Totalt antall glykosider fra stammer av Cistanche Tubulosa lindrer depresjonslignende oppførsel

Ta kontakt med:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Li Fan, Ying Peng, Jingwen Wang, Ping Ma, Lijuan Zhao, Xiaobo Li *

ABSTRAKT

Bakgrunn:Som den mest bruktenyre-yang avgiftende urti tradisjonell kinesisk medisin har tørkede saftige stilker av Cistanche tubulosa (Schenk) Wight (CT) vist seg å være effektive i behandlingen av depresjon. Imidlertid forblir de antidepressive komponentene og deres underliggende mekanisme uklare.

Hensikt:Å utforske de aktive komponentene i CT mot depresjon, samt potensielle mekanismer. Studiedesign og metoder: Atferdsmessige fortvilelsestester ble brukt for å vurdere de antidepressive aktivitetene til polysakkarider, oligosakkarider og forskjellige glykosid-anrikede fraksjoner separert fra CT, så vel som de typiske tarmmikrobiota-metabolittene inkludert 3-hydroksyfenylpropionsyre ({{2 }}HPP) og hydroksytyrosol (HT). Videre ble effekten av bioaktive fraksjoner og metabolitter på modeller for kronisk uforutsigbart mildt stress (CUMS) utforsket med flere farmakodynamiske og biokjemiske analyser. Endringer i kolonhistologi og tarmbarrieren ble observert ved farging og immunhistokjemisk analyse. Tarmmikrobielle egenskaper og tryptofan-kynurenin-metabolisme ble utforsket ved bruk av henholdsvis 16S rRNA-sekvensering og western-blotting.

Resultater:Totalt glykosider (TG) lindret dramatisk depresjonslignende atferd sammenlignet med forskjellige separerte fraksjoner, noe som gjenspeiles i de synergistiske effektene av fenyletanoid- og iridoidglykosider på hyperaktivering av hypothalamus-hypofyse-binyreaksen (HPA), alvorlig nevro- og perifer betennelse, og mangler i 5-hydroksytryptamin (5-HT) og hjerneavledet nevrotrofisk faktor i hippocampus. Dessuten dempet TG lavgradig betennelse i tykktarms- og tarmbarriereforstyrrelser, og forekomsten av flere bakterieslekter var sterkt korrelert med HPA-aksen og betennelse hos CUMS-rotter. Konsekvent ble uttrykket av indolamin 2, 3-dioksygenase 1 (IDO1) i tykktarmen betydelig redusert etter TG-administrasjon, ledsaget av undertrykkelse av tryptofan-kynurenin-metabolismen. På den annen side utøvde HT også en markert antidepressiv effekt ved å forbedre HPA-aksefunksjonen, pro-inflammatorisk cytokinfrigjøring og tryptofan-kynurenin metabolisme, mens den i stor grad ikke var i stand til å justere den forstyrrede tarmmikrobiotaen på samme måte som TG. Overraskende nok, overlegne fluoksetin, kan TG og HT ytterligere forbedre dysfunksjon av hypothalamus-hypofyse-gonadeaksen og unormal syklisk nukleotidmetabolisme.

cistanche salsa fordelerkunne videreforbedre dysfunksjon.

Introduksjon

Depresjon er en kronisk, tilbakevendende og potensielt livstruende psykisk lidelse som rammer opptil 20 prosent av befolkningen på verdensbasis (Nabavi et al., 2017). For tiden, selv om mange antidepressiva er godkjent, er bivirkningene bekymringsfulle. Spesielt langtidsbehandling med selektive serotoninreopptakshemmere (SSRI) som fluoksetin, det viktigste farmakologiske middelet for depresjon, forverret problemer som kronisk seksuell dysfunksjon (Bijlsma et al., 2014); dette har trukket økende oppmerksomhet til oppdagelsen av nye antidepressiva fra naturlige urter (Wang et al., 2019). I tradisjonell kinesisk medisin (TCM)-teori, resulterer nyre-yang-mangel i ytelsestrekk som ligner på de kliniske symptomene på depresjon, som å føle seg nede, tap av interesse og sentimentalitet (Yang et al., 2020), noe som fremmer tankene å lindre depresjonslignende atferd ved å tonifisere nyre-yang. Tilfeldigvis har mange nyre-yang tonifiserende urter fordelen av å forbedre seksuell funksjon (Wu et al., 2015). Slike studier får oss til å ta hensyn til den potensielle anvendelsen av Cistanches Herba, som er den mest brukte nyre-yang-tonifiserende urten i TCM og er effektiv i behandling av mannlig seksuell dysfunksjon (Wang et al., 2020), når det gjelder utvikling av antidepressiva. Cistanches Herba, offisielt registrert som de tørkede saftige stilkene av Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight (CT) og Cistanche deserticola (YC Ma) i den kinesiske farmakopéen (Wang et al., 2017), har blitt brukt i Kina og andre østasiatiske land siden 1400-tallet for å behandle tilstander som nyre-yang-mangel, impotens og kvinnelig infertilitet. Moderne farmakologiske studier indikerer at Cistanches Herba har flere bioaktiviteter, som immunitetsforbedring, nevrobeskyttelse, antioksidant-, antialdrings- og antifatigue-effekter (Wang et al., 2017). De nevrobeskyttende egenskapene til Cistanches Herba antyder dets terapeutiske potensiale ved kognitiv-relaterte sykdommer som slag, depresjon og Alzheimers sykdom (Wang et al., 2020). I vår forrige studie fant vi at CT-ekstrakt lindret depresjonslignende oppførselen til rotter med kronisk uforutsigbar mild stress (CUMS) (Li et al., 2018). Til dags dato har kjemisk analyse av CT vist at hovedbestanddelene inkluderer fenyletanoidglykosider, iridoidglykosider, polysakkarider og oligosakkarider (Jiang og Tu, 2009), men hvilken type forbindelse som spiller en dominerende rolle i dens antidepressive effekt er fortsatt uklar.

Tallrike studier har bekreftet at den fysiologiske virkningen av tarmen (spesielt kommensal mikrobiota) spiller en viktig rolle i utviklingen av depresjon og kan regulere det nevroendokrine, autonome nervesystemet og immunsystemet (Yang et al., 2020). Dessuten har forholdet mellom tryptofanmetabolisme, tarmmikrobiota og depresjon gradvis tiltrukket seg mye oppmerksomhet. Endret tarmmikrobiota kan aktivere tryptofan-kynurenin-banen, og deretter redusere perifer og cerebral tryptofan-tilgjengelighet, noe som resulterer i 5-HT-mangel (Agus et al., 2018). Vår forrige studie viste at fenyletanoidglykosider i CT generelt har lav biotilgjengelighet, og kan raskt metaboliseres til 3-hydroksy-fenylpropionsyre (3-HPP) og hydroksytyrosol (HT) av tarmmikrobiotaen (Li et al., 2016). I tillegg ble CT-ekstrakt rapportert å gjenopprette tarmmikrobiotahomeostase hos CUMS-rotter (Li et al., 2018). Basert på slik forskning, konkluderte vi med at den toveis interaksjonen mellom fytokjemikaliene og tarmmikrobiotaen kan styre de antidepressive effektene av spesifikke bioaktive komponenter i CT. Nærmere bestemt kan forbindelsene omdannes til absorberbare metabolitter (som 3-HPP og HT) i mage-tarmkanalen av tarmmikrobiota, og deretter utøve antidepressive effekter. I sin tur kan bioaktive komponent-induserte tarmmikrobiota strukturelle endringer samtidig spille en viktig rolle i antidepressiv aktivitet.

Materialer og metoder

Materialer

Alle standarder brukt for kjemisk analyse ble kjøpt fra Durst (Sichuan, Kina). 3-HPP, HT, fluoksetin og imipramin ble kjøpt fra Aladdin (Shanghai, Kina). Det kvantitative BCA-proteinsettet ble kjøpt fra Boster (Wuhan, Kina). Nanjing Jiancheng (Nanjing, Kina) ga 5-HT, BDNF, tumornekrosefaktor-alfa (TNF-), interleukin-1beta (IL-1) og interferon-gamma (IFN- ) sett med enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA). Kortikosteron (CORT), adrenokortikotropisk hormon (ACTH) og kortikotrofinfrigjørende hormon (CRH) ELISA-sett ble kjøpt fra Multi Sciences (Hangzhou, Kina). Syklisk adenosinmonofosfat (cAMP), syklisk guanosinmonofosfat (cGMP), testosteron (T) og gonadotropinfrigjørende hormon (GnRH) ELISA-sett ble kjøpt fra Enzyme-linked Biotechnology (Shanghai, Kina). Tryptofan og kynurenin ELISA-sett ble oppnådd fra Small Molecule Antibodies (Bordeaux, Frankrike). Primære/sekundære antistoffer inkludert zonula occludens 1 (ZO-1), indolamin 2, 3-dioxygenase 1 (IDO1), -aktin og HRP geit anti-kanin IgG (H pluss L) ble kjøpt fra Proteintech (Wuhan, Kina). Alle andre reagenser av analytisk kvalitet eller høyere renhet ble hentet fra kommersielle leverandører.

cistanche ekstrakt supplement

Fremstilling av forskjellige fraksjoner separert fra CTE

CT ble samlet inn i november 2015 i Hetian, Xinjiang, Kina, og autentisert av prof. Xiaobo Li. Kupongprøven (20151108) ble deponert ved School of Pharmacy ved Shanghai Jiao Tong University.

Knust prøver ble ekstrahert tre ganger med destillert vann (1:10, w/v) i 2 timer ved 80~90 ◦C for å oppnå CTE (utbyttet var 57,1 prosent). CTE ble oppløst i destillert vann og deretter sakte omrørt med etanol (1:4, v/v) og plassert ved 4 ◦C i 24 timer. Deretter ble presipitatet og supernatanten samlet ved sentrifugering ved 4000 rpm i 20 minutter. Totalt antall polysakkarider (TP; utbyttet var 5,7 prosent) ble oppnådd ved vasking med 80 prosent etanol og deproteinisering med Sevage-reagens tre ganger fra det oppsamlede bunnfallet. Den gjenværende supernatanten ble deretter kromatografert over en D101 mikroporøs harpikskolonne og eluert med destillert vann og 40% etanol. De eluerte vann- og 40 prosent etanolfraksjonene inneholdt henholdsvis totalt oligosakkarider (TO; utbyttet var 35,1 prosent) og totalt glykosider (TG; utbyttet var 12,1 prosent). TG ble ytterligere eluert med destillert vann og 5 prosent, 10 prosent og 40 prosent etanol gjennom D101 mikroporøs harpiks igjen, og de eluerte fraksjonene på 5 prosent og 40 prosent etanol var totale iridoidglykosider (TG-IrG; utbyttet var 2,7 prosent) og totale fenyletanoidglykosider (TG-PhG; utbyttet var henholdsvis 8,7 prosent).

Kjemisk analyse

For det første ble de viktigste kjemiske bestanddelene i forskjellige fraksjoner separert fra CTE karakterisert ved UPLC-QTOF-MS. For det andre ble det relative innholdet av totale karbohydrater og glykosider bestemt ved UV-Vis-metoden. For det tredje ble hovedkomponentene (echinakosid, verbaskosid, isoverbaskosid, 8-epilogansyre og geniposidinsyre) kvantifisert ved en validert HPLC-metode. De detaljerte parametrene og metodevalideringen er vist i tilleggsmaterialet.

Fig. 1. Flytskjema over dyreforsøk

Tabell 1 Forsøkspersoner og dosering for mus eller rotter i hver gruppe.

Dyreforsøk

De spesifikke dyreforsøksplanene er vist i fig. 1. Alle forsøksdyr ble holdt og akklimatisert i 1 uke før forsøkene i Laboratory Animal Center ved Shanghai Jiao Tong University (Shanghai, Kina), under kontrollerte romtemperaturer (25 ± 2) ◦C; 55 ± 10 prosent relativ fuktighet) med en lys-mørke-syklus på 12:12 timer. Denne forskningen ble utført i samsvar med SJTUs retningslinjer for stell og bruk av forsøksdyr. Dyrefasilitetene og protokollene ble godkjent av den dyreetiske komiteen til SJTU (nr. A2019008).

Ett hundre og femti ICR-hannmus (som veide 18–20 g, 6 uker gamle) ble kjøpt fra Shanghai Slack Biotechnology Company (Shanghai, Kina) og tilfeldig delt inn i 10 grupper (n=15/gruppe). Forsøkspersonene og dosene for atferdsmessige fortvilelsesmus i hver gruppe er vist i tabell 1. Dosene av CTE og dets separerte fraksjoner ble beregnet ved hjelp av følgende formel: dosering=4.55 g/kg.d.bw × utbytte, som ble bestemt i henhold til tre humanekvivalente doseberegninger basert på kroppsoverflate. Dosene av det positive medikamentet imipramin og tarmmikrobiota-metabolitter (3-HPP og HT) ble satt opp i henhold til de tidligere studiene (Gupte et al., 2016; Pablos et al., 2019). Etter intragastrisk administrering én gang daglig i 7 dager, ble åpen felttest (OFT), haleopphengstest (TST) og tvungen svømmetest (FST) utført på henholdsvis 8., 9. og 10. dag. De spesifikke metodene for atferdstestene er skissert i tilleggsmaterialet.

Syttito hannrotter Sprague-Dawley (vekt 160–180 g, 6 uker gamle) ble kjøpt fra Shanghai Slack Laboratory Animal Company (Shanghai, Kina). Før de formelle eksperimentene ble alle rottene utsatt for sukrosepreferansetesten (SPT) etter den tilsvarende treningen. Rottene ble delt inn i 8 grupper (n=9/gruppe) i henhold til deres sukrosepreferanse (Supplerende Fig. S1). Forsøkspersonene og dosene for rottene i hver gruppe er vist i tabell 1. Dosene ble satt opp i henhold til konverteringskoeffisienten mellom mus og rotte basert på deres effektive doser hos musene med fortvilelse i atferd. Og dosen av det positive kontrollmedisinen fluoksetin var i samsvar med forrige studie (Hou et al., 2017). Alle gruppene fikk en serie med kronisk uforutsigbart mildt stress (CUMS) bortsett fra kontrollgruppen. Stressfaktorer ble påført kontinuerlig og tilfeldig i 4 uker (se tilleggstabell S1 for detaljer). Mat og vann var fritt tilgjengelig for kontrollrottene, som forble uforstyrret i et annet rom, bortsett fra atferdstestene. Forsøkspersonene ble administrert intragastrisk 1 time før CUMS-prosedyren i løpet av 4 uker. Etter 28 dager med kontinuerlige stressfaktorer og medikamentadministrasjon ble OFT, SPT og FST utført på henholdsvis 29., 31. og 33. dag. De spesifikke metodene for atferdseksperimentene er vist i tilleggsmaterialet.

Tabell 2 Innhold av echinakosid, verbaskosid, isoverbaskosid, 8-epilogansyre og geniposidinsyre i hver fraksjon.

Prøveinnsamling og biokjemisk analyse

Etter atferdstestene ble de fastende rottene bedøvet med pentobarbitalnatrium, og fullblod ble samlet for å få serumprøver. Etter hjerteperfusjon med saltvann ble innholdet i hippocampus, tykktarmen og cecal samlet og lagret i -80 ◦C. Distale tykktarmssegmenter ble fjernet og fiksert i 4 prosent paraformaldehyd. Nivåene av CORT, CRH, ACTH, TNF-, IL-1, IFN-, cAMP, cGMP, T, GnRH, tryptofan og kynurenin i serumet, 5-HT, BDNF og TNF- i hippocampus, og TNF- og IFN- i tykktarmen ble målt i henhold til instruksjonene som fulgte med det tilsvarende ELISA-settet.

Histologi, immunhistokjemi og western-blotting-analyse

Hematoxylin og eosin (H&E) og Alcian blue-periodic acid-Schiff (AB-PAS)-farging ble brukt for å observere de patologiske endringene i tykktarmsvev. I tillegg ble immunhistokjemivurderinger av disse seksjonene utført for å observere ZO-1-proteinekspresjon i tykktarmsepitelceller (Ding et al., 2020). Detaljer om prøveforberedelse og western-blotting-analyse for å bestemme IDO1-proteinekspresjon i tykktarmen og hippocampus er også beskrevet i tilleggsmaterialene.

Sammensetningsprofilanalyse av tarmmikrobiota

16S rRNA high-throughput sekvensering ble utført av MajorBio Co., Ltd. (Shanghai, Kina), og den detaljerte metoden og databehandlingen er vist i tilleggsmaterialet.

Statistisk analyse

Dataene uttrykkes som gjennomsnitt ± standardfeil av gjennomsnittet (SEM). Enveis variansanalyse (ANOVA) ble brukt til å sammenligne flere grupper ved å bruke SPSS 20.0-programvare. En forskjell ble ansett som signifikant ved p < 0,05.="" korrelasjonene="" mellom="" tarmmikrober="" og="" visse="" depresjonsrelaterte="" fysiologiske="" faktorer="" ble="" analysert="" ved="" å="" bruke="" spearman-korrelasjonskoeffisienten="" basert="" på="">

Resultater

Kjemisk analyse av forskjellige fraksjoner separert fra CTE

Hovedkomponentene ble karakterisert ved bruk av UPLC-QTOF-MS (tilleggstabell S2 og fig. S2), og totalt 21 bestanddeler ble identifisert, inkludert 16 bestanddeler av fenyletanoidglykosider, 2 bestanddeler av fenolglykosider i CTE, TG og TG- PhG; og 3 bestanddeler av iridoidglykosider i CTE, TG og TG-IrG. Totalt sett var det relative innholdet av totale karbohydrater i TP og TO henholdsvis 60,3 prosent og 80,8 prosent. Det relative innholdet av totale glykosider i TG var 87,7 prosent. Tilsvarende utgjorde fenyletanoid- og iridoidglykosider 86,7 prosent og 53,4 prosent av henholdsvis TG-PhG og TG-IrG. Innholdet av echinakosid, verbaskosid, isoverbaskosid, 8-epilogansyre og geniposidinsyre i hver fraksjon er vist i tabell 2, og HPLC-kromatogram- og metodevalideringsdata er oppført i tilleggstabell S3 og fig. S3.

Fig. 2. Effektene av forskjellige fraksjoner separert fra CTE og de typiske metabolittene av tarmmikrobiota på FST, TST, OFT hos mus.

Effekter av forskjellige fraksjoner skilt fra CTE og de typiske metabolittene av tarmmikrobiota på atferdsmessige fortvilelsestester hos mus

Som vist i fig. 2, sammenlignet med kontrollgruppen, viste mus som ble utsatt for 7 dager med imipramin (positiv kontroll) administrering signifikante reduksjoner i immobilitetstidene i både FST og TST og viste ingen signifikant effekt på den totale tilbakelagte distanse i OFT . Lignende endringer ble også observert i CTE-, TG- og HT-grupper, noe som indikerer at CTE, TG og HT utøvde den antidepressive aktiviteten og effektene var ikke relatert til eksitabilitet. Derfor var TG og HT den dominerende bioaktive fraksjonen separert fra henholdsvis CTE og typiske metabolitter av tarmmikrobiota. Interessant nok ble det ikke vist noen signifikante endringer i immobilitetstidene i FST etter TG-PhG og TG-IrG administrering sammenlignet med kontrollene, eller i TST etter TG-PhG administrering, noe som indikerer at tilstedeværelsen av fenylethanoid og iridoid glykosider kan være avgjørende for den antidepressive aktiviteten til CTE.

Tabell 3 Effektene av forskjellige glykosid-anrikede fraksjoner og HT på FST, SPT og OFT hos CUMS-rotter.

Farmakodynamiske effekter og biokjemiske endringer av forskjellige glykosid-anrikede fraksjoner og HT på CUMS-rotter

Som vist i tabell 3, viste rotter som ble utsatt for 28 dager av CUMS-paradigmet betydelige reduksjoner (p < 0.001)="" i="" sukrosepreferanse="" i="" spt,="" totalt="" tilbakelagt="" distanse,="" og="" oppvekstnummer="" i="" oft,="" samt="" en="" signifikant="" økning="" (p="">< 0,01)="" i="" total="" immobilitetstid="" i="" fst="" sammenlignet="" med="" kontrollene,="" noe="" som="" tyder="" på="" induksjon="" av="" depresjonslignende="" fenotyper="" hos="" cums-rotter.="" de="" depressive="" ytelsene="" ble="" reversert="" i="" flx-gruppen="" (positiv="" kontroll).="" på="" samme="" måte="" resulterte="" cte-,="" tg-,="" tg-phg-,="" tg-irg-="" og="" ht-behandling="" i="" gjenoppretting="" av="" sukrosepreferanse="" til="" normale="" nivåer="" hos="" cums-rotter,="" som="" var="" 102,7="" prosent="" ,="" 94,1="" prosent="" ,="" 89,8="" prosent="" ,="" 91,9="" prosent="" og="" 94,3="" prosent="" av="" kontroller,="" henholdsvis.="" konsekvent="" i="" fst-,="" cte-="" og="" tg-gruppene="" viste="" de="" mest="" åpenbare="" effektene,="" og="" immobilitetstidene="" nådde="" henholdsvis="" 103,3="" prosent="" og="" 93,4="" prosent="" av="" kontrollgruppene,="" mens="" immobilitetstidene="" for="" tg-phg-,="" tg-irg-="" og="" ht-gruppene="" nådde="" akkurat="" 62,1="" prosent,="" 73,2="" prosent="" og="" 69,9="" prosent="" av="" kontrollgruppene.="" lignende="" signifikante="" økninger="" (p="">< 0,05)="" ble="" observert="" i="" den="" totale="" tilbakelagte="" avstanden="" og="" oppveksttallet="" i="" oft="" etter="" cte-,="" tg-="" og="" ht-administrasjon,="" og="" tg-phg-="" og="" tg-irg-behandling="" hadde="" en="" tendens="" til="" å="" revidere="" oppveksttallet="" hos="" cums-rotter.="" resultatene="" indikerte="" at="" tg="" var="" den="" dominerende="" bioaktive="" antidepressive="" fraksjon="" skilt="" fra="" cte,="" og="" fenyletanoid-="" og="" iridoidglykosider="" var="" uunnværlige="" for="" å="" utøve="" sin="" antidepressive="" effekt.="" dessuten="" ble="" ht="" vist="" å="" være="" en="" av="" de="" aktive="" metabolittene="" til="" tg="" in="">

Konsekvent økte det å lide av CUMS nivåene av CORT, CRF, ACTH, TNF-, IL-1 og IFN- i serumet og TNF- i hippocampus hos rotter, sammenlignet med kontrollgruppen (p.< 0.05),="" resulting="" in="" significant="" reductions="" (p="" <="" 0.05)="" in="" the="" levels="" of="" hippocampal="" 5-ht="" and="" bdnf="" (fig.="" 3).="" except="" for="" a="" non-significant="" difference="" in="" the="" level="" of="" hippocampal="" bdnf="" between="" flx="" and="" cums="" groups,="" the="" above-mentioned="" alterations="" in="" cums="" rats="" could="" be="" significantly="" reversed="" (p="" <="" 0.05)="" after="" administration="" of="" fluoxetine,="" cte,="" tg,="" and="" ht,="" indicating="" that="" cte,="" tg,="" and="" ht="" showed="" ameliorative="" effects="" on="" the="" hyperactivation="" of="" hpa="" axis,="" severe="" peripheral="" and="" neural="" inflammation,="" and="" deficiencies="" in="" 5-ht="" and="" bdnf.="" likewise,="" tg-irg="" and="" tgphg="" treatment="" significantly="" reduced="" the="" levels="" of="" serum="" cort,="" tnf-α,="" ifn-γ,="" and="" hippocampal="" tnf-α,="" and="" increased="" the="" level="" of="" hippocampal="" 5-ht="" in="" cums="" rats="" (p="" <="" 0.05).="" significant="" decreases="" (p="" <="" 0.05)="" in="" the="" levels="" of="" serum="" crf="" and="" acth="" were="" also="" observed="" in="" the="" tg-irg="" group="" compared="" with="" cums="" group.="" interestingly,="" the="" levels="" of="" serum="" cort,="" tnf-α,="" acth,="" and="" crf="" in="" tg-phg="" and="" tg-irg="" groups="" were="" significantly="" higher="" than="" those="" in="" the="" tg="" group="" (p="" <="" 0.05),="" and="" the="" levels="" of="" hippocampal="" 5-ht="" and="" bdnf="" exhibited="" the="" opposite="" expression="" pattern="" (p="" <="" 0.05).="" these="" results="" showed="" that="" the="" effects="" of="" tg-phg="" and="" tg-irg="" on="" the="" hyperactivity="" of="" the="" hpa="" axis,="" peripheral="" and="" neural="" inflammation="" and="" shortage="" of="" 5-ht="" were="" clearly="" inferior="" to="" tg,="" indicating="" that="" phenylethanoid="" and="" iridoid="" glycosides="" might="" exert="" synergistic="" effects="" on="" the="" above-mentioned="" multiple="">

TG og HT regulerer HPG-aksen og syklisk nukleotidmetabolisme hos CUMS-rotter

Nivåene av T, GnRH, cAMP og cGMP og forholdet mellom cAMP og cGMP (cAMP/cGMP) i serumet som ble utsatt for CUMS ble målt, og resultatene er vist i tabell 4. Konsentrasjonene av T, GnRH, cAMP, og cAMP/cGMP i serumet ble signifikant redusert, og nivået av cGMP ble signifikant økt (p < 0.05)="" i="" cums-gruppen="" sammenlignet="" med="" kontrollene,="" noe="" som="" indikerer="" at="" utsatt="" for="" cums="" resulterte="" i="" undertrykkelse="" av="" hpg-aksen="" og="" syklisk="" nukleotidmetabolisme="" dysfunksjon.="" sammenlignet="" med="" cums-gruppen="" var="" det="" ingen="" signifikante="" endringer="" i="" flx-gruppen.="" overraskende="" nok,="" etter="" tg-="" og="" ht-behandling="" ble="" det="" vist="" signifikante="" økninger="" (p="">< 0.05)="" i="" nivåene="" av="" serum="" t,="" gnrh,="" camp="" og="" camp/cgmp,="" mens="" nivået="" av="" serum-cgmp="" ble="" betydelig="" redusert="" (p="">< 0,05).="" disse="" resultatene="" indikerte="" at="" tg="" og="" ht="" regulerte="" hpg-aksen="" og="" syklisk="" nukleotidmetabolisme,="" som="" var="" klart="" overlegen="" den="" positive="" kontrollen="">

Fig. 3. Effekter av forskjellige glykosid-anrikede fraksjoner og HT på nivåene av CORT, ACTH, CRF, TNF-, IL-1, IFN- i serumet og 5-HT, BDNF, TNF- i hippocampus til CUMS-rotter.

TG og HT lindrer lavgradig betennelse i tykktarmen og forstyrrelse av tarmbarrieren hos CUMS-rotter

H&E-farging ble brukt for å vurdere tykktarmsmorfologiske skader, og ingen signifikante forskjeller i tykktarmen ble observert blant forsøksgruppene (fig. 4a). Videre ble også effektene av TG og HT på inflammasjon i tykktarmen og forstyrrelse av tarmbarrieren analysert (fig. 4b-d). Sammenlignet med kontrollgruppen, ble antall begerceller og tykkelsen på slimlaget redusert i CUMS-gruppen. Konsekvent ble proteinekspresjonen av ZO-1 og nivåene av IFN- og TNF- i tykktarmen signifikant redusert (p < 0.05)="" og="" økt="" (p="">< {="" {13}}.05),="" henholdsvis,="" noe="" som="" tyder="" på="" at="" selv="" om="" ingen="" åpenbar="" histologisk="" skade="" ble="" indusert,="" resulterte="" utsatt="" for="" cums="" i="" lavgradig="" betennelse="" i="" tykktarmen="" og="" forstyrrelse="" av="" tarmbarrieren.="" etter="" fluoksetin-,="" tg-="" og="" ht-behandling="" ble="" antall="" begerceller="" og="" tykkelsen="" på="" slimlaget="" økt,="" og="" nivåene="" av="" colon="" ifn-="" og="" tnf-="" ble="" signifikant="" redusert="" (p="">< 0,05).="" i="" tillegg="" økte="" tg="" og="" ht="" signifikant="" (p="">< 0,05)="" proteinekspresjonen="" av="" zo-1="" til="" et="" nivå="" som="" ligner="" det="" for="" kontrollgruppen.="" disse="" resultatene="" viste="" at="" tg="" og="" ht="" kunne="" lindre="" lavgradig="" betennelse="" i="" tykktarmen="" og="" forstyrrelse="" av="" tarmbarrieren="" hos="">

Tabell 4 Effekter av TG, HT eller fluoksetin på HPG-akserelaterte hormoner og nukleotidmetabolismerelaterte indekser i serumet til CUMS-rotter.

Effekter av TG og HT på sammensetning av tarmmikrobiota

Etter å ha fjernet ukvalifiserte sekvenser, ble det oppnådd totalt 1 874 721 effektive avlesninger. Resultatene for alfa-diversitet (fig. 5a) og beta-diversitet (fig. 5b) viste at selv om rikdommen (Chao) og diversiteten (Shannon) til tarmmikrobiotaen i cecalinnholdet ikke var forskjellig, var den generelle strukturen til tarmmikrobiotaen i plottet for hovedkoordinatanalyse (PCoA) indikerte en slående forskjell mellom kontroll- og CUMS-grupper. Dessuten økte TG- og HT-behandlingen signifikant bakterierikheten til CUMS-rotter og induserte markante forskjeller i PCoA-plottet sammenlignet med de for CUMS-rotter, og viste klare likheter med kontrollene, spesielt når TG ble analysert.

De taksonomiske endringene i mikrobiota bekreftet videre at TG utøvde en dramatisk regulatorisk effekt på sammensetningen av tarmmikrobiota. Etter TG-administrering ble forekomsten av flertallet av endrede taxa i CUMS-rotter reversert til et nivå som ligner på kontrollgruppen. En betydelig reduksjon (14,2 prosent , p < 0,05)="" og="" berikelse="" (53,6="" prosent="" ,="">< 0.05)="" in="" the="" abundances="" of="" the="" phylum="" firmicutes="" and="" bacteroidetes="" were="" observed="" in="" the="" tg="" group="" compared="" with="" cums="" group="" (fig.="" 5c),="" respectively.="" consistently,="" at="" the="" family="" level="" (supplementary="" table="" s4),="" tg="" decreased="" the="" abundances="" of="" ruminococcaceae="" (phylum="" firmicutes)="" and="" peptococcaceae="" (phylum="" firmicutes)="" by="" 33.9%="" and="" 82.9%,="" respectively,="" compared="" with="" cums="" group="" (p="" <="" 0.05).="" conversely,="" significant="" enrichments="" in="" the="" abundances="" of="" family="" erysipelotrichaceae="" (phylum="" firmicutes,="" 78.4%,="" p="" <="" 0.05)="" and="" muribaculaceae="" (phylum="" bacteroidetes,="" 77.3%,="" p="" <="" 0.05)="" existed="" in="" tg="" group.="" consistently="" at="" the="" genus="" level="" (fig.="" 5d),="" the="" abundances="" of="" anaerotruncus,="" harryflintia,="" ruminiclostridium_9,="" unclassified_f_ruminococcaceae="" (members="" of="" the="" family="" ruminococcaceae),="" and="" peptococcus="" (a="" member="" of="" the="" family="" peptococcaceae)="" were="" significantly="" decreased="" while="" norank_f_erysipelotrichaceae,="" allobaculum,="" dubosiella="" (members="" of="" the="" family="" erysipelotrichaceae)="" and="" norank_f_muribaculaceae="" (a="" member="" of="" the="" family="" muribaculaceae)="" displayed="" higher="" abundances="" in="" tg="" group="" than="" those="" of="" cums="" group="" (p="">< 0.05).="" in="" addition,="" tg="" decreased="" the="" abundances="" of="" tyzzerella_3,="" acetatifactor,="" and="" norank_f_lachnospiraceae="" assigned="" to="" the="" family="" lachnospiraceae="" (p="" <="" 0.05),="" although="" the="" abundance="" of="" the="" family="" lachnospiraceae="" was="" similar="" across="" all="" experimental="" groups.="" unlike="" tg,="" ht="" decreased="" the="" abundances="" of="" partially="" altered="" taxa="" induced="" by="" cums,="" including="" the="" family="" ruminococcaceae,="" 3="" genera="" (anaerotruncus,="" harryflintia,="" and="" ruminiclostridium_9)="" assigned="" to="" the="" family="" ruminococcaceae="" and="" 2="" genera="" (tyzzerella_3,="" acetatifactor)="" assigned="" to="" the="" family="" lachnospiraceae.="" additionally,="" converse="" variations="" were="" observed="" in="" the="" abundances="" of="" ruminococcaceae_ucg_013="" and="" streptococcus="" in="" the="" ht="" group.="" these="" results="" indicated="" that="" tg="" and="" ht="" exerted="" clear="" differences="" in="" the="" regulation="" of="" gut="" microbiota="" composition,="" and="" the="" effect="" of="" tg="" was="" superior="" to="" that="" of="" tg="" especially="" in="" altering="" the="" genera="" assigned="" to="" the="" family="" erysipelotrichaceae,="" peptococcaceae,="" and="">

Fig. 4. Effekter av TG, HT eller fluoksetin på de morfologiske endringene, ZO-1-proteinekspresjon, IFN- og TNF-konsentrasjoner i tykktarmen til CUMS-rotter.

Korrelasjonsanalyse av endrede mikrobielle slekter påvirket av TG og HT, HPA-akserelaterte hormoner, pro-inflammatoriske cytokiner, 5-HT og BDNF

For å belyse assosiasjonene mellom endringer i tarmmikrobiota-sammensetningen påvirket av TG og HT, og tilsvarende depresjonsrelaterte egenskaper, ble Spearmans korrelasjonsanalyse utført. Som vist i fig. 6 var nivåene av 5-HT og BDNF i hippocampus bare signifikant positivt korrelert med norank_f_Muribaculaceae. Ellers kan klare korrelasjoner identifiseres mellom de endrede mikrobielle slektene og HPA-akserelaterte hormoner. Spesielt var Dubosiella, norank_f_Muribaculaceae, norank_f_ Erysipelotrichacea og Peptococcus sterkt relatert til HPA-aksefunksjonen. Serum CORT, CRF og ACTH hadde negative korrelasjoner med Dubosiella, norank_f_Muribaculaceae og norank_f_Erysipelotrichacea, og positive assosiasjoner med Peptococcus. Videre viste Dubosiella og norank_f_ Erysipelotrichacea negative assosiasjoner med colon IFN- og hippocampal TNF-, mens lignende forhold eksisterte i Allobaculum, Harryfinita og serum og hippocampal TNF-, så vel som i norank _f_Lachnospiracea og serum IFN- og TNF-. I motsetning til dette var Peptococcus positivt assosiert med colon TNF- og serum TNF-. På samme måte var norank_f_Muribaculaceae positivt relatert til serum IFN- og TNF-. Disse resultatene indikerte at de endrede mikrobielle slektene, spesielt visse slekter som tilhører familien Erysipelotrichaceae, Peptococcaceae og Muribaculaceae, som var spesifikt påvirket av TG, viste sterke assosiasjoner med HPA-akserelaterte hormoner og pro-inflammatoriske cytokiner samtidig, noe som demonstrerte den kritiske rollen av tarmmikrobiota for å regulere HPA-aksens funksjon og betennelse.

cistanche propiedades

TG og HT hemmer tryptofan-kynurenin-metabolismen hos CUMS-rotter

Effektene av TG og HT på nivåene av tryptofan og kynurenin i serumet til rotter, samt uttrykket av IDO1 i tykktarmen og hippocampus, ble bestemt. Som vist i fig. 7 og fig. 8, sammenlignet med kontrollgruppen, ble nivået av tryptofan i serumet betydelig redusert i CUMS-gruppen, i motsetning til det økte nivået av kynurenin og kynurenin-til-tryptofan-forholdet (Kyn /Trp) og IDO1-proteinekspresjon i tykktarmen og hippocampus. Sammenlignet med CUMS-gruppen var serum Kyn/Trp i FLX-gruppen betydelig redusert (p< 0.05).="" tg="" and="" ht="" treatment="" resulted="" in="" a="" significant="" increase="" in="" the="" serum="" tryptophan="" level="" in="" cums="" rats="" (p="" <="" 0.05),="" and="" a="" decrease="" in="" the="" levels="" of="" serum="" kynurenine="" and="" kyn/trp="" (p="" <="" 0.05).="" in="" addition,="" tg="" significantly="" inhibited="" the="" expression="" of="" ido1="" protein="" in="" the="" colon="" of="" cums="" rats="" (p="" <="" 0.05),="" while="" a="" non-significant="" difference="" in="" the="" expression="" of="" ido1="" protein="" in="" the="" hippocampus="" was="" observed="" between="" cums="" and="" tg="" groups.="" however,="" the="" effect="" of="" ht="" on="" the="" expression="" of="" ido1="" protein="" in="" the="" colon="" and="" hippocampus="" was="" contrary="" to="" that="" of="" tg,="" indicating="" that="" tg="" and="" ht="" inhibited="" tryptophan-kynurenine="" metabolism="" by="" decreasing="" the="" expression="" of="" ido1="" in="" the="" colon="" and="" hippocampus="" of="" cums="" rats,="">

Fig. 5. Analyse av mangfoldet, sammensetningen og forskjellene til tarmmikrobiota i cecalprøver.

Diskusjon

I denne studien ble to forskjellige dyremodeller brukt til å screene for bioaktive forbindelser i CT som lindrer depresjonslignende atferd for første gang. TP og TO var mest sannsynlig ineffektive ingredienser i CTE, mens TG viste mest potensiale i behandlingen av depresjon. Tidligere studier på CT, så vel som Cistanche-planter, har stort sett fokusert på bioaktivitetene til fenyletanoidglykosider med det høyeste innholdet og neglisjert viktigheten av iridoidglykosider og andre mindre rikelige ingredienser. Interessant nok viste studien vår at fenyletanoid- og iridoidglykosider viste synergistiske effekter på hyperaktiviteten til HPA-aksen, alvorlig perifer og nevrale betennelse og mangler i hippocampus 5-HT og BDNF, som kan være den kritiske årsaken til det fordelaktige antidepressivet. effekt av TG. Disse resultatene antyder videre multikomponent- og multitarget-egenskapene til urtemedisin og minner oss om at bestanddelene med lavere nivåer, til og med sporingredienser, også kan spille en nøkkelrolle i farmakologiske effekter.

Kronisk stress induserer hyperaktiviteten til HPA-aksen, som fremmer utbruddet av depresjon, samt undertrykkelse av HPG-aksen via redusert GnRH-frigjøring og/eller hypofysefølsomhet av GnRH (Kirby et al., 2009). I mellomtiden er cAMP og cGMP viktige mellomliggende knutepunkter som stolte på mange nevrotransmittere og hormoner for å utøve sine fysiologiske effekter (Siawrys et al., 2002). Nyere studier har konsekvent vist at forekomsten av nyre-yang-mangel er nært knyttet til dysfunksjon av hypothalamus-hypofyse-målkjertelaksen (Zhang et al., 2019). Ved nyre-yang-mangelsyndrom er det også observert markerte reduksjoner i serumnivåene av cAMP og cAMP/cGMP. I denne studien fant vi at TG kunne hemme nivåene av serum CORT, CRF og ACTH, og øke serum T- og GnRH-innhold hos CUMS-rotter, noe som indikerer gjenoppretting av HPA- og HPG-aksedysfunksjon etter TG-administrasjon. I tillegg reverserte TG en signifikant reduksjon i nivået av serum cAMP/cGMP hos rotter utsatt for CUMS. Dermed kan den potensielle underliggende mekanismen til CT i behandlingen av depresjon og nyre-yang-mangel være delvis lik og fortjener å bli utforsket videre. Dessuten er produksjonen av seksuell lyst og atferd en kompleks nevral refleksprosess. Kjønnshormoner er store kilder til sentral seksuell begeistring, og mangel på kjønnshormoner kan forårsake mindre seksuell lyst eller seksuell dysfunksjon (Holloway og Wylie, 2015). Spesielt hemmer overdreven 5-HT frigjøringen av GnRH, som er en dominerende årsak til forekomsten av kronisk seksuell dysfunksjon etter langtidsbehandling med SSRI (Prasad et al., 2015). I vår studie var fluoksetin (representativ for SSRI) ineffektivt i HPG-aksens dysfunksjon. Men selv om TG betydelig forbedret nivået av 5-HT i hippocampus, ble lignende endringer i serum-T- og GnRH-nivåer også observert, og dermed forbedret undertrykkelsen av HPG-aksen. Disse resultatene viser den klare fordelen med CT i behandlingen av depresjon, og den iboende mekanismen som er ansvarlig for disse effektene må studeres videre.

Økende bevis har vist at tarmen er et potensielt mål for behandling av kroniske sykdommer ved bruk av naturlige forbindelser med lav biotilgjengelighet (Zhou et al., 2020). Nyere forskning (Wei et al., 2019) har indikert at CUMS-behandling induserer fekale mikrobiomendringer og tarmbarrieredefekter, som letter bakteriell invasjon i tykktarmsslimhinnen og forverrer betennelsesreaksjoner i tykktarmen. I samsvar med denne rapporten, viste resultatene våre at 4 uker med CUMS-eksponering induserte en omfattende utarming av begercelleantall og slimlagtykkelse i rottetykktarmen, samt utbruddet av tarmbarriereforstyrrelser representert ved økt tarmpermeabilitet, som ble bestemt av måling av ZO-1-proteinet. I tillegg ble økt uttrykk for pro-inflammatoriske faktorer (som TNF- og IFN-) observert i tykktarmen. Følgelig indikerte disse funnene at selv om ingen åpenbar histologisk skade ble indusert, initierte CUMS-behandling kolonbetennelse og forstyrrelse av tarmbarrieren. Tidligere studier har rapportert at CT utøvde forbedret effekt for å forhindre DSS-indusert kolitt hos mus (Jia et al., 2014). Inkonsekvent ble TG også vist å lindre lavgradig betennelse i tykktarm og tarmbarriereforstyrrelser hos CUMS-rotter, noe som understreker potensialet for klinisk behandling av tykktarmsbetennelsesrelaterte sykdommer.

Omfattende studier har også vist at forholdet mellom kommensal tarmmikrobiota, HPA-aksen og betennelse er komplekst og spiller en avgjørende rolle i utviklingen av depresjon (Misiak, et al., 2020). Endringer i sammensetningen av tarmmikrobiota kan bidra til økt frigjøring av cytokiner og syntese av små bioaktive molekyler (Du et al., 2020). Visse cytokiner (som TNF-) kan passere gjennom blod-hjerne-barrieren og er potente aktivatorer av HPA-aksen (Misiak et al., 2020). I sin tur kan hyperaktiveringen av HPA-aksen bidra til tarmmikrobiota dysbiose, kronisk betennelse i tykktarmen og endret tarmpermeabilitet (Misiak et al., 2020). I samsvar med tidligere studier er TG-medisinert modifikasjon av tarmmikrobiotaen sannsynligvis ansvarlig for dens forbedrende effekt på depresjon. Vi observerte at TG reverserte mengden av mikrobielle taxaer på forskjellige nivåer hos rotter utsatt for CUMS til et nivå som ligner på kontrollene. Spesielt ble de viktigste endrede slektene som tilhører familien Peptococcaceae, Erysipelotrichaceae og Muribaculaceae funnet å være sterkt korrelert med HPA-aksen og betennelse. I samsvar med resultatene våre har familie Peptococcaceae, Erysipelotrichaceae og Muribaculaceae blitt rapportert å spille en viktig rolle i å opprettholde slimhinnebarriereintegritet og forekomst av betennelse (Kankoush, 2015; Borton et al., 2017; Zhang et al., 2020). Derfor antok vi at TG kunne moderere forekomsten av noen slekter tildelt familien Erysipelotrichacea, Peptococcaceae og Muribaculaceae, og deretter lindre lavgradig betennelse i tykktarmen, hyperaktivitet av HPA-aksen og forstyrrelse av slimhinnebarriereintegritet. Interessant nok var det i vår studie at bare én slekt kalt nor ank_f_Muribaculaceae var korrelert med 5-HT og BDNF i hippocampus. Den spesifikke mekanismen for forholdet er fortsatt uklar og må undersøkes nærmere. Ellers tyder funnene også på at det er ekstremt vanskelig for flertallet av de endrede slektene forårsaket av TG å direkte påvirke nivåene av 5-HT i hippocampus. For å forklare hvordan endringer i sammensetningen av tarmmikrobiota påvirker nivået av hippocampus 5-HT etter TG-behandling, fanget det intrikate forholdet mellom tryptofanmetabolisme, HPA-aksen, inflammatoriske cytokiner og 5-HT vår oppmerksomhet. Tryptofan er en essensiell aminosyre for mennesker, og mindre enn 1 prosent brukes i proteinsyntese, hvor majoriteten (over 90 prosent) blir omdannet av IDO1 og tryptofan 2,3-dioksygenase 2 (TDO2) til kynureniner, og ca. 5 prosent blir drevet av tryptofanhydroksylase nedover serotoninbanen (Duan, et al. 2018). Nivået av 5-HT i hjernen avhenger i stor grad av tilgjengelighet av perifer tryptofan, gitt at tryptofan transporteres inn i hjernen via nøytrale aminosyretransportører (Duan et al., 2018). IDO1, det hastighetsbegrensende enzymet i det første trinnet av kynurenin-veien, induseres primært av IFN- og andre pro-inflammatoriske cytokiner, som IL-1 og TNF- (Kennedy et al., 2017), som ble vist å være assosiert med tarmmikrobiota i vår studie. Som rapportert metaboliseres mer tryptofan gjennom kynurenin-veien, og reduserer derved konkurransedyktig konverteringen av tryptofan til 5-HT, og kobler til den reduserte 5-HT som vanligvis finnes ved depresjon (O'Mahony et al., 2015). Dermed er lavere tryptofannivåer og høyere Kyn/Trp vanlig og sammenfaller med økt risiko for depressiv stemning. Etter TG-administrasjon ble overekspresjonen av IDO1 i tykktarmen hemmet, noe som resulterte i økte serumtryptofannivåer og en reduksjon i serum Kyn/Trp, noe som avslørte den potensielle koblingen mellom tarmmikrobiota og hippocampus 5-HT-nivå påvirket av TG. I mellomtiden er BDNF, et nevrotrofinfamiliemedlem, avgjørende for celledifferensiering, nevronal overlevelse, synapsedannelse og nevroplastisitetsprosesser ved depresjon (Greenberg et al., 2009). Nyere studier har vist at BDNF har blitt funnet å være nært assosiert med tarmslimhinnebarrierefunksjon og tarmmikrobiota (Maqsood og Stone, 2016). I tillegg har endringene i tarmmikrobiota blitt rapportert å ha potensial til å øke nivåene av BDNF-uttrykk og dermed påvirke utviklingen av depressiv-lignende atferd (Du et al., 2020). Imidlertid, i likhet med 5-HT-variasjon, var det ekstremt umulig for de fleste endrede slekter forårsaket av TG i vår studie å direkte påvirke nivåene av BDNF i hippocampus, og den iboende molekylære forbindelsen og mekanismen trenger ytterligere undersøkelse.

I motsetning til dette viste HT, en tarmmikrobiota-metabolitt av TG, også en antidepressiv effekt i denne studien, som er i samsvar med dens fordelaktige nevrobeskyttende aktivitet (Hu et al., 2014). Bekymringsfullt kan HT også moderere pro-inflammatoriske cytokiner, HPA- og HPG-akserelaterte hormoner og hippocampus 5-HT-konsentrasjoner til et nivå som ligner på kontrollene i CUMS-rotter, mens de fleste av de endrede mikrobielle slektene påvirket av HT hadde svake korrelasjoner med de ovennevnte fysiologiske indeksene, noe som tyder på at tarmmikrobiotaen kanskje ikke er målet for den antidepressive aktiviteten til HT. Videre undertrykte HT overekspresjonen av IDO1 i hippocampus, men ikke tykktarmen, ledsaget av økte serumtryptofannivåer. Forekomsten av de tilsynelatende forskjellene mellom TG og HT kan skyldes den utmerkede absorpsjonen av HT i blodet og kapasiteten for HT til å krysse blod-hjerne-barrieren (Robles-Almazan et al., 2018), som også indikerer at sterk metabolsk kapasitet i tarmmikrobiotaen er spesielt viktig i den antidepressive aktiviteten til TG, i tillegg til dens fysiologiske funksjoner. Derfor har vi foreløpig bevist at den toveis interaksjonen mellom fytokjemikaliene og tarmmikrobiotaen spiller en kritisk rolle i behandlingen av depresjon med TG-administrasjon (som vist i fig. 9).

Cistanche kosttilskuddspille aavgjørende rolle i behandlingen av depresjon.

For mer informasjon, vennligst klikk

Konklusjon

Oppsummert var TG hovedsakelig ansvarlig for den antidepressive aktiviteten til CT, noe som gjenspeiles i de synergistiske effektene av fenyletanoid- og iridoidglykosider på hyperaktiveringen av HPA-aksen, alvorlig perifer og nevrale betennelse og mangler i 5-HT og BDNF i hippocampus. Videre ble den potensielle molekylære mekanismen for den antidepressive effekten av TG oppnådd gjennom toveis interaksjon mellom fytokjemikaliene og tarmmikrobiota. I tillegg indikerte forbedring av den undertrykte HPG-aksen og sykliske nukleotidavvik ved TG og HT, som ikke ble regulert av behandling med SSRI representert av fluoksetin, den klare fordelen med CT i behandlingen av depresjon. Slike modulasjoner representerer en lovende strategi for behandling av depresjon ved bruk av CT og lignende tradisjonelle urtemedisiner.