Synergistiske antiinflammatoriske effekter av Laminaria Japonica Fucoidan og Cistanche Tubulosa Ekstrakt
Mar 03, 2022
Ansvarlig: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com
Abstrakt
Denantiinflammatoriskeffekter av fucoidan ogCistanche tubulosa (CT) ekstrakt ble undersøkt i Vitro makrofag kultursystem og in vivo carrageenan-indusert luftpose betennelse modell.Cistanche Tubulosaekstrakt hemmet nitrogenoksid produksjon fra aktivert RAW 264.7 makrofag celler, mens fucoidan var inaktiv. In vivo luftposebetennelsesmodell, carrageenan-indusert vaskulær eksudasjon og økte nitrogenoksid- og prostaglandin E2-konsentrasjoner i eksudatene ble synergistisk undertrykt ved samtidig administrering av fucoidan ellerCistanche Ttubulosaekstrakt. Videre ble vevsbetennelse betydelig svekket av kombinasjonsterapi. Det var imidlertid ingen synergistisk effekt motinflammatoriskcelleinfiltrasjon, selv om fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)trekke ut hvert merkes reduserte cellenumrene. Derfor foreslås det at fucoidan blokkerer infiltrasjon avinflammatoriskceller, mens CT(Cistanche tubulosa) ekstrakt hemmer aktivering av cellene, og at deres kombinasjonsbehandling kan være en lovende kandidat for lindring av ulike typer betennelse.
Nøkkelord: Carrageenan, betennelse, fucoidan, Cistanche tubulosa ekstrakt.
Som immunrespons mot fremmede antigener frigjør makrofager proinflammatoriske cytokiner som tumor-nekrosefaktor-α (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β), IL-6 og andre [1,2]. Slike cytokiner induserer en kjemosaktisk tilstrømning av granulocytter, monocytter, lymfocytter og mastceller til skadet vev som fremmer antigenfjerning og vevsgjenvinning [3,4]. Overdreven infiltrasjon og aktivering av cellene forverrer imidlertid vevsskader, noe som fører til ødem (vaskulær eksudasjon) og smerte som er kjente fenomener av betennelse.
TNF-α er en viktig faktor for å indusere nitrogenoksidsyntase (iNOS) genuttrykk i flere cellelinjer.iNOS-aktivering fører til nitrogenoksid (NO) produksjon[5-7] som ikke bare modulerer flere fysiologiske funksjoner som bakteriedrepende og vasodilatasjon, men også forårsaker betennelse [8,9]. Etter vevsskade genererer nedbrytning av fosfolipaser av cellemembranfolipider arakidonsyre. Arakidonsyre dekomponeres ytterligere av cyklooksygenase (COX) til prostaglandiner (PGs) [10]. En overdreven mengde PGE2formed av COX-II induserer flere cytokiner for betennelse. Siden både NO og PGE2 fungerer som viktige faktorer for betennelse og smerteinduksjon, er TNF-α- og COX-II-PGE2-veier hovedstrømmene i den inflammatoriske prosessen, som hemmes av kortikosteroider og ikke-steroideantiinflammatorisklegemidler (NSAIDs), henholdsvis [10,11].
Selv om det er flere steroider og NSAIDs for behandling av inflammatoriske sykdommer, kan disse stoffene gi opphav til bivirkninger på immunsystemet, mage-tarmkanalen, nyrene, leveren, sentralnervesystemet, blodtrykket og kardiovaskulærsystemet [12-14]. Derfor er det nødvendig å minimere bivirkningene av kjemisk terapeutisk ved å erstatte dem eller bruke dem i kombinasjon med naturlige produkter.
Fucoidan, sulfatpolysakkaridkompleks fra tang som Laminaria japonica og Cladosiphonokamuranus utbredt i mange land, har blitt brukt som terapeutisk i orientalsk medisin i lang tid. I tidligere studier har det vist seg at fucoidan har antioksidant, antikoagulativ, antikreft ogantiinflammatoriskaktiviteter [15,16]. Følgelig tiltrekker de gunstige effektene av fucoidan på inflammatoriske sykdommer, iskemi, immundysfunksjon og svulster etterforskernes oppmerksomhet [17,18]. På den andre sidenCistanche tubulosa(CT) har også blitt mye brukt til tradisjonell medisinering i Kina. Det ble rapportert at CT-ekstrakt senker produksjonen av TNF-á og IL-4 som er viktige faktorer for INGEN produksjon i den inflammatoriske banen [19].
Slike tidligere funn førte oss til å undersøke den kombinasjonseffekten av fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt på de 2 store veiene for betennelse. For å belyse virkningsmekanismen analyserte vi NO ogPGE2 i eksudatene fra carrageenan-indusert luftposebetennelse [20].
Materialer og metoder
Materialer
Halvrenset fucoidan og vannekstrakt av CT(Cistanche tubulosa)ble hentet fra Misuba RTech Co., Ltd. (Asan, Korea). Fucoidan- og CT-ekstrakt ble holdt ved 4oC, blandet (1:3) og oppløst i renset vann før bruk, og oralt administrert i et volum på 5 ml/kg
Cellekultur og INGEN kvantifisering
Murine macrophage RAW 264.7 cellelinjen ble kjøpt fra American Type Culture Collection (Manassas, USA), og dyrket i Dulbeccos modifiserte ørnemedium (Sigma, St. Louis, USA) som inneholder 10% foster bovint serum og antibiotika [100 U / mLpenicillin (Sigma) og 100 μg / mL streptomycin (Sigma)]. Cellene ble inkubert i en fuktet 5% CO2atmosphere ved 37oC.
For å vurdere effekten av fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt på sekresjonen av NO, RAW 264,7 celler (1×106 celler/ml) ble inkubert med fucoidan eller CT-ekstrakt (1–320 μg/ml) i 5 minutter, etterfulgt av interferon-γ (IFN-γ, 10 U/ml) og lipopolysakkarid (LPS, 10 μg/ml) i 24timer. I våre foreløpige studier ble det bekreftet at behandling med IFN-γ pluss LPS for aktivering avRAW 264,7 celler ikke påvirket levedyktigheten til cellene opptil 24 timer, og at fucoidan og CT-ekstrakt ikke var cytotoksisk opptil 1 mg /ml. Konsentrasjonen av nitritt (NO2–), det oksiderte produktet av NO, ble målt som en indikator på NEI. Kulturmediet ble blandet med et likt volum griess reagens (1% sulfanilamid, 0,1% naftalentyndimid i 2,5% fosforsyre) [21], og inkubert ved romtemperatur i 10 min. Nitrittkonsentrasjon ble analysert ved 540 nm, hvor NaNO2 ble brukt til å generere en standardkurve.
Dyr og behandling
Mannlige ICR-mus (7 uker gamle) ble kjøpt fra Daehan Biolink (Eumseong, Korea), og plassert i et rom med konstante miljøforhold (22±2ºC;40-70% relativ fuktighet; 12-timers lys-mørk syklus;150-300 lux lysstyrke). Pelletsfôr og renset vann var tilgjengelig ad libitum. Alle dyreforsøkene ble godkjent av Institutional Animal Care and use committee (IACUC) ved Chungbuk National University (CBNU), Korea, og utført i henhold til Standard Operation Procedures (SOP) ved LaboratoryAnimal Research Center, CBNU.
Musene (n=8/gruppe) ble oralt behandlet med fucoidan (18 eller 54 mg/kg), CT(Cistanche tubulosa)(54 eller 162 mg/kg), eller blandingen (18+54, 54+162 eller 90+270 mg/kg)en gang daglig i 7 dager. Lave doser fucoidan (18 mg/kg) og CT-ekstrakt (54 mg/kg) var fra estimerte humane doser på henholdsvis 100 mg/kropp (70 kg) og 300 mg/kropp etter overflateoversettelse av kroppsvekt (Km=37 for menneske/Km=3 for mus). Høye doser fucoidan og CT ekstrakt ble satt til 3 folder, alene eller i blandingen, og den høyeste dose blandingen ble løst på 5 ganger for å vurdere maksimale synergistiske effekter.
På den første dagen av fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstraksjonsbehandling, ble mus subkutant injisert med 10 ml steril luft på baksiden for å danne en pose [22,23]. Etter 2 og 5 dager ble posen injisert på nytt med 5 ml luft. En time etter den endelige behandlingen, 1 ml carrageenan (1% i saltvann; eller kjøretøyet (saltvann) ble injisert i posen.
Analyser av eksudatene
Luftposen ble vasket med 1 ml kald saltvann 6 timer etter carrageenan injeksjon, og nettovolumet av lavagevæske ble registrert. Totalt antall inflammatoriske celler, nøytrofiler, monocytter og lymfocytter ble bestemt ved hjelp av en colter counter. Konsentrasjonene av NO og PGE2 ble bestemt av Griess reagens (Sigma) og enzymimmunoassay (EIA) ved hjelp av et korrelat-EIA-sett (henholdsvis Assay Designs, Ann Arbor, AnnArboUSA).
Histopatologisk undersøkelse
Poseforingsvev ble fjernet og festet i nøytral formalinoppløsning. Paraffin-innebygde vevssklier ble farget med hematoksylin-eosin og undersøkt under et lett mikroskop for de inflammatoriske lesjonene.
Statistisk analyse
Resultatene presenteres som mean±SE. Eksperimentelle gruppesammenligninger ble gjort ved enveisvariasjon av varians etterfulgt av en Tukeys testkorrigering. En P-verdi<0.05 was="" considered="" statistically="">
Resultater
In vitro RAW 264.7 cellekultur, IFN-γ og LPS-behandling økte NO-produksjonen kraftig (figur 1). Forbehandling med fucoidan (1–320 μg/ml) påvirket ikke NO-utslippet fra makrofagcellelinjen (figur 1A). Til sammenligning er CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (32–320 μg/ml)signifikant undertrykt INGEN produksjon, noe som indikererantiinflammatoriskaktivitet (figur 1B).
Injeksjon av carrageenan i museluftposen økte ekssudatvolumet markert i posen (figur2). Slik økt eksudasjon ble svekket ved behandling med fucoidan (18 mg/kg) og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (54 og 162mg/kg). Spesielt kombinasjonsbehandlingen av fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstraktet reduserte eksudatvolumet ytterligere sammenlignet med de enkelte effektene, selv om høyere dosekombinasjoner (54+162 mg/kg og 90+270 mg/kg) ikke viste ytterligere effekt på den laveste dosekombinasjonen (18+54 mg/kg) (figur 2A). Ingen innhold i posen økte også drastisk etter carrageenan injeksjon (figur 2B). Sammenlignet med den milde effekten av fucoidan, kan CT(Cistanche tubulosa)reduserte NO-konsentrasjonen markert. Kombinasjonsbehandling av fucoidan- ogCT-ekstrakt reduserte NO-nivået ytterligere på en doseavhengig måte. På samme måte ble det øktePGE2-innholdet synergistisk undertrykt av kombinasjonsbehandlingen av fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (figur 2C). Parallelt med de inflammatoriske mediatorene i posen økte antallet inflammatoriske celler drastisk ved carrageenan injeksjon: henholdsvis 37,8, 4,8 og 24,1 ganger kontrollnivåer for nøytrofiler, monocytter og lymfocytter (tabell 1). Fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt reduserte signifikant den inflammatoriske celleinfiltrasjonen, der fucoidan var noe overlegen CT-ekstrakt. Uventet ble ingen synergistisk effekt i den inflammatoriske celleinfiltrasjonen oppnådd ved samtidig administrering av fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt.
Som utledet fra den inflammatoriske celleinfiltrasjonen i eksudatene, viste det subkutane vevet rundt luftposer alvorlige inflammatoriske lesjoner (figur3). Enormt mange celler i det fortykkede subkutane vevet utsatt for carrageenan ble observert (Figur3B), sammenlignet med de nesten normale egenskapene hos kontrolldyr (figur 3A). Slike inflammatoriske lesjoner ble bemerkelsesverdig svekket ved behandling med fucoidan (figur 3C og 3D) eller CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (figur 3E og 3F). Spesielt ble høyere antiinflammatoriske effekter oppnådd ved kombinasjonsbehandling med fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (figur 3G-3I)
Diskusjon
Ved hjelp av en in vivo carrageenan-indusert luftposebetennelsesmodell induserer injeksjon av luft til baksiden av gnagere spredning av celler som stratifiserer på overflaten av hulrommet for å danne en struktur som ligner synovium. I denne modellen økte injeksjonen av carrageenan-indusert inflammatorisk celleinfiltrasjon ekssudat, noe som indikerer vaskulær lekkasje. Luftposen fungerer som et reservoar av inflammatoriske celler og mediatorer som lett kan måles i væsken som akkumuleres lokalt.
Blant de forskjellige inflammatoriske mediatorene som kan indusere vaskulær permeabilitet, er det velkjent at NO og PGE2 er viktige faktorer involvert i patogenesen av mange inflammatoriske sykdommer [24,25]. De er også kjent som formidlere av smerteinduksjon og persepsjon[10,11]. iNOS, som uttrykkes og aktiveres i ulike celletyper ved stimulering med TNF-α og/ellerLPS under betennelse, gir høye, vedvarende konsentrasjoner av NO [3,5-7]. NO er et viktig regulatorisk molekyl i ulike fysiologiske funksjoner, som vaskodilatasjon som fører til vaskulær lekkasje [8,9]. PGE2, som genereres fra arakidonsyre via cox, bidrar til utvikling av mange inflammatoriske sykdommer [26,27], og overproduksjon avPGE2 som svar på ulike inflammatoriske stimuleringer er forbundet med oppregulering av COX-II-nivå og progresjon av betennelse [28]. Derfor har TNF-α-NO og COX-II-PGE2-veier blitt ansett som to hovedstrømmer av inflammatoriske prosesser, som er blokkert av hemmere av iNOS (kortikosteroider) ogCOX (NSAIDs), henholdsvis [22,29].
I den nåværende studien ble samtidig administrering av fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekssudatvolumet i posen, noe som tyder på at de har undertrykkende aktivitet mot vaskulær lekkasje (figur 2A). Sammenlignet med de individuelle effektene av hver fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)kombinasjonsbehandlingen økte ytterligere, noe som antydet at de to forbindelsenes virkning synergistisk. Slike synergistiske effekter mellom fucoidan og CT ekstrakt ble støttet av deres aktiviteter på NO- og PGE2-nivåene i eksudatene (figur 3B og 2C).
Interessant nok ble det imidlertid bekreftet at fucoidan ikke direkte hemmer aktiveringen av makrofager invitroanalyse (figur 1A). Tilsvarende var det hemmende potensialet for fucoidan på NO- og PGE2-akkumuleringen i bioassay relativt lavere enn for CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (figur 2B og 2C). En slik virkningsmekanisme av fucoidan er forskjellig fra en direkte inaktivering av cellene ved CT-ekstrakt (figur 1B). Til sammenligning utøvde fucoidan en høy effekt på hemming av inflammatorisk celleinfiltrasjon i posene (tabell 1). Fucoidan var overlegen CT-ekstrakt i å blokkere migrasjon av nøytrofiler, monocytter og lymfocytter til de carrageenan-induserte vevsskadestedene. Interessant nok var det ingen synergistisk antimigrerende effekt, noe som indikerer ulike virkningsmekanismer mellom fucoidan ogCT-ekstrakt: det vil si fucoidan blokker infiltrasjon av inflammatoriske celler, mens CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt hemmer aktivering av cellene.
Polymorfoukære celler, spesielt nøytrofiler, er de viktigste cellulære komponentene rekruttert til akutte inflammatoriske steder indusert av carrageenan. I tillegg spiller påfølgende inflammatoriske celler som makrofager og lymfocytter også sentrale roller i den inflammatoriske prosessen ved å utskille cytokiner [22,30,31]. Når det er forbehandlet med fucoidan eller CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt, ble antall hvite blodlegemer som migrerte inn i carrageenaninjiserte luftposer markert undertrykt. Dette resultatet var i samsvar med en effekt som ville bli oppnådd ved kortikosteroider som deksametason, men ikke av NSAIDs inkludert indomethacin [23,30]. Derfor antas det at fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt har delvis en egenskap av steroider.
I tillegg til blokkeringsvirkningen på inflammatorisk celle chemotaxis, kan CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt syntes å undertrykke aktivering av makrofager. Dette ble bekreftet av sine hemmende handlinger på NO in vitro og in vivo, som er den store inflammatoriske mediatoren produsert av makrofager. Effekten av CT(Cistanche tubulosa)makrofager kan skyldes undertrykkelse av mRNA-uttrykk og/eller direkte hemming av iNOS-aktivitet i disse cellene.
PGE2 er også en av de store inflammatoriske mediatorene. Det øker parallelt med vevødem, som undertrykkes av NSAIDs, hemmere av COX [21,22]. Carrageenan kan øke PGE2-produksjonen ved å indusereCOX-II mRNA og COX-II protein i posen ekssudat [32]. I denne modellen økte carrageenan betydelig mengden PGE2, og den ble vesentlig undertrykt av CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt. Det er interessant å merke seg at dette resultatet var i samsvar med en effekt som ville bli oppnådd av en NSAID indomethacin [23]. Derfor er det utledet fra resultatene at CT-ekstrakt har tilleggsegenskapen til NSAIDs. Samlet antas det at CT(Cistanche tubulosa)ekstraktet utøvde både kortikosteroid- og NSAID-lignende effekter i den carrageenan-induserte betennelsesmodellen, og at fucoidan forbedretantiinflammatoriskeffekter av CT-ekstrakt ved å blokkere inflammatorisk celleinfiltrasjon.
Selv om det å definere den eksakte virkningsmekanismen krever videre studier, vil en blanding av fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)avtrekk markert svekkede inflammatoriske tegn ved å blokkere TNF-α-NO og COX-II-PGE2-veiene i carrageenan-indusert luftposebetennelse. Disse funnene gir bevis for at kombinasjonsbehandling av fucoidan og CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt kan være en lovende kandidat for lindring av ulike typer betennelse som er lydhør overfor kortikosteroider eller NSAIDs.
Referanser
1. Dag R. Bivirkninger av TNF-α hemmere ved revmatoid artritt. Lancet 2002; 359(9306): 540-541.
2. Feldmann M, Brennan FM, Maini RN. Rolle av cytokiner i revmatoid artritt. Annu Rev Immunol 1996; 14: 397-400.
3. Eigler A, Sinha B, Hartmann G, Endres S. Taming TNF: strategier for å begrense denne proinflammatoriske cytokinen. Immunol I dag 1997;18(10): 487-492.
4. Ershler WB, Keller ET. Aldersrelatert økt interleukin-6gene uttrykk, sen-liv sykdommer og skrøpelighet. Annu Rev Med2000; 51: 245-270.
5. Adams V, Nehrhoff B, Späte U, Linke A, Schulze PC, Baur A, Gielen S, Hambrecht R, Schuler G. Induksjon av iNOS-ekspresjonin skjelettmuskulatur ved IL-1β og NFκB-aktivering: en in vitro andin vivo-studie. Cardiovasc Res 2002; 54(1): 95-104.
6. Xie QW, Whisnant R, Nathan C. Promoter av musen gen koding kalsium-uavhengig nitrogenoksid syntase gir inducibility ved interferon γ og bakteriell lipopolysakkarid. J ExpMed 1993; 177(6): 1779-1784.
7. Yui Y, Hattori R, Kosuga K, Aizawa H, Hiki K, Kawai C.Rensing av nitrogenoksidsyntase fra rottemakrofag. J BiolChem 1991; 266(19): 12544-12547.
8. Marletta MA, Yoon PS, Iyengar R, Leaf CD, Wishnok JS. Makrofagoksidasjon av L-arginin til nitritt og nitrat: nitrogenoksid er et mellomliggende. Biokjemi 1998; 27(24): 8706-8711.
9. Moncada S, Palmer RM, Higgs EA. Nitrogenoksid: fysiologi, patofysiologi og farmakologi. Pharmacol Rev 1991; 43(2):109-142.
10. Pang L, Hoult JR. Cytotoksisitet til makrofager av tetrandrin, en anti-silikosealkaloid, ledsaget av en overproduksjon av prostaglandiner. Biochem Pharmacol 1997; 53(6): 773-782.
11. Hunskaar S, Hull K. Formalintesten hos mus: dissosiasjon mellom inflammatorisk og ikke-inflammatorisk smerte. Smerte 1987; 30:103-114.
12. Lester RS, Knowles SR, Skjær NH. Risikoen for systemisk kortikosteroidbruk. Dermatol Clin 1998; 16(2): 277-288.
13. Lichtenstein DR, Syngal S, Wolfe MM. Ikke-steroidantiinflammatorisklegemidler og mage-tarmkanalen. Det tvekantede sverdet. Leddgikt Rheum 1995; 38(1): 5-18.
14. Mukherjee D, Nissen SE, Topol EJ. Risiko for kardiovaskulære hendelser forbundet med selektive COX-2-hemmere. JAMA 2001; 286(8):954-959.
15. Feldman SC, Reynaldi S, Stortz CA, Cerezo AS, Damont EB. Antivirale egenskaper av fucoidan fraksjoner fra Leathesiadifformis. Fytomedikin 1999; 6(5): 335-340.
16. Wang J, Zhang Q, Zhang Z, Song H, Li P. Potensiell antioksidant og antikoagulant kapasitet av lavmolekylære fucoidanfraksjoner ekstrahert fra Laminaria japonica. Int J Biol Macromol2010; 46(1): 6-12.
17. Bojakowski K, Abramczyk P, Bojakowska M, Zwoliñska A, Przybylski J, Gaciong Z. Fucoidan forbedrer nyreblodstrømmen i det tidlige stadiet av nyre iskemi / reperfusjonsskade hos rotten. JPhysiol Pharmacol 2001; 52(1): 137-143.
18. Li N, Zhang Q, Song J. Toksikologiske evaluering av fucoidan ekstrahert fra Laminaria japonica hos Wistar rotter. Mat ChemToxicol 2005; 43(3): 421-426.
19. Yamada P, Iijima R, Han J, Shigemori H, Yokota S, Isoda H.Inhibitory effekt av acteoside isolert fra Cistanche tubulosa på kjemisk mediator frigjøring og inflammatorisk cytokin produksjon av RBL-2H3 og KU812 celler. Planta Med 2010; 76(14): 1512-1518.
20. Shin S, Jeon JH, Park D, Jang JY, Joo SS, Hwang BY, Choe SY, Kim YB.Antiinflammatoriskeffekter av et etanolekstrakt av angelica gigas i en carrageenan-air pose betennelsesmodell. Exp Anim 2009; 58(4): 431-436.
21. Hevel JM, Marletta MA. Syntaseanalyser av nitrogenoksid. MetoderEnzymol 1994; 233: 250-258.
22. Romano M, Faggioni R, Sironi M, Sacco S, Echtenacher B, DiSanto E, Salmona M, Ghezzi P. Carrageenan induserte akutt oppblåsning i musens synovialmodell. Rolle av tumornekrose faktor. Meklere Inflamm 1997; 6(1): 32-38.
23. Wallace JL, Chapman K, McKnight W. Begrensetantiinflammatoriskeffekten av cyclo-oxygenase-2 hemming i carrageenan-air pose betennelse. Br J Pharmacol 1999; 126(5): 1200-1204.
24. Guslandi M. Nitrogenoksid og inflammatoriske tarmsykdommer. Eur J Clin Invest 1998; 28(11): 904-907.
25. Ritchlin CT, Haas-Smith SA, Li P, Hicks DG, Schwarz EM. Mekanismer for TNF-α- og RANKL-mediert osteoklastogenese og benreorpsjon ved psoriasisartritt. J Clin Invest 2003;111(6): 821-831.
26. Minghetti L. Cyclooxygenase-2 (COX-2) i inflammatoriske og degenerative hjernesykdommer. J Neuropathol Exp Neurol 2004;63(9): 901-910.
27. St-Onge M, Flamand N, Biarc J, Picard S, Bouchard L, DussaultAA, Laflamme C, James MJ, Caughey GE, Cleland LG, BorgeatP, Pouliot M. Karakterisering av prostaglandin E2 generasjon gjennom cyclooxygenase (COX)-2 banen i menneskelige nøytrofiler. Biochim Biophys Acta 2007; 1771(9): 1235-1245.
28. Choi YH, Park HY.Antiinflammatoriskeffekter av spermid i lipopolysakkarid-stimulerte BV2 mikrogliale celler. J Biomed Sci2012; 19: 31.
29. Wallace JL, Chapman K, McKnight W. Begrensetantiinflammatoriskeffekten av cyclo-oxygenase-2 hemming i carrageenan-air pose betennelse. Br J Pharmacol 1999; 126(5): 1200-1204.
30. Oliveira de Melo J, da Conceição Torrado Truiti M, Muscará MN, Bolonheis SM, Dantas JA, Caparroz-Assef SM, Cuman RK, Bersani-Amado CA.Antiinflammatoriskaktivitet av rå ekstraktog brøkdeler av Nectandra falcifolia blader. Biol Pharm Bull2006; 29(11): 2241-2245.
31. Zanardo RC, Brancaleone V, Distrutti E, Fiorucci S, Cirino G, Wallace JL. Hydrogensulfid er en endogen modulator av leukocyttmediert betennelse. FASEB J 2006; 20(12): 2118-2120.
32. Masferrer JL, Zweifel BS, Manning PT, Hauser SD, Leahy KM, Smith WG, Isakson PC, Seibert K. Selektiv hemming av induserbar cyclooxygenase 2 in vivo erantiinflammatoriskog nonulc erogen. Proc Natl Acad Sci USA 1994; 91(8): 3228-3232.
