Det vitenskapelige grunnlaget for den nye anvendelsen av Cistanche
Mar 09, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com
Sun Weidong1, Chen fei2, Sun yun2
(1. Yangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Yangzhou 225009, Jiangsu; 2. School of Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu)
ABSTRAKT: Rottemodellen for beg nin prostatahyperplasi (BPH) ble etablert, og tre dosegrupper med akteosid ble administrert oralt i 4 uker, for å studere effekten av akteosid destillert fraCistanche tubulosaom apoptose og ultramikrostruktur prostatakjertel hos rotter med BPH. Den ultrastrukturelle endringen av prostatakjertelen ble observert ved transmisjonselektronmikroskopi. Resultatene viste at apoptose av normal rotteprostata ikke var åpenbar, det var en lav
rate av prostata apoptose i modellgruppen, i høydose acteosid fraCistanche tubulosabehandling var rotteprostataapoptose signifikant høyere enn modellens.
SØKEORD:Cistanche, Cistanche tubulosaakteosid; rotte; begynne prostatahyperplasi; apoptose; ultrastrukturelle
I prosessen med godartet prostatahyperplasi (BPH) er celleapoptose en av mekanismene som for tiden tiltrekker seg oppmerksomhet. Genkoding bestemmer det og gjør det mulig for celler å kontrollere programmert celledød ved å reagere på spesifikke signaler.
Etter at prostata utvikler seg til voksen størrelse, opprettholdes proliferasjonsraten for prostataceller på 1 prosent til 2 prosent gjennom balansen av den gjennomsnittlige apoptosehastigheten. Når balansen er brutt, anses det å være årsaken til BPH. Under normale forhold er nivåene av østrogen og androgen og normal sirkulasjon i prostata en slags selvbalansetilstand som eksisterer i prosessen med spredning og apoptose. Når balansen mellom proliferasjon og apoptose er ute av balanse, vil det føre til ytterligere vekst og utvidelse av kjertelen, noe som hovedsakelig forårsaker utvidelse av epitelcellerommet [1].
I dette eksperimentet etablerte vi en rotteprostatahyperplasimodell for å observere og analysere effekten av akteosid (koaksjonslignende glykosid), en av de kjemiske komponentene iCistanchepå apoptose og ultrastrukturelle endringer av rotteprostataceller, for å evaluere effekten av akteosid Effekten av å hemme prostatahyperplasi gir et vitenskapelig grunnlag for utvikling og utnyttelse av nye bruksområder for kinesisk medisin Cistanche.
Cistancheekstrakt
1 Materiale og metoder
1. 1 forsøksdyr
Femti SD-hannrotter i alderen 6-7 uker, ren klasse, veier 80-100 g, leveres av Center for Comparative Medicine ved Yangzhou University.
1. 2 reagenser og medisiner
Testosteronpropionat-injeksjon er fra Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., spesifikasjonen er 25 mg·mL-1, og batchnummeret er 060708. PI-fargeløsning er fra Yangzhou University Testing Center. Innholdet av Aktiside er 945 g·kg-1, utarbeidet av Institutt for kinesisk medisinanalyse, China Pharmaceutical University.
1. 3 Eksperimentelt utstyr
Philips Tecnai 12 transmisjonselektronmikroskop er fra Philips i Nederland; FACSAria flowcytometer er fra BD i USA.
1. 4 Grupperinger og modellering
Etter kastrering i henhold til litteraturmetoden [3] ble rotter injisert med 5 mg·(kg·d)-1av testosteronpropionat på ryggen til rottene i 4 uker for å etablere en prostatahyperplasimodell. Modellrottene ble tilfeldig delt inn i modellgrupper: modell pluss akteosid høydose gruppe, modell pluss akteosid middels dose gruppe, modell pluss akteosid lavdose gruppe, ti rotter i hver gruppe; ytterligere ti normale rotter var som kontrollgruppe.
1. 5 Administrasjonsmetode
En uke etter modellering ble akteosidgrupper med høy, middels og lav dose gitt henholdsvis 60, 30, 15 mg·(kg·d)-1 ved sonde. Modellgruppen og kontrollgruppen ble satt et likt volum med vanlig saltvann én gang daglig i fire uker, veid én gang i uken og justert dosen i henhold til kroppsvekten.
1. 6 Prøveinnsamling og behandling
1) Materiale og prøvepreparering: 24 timer etter siste administrering, vei de fastende rottene og avliv rottene ved cervikal dislokasjon. Åpne umiddelbart nedre del av magen, skrell av vevet rundt prostata, frigjør prostata og ta en del av prostata for bruk i et isbad. Vevshomogenisator homogenisert, preparert prostata encellesuspensjon og farget med propidiumjodid en-trinnsmetode [4]; en annen del av prostatavevet ble fiksert i 25 g·L-1 glutaraldehyd for å forberede ultratynne snitt.
2) Forbered en enkeltcellesuspensjon: Under aseptiske forhold, fjern rotteprostata helt og flytt den over i en petriskål, vask blodet og blodproppene på overflaten av prostatavevet med PBS, og fjern det omkringliggende fettet, overflødige fibre, og cellemembraner. Fra samme rotteprostata, friskt prostatavev med størrelsen ca. 0,5 cm3ble tatt og kuttet i biter for å forberede en prostatacellesuspensjon [5]. Plasser prostatavevsblokken i en petriskål, og tilsett en liten mengde PBS; bruk oftalmologisk saks for å kutte vevet i et isbad, mal homogenisatoren til en suspensjon, tilsett 10 mL PBS, pipetter vevshomogenatet, og bruk 0,074 mm porestørrelse nylonnett ble filtrert inn i reagensrøret, sentrifugert ved 1 500 r min-1i 3 min, og bunnfallet ble vasket tre ganger med PBS, hver gang ved 500 r min.-1kortvarig lavhastighets sentrifugering for å fjerne celleavfall, til 0.037 mm porestørrelse nylonnettingsfilter for å fjerne celleklumper. Tell cellene og juster cellekonsentrasjonen til 2×109 celler·L-1. Flekk med 1 mL PI-fargeløsning, beskytt mot lys ved 4 grader i 10 min.
3) Klargjøring av ultratynne seksjoner: For forberedelse av ultratynne vevssnitt, se litteratur [6].
2 Resultater og analyse
Fig. 1 Apoptose av BPH-rottemodellen og indusert virkning av acteosid
en. Normal gruppe; b. Modellgruppe; c. Acteosid høydose gruppe; d. Acteosid lavdosegruppe
2. 1 Effekten av akteosid på apoptose av rotteprostata
Figur 1 viser toppen av apoptose detektert ved flowcytometri, som viser at akteosid har en pro-apoptotisk effekt. Den statistiske analysen av celleapoptoseresultatene viste at rottecelleapoptosehastigheten var signifikant økt (24,7±1,85) prosent og (16,1±1.04) prosent etter behandling med høye, middels og lave doser av akteosid. , (14,5±0,68) prosent , og normalgruppen (1,1±{{20}}},06) prosent , modellgruppe (9,5±0,5) prosent , positiv gruppe (9,83± 0,76) Forskjellen i prosentsammenligning er signifikant (P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">
Fig. 2 Radioen for apoptose i BPH-rottemodellen og virkningen av akteosid
2.2 Effekten av akteosid på ultrastrukturen til prostatahyperplasiceller.
Elektronmikroskopi-observasjoner viser at den normale rotteprostata har komplette kjerner, åpenbart nukleoler, og jevn nukleær kromatinfordeling; det grove endoplasmatiske retikulumet har samme størrelse, er pent arrangert og har ingen vakuolering. Det er ingen fingerlignende mikrovilli på overflaten av epitelet, ingen hevelse av mitokondrier og få sekreter i hulrommet. Kjernene til prostataceller i modellgruppen ble deformert og krympet, og cytoplasmaet var rikelig. Det grove endoplasmatiske retikulumet ble utvidet i en cystelignende form, og cysten ble fylt med proteinpartikler med høy tetthet. Mitokondriene var lett hovne (det var også vakuoler), Det er sekret med middels tetthet i hulrommet, og det ble funnet tette runde sekresjonsgranulat i noen celler. Hos rotter behandlet med akteosid var kjernen intakt sammenlignet med modellgruppen. Kjernen ble konsentrert, kjernedensiteten ble økt, heterokromatin akkumulert, cytoplasmaet hadde vakuoler og de grove endoplasmatiske retikulumvakuolene ble redusert. Lavdose-acteosidgruppen hadde lett rynkete kjerner Krymping, uregelmessig, rikere cytoplasma og redusert grovt endoplasmatisk retikulum (Figur 3).
Fordelen med cistanche: anti-Apoptose
3 Diskusjon
Apoptose er en prosess med programmert celledød i flercellede organismer som regulerer utviklingen av kroppen og opprettholder stabiliteten i det indre miljøet, og genetiske koder bestemmer det.
Apoptotiske celler har sine unike morfologiske og biologiske egenskaper: kjernefysisk kromatinkrymping, omfattende DNA-nedbrytning og fragmentering, fullskala krymping av celler, krymping av cellemembraner og ytre fremspring som dekker organeller (som mitokondrier og ribosomer), og kjernedannelse av karakteristiske. fragmenter Apoptotiske kropper, apoptotiske celler beholder ikke bare en fullstendig cellemembranstruktur og funksjon, men har også en komplett struktur av organeller, som er forskjellig fra cellenekrose.
Den molekylære mekanismen for celleapoptose har ikke blitt fullstendig belyst så langt. Studier [7] har vist at det er mange gener involvert i genreguleringen av celleapoptose.
Apoptose er prosessen med BPH for tiden tiltrekker seg mer oppmerksomhet. Det bestemmes av genkoding og gjør det mulig for celler å kontrollere celledød ved å reagere på spesifikke signaler [1]. Etter at prostata utvikler seg til voksen størrelse, opprettholdes proliferasjonsraten for prostataceller på 1 prosent til 2 prosent gjennom balansen mellom apoptosehastighet. Ødeleggelsen av denne balansen har alltid vært ansett som årsaken til BPH [8]. Under normale forhold er nivået av østrogen og androgen og regelmessig sirkulasjon i prostata en slags selvbalansetilstand som eksisterer i prosessen med spredning og apoptose. Når spredningen og apoptosen er i ubalanse, vil det føre til at kjertlene vokser og utvider seg ytterligere, hovedsakelig på grunn av utvidelsen av epitelcellerommet [9]. Avbruddet i denne balansen kan skyldes endringer i androgennivåer eller funksjoner; det kan også skyldes enhver respons produsert av AR-stimulering av DHT eller endringer i DHT-mediert vekstfaktornivå [2]. I denne studien oppdaget FCM celleapoptose og fant at apoptosefrekvensen av prostataceller hos rotter som fikk høye doser akteosid økte betydelig. Elektronmikroskopiresultater viste at kjernene til prostataceller i modellgruppen ble deformert, det grove endoplasmatiske retikulumet var sterkt utvidet i en cystelignende form, og cysten ble fylt med proteinpartikler med høy tetthet, og vakuolering ble funnet. Mitokondriene var lett hovne, og relaterte studier[ 10-11 ] Rapporten er konsistent.
Etter akteosid-intervensjon var graden av prostatahyperplasi hos rotter lavere. Høydosegruppen viste også tidlige tegn på apoptose: kjernen til prostataceller forble intakt, og endoplasmatiske retikulumvakuoler var betydelig lavere. Kondensering av kjerner, økt kjernetetthet, akkumulering av heterokromatin, lik karakteriseringen av prostatavevsceller hos rotter etter kastrering [12-13]. Det viser at acteoside fracistanchekan indusere celleapoptose hos rotter med prostatahyperplasi, regulere og gjenopprette balansen mellom prostatacelleapoptose og proliferasjon, og spille en rolle i å hemme prostatacelleproliferasjon. Resultatene fra denne studien og tidligere studier [14] indikerer at den hemmende effekten av akteosid, en kjemisk komponent iCistanche tubulosa, på prostatahyperplasi kan være relatert til dets fremme av celleapoptose, reduksjon av AR og TGF-UR1 overekspresjon. Den detaljerte virkningsmekanismen må fortsatt studeres videre.
Cistanche fordel: forbedre immuniteten
Referanser:
[1] Giacomo N, Antonio G, Rafa el BB, et al. Betennelse, apoptose og BPH, hva er beviset [J]. European Urology Supplements, 2006(5): 401-408.
[2] Car son IC, Rittmaster R. Rollen til dihydrotestosteron i benign prostatahyperplasi [J]. Urology, 2003, 61: 2-7.
[3] Xu Shuyun, Bian Julian, Chen Yuxiu. Farmakologisk eksperimentmetodikk[M]. 3. utgave. Beijing: People's Medical Publishing House, 2002: 1552-1553.
[4] Zhai Qiwei, Ji Hongbin, Yan Mingda, et al. Ved å bruke et tet-off induserbart ekspresjonssystem for å studere funksjonen til Akt[J]. Chinese Science Bulletin, 2000, 45( 16): 1738-1741.
[5] Xia Anzhou, Xing Shuhua, Zhu Xuewen, et al. Sammenlignende studie av tilberedningsmetodene for encellesuspensjon i nyrevev [J]. Journal of Xuzhou Medical College, 2004, 24( 1):50-53.
[6] Sun Yun, Wang Dejun, Liu Xiaomei, et al. Endringene i lungens ultrastruktur i eksperimentelle aldrende mus og effekten av Cistanche deserticola polysakkarid [J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2002, 18(1): 84-87.
[7] Liu Qingming, Lu Mingzhi. Forskningsfremgang i patogenesen av godartet prostatahyperplasi celleproliferasjon og apoptose [J]. Jiangxi Medical Laboratory Science, 2005, 23( 2): 141-143.
[8] Sharia t SF, Ashfaq R, Roehrborn CG, et al. Uttrykk av survivin og apoptotiske biomarkører i benign prostatahyperplasma [J]. J Urol, 2005, 174: 2046-2050.
[9] Unter G, Madersbacher S, Berg er P. Benign prostatahyperplasi: aldersrelatert vevsremodellering [J]. Exp Gerontol, 2005, 40: 121-128.
[10] Zheng Heng, Shao Chunli, Qian Jiaqing. Den hemmende effekten av hydroklorid på prostatahyperplasi hos rotter [J]. Journal of Tongji Medical University, 1999, 28(3):227-229.
[11] Zhong Wei, Qiu Shudong, Jiang Sailing. De morfologiske endringene av benign prostatahyperplasi og forskjellen i ARmRN A-uttrykk [J]. Journal of Xi'an Medical University, 1999,20( 2): 145-149.
[12] Niu Yuanjie, Dong Kequan, Bai Jingwen, et al. Dynamiske patologiske endringer av prostata hos hund etter kastrering [J]. Chinese Journal of Urology, 1998, 19( 7): 429-433.
[13] Ye Zhangqun, Lan Ruzhu, Zhou Yusheng, et al. Dynamiske endringer i mikrostrukturen til den ventrale prostata hos rotten etter kastrering [J]. Chinese Journal of Urology, 2001,22( 8): 468-472.
[14] Sun Weidong, Chen fei, Sun yun. Den hemmende effekten av Aktiside på eksperimentell benign prostatahyperplasimodell [J]. Journal of Yangzhou University: Agriculture and Life Sciences
Utgave, 2008, 29(3): 55-58.