosider, cistanosider A og B[J]. Chem. Pharm Bull, 19^,32(10):3009 -3014.

[4]LI LI, RONG TSAO, RAYMOND YANG, et al. Isolering og rensing av fenyletanoidglykosider fraCistanche deserticolaved høyhastighets motstrømskromatografi[ J ]. Food Chemistry,2008,1(^:702-710.

[5]LI LI, RONG TSAO, LIU ZQ, et al. Isolering og rensing av actec^id og isoacteosid fra Plantago psyllium L. ved høyhastighets motstrømskromatografi [J ]. Journal of Chromatography A,2005,1063: 161-169.

[6]RAVN H, NISHIBE S, SASAHARA M, et al. Fenolforbindelser fra Plantago Asiatica[ J]. Phytochemistry, 1990, 29: 3627-3631.

[7]TOYAMA Y, MATSUMOTO M, NISHIOKA I. Fenolglykosider fra syke røtter av Rehmannia gluiinosa var. purpurea [J]. Phytochemistry, 1987, 26: 983-986.

[8] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Wu Ji J Ya, et al. Cistanche cistanche totale glykosider in vitro fjerner frie radikaler og beskyttende effekter på DNA-skade indusert av OH [J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2001, 36(1): 29-31.

[9]XIONG Q, HASE K, TEZUKA Y, et al. Leverbeskyttende aktivitet av fenyletanoider fraCistanche deserticola[J]. Planta Med, 1998,64:120.

[10]SCHAPOVAL EES, WINTER DE VARGAS MR, CHAVES CG, et al. Antiinflammatoriske og antinociseptive aktiviteter av ekstrakter og isolerte forbindelser fra Stachytarpheta cayeunensis [J]. J Ethnopharmacol, 1998, 60: 53.

[11] LI J, WANG PF, ZHENG RL, et al. Beskyttelse av fenylpropanoidglykosider fra Pedicularies mot oksidativ hemolyse in vitro [J]. Planta Med, 1993,59:315—317.

[12] HE ZD, LAU KM, Xu HX, et al. Antioksidantaktivitet av fenyletanoidglykosider fra Brandisia-kreft [J]. Ethnopharmacology, 2000, 71:483-486.

[13]XIONG Q, KADOTA S, TANI T, et al. Antioksidanteffekter av fenyletanoid fraCistanche deserticola[J]. Biol Pharm Bull, 1996,19: 1580-1585.

[14]TSAO R, YANG R, XIE S, et al. Hvilke polyfenoliske forbindelser bidrar til den totale antioksidantaktiviteten til eple? [J]. J Agric Food Chem, 2005,53:4989-4995.

[15] POPOV IN, LEWIN G. Hiotochemiluminescerende deteksjon av antiradikal aktivitet: U. testing av ikke-enzymiske vannløselige antioksidanter [J ]. Free Rad Biol Med, 1994, 17: 267-271.

[16]BRAND-WILLIAMS W, CUVEHER ME, BERGET C. Bruk av en metode for frie radikaler for å evaluere antioksidantaktivitet [J ]. Lebensm Wiss Technol, 1995,28:25-30.

[17] Li Chunyang, Xu Shiying, Wang Zhang. DPPH-metode for å bestemme evnen til druefrøproantocyanidiner til å fange frie radikaler [J]. Journal of Food and Biotechnology, 2006, 25(2)" 02-106.

SCHLESIER K, HARWICH M, BOHM V, et al. Vurdering av antioksidantaktivitet ved bruk av ulike in vitro metoder [J ]. Free Radical Research, 2002,36(2):177-187.