Effekten av diettholdige humiske stoffer på cellulær immunitet og blodkarakteristikker hos smågriser

Abstrakt: Målet med denne studien var å bestemme virkningen av humusstoffer i kosten på immunrespons og blodprofiler hos smågriser. Totalt 24 krysningsgriser (slovakisk hvit × landrase; 35 dager gammel; gjennomsnittlig kroppsvekt på 11,67 kg) ble tildelt to diettgrupper med (eksperimentell; 5 g·kg−1 ) eller uten (kontroll; 0 g·kg−1 ) tilskudd av naturlige humusstoffer. I denne studien observerte vi en signifikant økning i andelen CD4+CD8--lymfocytter (p < {{10}}.001) i forsøksgruppen. Resultatene viste også en tendens til en økning av fagocyttaktiviteten og oppslukingskapasiteten til fagocytter og antallet andre overvåkede lymfocyttsubpopulasjoner (CD3+, CD21+, CD4-D 8+, CD4+CD8+, CD4+CD25+) hos smågriser i forsøksgruppen sammenlignet med kontrollgruppen. Tilskudd av humusstoffer økte serum alkalisk fosfatase sammenlignet med kontrollgruppen (p < 0,05). Andre overvåkede blodparametre ble ikke signifikant påvirket av diettbehandling. Den konkluderte med at inkludering av humusstoffer i dietten til smågriser kunne ha en stimulerende effekt på cellulær immunitet, uten negativ effekt på hematologiske og biokjemiske parametere.

Nøkkelord: humusstoffer; fagocytose; lymfocytt; blod biokjemi; hematologi; smågriser

cistanche supplement fordeler-hvordan styrke immunforsvaret

1. Introduksjon

Humusstoffer (HS) er en klasse av ikke-ernæringsmessige naturlige organiske bioaktive forbindelser dannet i jord [1]. De er viktige humuskomponenter hvis primære funksjon er å overføre næringsstoffer fra jorda til levende organismer. HS inkluderer spesifikt humussyre, fulvinsyre og humin som deres hovedbestanddeler [2]. Disse komponentene er essensielle for plantevekst [3] og kan fremme effektiv utnyttelse av næringsstoffer av planten [4]. På grunn av forbudet mot bruk av antibiotika som vekstfremmere i EU, har interessen for alternative fôrtilsetningsstoffer for animalsk produksjon økt [5]. De siste to tiårene har interessen for bruk av HS i dyrefôr økt [2,6]. Mange forfattere observerte en forbedring i produksjonsparametrene etter tilsetning av HS i fôr under studiene. De siste årene har det vist seg at HS tilsatt fôr til enmagede dyr som svin, fjærfe og kaniner fremmer vekst [7–10]. Videre har HS blitt brukt som et immunstimulerende, antidiaré-, smertestillende og antimikrobielt middel i veterinærpraksis [11–13]. Tilsetningen av biologisk aktive tilskudd av humisk natur til dietten til dyr stimulerte metabolske prosesser og fordøyelighet av næringsstoffer og aktiverte også absorpsjonen av noen mineralelementer [14]. Andre studier fant at HS bidrar til å redusere ammoniakkutskillelse fra gjødsel og forbedrer det relative antallet blodlymfocytter. Modifikasjonene nevnt ovenfor hjelper dyrenes immunitet [2,8,15]. På grunn av de forskjellige kildene og typene av HS-preparater, samt det faktum at det ikke finnes en enkelt standard for måling av ekte HS-effekter, avhenger deres bioeffekt av spesifikasjoner. Basert på våre tidligere resultater og erfaringer fra fjørfestudier (broilere og verpehøner) på effekten av humusstoffer (i konsentrasjoner på henholdsvis 0,8 % og 0,5 %) på immunstatusen og immunrespons bestemte vi oss for å verifisere denne effekten hos smågriser. Vi observerte en signifikant økning i fagocyttaktivitet og B-cellerespons, samt en signifikant økning i CD4+:CD8+ lymfocyttforhold [16,17]. Generelt er tilskudd som fôrtilsetning hos griser lite rapportert sammenlignet med fjørfe, og vitenskapelige studier om påvirkning av HS-tilskudd i grisers diett på immunitet og metabolisme er fortsatt relativt begrenset. Derfor ble denne studien, som et pilotforsøk, utført for å vurdere effekten av 0,5 % HS-tilskudd på immunindikatorene, samt biokjemiske og hematologiske variabler i blodet til smågriser.

cistanche supplement fordeler-hvordan styrke immunforsvaret

Klikk her for å se Cistanche Enhance Immunity-produkter

【Be om mer】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2. Materialer og metoder

2.1. Eksperimentelt design

Forsøket ble utført i samsvar med «European Directive on the Protection of animals used for scientific purposes» [18]. Dyrene ble holdt i akkrediterte staller ved Institutt for dyreernæring og husdyrhold ved Universitetet for veterinærmedisin i Košice, Slovakia, under påkrevde dyrehygieniske forhold. Under forsøket var gjennomsnittstemperaturen i stallen 20,2 ± 1,5 ◦C, og den relative fuktigheten var 68,5 ± 4,8 %. Forsøket ble godkjent av den etiske kommisjonen ved Universitetet for veterinærmedisin og farmasi i Košice (protokollnr. EKV/2022-11). Totalt 24 kryssede (slovakisk hvit x landrase) 35-daggamle grisunger ble delt inn i to grupper (n=12; 50 % hanner og 50 % hunner i begge grupper). Før forsøksstart ble en initial gjennomsnittlig dyrekroppsvekt (BW) på 11,68 ± 1,35 kg i kontrollgruppen og 11,65 ± 1,34 kg i forsøksgruppen registrert. Følgende forsøksgrupper ble inkludert i studien: kontrollgruppen og forsøksgruppen, hvor forsøksgruppens kosthold ble supplert med 0,5 % HS-tilskudd. Eksperimentet varte i 4 uker. De samme diettene for begge gruppene ble brukt i forsøket (tabell 1). Innføringen av HS-tilskuddet i kostholdet ble realisert på bekostning av bygg i forsøksgruppen. Grisene ble fôret to ganger per dag med fullfôrblandinger. Drikkevann var tilgjengelig for dyrene ad libitum gjennom hele forsøksperioden. Fullfôrblandingene i forsøket ble formulert i henhold til ernæringskravene av Šimeˇcek et al. [19]. Det naturlige kosttilskuddet HS (HUMAC® Natur AFM; Humac, Ltd., Košice, Slovakia) ble malt og fysisk renset med Leonardite uten kjemisk behandling. Fullfôrblandingene ble analysert for tørrstoff, råprotein, råfiber, total aske, stivelse og total fosfor i henhold til EC Commission Regulation 152/2009 [20]. Nivået av kalsium og natrium i kosten ble analysert ved å bruke flammemetoden til et atomabsorpsjonsspektrometer (Unicam Solar 939, Camberley, Surrey, Storbritannia). De metaboliserbare energiverdiene til fullfôrblandinger ble beregnet med formelen i henhold til Šimeˇcek et al. [19].

2.2. Prøvetaking og målinger

I uke 4, om morgenen på forsøkets siste dag, ble det tatt blodprøver ved orbital sinuspunksjon fra alle griser individuelt i begge grupper for etterfølgende analyse. Serum ble oppnådd ved sentrifugering (3000 rpm i 30 minutter) og lagret ved -20 ◦C inntil analyse. Heparinisert blod ble brukt til å bestemme hematologiske parametere, teste fagocyttaktivitet og identifisere lymfocyttsubpopulasjoner.

Tabell 1. Formel og kjemisk sammensetning av fôrblandinger til griser (som fôret).

2.2.1. Hematologiske og serumbiokjemiske parametere

En fullstendig blodtelling ble utført med en automatisk hematologianalysator (scil Vet ABC™ Hematology Analyzer, Tyskland). Variablene som ble evaluert i vår studie var hematokritverdi (HCT), hemoglobinkonsentrasjon (Hb), antall røde blodlegemer (RBC), gjennomsnittlig korpuskulært volum (MCV) og totalt antall hvite blodlegemer (WBC). Biokjemiske serumparametere - totalt protein, albumin, glukose, urea, triglyserider, kolesterol, kreatinin, aspartataminotransferase (AST), alkalisk fosfatase (ALP) og fosfor ble målt ved hjelp av en helautomatisk tilfeldig tilgang benchtopanalysator (Ellipse, Italia). Konsentrasjonen av kalsium i serum ble bestemt ved hjelp av et flamme atomabsorpsjonsspektrometer (Unicam Solar 939, Camberley, Surrey, UK).

2.2.2. Biomarkør for lipidperoksidasjon

Konsentrasjonene av lipidperoksidasjonsprodukter (malondialdehydnivåer, MDA) i serum ble målt som tiobarbitursyrereaktive stoffer (TBAR) i henhold til den spektrofotometriske modifikasjonsmetoden beskrevet av Costa et al. [21]. Kort fortalt ble serumprøver blandet med en løsning bestående av trikloreddiksyre (15 %; Merck, Darmstadt, Tyskland), tiobarbitursyre (0.38 %; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) og saltsyre (0,25 N; Mikrochem, Pezinok, Slovakia) og oppvarmet i 30 minutter i et kokende vannbad. Etter avkjøling i isvann og sentrifugering ble absorbansen til supernatanten målt ved 535 nm. Konsentrasjonen av TBAR ble bestemt fra standardkurven utarbeidet ved bruk av 1,1,3,3-tetrametoksypropan (malondialdehyd-bis (dimetylacetal); Acros Organics, Geel, Belgia). Resultatene ble uttrykt som nmol MDA/ml serum.

cistanche planteøkende immunsystem

2.2.3. Fagocyttaktivitetstesting og identifisering av lymfocyttsubpopulasjoner

En kommersiell Phagotest®-analyse (Celonic, München, Tyskland) ble brukt for å bestemme fagocyttenes fagocyttaktivitet og oppslukende kapasitet. Produsentens instruksjoner ble fulgt ved utførelse av testen. Direkte immunfargingsanalyse ble brukt for å identifisere utvalgte subpopulasjoner av lymfocytter. To kombinasjoner av konjugerte muse anti-svine monoklonale antistoffer: CD3e/CD21 og CD4/CD8a/CD25 ble brukt i henhold til spesifikasjonene gitt i tabell 2. Heparinisert blod i en mengde på 50 µL ble inkubert med monoklonale antistoffer i 15 minutter i mørket ved laboratorietemperatur. Etter inkubering ble 1 ml BD FACS lyseringsløsning tilsatt til rørene. Rørene ble inkubert i ytterligere 20 minutter i mørket ved laboratorietemperatur og deretter sentrifugert (300 x g i 5 minutter). Cellepelleter ble deretter vasket og sentrifugert to ganger med 1 ml fosfatbuffer saltvann (PBS; MP Biomedicals, Illkirch-Graffenstaden, Frankrike) ved 300 x g i 5 minutter. Til slutt ble cellene resuspendert i 200 µL PBS for påfølgende cytometrisk analyse.

Tabell 2. Spesifikasjon og mengder av brukte mus anti-svine monoklonale antistoffer.

Fagocytisk aktivitetsanalyse samt identifisering av lymfocyttsubpopulasjoner ble utført på et seksfarget BD FACSCantoTM flowcytometer (Becton Dickinson Biosciences, San Jose, CA, USA) ved bruk av BD FACS DivaTM programvare. Posisjonen til de analyserte cellene ble portet i FSC vs. SSC-punktplott. Granulocytter, monocytter og begge cellepopulasjonene sammen ble henholdsvis lukket for fagocytisk aktivitetsanalyse. Basert på det lave DNA-innholdet i det røde fluorescenshistogrammet (FL-2), ble bakterieaggregater ekskludert fra videre analyse. Prosentandelen av aktive fagocytter og gjennomsnittlig fluorescensintensitet ble bestemt i det grønne fluorescenshistogrammet (FL-1). Gated lymfocytter (Figur 1a,b) ble brukt for identifisering av lymfocyttsubpopulasjoner. CD3+-lymfocytter representerer T-lymfocytter og CD21+ B-lymfocytter (figur 1c). CD4+CD8--underpopulasjonen ble evaluert som T-hjelperlymfocytter, CD4-CD8+ som cytotoksiske lymfocytter, CD4+CD8+ som doble positive T-lymfocytter (Figur 1d), og CD4+CD25+ som regulatoriske T-lymfocytter (Figur 1e). Andel av lymfocytter er uttrykt i prosent.

2.3. Statistisk analyse

Resultatene ble statistisk evaluert ved en uparet t-test med den statistiske programvaren GraphPad Prism 8.0. En verdi på p < 0.05 ble ansett som statistisk signifikant. Resultatene oppnådd i dette eksperimentet ble uttrykt som gjennomsnitt ± standard feil av gjennomsnittet (SEM).

Figur 1. Gatingstrategi: (a) bestemmelse av posisjonen til lymfocytter (røde) på det grunnleggende prikkplottet (FSC-A versus SSC-A); (b) fjerning av dubletter og agglomerater fra analysen; (c) analyse av representasjonen av CD3+ og CD21+ lymfocytter; (d) analyse av representasjonen av CD4+ og CD8+ lymfocytter; (e) bestemmelse av representasjonen av CD4+CD25+-lymfocytter på histogram fra CD4+-positive celler (omgitt av grønt).

3. Resultater

3.1. Hematologiske og serumbiokjemiske parametere

Effektene av HS på hematologiske og biokjemiske blodprofiler er presentert i tabell 3. De bestemte blodparametrene inkludert innholdet av røde blodlegemer, hvite blodlegemer, hemoglobin, hematokrit, gjennomsnittlig korpuskulært volum, totalt protein, albumin, glukose, urea, triglyserider , kolesterol, kreatinin, AST, Ca og P var upåvirket av HS-behandlingen. Kosttilskudd med HS økte imidlertid aktiviteten til ALP (p < 0.05).

Tabell 3. Effekt av humusstoffer på noen hematologiske og serumbiokjemiske parametere hos smågriser

Serum-TBAR-nivå, sekundære produkter av lipidperoksidasjon (som er en viktig parameter som brukes ved bestemmelse av lipidperoksidasjon), ble ikke påvirket av tilsetning av HS.

3.2. Cellulær immunrespons

Tilsetning av HS til grisungenes fôr hadde ingen signifikant effekt på prosentandelen aktive fagocytter (tabell 4) og fagocyttenes oppslukende kapasitet (tabell 5). De høyere verdiene av disse medfødte immunresponsparametrene ble funnet i forsøksgruppen sammenlignet med kontrollgruppen.

Tabell 4. Effekt av humusstoffer på fagocyttaktiviteten i smågrisers blod evaluert som prosentandel av aktive fagocytter - fagocyttaktivitet

Tabell 5. Effekt av humusstoffer på fagocyttenes oppslukende kapasitet uttrykt som gjennomsnittlig fluorescensintensitet (MFI).

Figur 2. Forts.

Figur 2. Effekt av humusstoffer på prosentandelen av lymfocytter: (a) CD3+; (b) CD21+; (c) CD4+CD8-; (d) CD4-CD8+; (e) CD4+CD8+; (f) CD4+CD{{10}}; og (g) forholdet mellom CD4:CD8-lymfocytter i blodet til smågrisene. Kolonnen merket med en stjerne er signifikant forskjellig fra kontrollen (*** p < 0,001).

4. Diskusjon

4.1. Cellulær immunrespons

Studiens hovedmål var å spore hvordan humusstoffer (HS) påvirket noen få forskjellige cellulære immunitetsindikatorer. Prosentandelen av aktive fagocytter og deres oppslukende kapasitet ble valgt som indikatorer for å overvåke effekten på medfødt cellulær immunitet. I vår forrige studie ble det funnet at tilsetning av HS til diettene ({{0}},8%) til slaktekyllinger betydelig økte fagocytisk aktivitet så vel som gjennomsnittlig fluorescensintensitet [16]. I tillegg observerte ELnaggar og El-Kelawy [22] en økning i fagocytisk aktivitet og fagocytisk indeks etter tilskudd av humussyre til dietten (0.1, 0.2 og 0. 4 %) av Sacco-kyllinger. Lignende funn ble oppnådd med verpehøner [17]. I den nåværende studien hadde tilskudd av HS til dietten til grisunger ingen signifikant effekt på fagocytose. Imidlertid var prosentandelen av aktive fagocytter så vel som deres oppslukende kapasitet numerisk høyere hos smågriser supplert med HS enn hos smågriser i kontrollgruppen. I følge Sanmiguel og Rondón [23] er effekten av HS på fagocytter tidsavhengig. De fant at tilskudd av HS til diettene (0.1 og 0.2%) til verpehøner økte fagocyttindeksen på dag 8 og 30 av påføringen, men sammenlignet til de av Wang et al. [2], som fant ut at griser hvis fôr hadde 10% HS tilsatt, hadde høyere relative lymfocyttall. Lignende resultater ble oppnådd for fjørfe, som ble fôret med en diett supplert med 0,15 % humate [24], eller ble supplert med 20 mg humussyre/kg kroppsvekt i drikkevann [25]. I følge Cetin et al. [24], tilskudd av verpehøns dietter med humusforbindelser resulterer i en betydelig økning i lymfocytttallet, noe som kan tilskrives økt produksjon av IL-2, samt ekspresjon av IL{{29} } reseptor på lymfocytter. Humusstoffer ser ut til å øke aktiviteten til IL-2-produserende celler. Andre forfattere observerte imidlertid ingen signifikant effekt på antall lymfocytter hos griser som ble fôret med humussyretilsatt fôr [26] så vel som hos kyllinger som fikk humussyrer i drikkevannet [27] eller diettene deres [22] . Resultatene våre ligner observasjonene til Mudro ˇnová et al. [16], som fant at prosentandelen av CD4-lymfocytter var signifikant økt for slaktekyllinger som fikk HS-tilskudd (0,8 %) sammenlignet med kontrollgruppen. De bemerket også en signifikant reduksjon i CD8+-lymfocytter (T-cytotoksiske lymfocytter), noe som resulterte i et statistisk høyere CD4:CD8-forhold, som brukes som en markør for immunstimulering. På den annen side økte fôring av verpehøner med en diett på 0,5 % HS signifikant andelen IgM+-lymfocytter som representerer en underpopulasjon av B-lymfocytter og reduserte signifikant andelen CD3+-lymfocytter som representerer totale T-lymfocytter. Andelen T-hjelper og T cytotoksiske lymfocytter ble ikke påvirket [17]. Basert på våre resultater, samt ulike studier, følger det at HS kan ha en immunstimulerende effekt som kan påvirkes av sammensetningen og mengden av humater som brukes, administrasjonsmåten, dyrearten og, ifølge ELnaggar og El -Kelawy [22], ved oppdrett av dyr i ulike regioner i verden, forskjellig i klima. Immunmoduleringen av HS kan teoretisk bestå av dannelsen av komplekser av humater med sakkarider. Disse kompleksene binder seg til overflaten av T-lymfocytter og NK-celler og påvirker deres funksjon, inkludert produksjonen av cytokiner, som ytterligere påvirker andre celler i immunsystemet [28].

cistanche tubulosa-forbedre immunsystemet

4.2. Hematologisk og serumbiokjemisk parameter

Et annet mål med denne studien var å evaluere utvalgte hematologiske og biokjemiske blodparametere for smågrisfôrede dietter supplert med HS. Det ble ikke funnet noen signifikant forskjell i utvalgte variabler for protein-, energi- og mineralmetabolisme, så vel som i hematologiske indekser, mellom forsøksgruppen av dyr med kosttilskudd med HS-tilskudd og kontrollgruppen, bortsett fra ALP-aktivitet i den nåværende studien. Biokjemiske indikatorer i vår studie var innenfor referanseområdet for alle smågriser, ifølge Doubek et al. [29] og Kraft og Dürr [30]. Våre funn er i tråd med tidligere arbeid av Wang et al. [2], som ikke fant noen signifikante endringer i de røde og hvite blodcellene i løpet av forsøket i studien deres for å finne ut effekten av HS på blodvariabler hos slaktgriser. Etter behandling med en HS-holdig diett, har Herzig et al. [31], og også Šamudovská og Demeterová [32], observerte ikke-signifikant økt ALP-aktivitet hos kyllinger. I vår undersøkelse fant vi at den eksperimentelle gruppen hadde betydelig høyere ALP-aktivitet enn kontrollgruppen. Verdiene deres holdt seg i mellomtiden innenfor referanseområdet for ALP-nivåer fra gris (2–17 kat·L −1 ) [29,30]. På den annen side, Jad'uttová et al. [33] og Rath et al. [34] la merke til en betydelig reduksjon i ALP-aktivitet hos kyllinger etter fôring med HS. Blodnivåene av ALP i slaktekyllinger gitt 1,00 % HS-fôrtilskudd sank, ifølge disse forfatterne. Selv om de reduserte verdiene av ALP-aktivitet i Rath et al. [34] studien var statistisk annerledes enn kontrollene, de reflekterte ingen toksisk effekt av HS på selektive organer (muskler, nyre, hjerte eller lever). Mengden HS som kostholdet gir kan påvirke konsentrasjonen av mineraler i blodet. Nivåene av kalsium og fosfor i grisungenes blodserum var upåvirket av administrering av HS i en konsentrasjon på 0,5 %. Evnen til HS til å chelatere metaller, som er påvirket av en betydelig mengde karboksylsyresidekjeder, kan være årsaken til nedgangen i mineralserumkonsentrasjoner [34]. I vår studie ble ikke konsentrasjonene av kalsium og fosfor i smågrisers blod redusert under referanseverdiene ved tilsetning av HS til fôrblandingen til forsøksgruppen. MDA er produktet av lipidperoksidasjon forårsaket av frie oksygenradikaler, som kan brukes som en markør for å vurdere antioksidantstatus og lipidperoksidasjon [35]. MDA ble bestemt som en biomarkør for oksidativt stress ved å måle nivåene av tiobarbitursyrereaktive stoffer (TBAR) i blodet. En reduksjon i oksidativt stress er preget av en reduksjon i MDA-nivåer. Tidligere forskning har vist at HS kan ha antioksidantegenskaper, og beskytter mot en rekke lidelser knyttet til det oksidative stresset som frie radikaler vanligvis forårsaker. For eksempel, Wang et al. [15] fant at kosttilskudd av natriumhumat (2000 mg·kg−1) kunne forbedre antioksidantstatusen til avvente smågriser. De observerte en betydelig reduksjon i innholdet av MDA i serumet, samt en betydelig økning i total antioksidantkapasitet. Imidlertid er HS naturlige materialer med en variabel sammensetning, som kan forårsake ulik effektivitet, som også kan avhenge av administrert mengde. I det nåværende eksperimentet ble det ikke observert noen variasjon i serum MDA (TBAR)-nivåer for smågriser som ble fôret med HS sammenlignet med kontrollgruppen. Resultatene våre er i samsvar med Zhang et al. [36], som fant at tilsetning av natriumhumat til diettene (0,1, 0,3 og 0,5%) av verpehøner ikke hadde noen effekt på serumets totale antioksidantkapasitet og MDA-verdier.

cistanche supplement fordeler-hvordan styrke immunforsvaret

5. Konklusjoner

Basert på resultatene som er oppnådd i denne studien, kan det konkluderes med at et dietttilskudd med 0,5 % humusstoffer kan ha en stimulerende effekt på enkelte immunceller hos smågriser. Det var en signifikant økning i andelen CD4+CD8--lymfocytter i blodet. Tilskudd med humusstoffer økte serum-ALP. Disse verdiene var imidlertid fortsatt innenfor referanseområdet. Resultatene viste at selv en så lav konsentrasjon av HS kan påvirke cellulær immunitet positivt hos smågriser. På grunn av det faktum at konsentrasjonen av humusstoffer vi valgte hadde en signifikant effekt bare på noen indikatorer på cellulær immunitet, vil ytterligere studier være nødvendig for å velge en passende konsentrasjon og bekrefte den stimulerende effekten på immunitet i denne kategorien dyr.

Referanser

1. Peña-Méndez, EM; Havel, J.; Patoˇcka, J. Humic stoffer-forbindelser med fortsatt ukjent struktur: Anvendelser i landbruk, industri, miljø og biomedisin. J. Appl. Biomed. 2005, 3, 13–24. [CrossRef]

2. Wang, Q.; Chen, YJ; Yoo, JS; Kim, HJ; Cho, JH; Kim, IH Effekter av supplerende humusstoffer på vekstytelse, blodkarakteristikker og kjøttkvalitet hos slaktgriser. Livest. Sci. 2008, 117, 270–274. [CrossRef]

3. Visser, SA Effekt av humusstoffer på høyerestående dyr og mennesker, mulig bruk av humusforbindelser i medisinske behandlinger. I Proceedings of the International Humic Acid Society Meeting, Sevilla, Spania, 1988; s. 27.

4. Stevenson, FJ Humuskjemi: Genesis, sammensetning, reaksjoner; Wiley-Inter-Science: New York, NY, USA, 1994; s. 34–41.

5. Hassan, HMA; Mohamed, MA; Youssef, AW; Hassan, ER Effekt av å bruke organiske syrer for å erstatte antibiotikavekstfremmere på ytelse og tarmmikroflora hos slaktekyllinger. Asiatisk-Aust. J. Anim. Sci. 2010, 23, 1348–1353. [CrossRef]

6. Gálik, B.; Hrnˇcár, C.; Gašparoviˇc, M.; Rolinec, M.; Hanušovský, O.; Juráˇcek, M.; Šimko, M.; Zábranský, L.; Kovacik, A. Effekten av humiske stoffer på kjøttkvaliteten i oppfeding av gårdsfasaner (Phasianus colchicus). Landbruk 2023, 13, 295. [CrossRef]

7. Karaoglu, M.; Macit, M.; Esenbuga, N.; Durdag, H.; Turgut, L.; Bilgin, OC Effekt av tilleggshumat på ulike nivåer på vekstytelse, slakting og slakteegenskaper hos slaktekylling. Int. J. Poult. Sci. 2004, 3, 406–410.

8. Ji, F.; McGlone, JJ; Kim, SW Effekter av humusstoffer i kosten på grisevekstytelse, kadaveregenskaper og ammoniakkutslipp. J. Anim. Sci. 2006, 84, 2482–2490. [CrossRef]

9. Lackova, Z.; Zigo, F.; Farkašová, Z.; Ondrašoviˇcová, S. Effekten av humiske stoffer som et organisk tilskudd på fetningsytelsen, kvaliteten på kjøttet og utvalgte biokjemiske parametere til kaniner. Life 2022, 12, 1016. [CrossRef]

10. Kaevska, M.; Lorencova, A.; Videnska, P.; Sedlar, K.; Provaznik, I.; Trckova, M. Effekt av natriumhumat og sinkoksid brukt i profylakse av diaré etter avvenning på fekal mikrobiotasammensetning i avvente smågriser. Vet. Med. 2016, 61, 328–336. [CrossRef]

11. Trckova, M.; Matlova, L.; Hudcova, H.; Martin, F.; Zraly, Z.; Dvorska, L.; Beran, V.; Pavlik, I. Torv som fôrtilskudd for dyr: En anmeldelse. Vet. Med. - Tsjekkisk. 2005, 50, 361–377. [CrossRef]

12. Weber, TE; van Sambeek, DM; Gabler, NK; Kerr, BJ; Moreland, S.; Johal, S.; Edmonds, MS Effekter av humus- og smørsyre i kosten på vekstytelse og respons på lipopolysakkarid hos unge griser. J. Anim. Sci. 2014, 92, 4172–4179. [CrossRef]

13. Mao, Y. Modulering av vekstytelse, kjøttsammensetning, oksidativ status og immunitet til slaktekyllinger med fulvinsyrer i kosten. Poult. Sci. 2019, 98, 4509–4513. [CrossRef] [PubMed]

14. Stepchenko, LM Rollen til humuspreparater i styringen av metabolske prosesser i dannelsen av biologiske produkter fra landbruksdyr. I prestasjoner og utsikter for bruk av humiske stoffer i landbruket; Publishing House of the Agricultural Institute: Dnepropetrovsk, Ukraina, 2008; s. 70–74. (På russisk)

15. Wang, Q.; Ying, J.; Zou, P.; Zhou, Y.; Wang, B.; Yu, D.; Li, W.; Zhan, X. Effekter av kosttilskudd av humussyrenatrium og sinkoksid på vekstytelse, immunstatus og antioksidantkapasitet til avvente smågriser. Dyr 2020, 10, 2104. [CrossRef] [PubMed]

16. Mudro ˇnová, D.; Karaffová, V.; Pešulová, T.; Košˇcová, J.; Marušˇcáková, IC; Bartkovský, M.; Marcinˇcáková, D.; Ševˇcíková, Z.; Marcinˇcák, S. Effekten av humusstoffer på tarmmikrobiota og immunrespons hos slaktekyllinger. Food Agric. Immunol. 2020, 31, 137–149. [CrossRef]

17. Mudro ˇnová, D.; Karaffová, V.; Semjon, B.; Nad', P.; Košˇcová, J.; Bartkovský, M.; Makiš, A.; Buj ˇnák, L.; Nagy, J.; Mojžišová, J.; et al. Effekter av kosttilskudd av humusstoffer på produksjonsparametere, immunstatus og tarmmikrobiota hos verpehøner. Landbruk 2021, 11, 744. [CrossRef]

18. EU-kommisjonen. Europaparlamentets og rådets direktiv 2010/63/EU av 22. september 2010 om beskyttelse av dyr som brukes til vitenskapelige formål. Av. J. Eur. Union 2010, 276, 33–79.

19. Šimeˇcek, K.; Zeman, L.; Heger, J. Næringsbehov og tabeller over næringsverdier av grisefôr, 3. utg.; Czech Academy of Agricultural Sciences: Brno, Tsjekkia, 2000; 125p. (på tsjekkisk)

20. EU-kommisjonen. Kommisjonsforordning (EF) nr. 152/2009 av 27. januar 2009 om fastsettelse av metoder for prøvetaking og analyse for offisiell kontroll av fôr. Av. J. Eur. Union. 2009, 54, 2–54.

21. Costa, CM; Santos, RCC; Lima, ES En enkel automatisert prosedyre for tiolmåling i humane serumprøver. J. Bras. Patol. Med. Lab. 2006, 42, 345–350. [CrossRef]

22. ELnaggar, AS; El-Kelawy, MI Effekt av humussyretilskudd på produktiv ytelse, blodbestanddeler, immunrespons og kadaveregenskaper til Sasso-kylling. Egypt. J. Anim. Prod. 2018, 55, 75–84.

23. Sanmiguel, PR; Rondón, BI Tilskudd med humusstoffer påvirker den medfødte immuniteten hos laghøner i pos-fastefasen. Rev. MVZ Córdoba 2016, 21, 5198–5210. [CrossRef]

24. Cetin, E.; Guclu, BK; Cetin, N. Effekt av kosttilskudd av humat og organisk syre på sosialt stress indusert av høy besetningstetthet hos verpehøner. J. Anim. Vet. Adv. 2011, 10, 2402–2407.

25. Salah, H.; Mansour, E.; Reham, RR; Abd El Hamid, ES Studie på effekten av humussyre på vekstytelse, immunologiske, noen blodparametere og kontroll av tarmen Clostridium hos slaktekyllinger. Zag. Vet. J. 2015, 43, 102–109. [CrossRef]

26. Kim, K.; Bae, I.; Cho, J.; Choi, Y.; Ha, J.; Choi, J. Effekter av tilskudd av humussyre og blåbærbladpulver i fôr på produktiviteten, blod- og kjøttkvaliteten til slaktgriser. Food Sci. Anim. Resurs. 2019, 39, 276–285. [CrossRef] [PubMed]

27. Lala, AO; Okwelum, N.; Irekhore, OT; Ogunlade, BA; Adigun, AA; Elegbede, LA; Oyedeji, MM Hematologiske og biokjemiske parametere for slaktekylling supplert med humussyre i drikkevannet. Appl. Trop. Agric. 2016, 21, 74–78.

28. Terratol, LLC Effekter av humussyre på dyr og mennesker. Tilgjengelig på nettet: https://fulvic.info/wp-content/uploads/2019 /01/M-Terratrol_Artikel-1.pdf (åpnet 10. august 2022).

29. Doubek, J.; Šlosárková, S.; ˇReháková, K.; Bouda, J.; Scheer, P.; Piperisová, I.; Tomenendálová, J.; Matalová, E. Tolkning av grunnleggende biokjemiske og hematologiske funn hos dyr, 2. utg.; Noviko: Brno, Tsjekkia, 2010; s. 102. (på tsjekkisk)

30. Kraft, W.; Dürr, UM Klinická Laboratórna Diagnostika vo Veterinárnej Medicíne, 1. utg.; Hajko & Hajková: Bratislava, Slovakia, 2001; s. 1–380. (på slovakisk)

31. Herzig, I.; Navrátilová, M.; Totušek, J.; Suchý, P.; Veˇcerek, V.; Blahová, J.; Zralý, Z. Effekten av humussyre på sinkakumulering i kyllingbroilervev. Tsjekkiske J. Anim. Sci. 2009, 54, 121–127. [CrossRef]

32. Šamudovská, A.; Demeterová, M. Effekt av diett supplert med naturlige humusforbindelser og natriumhumat på ytelse og utvalgte metabolske variabler hos slaktekyllinger. Acta Vet. Brno 2010, 79, 385–393. [CrossRef]

33. Jad'uttová, I.; Marcinˇcáková, D.; Bartkovský, M.; Semjon, B.; Harˇcárová, M.; Nagyová, A.; Váczi, P.; Marcinˇcák, S. Effekten av humusstoffer i dietten på slakteytelsen, slakteavlingen, blodbiokjemiparametere og benmineralprofilen til slaktekyllinger. Acta Vet. Brno 2019, 88, 307–313. [CrossRef]

34. Rath, NC; Huff, VI; Huff, GR Effekter av humussyre på slaktekyllinger. Poult. Sci. 2006, 85, 410–414. [CrossRef]

35. Sumida, S.; Tanaka, K.; Kitao, H.; Nakadomo, F. Treningsindusert lipidperoksidasjon og lekkasje av enzymer før og etter vitamin E-tilskudd. Int. J. Biochem. 1989, 21, 835–838. [CrossRef]

36. Zhang, AR; Pirzado, SA; Liu, GH; Chen, ZM; Chang, WH; Cai, HY; Bryden, WL; Zheng, AJ Kosttilskudd med natriumhumat forbedrer eggkvaliteten og immunfunksjonen til verpehøns. J. Appl. Anim. Nutr. 2020, 8, 93–99. [CrossRef]