Unike og delte miRNA-er av de tre eksosomtypene

Deretter undersøkte vi rollen til de unike miRNAene fra de tre eksosomtypene i signalregulering. Venn-diagrammet avslørte 16, 27 og 61 unike miRNA-er i henholdsvis hESC-Exos, hiPSC-Exos og hUC-MSC-Exos, og 70 delte miRNA-er (fig. 6A). Det regulatoriske nettverket av miRNA-proteininteraksjoner ble evaluert ved å målrette de unike miRNAene. I hESC-Exos ble de 16 unike miRNA-ene funnet å regulere autofagi, PI3K-AKT, Foxo, HIF-1, ErbB, mTOR, lang levetid, AMPK-vei, etc. (Fig. 6B). For de 27 unike miRNAene i hiPSC-Exos avslørte KEGG-analyse flere signifikante ontologier, inkludert metabolismen av xenobiotika, AGE-RAGE-signalering, mTOR-signalering, retinolmetabolisme, cellulær senescens, MAPK-signalering, etc. (Fig. 6C). I hUC-MSC-Exos ble de 61 unike miRNA-ene funnet å delta i reguleringen av PI3K-AKT-signalering, human papillomavirusinfeksjon, cGMP-PKG-signalering, cellulær senescens, Ras-signalering, mTOR-signalering, JAK-STAT-signalering, NF-κB signalering, etc. (fig. 6D).

Glykosid av cistanche kan også øke aktiviteten til SOD i hjerte- og levervev, og redusere innholdet av lipofuscin og MDA i hvert vev betydelig, effektivt rense ulike reaktive oksygenradikaler (OH-, H₂O₂, etc.) og beskytte mot DNA-skader forårsaket av OH-radikaler. Cistanche-fenyletanoidglykosider har en sterk renseevne for frie radikaler, en høyere reduserende evne enn vitamin C, forbedrer aktiviteten til SOD i sædsuspensjon, reduserer innholdet av MDA og har en viss beskyttende effekt på sædmembranfunksjonen. Cistanche-polysakkarider kan øke aktiviteten til SOD og GSH-Px i erytrocytter og lungevev hos eksperimentelt senescent mus forårsaket av D-galaktose, samt redusere innholdet av MDA og kollagen i lunge og plasma, og øke innholdet av elastin, har en god rensende effekt på DPPH, forlenger hypoksitiden hos eldre mus, forbedrer aktiviteten til SOD i serum og forsinker den fysiologiske degenerasjonen av lunge hos eksperimentelt eldre mus. Med cellulær morfologisk degenerasjon har eksperimenter vist at Cistanche har den gode antioksidantevnen og har potensial til å være et medikament for å forebygge og behandle aldringssykdommer. Samtidig har echinacoside i Cistanche en betydelig evne til å rense DPPH-frie radikaler og har evnen til å rense reaktive oksygenarter og forhindre frie radikal-indusert kollagen-nedbrytning, og har også en god reparasjonseffekt på anionskader av tymin frie radikaler.

Klikk på Cistanche Deserticola Supplement

【For mer informasjon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

MiRNA-komponentene bidrar indirekte sterkt til flere signalveier. For å undersøke interaksjonen mellom de unike miRNA-klyngene og kanoniske veier, utførte vi en regulatorisk nettverksanalyse ved å bruke IPA-databasen. IPA-resultater avslørte at de øverste lesetall miRNA-er (P<0.05, abundance>1000) i reguleringsnettverket ble kartlagt til flere kanoniske signalveier. miRNA-er og deres korresponderende veier er oppført i tilleggsfil 5. Ved å bruke hESC-Exos miRNA-er som eksempler, kan flere miRNA-er med høy overflod, inkludert has-miR-95-3p, has-miR-30a{{8} }p, has-miR- 181-5p, has-miR-183-3p og has-miR-301a-3p, var involvert i AMPK, autofagi, ErbB, lang levetid regulering, og FOXO-signalveien, blant andre. Cytoscape ble brukt til å tegne nettverket av unike miRNAer fra de tre exosomtypene og deres regulerte signalveier (tilleggsfil 1: Fig. S11).

miRNA-profiler relatert til pluripotensregulering

To investigate the regulatory effect of exosome-derived miRNAs on the pluripotency of stem cells, we predicted the target genes and screened the miRNAs involved in regulating the above process. Pluripotency-related miRNAs (abundance>1000) i de tre eksosomtypene er oppført (fig. 7A–C). De tre beste miRNA-ene i de tre eksosomtypene var has-miR-302b-3p, has-miR-302a-5p og has-miR{{9} }d-3p (hESC-Exos), has-miR-372-3p, has-miR-371a-5p og has-miR-221-3p (hiPSC-Exos), og has-miR-21-5p, has-miR-146a-5p og has-miR- 320a-3p ( hUC-MSC-Exos). Videre beskrev vi det regulatoriske nettverket til de ti beste miRNAene fra eksosomer og deres målgener involvert i pluripotensregulering (fig. 7D-F). Venn-diagramanalyse avdekket 12 overlappende miRNA-er, noe som indikerte at de kan være avgjørende miRNA-sett for å regulere pluripotensen til stamceller (fig. 7G–H).

Spesifikke proteiner og miRNA-er i de tre eksosomtypene

For ytterligere å bekrefte det faktiske uttrykket av spesifikke proteiner i de tre eksosomene, utførte vi western blotting for å oppdage kandidatproteiner i forskjellige veier (fig. 8A og B). For cellesyklusen ble tre avgjørende regulatoriske faktorer, MCM5, PCNA1 og CDK1, mer uttrykt i hESC-Exos og hiPSCExos enn i hUC-MSC-Exos. PRKAA1, som tilhører ser/thr-proteinkinasefamilien, er en cellulær energi, bevart faktor i alle eukaryote celler og viste en lignende belastning i de tre eksosomene. SYK er mye uttrykt i hematopoietiske celler og er involvert i koblingen av aktiverte immunreseptorer til nedstrøms signalhendelser. BTK spiller en avgjørende rolle i B-celleutvikling og immunregulering. Proteinbelastningene til SYK og BTK ble forhøyet i hUC-MSCExos sammenlignet med de i hESC-Exos eller hiPSC-Exos. Wnt5 er medlem av Wnt-genfamilien, som har vært involvert i utviklingsprosesser, inkludert regulering av celleskjebne og mønsterdannelse under embryogenese. hESC-Exos var de mest berikede i Wnt5, etterfulgt av hiPSC-Exos og hUC-Exos. RHEB er viktig for å regulere vekst og cellesyklusprogresjon gitt sin rolle i mTOR/S6K-signalveien. Western blotting indikerte at de tre eksosomtypene bar en lignende RHEB-belastning. EGFR er et celleoverflateprotein som binder den epidermale vekstfaktoren, og induserer dermed reseptordimerisering og tyrosinautofosforylering, noe som fører til celleproliferasjon. Både hESC-Exos og hUC-MSC-Exos hadde høyere EGFR-nivåer enn hiPSC-Exos gjorde. ICAM2 er medlem av den intercellulære adhesjonsmolekylfamilien (ICAM) og formidler adhesive interaksjoner som er viktige for antigenspesifikk immunrespons, NK-cellemediert clearance, lymfocyttresirkulasjon og andre cellulære interaksjoner som er viktige for immunrespons og overvåking. Blant de tre eksosomene hadde hUC-MSC-Exos det høyeste ICAM2-nivået. I tillegg ble de fem beste miRNAene i de tre eksosomtypene evaluert ved RT-qPCR, og deres uttrykk var i samsvar med RNA-sekvenseringsresultatene (fig. 8C).

Diskusjon

EV-er er rike på ulike biologisk aktive stoffer og består hovedsakelig av proteiner, nukleotider og lipider [3, 17]. De siste tiårene har forskningsmiljøet innledet gullalderen for analytiske teknikker for protein-, nukleotid- og lipidomics. Blant disse teknikkene muliggjør massespektrometri [14, 20] og high-throughput-sekvensering [6, 54] storskala screening og identifisering av EV-komponenter. To databaser, Vesiclepedia (https://microvesicles.org) [28] og Expedia (https://evpedia.info) [29], oppdateres kontinuerlig og gir et sammendrag av komponentene i henholdsvis pattedyr og ikke-pattedyr elbiler. . Som EV-er skiller eksosomer seg fra MV-er når det gjelder deres biologiske opprinnelse og fysiske dimensjoner [46]. Med kontinuerlige fremskritt innen elbiler, optimaliseres stadig nye metoder for å lette isolering og rensing av eksosomer, og oppfyller strengheten som trengs for komparativ analyse. For å fylle på eksosomdatabasene og utvide omfanget av deres kliniske anvendelser, beskriver vi i denne studien komponentrammeverket til eksosomer fra hESCs og hiPSCs, som ennå ikke er rapportert. Vi sammenlignet også deres sammensetning og biologiske funksjoner med de til hUC-MSC-avledede eksosomer. For dette formål arresterte vi eksosomer fra EV-er i anerkjente størrelser ved bruk av ultrasentrifugering kombinert med filtrering, unntatt MV-er og apoptotiske kropper, noe som gjorde det lettere å foredle eksosomkomponenter. Under den logaritmiske vekstfasen av cellene var de innsamlede CM-ene klare for eksosome-preparat. Partikkelkonsentrasjonen til hESC-Exos ble funnet å være betydelig høyere enn for hUC-MSC-Exos, men lik den til hiPSC-Exos. Lignende resultater ble oppnådd ved sammenligning av proteinkonsentrasjonene. I kontrast viste totale RNA-er en betydelig reduksjon i gradienter fra hESC-Exos og hiPSC-Exos til hUC-MSC-Exos. Disse resultatene indikerer at hESCs (H9) kan spille en sentral rolle i replikasjonsaktiviteten og har en sterkere evne til å skille ut eksosomer blant de tre stamcellene.

I tidligere studier har forskere fokusert på tilgjengeligheten til eksosomer [1, 11, 58] mens de er begrenset til sitt forskningsfelt. Som et resultat har mindre oppmerksomhet blitt viet til forskjellsanalyse mellom eksosomer avledet fra forskjellige kilder. Selv om noen EV-proteomikk av de tre stamcellene er utført, har forskerne ennå ikke forfinet dimensjonen til eksosomer [19, 32, 59], og analysemetoden er generelt basert på en enkelt massespektrometriteknikk. I denne studien ble både TMT- og LFQ-metoder brukt til å måle og kvantifisere proteinkomponentene til de isolerte eksosomer. Bioinformatikkanalyse avslørte at høyt belastede proteiner kunne koordinere prosessene for utvikling, skadereparasjon og metabolisme via intervenerende Wnt, AMPK, VEGF og cellesyklus signalveier, som var i samsvar med en tidligere rapport [19]. Tilsvarende kan hiPSC-Exos også delta i de ovennevnte biologiske prosessene ved å påvirke sikkerhetssignalene. Imidlertid viste EV-proteomikken til hiPSC-er indusert fra HFF-er en annen genontologioversikt, og fokuserte mer på prosessene med DNA-replikasjon og RNA-katabolisme [45]. Derfor utledet vi at eksosomer utskilt fra hiPSCs avledet fra forskjellige vev kan ha forskjellige proteinprofiler. Når det gjelder hUC-MSCs-Exos, blandet komponentene seg inn i mange immunmodulerende aktiviteter ved å regulere komplementsystem, mikrobiell infeksjon, NF-KB-signalering og så videre, og påvirket flere metabolske signaler, som kolesterolmetabolisme, fosfolipase D-metabolisme og purin metabolisme, og gir resultater som ligner de i tidligere rapporter [1, 59].

I denne studien sammenlignet vi proteomene til tre typer eksosomer parvis og analyserte deres eksklusive proteiner videre angående funksjonelle veier og regulatoriske nettverk. HiPSC-ene er en type pluripotente stamceller som kan genereres ved å omprogrammere somatiske celler for å etterligne pluripotensen til hESC-er [48], noe som viser at disse cellene ligner til en viss grad. Selv om deres eksosomproteiner var svært overlappende, ble de fra hESC-Exos beriket i utviklingsregulering og cellesyklusfunksjoner, noe som indikerer at hESC-Exos kan ha en sterkere evne til å regulere pluripotens enn hiPSC-Exos i vår studie. Pluripotensen til hUC-MSCs er dårligere enn hiPSCs og hESCs, som reflektert av deres spesielt forskjellige proteinprofiler. Proteomet til hUC-MSC-Exos skilte seg fra det til hESC-Exos og hiPSC-Exos i immunregulering, og ble beriket i proteiner som regulerer aktivitetene til naturlige drepeceller og komplementsystemet. Videre avslørte bioinformatikk av proteinene som deles av de tre eksosomtypene at oppreguleringen av hESC-Exos- eller hiPSC-Exos-proteiner fokuserte mer på metabolisme, utvikling og celleproliferasjonsfunksjoner ved å forstyrre klassiske signalveier som AMPK, Wnt, mTOR og cellesyklusen. Til sammenligning ble de oppregulerte proteinene til hUC-MSC-Exos ikke bare beriket i immunrelatert signalering, inkludert komplementsystemet, mikrobiell infeksjon, NF-KB-signalering og B-cellereseptorsignalering, men også i metabolske prosesser som PPAR-signalering. , kolesterolmetabolisme og MAPK-signalering.

Eksosomlaster er av unik vevs- og cellulær opprinnelse og inneholder miRNA [16]. Den nåværende studien viste også at eksosomer isolert fra CM-er produsert in vitro av hESC-er, hiPSC-er og hUC-MSC-er inneholdt særegne og spesifikke miRNA-signaturer. Vi fant ut at hver eksosomal miRNA hadde et unikt landskap. miRNA-ekspresjon og interaksjon med 3' eller 5' UTR av målgenene deres er involvert i komplekse fysiologiske og patofysiologiske aktiviteter [18]. De toppladede miRNA-ene av de tre exosomtypene regulerer en rekke biologiske prosesser, inkludert cellesyklusen og Hippo, Wnt, AMPK og TGF-signalering. Imidlertid hadde miRNA-profilene til hUC-MSC-Exos en sterkere immunmodulerende evne enn den til hESC-Exos eller hiPSC-Exos angående oppførselen til B- og T-celler, samt TNF-, JAK-STAT- og NF-KB-signalering. Spesielt var de fleste unike miRNA-profiler knyttet til regulering av autofagi, lang levetid, PI3K-Akt, mTOR, AMPK og p53-signalering, noe som indikerer at disse miRNA-klyngene kan modulere aldring, aldringsrelaterte sykdommer, vevsreparasjon etter skade og metabolisme . De unike miRNAene til hiPSC-Exos regulerer mTOR-signalering, cellulær senescens, retinolmetabolisme og TNF-signalering, som også bidrar til alderdom og metabolismeregulering. I tillegg til mTOR-signalering og cellesenescens, regulerer de unike miRNA-ene til hUC-MSC-Exos Foxo-, Jak-STAT- og NF-KB-signalering, som kan bidra til å omforme det metabolske og immune mikromiljøet. Analysen av delte miRNA-er blant de tre eksosomtypene støttet ytterligere disse forskjellene i signalregulering. Totalt sett koordinerte miRNA-klyngene i hESC-Exos eller hiPSC-Exos forekomsten av flere hendelser, for eksempel utvikling, cellesyklus og celledifferensiering. MiRNA-settet til hiPSC-Exos ser ut til å spille en mindre viktig rolle i disse funksjonene enn for hESC-Exos, men en viktigere rolle enn hUCMSC-Exos. Når det gjelder hUC-MSC-Exos, indikerer miRNA-profilene deres overlegne evne til å regulere immunmiljøet, spesielt ved sår- og infeksjonsheling.

I utviklingsbiologi fremmer eksosomer avledet fra pluripotente stamceller opprettholdelsen av den pluripotente tilstanden. Derfor bidrar miRNA-er som kommer inn i cellemikromiljøet betydelig til opprettholdelsen av stammen [4, 32]. De tre eksosomtypene i denne studien inneholdt forskjellige miRNA-klynger som regulerer pluripotent signalering. Likevel kan de 12 miRNAene som deles mellom de tre eksosomtypene være avgjørende for pluripotensregulering, inkludert miR- 21-5p, miR-92a-3p og miR-221-3p. Denne hypotesen gjenstår å bli testet, og flere stamcelletyper må undersøkes. I tillegg kan de overlappende miRNAene mellom hESC-Exos og hiPSC-Exos være involvert i celledifferensiering og omprogrammering, som indikert av resultatene fra mer detaljerte analyser. For eksempel var miR-302-familien sterkt beriket i og eksklusivt for hESC-Exos og hiPSC-Exos og bidro sterkt til å påvirke stamcelleadferd ved å modulere omprogrammering [33, 50]. Dette punktet samsvarer indirekte med tidligere forskning angående det unike ved miR-302 i ESC-er for mennesker og mus [33, 50]. Ekspresjonsanalyse av miRNA-klynger som ble sterkt uttrykt i ESC-er under den innledende fasen av omprogrammering avslørte induksjonen av miR-17 [41] og miR-106a/106b [37]. Overekspresjon av miR-93 fremmet en økning i koloniantallet av iPSCer [35].

Signalnettverket etablert av eksosome laster driver intracellulære hendelser, og griper videre inn i en rekke patologiske og fysiologiske prosesser [3]. Eksosomene til hESC-er inneholder en rekke ladede proteiner og miRNA-er som er spådd å regulere landskapet for utvikling, metabolisme og antialdring via blanding inn i AMPK-, mTOR- og Wnt-signalveiene og regulere autofagi, levetid og cellesyklus. Flere studier har fremhevet funksjonene til hESCEV-er for å forynge den aldrende hippocampus [25, 26], benmarg [19] og endotelceller [10], samt lindre tilbakevendende slitasjegikt ved å levere spesifikke proteiner eller miRNA-er [58]. Funnene våre støtter også tidligere forskning, der ESC-avledede elbiler ble funnet å ha positive implikasjoner for å gjenopprette nedsatt kardiovaskulær funksjon [5]. ESC-avledede EV-er gjorde det mulig å opprettholde stammen til ESC-er, og var dermed i stand til å omprogrammere [4], som er i tråd med resultatene våre for hESC-Exos-laster. I vår studie hadde hiPSCs omprogrammert fra navlestrengsceller biologiske funksjoner som ligner på hESC-Exos; Imidlertid har ingen rapporter spesifikt støttet denne teorien. Til sammenligning har hUC-MSC-Exos fått mer oppmerksomhet, og ulike prekliniske og kliniske studier har klarlagt deres terapeutiske effekt på flere sykdommer [51]. Selv om hUC-MSC-Exos bidrar til vevsregenerering og vevsremodellering, er disse evnene dårligere enn hESC-Exos og hiPSC-Exos. Vår analyse viste at hUC-MSC-Exos viste utmerket immunreguleringsevne. Disse funnene gir grunnlag for videre forskning på betennelsesrelaterte sykdommer som COVID-19 [2].

Konklusjoner

Totalt sett er hESC-Exos enestående i å regulere utvikling, metabolisme og anti-aldring, hiPSC-Exos har lignende biologiske funksjoner, men er dårligere enn hESC-Exos. Til sammenligning bidrar hUC-MSC-Exos mer til immunregulering. Analysen vår utvider anvendelsesomfanget til hESC-Exos, hiPSCs og hUC-MSC-Exos og fremhever deres respektive fordeler ved intervensjon av sykdomsrelatert signalering. Så vidt vi vet, er denne studien den første som rapporterer en systematisk og omfattende analyse av eksosome proteomikk og miRNA-profiler av hESCs, hiPSCs og hUC-MSCs. Vår studie beriker de nåværende EV-databasene ytterligere, og letter utvinningen av mer verdifulle data for identifisering av passende acellulære terapier i kliniske omgivelser. Disse eksosomene imøtekommer også medikamentutvikling som et alternativt leveringssystem for å erstatte virusleveringssystemer som adenovirus [7]. Selv om nåværende spådommer mangler betydelig validering, kan disse funnene avsløre ytterligere individuelle eller felles anvendelser av de tre eksosomer i preklinisk eller klinisk forskning. Videre kan fremtidig forskning også utføres via den integrerte differensialanalysen av eksosomlaster med elbiler, så vel som av komponentene i selve cellene.

Forkortelser

MSC: Mesenkymal stamcelle; hESCs: Humane embryonale stamceller; hiPSCs: Human-induserte pluripotente stamceller; hUC-MSCs: Humane navlestrengs mesenkymale stamceller; TMT: Tandem massemerke; LFQ: Etikettfri relativ peptidkvantifisering; hESC-Exos: Eksosomer avledet av humane embryonale stamceller; hiPSC-Exos: Eksosomer avledet av humane embryonale stamceller; hUC-MSC-Exos: Eksosomer avledet av humane navlestreng mesenkymale stamceller; EVs: Ekstracellulære vesikler; MVer: mikrovesikler; Alix: Apoptose-koblet gen 2-som interagerer med protein X; TSG101: Tumorfølsomhetsgen 101; HFFs: Menneskelige forhudsfibroblaster; CAM-er: Celleadhesjonsmolekyler; TEM: Transmisjonselektronmikroskopi; PDI: Polydispersitet; TEAB: Tetraetylammoniumbromid; DEPs: Differensielt uttrykte proteiner; FDR: Falske oppdagelsesrater.

Anerkjennelser

Vi er takknemlige til Xueke Tan, Zhongshuang Lv og Xixia Li for å ha hjulpet med forberedelse av elektronmikroskopiprøver og tatt TEM-bilder ved Center for Biological Imaging (CBI), Institute of Biophysics, Chinese Academy of Science. Forfatterne takker også Dr. Baohua Zou fra Institute of Biophysics Chinese Academy of Sciences for hennes vennlige hjelp til viktig lesing og forslag.

Forfatterbidrag

YB, YZ og JG unnfanget og designet eksperimentene. YB og XQ utførte eksosomisolering og identifikasjon. YB, XQ, QL, SS, KZ, XQ, XZ, CJ, HW og ZY bidro til bioinformatikkanalysen. YB, YZ og JG skrev papiret. Alle forfattere har lest og godkjent manuskriptet.

Finansiering

Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra National Key Research and Development Project (2019YFA0110400 til GJ), National Foundation of Sciences and Technology (31971051, 31771562 til GJ), og Dalian kommunale Dengfeng Clinical Medicine Grant Support (2021024 til YZ).

Tilgjengelighet av data og materialer

Alle datasett brukt og/eller analysert i løpet av den nåværende studien er tilgjengelig fra den tilsvarende forfatteren på rimelig forespørsel. Alle forfattere har bekreftet at en sitering for tilgjengelige data i referansedelen ble inkludert.

Erklæringer

Etikkgodkjenning og samtykke til å delta

Forfatterne erklærer ingen potensiell interessekonflikt.

Samtykke til publisering

Ikke aktuelt.

Forfatterdetaljer

1 Key Laboratory of Interdisciplinary Research, Institute of Biophysics, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, Kina. 2 University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, Kina. 3 Avdeling for medisinsk onkologi, det andre tilknyttede sykehuset ved Dalian Medical University, Dalian 116023, Kina. 4 Sjette avdeling for leversykdom, Dalian Public Health Clinical Center, Dalian Medical University, Dalian 116023, Kina.

Referanser

1. Abbaszadeh H, Ghorbani F, Derakhshani M, Movassaghpour A, Yousef M. Human navlestreng mesenkymale stamcelle-avledede ekstracellulære vesikler: et nytt terapeutisk paradigme. J Cell Physiol. 2020;235(2):706–17.

2. Abdelgawad M, Bakry NS, Farghali AA, Abdel-Latif A, Lotfy A. Mesenchymal stamcelle-basert terapi og eksosomer i COVID-19: nåværende trender og prospekter. Stamcelle Res Ther. 2021;12(1):469.

3. Abels ER, Breakefeld XO. Introduksjon til ekstracellulære vesikler: biogenese, RNA-lastseleksjon, innhold, frigjøring og opptak. Cell Mol Neurobiol. 2016;36(3):301–12.

4. Baumann K. elbiler fremmer stemness. Nat Rev Mol Cell Biol. 2021;22(2):72– 3.

5. Bei Y, Das S, Rodosthenous RS, Holvoet P, Vanhaverbeke M, Monteiro MC, Monteiro VVS, Radosinska J, Bartekova M, Jansen F, Li Q, Rajasingh J, Xiao J. Ekstracellulære vesikler i kardiovaskulær teranostics. Teranostikk. 2017;7(17):4168–82.

6. Bellingham SA, Coleman BM, Hill AF. Små RNA-dypsekvensering avslører en distinkt miRNA-signatur frigitt i eksosomer fra prion-infiserte nevronceller. Nucleic Acids Res. 2012;40(21):10937–49.

7. Bi Y, Gu L, Wang J, Chang Y, Jin M, Mao Y, Wang H, Ji G. Et nytt system for enkel rask adenoviral vektorkonstruksjon for å lette CRISPR/Cas9--mediert genomredigering. CRISPR J. 2021;4(3):381–91.

8. Bi Y, Guo X, Zhang M, Zhu K, Shi C, Fan B, Wu Y, Yang Z, Ji G. Benmargsavledede mesenkymale stamceller forbedrer diabetesassosiert fettlever via mitokondrietransformasjon hos mus. Stamcelle Res Ther. 2021;12(1):602.

9. Bissels U, Wild S, Tomiuk S, Holste A, Hafner M, Tuschl T, Bosio A. Absolutt kvantifisering av mikroRNA ved bruk av en universell referanse. RNA. 2009;15(12):2375–84.

10. Chen B, Sun Y, Zhang J, Zhu Q, Yang Y, Niu X, Deng Z, Li Q, Wang Y. Eksosomer avledet av menneskelige embryonale stamceller fremmer trykksårheling hos gamle mus ved å forynge senescent endotelceller. Stamcelle Res Ther. 2019;10(1):142.

11. Chen L, Xiang B, Wang X, Xiang C. Eksosomer avledet fra menneskelige menstruasjonsblod-avledede stamceller lindrer fulminant leversvikt. Stamcelle Res Ther. 2017;8(1):9.

12. Chiang HR, Schoenfeld LW, Ruby JG, Auyeung VC, Spies N, Baek D, Johnston WK, Russ C, Luo S, Babiarz JE, Blelloch R, Schroth GP, Nusbaum C, Bartel DP. Pattedyrs mikroRNA: eksperimentell evaluering av nye og tidligere kommenterte gener. Genes Dev. 2010;24(10):992–1009.

13. Choi DS, Choi DY, Hong BS, Jang SC, Kim DK, Lee J, Kim YK, Kim KP, Gho YS. Kvantitativ proteomikk av ekstracellulære vesikler avledet fra humane primære og metastatiske kolorektale kreftceller. J Ekstracellevesikler. 2012.

14. Choi DS, Kim DK, Kim YK, Gho YS. Proteomikk av ekstracellulære vesikler: eksosomer og eksosomer. Mass Spectrum Rev. 2015;34(4):474–90.

15. Colombo M, Moita C, van Niel G, Kowal J, Vigneron J, Benaroch P, Manel N, Moita LF, Théry C, Raposo G. Analyse av ESCRT-funksjoner i eksosom biogenese, sammensetning og sekresjon fremhever heterogeniteten til ekstracellulært vesikler. J Cell Sci. 2013;126(Pt 24):5553–65.

16. Colombo M, Raposo G, Théry C. Biogenese, sekresjon og intercellulære interaksjoner av eksosomer og andre ekstracellulære vesikler. Annu Rev Cell Dev Biol. 2014;30:255–89.

17. Dai J, Su Y, Zhong S, Cong L, Liu B, Yang J, Tao Y, He Z, Chen C, Jiang Y. Eksosomer: nøkkelaktører innen kreft og potensiell terapeutisk strategi. Signal Transduct Target Ther. 2020;5(1):145.

18. Gangaraju VK, Lin H. MicroRNAs: nøkkelregulatorer av stamceller. Nat Rev Mol Cell Biol. 2009;10(2):116–25.

19. Gong L, Chen B, Zhang J, Sun Y, Yuan J, Niu X, Hu G, Chen Y, Xie Z, Deng Z, Li Q, Wang Y. Human ESC-sEVs lindrer aldersrelatert bentap ved å forynge aldrende benmargsavledede mesenkymale stamceller. J Ekstracellevesikler. 2020;9(1):1800971.

20. Haraszti RA, Didiot MC, Sapp E, Leszyk J, Shafer SA, Rockwell HE, Gao F, Narain NR, DiFiglia M, Kiebish MA, Aronin N, Khvorova A. Høyoppløselig proteomisk og lipidomisk analyse av eksosomer og mikrovesikler fra forskjellige cellekilder. J Ekstracellevesikler. 2016;5:32570.

21. He C, Zheng S, Luo Y, Wang B. Exosome theranostics: biologi and translational medicine. Teranostikk. 2018;8(1):237–55.

22. Hessvik NP, Llorente A. Aktuell kunnskap om eksosom biogenese og frigjøring. Cell Mol Life Sci. 2018;75(2):193–208.

23. Hinna A, Steiniger F, Hupfeld S, Stein P, Kuntsche J, Brandl M. Filterextruded liposomes revisited: a study into size distributions and morphologys about lipid-composition and process parameters. J Liposome Res. 2016;26(1):11–20.

24. Hsu C, Morohashi Y, Yoshimura S, Manrique-Hoyos N, Jung S, Lauterbach MA, Bakhti M, Grønborg M, Möbius W, Rhee J, Barr FA, Simons M. Regulation of exosome secret by Rab35 and its GTPase- aktiverende proteiner TBC1D10A-C. J Cell Biol. 2010;189(2):223–32.

25. Hu G, Xia Y, Chen B, Zhang J, Gong L, Chen Y, Li Q, Wang Y, Deng Z. ESC-sEVs forynger aldrende hippocampale NSCs ved å overføre SMADs for å regulere MYT1-Egln{ {3}}Sirt1-akse. Mol Ther. 2021;29(1):103–20.

26. Hu G, Xia Y, Zhang J, Chen Y, Yuan J, Niu X, Zhao B, Li Q, Wang Y, Deng Z. ESC-sEVs forynger senescent hippocampus NSCs ved å aktivere lysosomer for å forbedre kognitiv dysfunksjon ved vaskulær demens. Adva Sci. 2020;7(10):1903330.

27. Huang H, Xiong Q, Wang N, Chen R, Ren H, Siwko S, Han H, Liu M, Qian M, Du B. Kisspeptin/GPR54-signalering begrenser antiviral medfødt immunrespons gjennom å regulere calcineurin-fosfataseaktivitet. Sci Adv. 2018;4(8):9784.

28. Kalra H, Simpson RJ, Ji H, Aikawa E, Altevogt P, Askenase P, Bond VC, Borràs FE, Breakefeld X, Budnik V, Buzas E, Camussi G, Clayton A, Cocucci E, Falcon-Perez JM, Gabrielsson S, Gho YS, Gupta D, Harsha HC, Hendrix A, Hill AF, Inal JM, Jenster G, Krämer-Albers EM, Lim SK, Llorente A, Lötvall J, Marcilla A, Mincheva-Nilsson L, Nazarenko I, Nieuwland R , Nolte-'t Hoen EN, Pandey A, Patel T, Piper MG, Pluchino S, Prasad TS, Rajendran L, Raposo G, Record M, Reid GE, Sánchez-Madrid F, Schifelers RM, Siljander P, Stensballe A, Stoorvogel W, Taylor D, Thery C, Valadi H, van Balkom BW, Vázquez J, Vidal M, Wauben MH, Yáñez-Mó M, Zoeller M, Mathivanan S. Vesiclepedia: a compendium for extracellular vesicles with continuous community annotation. PLoS Biol. 2012;10(12): e1001450.

29. Kim DK, Kang B, Kim OY, Choi DS, Lee J, Kim SR, Go G, Yoon YJ, Kim JH, Jang SC, Park KS, Choi EJ, Kim KP, Desiderio DM, Kim YK, Lötvall J, Hwang D, Gho YS. Expedia: en integrert database med data med høy gjennomstrømning for systemiske analyser av ekstracellulære vesikler. J Ekstracellevesikler. 2013.

30. Kim KI, van de Wiel MA. Effekter av avhengighet i høydimensjonale multiple testproblemer. BMC Bioinf. 2008;9:114.

31. Kingham E, Orefo RO. Embryonale og induserte pluripotente stamceller: forstå, skape og utnytte nano-nisjen for regenerativ medisin. ACS Nano. 2013;7(3):1867–81.

32. La Greca A, Solari C, Furmento V, Lombardi A, Biani MC, Aban C, Moro L, García M, Guberman AS, Sevlever GE, Miriuka SG, Luzzani C. Ekstracellulære vesikler fra pluripotente stamcelleavledede mesenkymale stamceller tilegne seg et stromalmodulerende proteomisk mønster under differensiering. Exp Mol Med. 2018;50(9):1–12.

33. Li HL, Wei JF, Fan LY, Wang SH, Zhu L, Li TP, Lin G, Sun Y, Sun ZJ, Ding J, Liang XL, Li J, Han Q, Zhao RC. miR-302 regulerer pluripotens, teratomdannelse og differensiering i stamceller via en AKT1/OCT4-avhengig måte. Celledød Dis. 2016;7(1): e2078.

34. Li P, Kaslan M, Lee SH, Yao J, Gao Z. Fremgang i eksosome isolasjonsteknikker. Teranostikk. 2017;7(3):789–804.

35. Li Z, Yang CS, Nakashima K, Rana TM. Liten RNA-mediert regulering av generering av iPS-celler. EMBO J. 2011;30(5):823–34.

36. Liang G, Zhang Y. Embryonal stamcelle og indusert pluripotent stamcelle: et epigenetisk perspektiv. Cell Res. 2013;23(1):49–69.

37. Lüningschrör P, Hauser S, Kaltschmidt B. Kaltschmidt C (2013) MicroRNAs in pluripotency, reprogrammering and cell fate induction. Biochim Biophys Acta. 1833;8:1894–903.

38. Maas SLN, Breakefeld XO, Weaver AM. Ekstracellulære vesikler: unike intercellulære leveringsbærere. Trender Cell Biol. 2017;27(3):172–88.

39. Martínez-Greene JA, Hernández-Ortega K, Quiroz-Baez R, ResendisAntonio O, Pichardo-Casas I, Sinclair DA, Budnik B, Hidalgo-Miranda A, Uribe-Querol E, Ramos-Godínez MDP, Martínez-Martínez Kvantitativ proteomisk analyse av ekstracellulære vesikkelundergrupper isolert ved en optimalisert metode som kombinerer polymerbasert utfelling og størrelseseksklusjonskromatografi. J Ekstracellevesikler. 2021;10(6): e12087.

40. Mathieu M, Martin-Jaular L, Lavieu G, Théry C. Spesifisiteter for sekresjon og opptak av eksosomer og andre ekstracellulære vesikler for celle-til-celle kommunikasjon. Nat Cell Biol. 2019;21(1):9–17.

41. Mogilyansky E, Rigoutsos I. MiR-17/92-klyngen: en omfattende oppdatering om dens genomikk, genetikk, funksjoner og stadig viktigere og tallrike roller innen helse og sykdom. Celledød er forskjellig. 2013;20(12):1603–14.

42. Nguyen HQ, Lee D, Kim Y, Bang G, Cho K, Lee YS, Yeon JE, Lubman DM, Kim J. Merkefri kvantitativ proteomisk analyse av ekstracellulære serumvesikler som skiller pasienter med alkoholiske og ikke-alkoholiske fettleversykdommer. J Proteomics. 2021;245: 104278.

43. Pittenger MF, Discher DE, Péault BM, Phinney DG, Hare JM, Caplan AI. Mesenkymalt stamcelleperspektiv: cellebiologi til klinisk fremgang. NPJ Regen Med. 2019;4:22.

44. Pocsfalvi G, Stanly C, Vilasi A, Fiume I, Capasso G, Turiák L, Buzas EI, Vékey K. Massespektrometri av ekstracellulære vesikler. Mass Spectrum Rev. 2016;35(1):3–21.

45. Questa M, Romorini L, Blüguermann C, Solari CM, Neiman G, Luzzani C, Scassa MÉ, Sevlever GE, Guberman AS, Miriuka SGa. Generering av iPSC-linje iPSC-FH2.1 under hypoksiske tilstander fra humane forhudsfibroblaster. Stamcelle Res. 2016;16(2):300–3.

46. ​​Raposo G, Stoorvogel W. Ekstracellulære vesikler: eksosomer, mikrovesikler og venner. J Cell Biol. 2013;200(4):373–83.

47. Ela S, Mäger I, Breakefeld XO, Wood MJ. Ekstracellulære vesikler: biologi og nye terapeutiske muligheter. Nat Rev Drug Discov. 2013;12(5):347–57.

48. Shi Y, Inoue H, Wu JC, Yamanaka S. Indusert pluripotent stamcelleteknologi: et tiår med fremgang. Nat Rev Drug Discov. 2017;16(2):115–

49. Skotland T, Sandvig K, Llorente A. Lipider i eksosomer: Aktuell kunnskap og veien videre. Prog Lipid Res. 2017;66:30–41.

50. Subramanyam D, Lamouille S, Judson RL, Liu JY, Bucay N, Derynck R, Blelloch R. Flere mål for miR-302 og miR-372 fremmer omprogrammering av humane fibroblaster til induserte pluripotente stamceller. Nat Biotechnol. 2011;29(5):443–8.

51. Tang Y, Zhou Y, Li HJ. Fremskritt i mesenkymale stamcelle-eksosomer: en gjennomgang. Stamcelle Res Ther. 2021;12(1):71.

52. Théry C, Witwer KW, Aikawa E, Alcaraz MJ, Anderson JD, Andriantsitohaina R, Antoniou A, Arab T, Archer F, Atkin-Smith GK, Ayre DC, Bach JM, Bachurski D, Baharvand H, Balaj L, Baldacchino S, Bauer NN, Baxter AA, Bebawy M, Beckham C, Bedina Zavec A, Benmoussa A, Berardi AC, Bergese P, Bielska E, Blenkiron C, Bobis-Wozowicz S, Boilard E, Boireau W, Bongiovanni A, Borràs FE, Bosch S, Boulanger CM, Breakefeld X, Breglio AM, Brennan M, Brigstock DR, Brisson A, Broekman ML, Bromberg JF, Bryl-Górecka P, Buch S, Buck AH, Burger D, Busatto S, Buschmann D, Bussolati B, Buzás EI, Byrd JB, Camussi G, Carter DR, Caruso S, Chamley LW, Chang YT, Chen C, Chen S, Cheng L, Chin AR, Clayton A, Clerici SP, Cocks A, Cocucci E, Cofey RJ, Cordeiro- da-Silva A, Couch Y, Coumans FA, Coyle B, Crescitelli R, Criado MF, D'Souza-Schorey C, Das S, Datta Chaudhuri A, de Candia P, De Santana EF, De Wever O, Del Portillo HA, Demaret T, Deville S, Devitt A, Dhondt B, Di Vizio D, Dieterich LC, Dolo V, Dominguez Rubio AP, Dominici M, Dourado MR, Driedonks TA, Duarte FV, Duncan HM, Eichenberger RM, Ekström K, El Andaloussi S , Elie-Caille C, Erdbrügger U, Falcón-Pérez JM, Fatima F, Fish JE, Flores-Bellver M, Försönits A, FreletBarrand A, Fricke F, Fuhrmann G, Gabrielsson S, Gámez-Valero A, Gardiner C, Gärtner K , Gaudin R, Gho YS, Giebel B, Gilbert C, Gimona M, Giusti I, Goberdhan DC, Görgens A, Gorski SM, Greening DW, Gross JC, Gualerzi A, Gupta GN, Gustafson D, Handberg A, Haraszti RA, Harrison P, Hegyesi H, Hendrix A, Hill AF, Hochberg FH, Hofmann KF, Holder B, Holthofer H, Hosseinkhani B, Hu G, Huang Y, Huber V, Hunt S, Ibrahim AG, Ikezu T, Inal JM, Isin M, Ivanova A, Jackson HK, Jacobsen S, Jay SM, Jayachandran M, Jenster G, Jiang L, Johnson SM, Jones JC, Jong A, Jovanovic-Talisman T, Jung S, Kalluri R, Kano SI, Kaur S, Kawamura Y, Keller ET, Khamari D, Khomyakova E, Khvorova A, Kierulf P, Kim KP, Kislinger T, Klingeborn M, Klinke DJ, Kornek M, Kosanović MM, Kovács ÁF, Krämer-Albers EM, Krasemann S, Krause M, Kurochkin IV, Kusuma GD, Kuypers S, Laitinen S, Langevin SM, Languino LR, Lannigan J, Lässer C, Laurent LC, Lavieu G, Lázaro-Ibáñez E, Le Lay S, Lee MS, Lee YXF, Lemos DS, Lenassi M, Leszczynska A , Li IT, Liao K, Libregts SF, Ligeti E, Lim R, Lim SK, Linē A, Linnemannstöns K, Llorente A, Lombard CA, Lorenowicz MJ, Lörincz ÁM, Lötvall J, Lovett J, Lowry MC, Loyer X, Lu Q, Lukomska B, Lunavat TR, Maas SL, Malhi H, Marcilla A, Mariani J, Mariscal J, Martens-Uzunova ES, Martin-Jaular L, Martinez MC, Martins VR, Mathieu M, Mathivanan S, Maugeri M, McGinnis LK , McVey MJ, Meckes DG Jr, Meehan KL, Mertens I, Minciacchi VR, Möller A, Møller Jørgensen M, Morales-Kastresana A, Morhayim J, Mullier F, Muraca M, Musante L, Mussack V, Muth DC, Myburgh KH, Najrana T, Nawaz M, Nazarenko I, Nejsum P, Neri C, Neri T, Nieuwland R, Nimrichter L, Nolan JP, Nolte-'t Hoen EN, Noren Hooten N, O'Driscoll L, O'Grady T, O' Loghlen A, Ochiya T, Olivier M, Ortiz A, Ortiz LA, Osteikoetxea X, Østergaard O, Ostrowski M, Park J, Pegtel DM, Peinado H, Perut F, Pfaf MW, Phinney DG, Pieters BC, Pink RC, Pisetsky DS , Pogge von Strandmann E, Polakovicova I, Poon IK, Powell BH, Prada I, Pulliam L, Quesenberry P, Radeghieri A, Rafai RL, Raimondo S, Rak J, Ramirez MI, Raposo G, Rayyan MS, Regev-Rudzki N, Ricklefs FL, Robbins PD, Roberts DD, Rodrigues SC, Rohde E, Rome S, Rouschop KM, Rughetti A, Russell AE, Saá P, Sahoo S, Salas-Huenuleo E, Sánchez C, Saugstad JA, Saul MJ, Schifelers RM, Schneider R, Schøyen TH, Scott A, Shahaj E, Sharma S, Shatnyeva O, Shekari F, Shelke GV, Shetty AK, Shiba K, Siljander PR, Silva AM, Skowronek A, Snyder OL 2nd, Soares RP, Sódar BW, Soekmadji C, Sotillo J, Stahl PD, Stoorvogel W, Stott SL, Strasser EF, Swift S, Tahara H, Tewari M, Timms K, Tiwari S, Tixeira R, Tkach M, Toh WS, Tomasini R, Torrecilhas AC, Tosar JP, Toxavidis V, Urbanelli L, Vader P, van Balkom BW, van der Grein SG, Van Deun J, van Herwijnen MJ, Van Keuren-Jensen K, van Niel G, van Royen ME, van Wijnen AJ, Vasconcelos MH, Vechetti IJ Jr. , Veit TD, Vella LJ, Velot É, Verweij FJ, Vestad B, Viñas JL, Visnovitz T, Vukman KV, Wahlgren J, Watson DC, Wauben MH, Weaver A, Webber JP, Weber V, Wehman AM, Weiss DJ, Welsh JA, Wendt S, Wheelock AM, Wiener Z, Witte L, Wolfram J, Xagorari A, Xander P, Xu J, Yan X, YáñezMó M, Yin H, Yuana Y, Zappulli V, Zarubova J, Žėkas V, Zhang JY, Zhao Z, Zheng L, Zheutlin AR, Zickler AM, Zimmermann P, Zivkovic AM, Zocco D, Zuba-Surma EK. Minimal informasjon for studier av ekstracellulære vesikler 2018 (MISEV2018): en posisjonserklæring fra det internasjonale samfunnet for ekstracellulære vesikler og en oppdatering av MISEV2014-retningslinjene. J Ekstracellevesikler. 2018;7(1):1535750.

53. Théry C, Zitvogel L, Amigorena S. Eksosomer: sammensetning, biogenese og funksjon. Nat Rev Immunol. 2002;2(8):569–79.

54. Tosar JP, Gámbaro F, Sanguinetti J, Bonilla B, Witwer KW, Cayota A. Vurdering av små RNA-sortering i forskjellige ekstracellulære fraksjoner avslørt ved høykapasitets sekvensering av brystcellelinjer. Nucleic Acids Res. 2015;43(11):5601–16.

55. Trajkovic K, Hsu C, Chiantia S, Rajendran L, Wenzel D, Wieland F, Schwille P, Brügger B, Simons M. Ceramid utløser knoppskyting av eksosomvesikler til multivesikulære endosomer. Vitenskap. 2008;319(5867):1244–7.

56. Vader P, Mol EA, Pasterkamp G, Schifelers RM. Ekstracellulære vesikler for medikamentlevering. Adv Drug Deliv Rev. 2016;106(Pt A):148–56.

57. van Niel G, D'Angelo G, Raposo G. Kaster lys på cellebiologien til ekstracellulære vesikler. Nat Rev Mol Cell Biol. 2018;19(4):213–28.

58. Wang Y, Yu D, Liu Z, Zhou F, Dai J, Wu B, Zhou J, Heng BC, Zou XH, Ouyang H, Liu H. Eksosomer fra embryonale mesenkymale stamceller lindrer slitasjegikt gjennom å balansere syntese og nedbrytning av brusk ekstracellulær matrise. Stamcelle Res Ther. 2017;8(1):189.

59. Wang ZG, He ZY, Liang S, Yang Q, Cheng P, Chen AM. Omfattende proteomisk analyse av eksosomer avledet fra menneskelig benmarg, fettvev og mesenkymale stamceller fra navlestrengen. Stamcelle Res Ther. 2020;11(1):511.

60. Xie C, Mao X, Huang J, Ding Y, Jianmin W, Dong S, Kong L, Gao G, Li CY, Wei L. KOBAS 2.0: en webserver for merknader og identifikasjon av berikede veier og sykdommer. Nucleic Acids Res. 2011;39(tillegg_2): W316–22.

61. Xu R, Rai A, Chen M, Suwakulsiri W, Greening DW, Simpson RJ. Ekstracellulære vesikler i kreft: implikasjoner for fremtidige forbedringer i kreftomsorg. Nat Rev Clin Oncol. 2018;15(10):617–38.

62. Yáñez-Mó M, Siljander PR, Andreu Z, Zavec AB, Borràs FE, Buzas EI, Buzas K, Casal E, Cappello F, Carvalho J, Colás E, Cordeiro-da Silva A, Fais S, Falcon-Perez JM , Ghobrial IM, Giebel B, Gimona M, Graner M, Gursel I, Gursel M, Heegaard NH, Hendrix A, Kierulf P, Kokubun K, Kosanovic M, Kralj-Iglic V, Krämer-Albers EM, Laitinen S, Lässer C, Lener T, Ligeti E, Linē A, Lipps G, Llorente A, Lötvall J, Manček-Keber M, Marcilla A, Mittelbrunn M, Nazarenko I, Nolte-'t Hoen EN, Nyman TA, O'Driscoll L, Olivan M, Oliveira C, Pállinger É, Del Portillo HA, Reventós J, Rigau M, Rohde E, Sammar M, Sánchez-Madrid F, Santarém N, Schallmoser K, Ostenfeld MS, Stoorvogel W, Stukelj R, Van der Grein SG, Vasconcelos MH, Wauben MH, De Wever O. Biologiske egenskaper til ekstracellulære vesikler og deres fysiologiske funksjoner. J Ekstracellevesikler. 2015;4:27066.

Utgivers notat

Springer Nature forblir nøytral om jurisdiksjonskrav i publiserte kart og institusjonelle tilknytninger.

【For mer informasjon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】