4.6. Tiobarbitursyrereaktive stoffer (TBAR)

Innholdet av TBAR ble brukt som en indeks for lipoperoksidasjon. I hjernevev ble 50 mM fosfatbuffer (pH 7,4) tilsatt til en konsentrasjon på 25 mg/ml (w/v), og suspensjonen ble homogenisert ved sonikering i 10 s. Til 30 µL av homogenatet ble 250 µL 1 prosent fosforsyre og 75 µL 0,6 prosent tiobarbitursyre (TBA) tilsatt. Reagensblandingen ble inkubert ved 100 ◦C i et vannbad i 45 minutter, hvoretter den ble avkjølt i et isbad og deretter sentrifugert ved 3000×g i 10 minutter ved 4◦C. Et volum på 150 µL supernatant ble tatt fra hver prøve. Fluorescens ble målt ved bruk av en FLUOSTAR mikroplateleser (BMG LABTECH, Ortenberg, Baden-Württemberg, Tyskland) med eksitasjonsfilteret satt til 485 nm (båndbredde 5 nm) og emisjonsfilteret satt til 530 nm (båndbredde 5 nm). En kalibreringskurve ble utarbeidet ved bruk av malondialdehyd (MDA) som standard. Resultatene ble uttrykt i pmol MDA/mg protein.

Glykosid av cistanche kan også øke aktiviteten til SOD i hjerte- og levervev, og redusere innholdet av lipofuscin og MDA i hvert vev betydelig, effektivt rense ulike reaktive oksygenradikaler (OH-, H₂O₂, etc.) og beskytte mot DNA-skader forårsaket av OH-radikaler. Cistanche-fenyletanoidglykosider har en sterk renseevne for frie radikaler, en høyere reduserende evne enn vitamin C, forbedrer aktiviteten til SOD i sædsuspensjon, reduserer innholdet av MDA og har en viss beskyttende effekt på sædmembranfunksjonen. Cistanche-polysakkarider kan øke aktiviteten til SOD og GSH-Px i erytrocytter og lungevev hos eksperimentelt senescent mus forårsaket av D-galaktose, samt redusere innholdet av MDA og kollagen i lunge og plasma, og øke innholdet av elastin, har en god rensende effekt på DPPH, forlenger hypoksitiden hos eldre mus, forbedrer aktiviteten til SOD i serum og forsinker den fysiologiske degenerasjonen av lunge hos eksperimentelt eldre mus. Med cellulær morfologisk degenerasjon har eksperimenter vist at Cistanche har den gode antioksidantevnen og har potensial til å være et medikament for å forebygge og behandle aldringssykdommer. Samtidig har echinacoside i Cistanche en betydelig evne til å rense DPPH-frie radikaler og har evnen til å rense reaktive oksygenarter og forhindre frie radikal-indusert kollagen-nedbrytning, og har også en god reparasjonseffekt på anionskader av tymin frie radikaler.

Klikk på Hvor kan jeg kjøpe Cistanche

【For mer informasjon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

4.7. Enzymatisk aktivitet til de viktigste antioksidantenzymene

For bestemmelse av enzymaktivitet i hjernevev ble en lyseringsbuffer inneholdende 50 mM fosfatbuffer (pH 7,4) og antiproteaser (1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 g/ml pepstatin og 1 g/ml leupeptin) tilsatt til en konsentrasjon på 50 mg/ml (vekt/volum). Deretter ble suspensjonen sonikert i 30 s i et isbad, og homogenatet ble sentrifugert ved 10, 000 x g i 15 minutter ved 4 ◦C. Supernatanter ble samlet for bestemmelse av den enzymatiske aktiviteten til antioksidantenzymene.

Superoksiddismutase (SOD) aktivitet ble målt ved å følge inhiberingen av pyrogallol autooksidasjon ved 420 nm [69]. En enhet enzym ble definert som mengden enzym som kreves for å hemme hastigheten på pyrogallol autooksidasjon med 50 prosent. Den enzymatiske SOD-aktiviteten ble uttrykt som internasjonale enheter (IE)/mg protein. Katalase (CAT) aktivitet ble målt i Triton-X-100 (1 prosent , v/v)-behandlede supernatanter ved å følge hydrogenperoksid (H2O2) forsvinning ved 240 nm [70], og enzymaktivitet ble rapportert som substrat ( µmol H2O2) transformert/min · mg protein. Total glutationperoksidase (GPx) ble bestemt etter NADPH-oksidasjon ved 340 nm i nærvær av overskudd av GR, GSH og kumenhydroperoksid [71]. GPx-aktivitet ble uttrykt som substrat (nmol NADPH) transformert/min mg protein. Glutationreduktase (GR) aktivitet ble analysert etter NADPH-oksidasjon ved 340 nm i nærvær av GSSG [72] og uttrykt som substrat (nmol NADPH) transformert/min · mg protein. GR og begge GPx-aktivitetene ble korrigert for spontan reaksjon i fravær av biologiske prøver (i fravær av enzym).

4.8. BACE1 aktivitetstest

BACE1-testprotokollen innebærer bruk av et sekretasespesifikt substrat (peptid) som er konjugert til to reportermolekyler, nemlig EDANS og DABCYL, som resulterer i frigjøring av et fluorescerende signal [73,74]. BACE1-aktiviteten ble målt både i cortex og hippocampus lysater. Reaksjonen ble utført ved 37 ◦C i 1 time ved bruk av 10 µM substrat i 50 mM natriumacetatbuffer (pH 4,5). Fluorescensintensitetsmålinger ble utført ved bruk av en FLUOSTAR mikroplateleser (BMG LABTECH, Ortenberg, BadenWürttemberg, Tyskland) med eksitasjonsfilteret satt til 360 nm (båndbredde 5 nm) og emisjonsfilteret satt til 530 nm (båndbredde 5 nm). Nivået av enzymatisk sekretaseaktivitet er proporsjonal med den fluorometriske reaksjonen, og dataene uttrykkes som en x-fold økning i fluorescens i forhold til bakgrunnskontroller (reaksjoner i fravær av substrat eller vev). BACE1-aktiviteten ble normalisert med proteinkonsentrasjon. Musenes BACE1-aktivitet, quercetin- eller rutinbehandlet, ble uttrykt som prosentandelen av aktiviteten til TgAPP-kontrollmusene.

4.9. RT-PCR genuttrykk av de viktigste antioksidantenzymene, APP, BACE1, ADAM10, kaspase-3 og kaspase-6 og inflammatoriske cytokiner

4.9.1. Total RNA-ekstraksjon og rensing

Vi analyserte de forskjellige områdene i hjernen, nemlig cortex og hippocampus, lagret ved −80 ◦C. Til en kjent mengde hjernevev ble Triomol® lyseringsbuffer tilsatt i forholdet 1:10 (vekt/volum). Prøver ble homogenisert i 30 s ved bruk av en trådløs motor (Pellet-støter, Sigma-Aldrich), og inkubert i 5 minutter ved 25 ◦C for å tillate fullstendig dissosiasjon av nukleoproteinkomplekser. Deretter ble 0,2 ml kloroform tilsatt for hver ml Triomol® lyseringsbuffer som ble brukt. Rørene ble ristet kraftig i 15 s og inkubert ved 25 ◦C i 3 minutter. Deretter ble de sentrifugert ved 11,000× g i 15 minutter ved 4 ◦C. Etter sentrifugering ble det oppnådd tre faser, med RNA i øvre fase.

For å isolere RNA ble den øvre fasen overført til et annet rør og utfelt ved å tilsette 0,5 mL isopropanol. Etter grundig blanding av isopropanol og vandig løsning ved inversjon, ble blandingen inkubert ved romtemperatur i 10 minutter for å fremme utfelling, og sentrifugert ved 12,000× g i 10 minutter ved 4 ◦C. Supernatantene ble fjernet, og pellets ble vasket med 75 prosent etanol og sentrifugert ved 7500 x g i 5 minutter ved 4 ◦C. Pelletene ble tørket ved romtemperatur og oppløst i 50 µL DEPC-behandlet vann. For å fjerne spor av DNA ble 2,5 µL DNase (RNase-fri) tilsatt og inkubert ved 37 ◦C i 30 minutter. Til slutt ble prøver inkubert ved 64 ◦C i 5 minutter for å inaktivere DNasen.

Deretter ble konsentrasjonene av RNA målt i et UV-VIS spektrofotometer (BMG LABTECH, Ortenberg, Baden-Württemberg, Tyskland) ved 260 nm og renheten ble vurdert med tanke på absorbansforholdet ved 260 og 280 nm (A260/A280).

Bestemmelsen av RNA-integritet og -renhet ble utført ved elektroforese i en 1 prosent agarosegel farget med GelRed og visualisert under UV-lys, der, hvis RNA var intakt, to øvre bånd tilsvarende ribosomalt RNA (28S og 18S) og to nedre bånd tilsvarende overførings-RNA (tRNA) og 5S ribosomalt RNA måtte observeres.

4.9.2. Komplementær DNA (cDNA) Syntese

cDNA er mye mer stabilt enn RNA og tillater derfor mer praktisk og tryggere prøvehåndtering. cDNA ble syntetisert fra mRNA ved retrotranskripsjon ved bruk av First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR (Fermentas Life Sciences).

For å utføre retrotranskripsjonen for cDNA-syntese til 2 µg RNA, ble 11 µL DEPC-behandlet vann og 1 µL 10X Random primere tilsatt. Deretter ble blandingen inkubert ved 65 ◦C i 10 minutter for å denaturere RNA. Etter denne tiden ble rørene umiddelbart brakt til 4 ◦C i 5 minutter for å unngå renaturering av RNA. Reagensblandingen for cDNA-syntese er vist i tabell S1 (tilleggsdata).

Åtte ul av reaksjonsblandingen ble tilsatt til hver prøve. Hele volumet ble brakt til bunnen av rørene og inkubert ved 42 ◦C i 60 minutter. Til slutt ble reaksjonen stoppet ved å inaktivere revers transkriptasen ved å varme den opp til 70 ◦C i 10 minutter.

4.9.3. Sanntids PCR

Hovedtrekket ved sanntids PCR er at analysen av produktene finner sted under amplifikasjonsprosessen ved å bestemme fluorescensen. På denne måten skjer amplifikasjons- og deteksjonsprosessene samtidig i samme rør eller ampulle uten behov for ytterligere handling. For sanntids PCR brukes termiske syklere, som kan forsterke og oppdage fluorescens samtidig. Vi brukte LightCycler sanntids termisk syklus (Roche Diagnostics, Mannheim, Tyskland).

Tabell S2 (Tilleggsdata) viser reagensene som kreves for sanntids-PCR, ved bruk av sekvensspesifikke primere og DNA-bindende fargestoff (SYBR Green I, Roche Molecular Systems, Inc., Rotkreuz, Sveits) som deteksjonssystem.

For utformingen av primerne for de forskjellige kvantifiserte markørene ble Primer3Plus bioinformatikk-programmet brukt, hvor vi tok cDNA-sekvensene til genene av interesse fra Medline open-access-databasen. Primerne ble levert av Merck (Sigma-Aldrich). Hybridiseringstemperaturen og sekvensen til de forskjellige primerne som brukes er vist i tabell S3 (tilleggsdata).

Reaksjonsbetingelsene for amplifisering av genene av interesse er vist i tabell S4 (tilleggsdata).

Til slutt ble prøvene utsatt for et smelteprogram: 95 ◦C i 15 s, 65 ◦C i 30 s, og opp til 98 ◦C med en hastighet på 0,1 ◦C/s med kontinuerlig fluorescensregistrering.

For kvantifisering av cDNA-nivåer ble syklusterskel (Ct) sammenligningsmetoden [75] brukt, ved å bruke GADPH som husholderske. Amplifikasjonen av husholdersken ble gjort parallelt med det analyserte genet. Ct-verdier ble beregnet ved å bruke 4.0-programvaren levert av LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Tyskland). Programvaren gjør det mulig å skille mellom fluorescens på grunn av prøveamplifisering og bakgrunn. Smeltekurver ble også registrert. Bestemmelse av smeltetemperaturen til det amplifiserte fragmentet gjorde det mulig å karakterisere det amplifiserte produktet. Størrelsen på båndene ble kontrollert på en 1,5 prosent agarosegel.

Variasjonen av ekspresjonen av genet som studeres med quercetin- eller rutinbehandlingen ble uttrykt som en funksjon av kontroll-TgAPP (mus uten behandling) og normalisering av dette uttrykket med nivåene av GADPH. Change Fold (2−∆∆Ct) representerer antall ganger genet av interesse er modifisert under den spesielle behandlingen for kontrollmusene.

4.10. Statistiske analyser

Alle testene ble utført minst i duplikat og i tre forskjellige eksperimenter. De oppnådde resultatene uttrykkes som gjennomsnitt ± standardfeil. Enveis variansanalyse (ANOVA) ble utført når dataene ble testet og vist at de passer med en normalfordeling. Newman-Keuls multiple sammenligninger post-hoc-tester ble kjørt, og undersøkte gjennomsnittlige forskjeller mellom grupper. Verdiene av p < 0.05 ble ansett som signifikante. SigmaPlot 11.0 programvare ble brukt til statistiske analyser.

5. Konklusjoner

Kostholdsvaner og kosttilskudd kan påvirke cellulær redoksstatus. På dette grunnlaget hadde vi som mål å forbedre den cellulære redoks-homeostasen i en AD-musemodell med en flavonoiddiett som inneholder quercetin eller rutin for å lindre amyloidpatologi, med tanke på samspillet mellom cellulær redoksstatus og proteasomavhengige amyloidegenskaper i asymptomatisk AD. Datasettene våre er relevante siden flavonoideffektene som vises i TgAPP-musemodellen er i samsvar med de som er rapportert tidligere i våre in vitro- og ex vivo-modeller.

Avslutningsvis viser funnene våre at initiering av en diettbehandling på det asymptomatiske stadiet eller utbruddet av AD-lignende symptomer kan gjeninnføre cellulær redoksstatus og APP-fysiologisk prosessering via samtidig regularisering av APP-uttrykk og BACE1-aktivitet.

Selv om det er vanskelig å ekstrapolere funnene våre til den menneskelige tilstanden, kan de ha brede implikasjoner for den menneskelige responsen på fremtidige terapier. Av de to flavonoidene synes rutin, med generelt mer fremtredende in vivo-effekter, å være mest egnet for å bli inkludert i en daglig diett som adjuvant terapi ved AD, basert på forsterkning av intracellulær redokshomeostase i hjernen.

Tilleggsmaterialer:Følgende støtteinformasjon kan lastes ned på nettstedet. Referanse [76] er sitert i tilleggsmaterialet.

Forfatterbidrag:PB-B. og SM-A. unnfanget ideen og det eksperimentelle designet, hjalp til i eksperimentene, tolket de oppnådde resultatene og skrev manuskriptet. KLJ-A. utførte eksperimentene, utførte dataanalysene og tolket de oppnådde resultatene. JB hjalp til med dataanalyser og revisjon av manuskriptet. Alle data ble generert internt, og ingen papirfabrikk ble brukt. Alle forfattere er enige om å være ansvarlige for alle aspekter av arbeidet for å sikre integritet og nøyaktighet. Alle forfattere har lest og godtatt den publiserte versjonen av manuskriptet.

Finansiering:Denne forskningen ble finansiert av Medical Research Foundation «Mutua Madrileña» (fjerde utgave av Grants for Medical Research Projects), det spanske utdannings- og vitenskapsdepartementet (ref. AGL2008-04892-C03-02), og Det spanske departementet for vitenskap og innovasjon (ref. CTQ2010-16170).

Uttalelse fra institusjonell revisjonskomité:Dyreprotokoller ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Complutense University of Madrid og var i full overensstemmelse med det europeiske direktivet 2010/63/om beskyttelse av dyr brukt til vitenskapelige formål og spansk lovgivning om dyrevelferd ( Kongelig resolusjon 53/2013, 1. februar 2013).

Erklæring om informert samtykke:Ikke aktuelt.

Datatilgjengelighetserklæring:Dataene som støtter funnene i denne studien er tilgjengelig fra den tilsvarende forfatteren på rimelig forespørsel.

Anerkjennelser:Vi takker Foundation Folch for et pre-doktorstipend til KLJA.

Interessekonflikter:Forfatterne erklærer at det ikke er noen interessekonflikter.

Forkortelser

AD, Alzheimers sykdom; ADAM-10, et protein som inneholder desintegrin og metalloproteinase-domene 10; APP, amyloid forløperprotein; APPswe, svensk mutasjon av amyloid-forløperproteinet; A, amyloid-; BACE1, -site APP spaltende enzym 1; CAT, Catalase; GPx, glutationperoksidase; GR, glutationreduktase; GSH, Redusert glutation; GSSG, Oksidert glutation; SOD, Superoxide dismutase.

Referanser

1. Ebenau, JL; Pelkmans, W.; Verberk, IMW; Verfaillie, SCJ; van den Bosch, KA; van Leeuwenstijn, M.; Collij, LE; Scheltens, P.; Prins, ND; Barkhof, F.; et al. Association of CSF, Plasma, and Imaging Markers of Neurodegeneration with Clinical Progression in People with Subjective Cognitive Decline. Neurology 2022, 98, e1315–e1326. [CrossRef] [PubMed]

2. Dominguez, LJ; Veronese, N.; Vernuccio, L.; Catanese, G.; Inzerillo, F.; Salemi, G.; Barbagallo, M. Ernæring, fysisk aktivitet og andre livsstilsfaktorer i forebygging av kognitiv svikt og demens. Næringsstoffer 2021, 13, 4080. [CrossRef]

3. Tsarbopoulos, A. Alzheimers sykdom: Utforsker naturens "medisinske kiste" for nye terapeutiske midler. Biomol. Konsepter 2020, 11, 201–208. [CrossRef] [PubMed]

4. Ashe, KH; Zahs, KR Undersøker biologien til Alzheimers sykdom hos mus. Neuron 2010, 66, 631–645. [CrossRef] [PubMed]

5. Zahs, KR; Ashe, KH "For mye gode nyheter" - Prøver musemodeller fra Alzheimers å fortelle oss hvordan vi kan forebygge, ikke kurere, Alzheimers sykdom? Trender Neurosci. 2010, 33, 381–389. [CrossRef]

6. Foley, AM; Ammar, ZM; Lee, RH; Mitchell, CS Systematisk gjennomgang av forholdet mellom amyloidnivåer og mål på transgene musekognitive underskudd i Alzheimers sykdom. J. Alzheimers Dis. 2015, 44, 787–795. [CrossRef]

7. Anand David, A.; Arulmoli, R.; Parasuraman, S. Oversikter over den biologiske betydningen av quercetin: En bioaktiv flavonoid. Pharm. Rev. 2016, 10, 84–89.

8. Habtemariam, S. Rutin som en naturlig terapi for Alzheimers sykdom: Innsikt i dens virkningsmekanismer. Curr. Med. Chem. 2016, 23, 860–873. [CrossRef]

9. Martín-Aragón, S.; Jiménez-Aliaga, K.; Benedí, J.; Bermejo-Bescós, P. Nevrohormetiske responser av quercetin og rutin i en cellelinje som overuttrykker amyloid-forløperproteinet (APPswe-celler). Fytomedisin 2016, 23, 1285–1294. [CrossRef]

10. Zhou, W.; Qing, H.; Tong, Y.; Song, W. BACE1 genuttrykk og proteinnedbrytning. Ann. NY Acad. Sci. 2004, 1035, 49–67. [CrossRef]

11. Gutbier, S.; Spreng, AS; Delp, J.; Schildknecht, S.; Karreman, C.; Suciu, I.; Brunner, T.; Groettrup, M.; Leist, M. Forebygging av neuronal apoptose av astrocytter gjennom tiol-mediert stressresponsmodulering og akselerert utvinning fra proteotoksisk stress. Celledød er forskjellig. 2018, 25, 101–117. [CrossRef] [PubMed]

12. Aoyama, K. Glutathione in the Brain. Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 5010. [CrossRef] [PubMed]

13. Scholey, A. Næringsstoffer for nevrokognisjon i helse og sykdom: Tiltak, metoder og mekanismer. Proc. Nutr. Soc. 2018, 77, 73–83. [CrossRef] [PubMed]

14. Apelt, J.; Bigl, M.; Wunderlich, P.; Schliebsm, R. Aldringsrelatert økning i oksidativt stress korrelerer med utviklingsmønsteret for beta-sekretaseaktivitet og beta-amyloid plakkdannelse i transgene Tg2576-mus med Alzheimer-lignende patologi. Int. J. Dev. Neurosci. 2004, 22, 475–484. [CrossRef] [PubMed]

15. Howlett, DR; Richardson, JC Patologien til APP-transgene mus: En modell av Alzheimers sykdom eller ganske enkelt overuttrykk av APP? Histol. Histopathol. 2009, 24, 83–100. [PubMed]

16. Cencioni, C.; Spallotta, F.; Martelli, F.; Valente, S.; Mai, A.; Zeiher, AM; Gaetano, C. Oksidativt stress og epigenetisk regulering ved aldring og aldersrelaterte sykdommer. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 17643–17663. [CrossRef]

17. Tsang, AH; Chung, KK Oksidativt og nitrosativt stress ved Parkinsons sykdom. Biochim. Biofys. Acta 2009, 1792, 643–650. [CrossRef]

18. Mandal, PK; Saharan, S.; Tripathi, M.; Murari, G. Hjerneglutationnivåer – En ny biomarkør for mild kognitiv svikt og Alzheimers sykdom. Biol. Psykiatri 2015, 78, 702–710. [CrossRef]

19. Chen, JJ; Thiyagarajah, M.; Song, J.; Chen, C.; Herrmann, N.; Gallagher, D.; Rapoport, MJ; Svart, SE; Ramirez, J.; Andreazza, AC; et al. Endret sentral- og blodglutation ved Alzheimers sykdom og mild kognitiv svikt: En metaanalyse. Alzheimers Res. Ther. 2022, 14, 23. [CrossRef]

20. Pocernich, CB; Butterfield, DA Økning av glutation som en terapeutisk strategi ved Alzheimers sykdom. Biochim. Biofys. Acta (BBA)-Mol. Basis Dis. 2012, 1822, 625–630. [CrossRef]

21. Raza, A.; Xie, W.; Kim, KH; Dronamraju, VR; Williams, J.; Vince, R.; Mer, SS-dipeptid av ψ-GSH hemmer oksidativt stress og nevroinflammasjon i en musemodell for Alzheimers sykdom. Antioksidanter 2022, 11, 1075. [CrossRef] [PubMed]

22. Yang, H.; Xie, Z.; Wei, L.; Ding, M.; Wang, P.; Bi, J. Glutation-mimetisk D609 lindrer hukommelsessvikt og reduserer amyloidavsetning i en A PP/PS1 transgen musemodell. Nevroreport 2018, 29, 833–838. [CrossRef] [PubMed]

23. Guerrero-Gómez, D.; Mora-Lorca, JA; Sáenz-Narciso, B.; Naranjo-Galindo, FJ; Muñoz-Lobato, F.; Parrado-Fernández, C.; Goikolea, J.; Cedazo-Minguez, Á.; Link, CD; Neri, C.; et al. Tap av glutationredokshomeostase svekker proteostase ved å hemme autofagiavhengig proteinnedbrytning. Celledød er forskjellig. 2019, 26, 1545–1565. [CrossRef] [PubMed]

24. Lefaki, M.; Papaevgeniou, N.; Chondrogianni, N. Redox-regulering av proteasomfunksjon. Redox Biol. 2017, 13, 452–458. [CrossRef] [PubMed]

25. Bonet-Costa, V.; Pomatto, LC; Davies, KJ Proteasomet og oksidativt stress ved Alzheimers sykdom. Antioksid. Redokssignal. 2016, 25, 886–901. [CrossRef]

26. Belkacemi, A.; Ramassamy, C. Tidssekvens for oksidativt stress i hjernen fra transgene musemodeller av Alzheimers sykdom relatert til amyloid-kaskaden. Free Radic. Biol. Med. 2012, 52, 593–600. [CrossRef]

27. Tanigawa, S.; Fujii, M.; Hou, DX Handling av Nrf2 og Keap1 i ARE-mediert NQO1-uttrykk av quercetin. Free Radic. Biol. Med. 2007, 42, 1690–1703. [CrossRef]

28. Chondrogianni, N.; Kapeta, S.; Chinou, I.; Vassilatou, K.; Papassideri, I.; Gonos, ES Anti-aldring og foryngende effekter av quercetin. Exp. Gerontol. 2010, 45, 763–771. [CrossRef]

29. Bodendorf, U.; Danner, S.; Fischer, F.; Stefani, M.; Sturchler-Pierrat, C.; Wiederhold, KH; Staufenbiel, M.; Paganetti, P. Uttrykk av human beta-sekretase i musehjernen øker steady-state-nivået av beta-amyloid. J. Neurochem. 2002, 80, 799–806. [CrossRef]

30. Yamakawa, H.; Yagishita, S.; Futai, E.; Ishiura, S. beta-Secretase-hemmerstyrken reduseres ved avvikende beta-spaltningsplassering av det "svenske mutante" amyloidforløperproteinet. J. Biol. Chem. 2010, 285, 1634–1642. [CrossRef]

31. Keller, D.; Erö, C.; Markram, H. Celletettheter i musehjernen: en systematisk gjennomgang. Front. Neuroanat. 2018, 12, 83. [CrossRef] [PubMed]

32. Mladenovic Djordjevic, AN; Kapetanou, M.; Loncarevic-Vasiljkovic, N.; Todorovic, S.; Athanasopoulou, S.; Jovic, M.; Prvulovic, M.; Taoufik, E.; Matsas, R.; Kanazir, S.; et al. Farmakologisk intervensjon i en transgen musemodell forbedrer Alzheimers-assosierte patologiske fenotype: Involvering av proteasomaktivering. Free Radic. Biol. Med. 2021, 162, 88–103. [CrossRef] [PubMed]

33. Tamagno, E.; Bardini, P.; Guglielmotto, M.; Danni, O.; Tabaton, M. De forskjellige aggregeringstilstandene til beta-amyloid 1-42 medierer forskjellige effekter på oksidativt stress, nevrodegenerasjon og BACE-1-uttrykk. Free Radic. Biol. Med. 2006, 41, 202–212. [CrossRef] [PubMed]

34. Jorissen, E.; Prox, J.; Bernreuther, C.; Weber, S.; Schwanbeck, R.; Serneels, L.; Snellinx, A.; Craessaerts, K.; Thathiah, A.; Tesseur, I.; et al. Disintegrin/metalloproteinasen ADAM10 er avgjørende for etableringen av hjernebarken. J. Neurosci. 2010, 30, 4833–4844. [CrossRef]

35. Kuhn, PH; Wang, H.; Dislich, B.; Colombo, A.; Zeitschel, U.; Ellwart, JW; Kremmer, E.; Roßner, S.; Lichtenthaler, SF ADAM10 er den fysiologisk relevante, konstitutive -sekretase av amyloid-forløperproteinet i primære nevroner. EMBO J. 2010, 29, 3020–3032. [CrossRef]

36. Postina, R.; Schroeder, A.; Dewachter, I.; Bohl, J.; Schmitt, U.; Kojro, E.; Prinzen, C.; Endres, K.; Hiemke, C.; Blessing, M.; et al. En disintegrin-metalloproteinase forhindrer dannelse av amyloid plakk og hippocampale defekter i en musemodell av Alzheimers sykdom. J. Clin. Undersøk. 2004, 113, 1456–1464. [CrossRef]

37. Elfiky, AM; Mahmoud, AA; Elreedy, HA; Ibrahim, KS; Ghazy, MA Quercetin stimulerer den ikke-amyloidogene veien via aktivering av ADAM10 og ADAM17 genuttrykk i aluminiumklorid-indusert Alzheimers sykdom rottemodell. Life Sci. 2021, 285, 119964. [CrossRef]

38. Copanaki, E.; Chang, S.; Vlachos, A.; Tschäpe, JA; Müller, UC; Kögel, D.; Deller, T. sAPPalpha motvirker dendritisk degenerasjon og nevrondød utløst av proteasomalt stress. Mol. Cell Neurosci. 2010, 44, 386–393. [CrossRef]

39. Renziehausen, J.; Hiebel, C.; Nagel, H.; Kundu, A.; Kins, S.; Kogel, D.; Behl, C.; Hajieva, P. Spaltningsproduktet av amyloid-beta-proteinforløper sAbetaPPalpha modulerer BAG3-avhengig aggresomdannelse og øker cellulær proteasomal aktivitet. J. Alzheimers Dis. 2015, 44, 879–896. [CrossRef]

40. Livingstone, RW; Eldste, MK; Singh, A.; Westlake, CM; Tate, WP; Abraham, WC; Williams, JM Utskilt amyloid-forløperprotein-alfa forbedrer LTP gjennom syntese og trafikk av Ca2 pluss-permeable AMPA-reseptorer. Front. Mol. Neurosci. 2021, 14, 660208. [CrossRef]

41. Crawford, HC; Dempsey, PJ; Brown, G.; Adam, L.; Moss, ML ADAM10 som et terapeutisk mål for kreft og betennelse. Curr. Pharm. Des. 2009, 15, 2288–2299. [CrossRef] [PubMed]

42. Saftig, P.; Lichtenthaler, SF Alfa-sekretasen ADAM10: En metalloprotease med flere funksjoner i hjernen. Prog. Neurobiol. 2015, 135, 1–20. [CrossRef] [PubMed]

43. Borreca, A.; Gironi, K.; Amadoro, G.; Ammassari-Teule, M. Opposite Dysregulation of Fragile-X Mental Retardation Protein and Heteronuclear Ribonucleoprotein C Protein Associates with Enhanced APP Translation in Alzheimer Disease. Mol. Neurobiol. 2016, 53, 3227–3234. [CrossRef] [PubMed]

44. Augustin, S.; Rimbach, G.; Augustin, K.; Schliebs, R.; Wolffram, S.; Cermak, R. Effekt av en kort- og langtidsbehandling med Ginkgo biloba-ekstrakt på amyloidforløperproteinnivåer i en transgen musemodell som er relevant for Alzheimers sykdom. Arch. Biochem. Biofys. 2009, 481, 177–182. [CrossRef] [PubMed]

45. Borreca, A.; Valeri, F.; De Luca, M.; Ernst, L.; Russo, A.; Nobili, A.; Cordella, A.; Corsetti, V.; Amadoro, G.; Mercuri, NB; et al. Forbigående oppregulering av translasjonseffektivitet i prodromale og tidlige symptomatiske Tg2576-mus bidrar til A-patologi. Neurobiol. Dis. 2020, 139, 104787. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​D'Amelio, M.; Sheng, M.; Cecconi, F. Caspase-3 i sentralnervesystemet: Beyond apoptosis. Trender Neurosci. 2012, 35, 700–709. [CrossRef]

47. Ertürk, A.; Wang, Y.; Sheng, M. Lokal beskjæring av dendritter og pigger ved hjelp av caspase-3-avhengige og proteasombegrensede mekanismer. J. Neurosci. 2014, 34, 1672–1688. [CrossRef]

48. D'Amelio, M.; Cavallucci, V.; Middei, S.; Marchetti, C.; Pacioni, S.; Ferri, A.; Diamantini, A.; De Zio, D.; Carrara, P.; Battistini, L.; et al. Caspase-3 utløser tidlig synaptisk dysfunksjon i en musemodell av Alzheimers sykdom. Nat. Neurosci. 2011, 14, 69–76. [CrossRef]

49. Gervais, FG; Xu, D.; Robertson, GS; Vaillancourt, JP; Zhu, Y.; Huang, J.; LeBlanc, A.; Smith, D.; Rigby, M.; Shearman, MS; et al. Involvering av kaspaser i proteolytisk spaltning av Alzheimers amyloid-beta-forløperprotein og amyloidogen A-beta-peptiddannelse. Cell 1999, 97, 395–406. [CrossRef]

50. Park, G.; Nhan, HS; Tyan, SH; Kawakatsu, Y.; Zhang, C.; Navarro, M.; Koo, EH Caspase-aktivering og Caspase-mediert spaltning av APP er assosiert med amyloid-proteinindusert synapsetap ved Alzheimers sykdom. Cell Rep. 2020, 31, 107839. [CrossRef]

51. Lu, DC; Rabizadeh, S.; Chandra, S.; Shayya, RF; Ellerby, LM; Ja, X.; Salvesen, GS; Koo, EH; Bredesen, DE Et andre cytotoksisk proteolytisk peptid avledet fra amyloid beta-protein forløper. Nat. Med. 2000, 6, 397–404. [CrossRef] [PubMed]

52. LeBlanc, AC Caspase-6 som et nytt tidlig mål i behandlingen av Alzheimers sykdom. Eur. J. Neurosci. 2013, 37, 2005–2018. [CrossRef]

53. Albrecht, S.; Bogdanovic, N.; Ghetti, B.; Winblad, B.; LeBlanc, AC Caspase-6-aktivering i familiær Alzheimer-hjerne som bærer amyloid-forløperprotein eller presenilin I- eller presenilin II-mutasjoner. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 2009, 68, 1282–1293. [CrossRef] [PubMed]

54. Morihara, T.; Teter, B.; Yang, F.; Lim, fastlege; Boudinot, S.; Boudinot, FD; Frautschy, SA; Cole, GM Ibuprofen undertrykker interleukin-1beta-induksjon av pro-amyloidogent alfa1-antichymotrypsin for å lindre beta-amyloid (Abeta) patologi i Alzheimers modeller. Nevropsykofarmakologi 2005, 30, 1111–1120. [CrossRef] [PubMed]

55. Niu, YL; Zhang, WJ; Wu, P.; Liu, B.; Sun, GT; Yu, DM; Deng, JB Uttrykk av de apoptose-relaterte proteinene caspase-3 og NF-kappaB i hippocampus til Tg2576-mus. Neurosci. Okse. 2010, 26, 37–46. [CrossRef]

56. Fuller, S.; Steele, M.; Munch, G. Aktivert astroglia under kronisk betennelse ved Alzheimers sykdom – neglisjerer de deres nevrostøttende roller? Mutat. Res. 2010, 690, 40–49. [CrossRef]

57. Lee, M.; Cho, T.; Jantaratnotai, N.; Wang, YT; McGeer, E.; McGeer, PL Uttømming av GSH i gliaceller induserer nevrotoksisitet: Relevans for aldring og degenerative nevrologiske sykdommer. FASEB J. 2010, 24, 2533–2545. [CrossRef]

58. Hensley, K. Nevroinflammasjon ved Alzheimers sykdom: Mekanismer, patologiske konsekvenser og potensial for terapeutisk manipulasjon. J. Alzheimers Dis. 2010, 21, 1–14. [CrossRef]

59. Lu, J.; Wu, DM; Zheng, YL; Hub.; Zhang, ZF; Shan, Q.; Zheng, ZH; Liu, CM; Wang, YJ Quercetin aktiverer AMP-aktivert proteinkinase ved å redusere PP2C-ekspresjon som beskytter gammel musehjerne mot høyt kolesterol-indusert nevrotoksisitet. J. Pathol. 2010, 222, 199–212. [CrossRef]

60. Chen, JC; Ho, FM; Chao, PDL; Chen, CP; Jeng, KC; Hsu, HB; Lee, ST; Wen Tung, W.; Lin, WW Hemming av iNOS-genekspresjon av quercetin formidles av hemming av IkappaB-kinase, kjernefaktor-kappa B og STAT1, og avhenger av heme oksygenase-1 induksjon i muse BV-2 mikroglia. Eur. J. Pharmacol. 2005, 521, 9–20. [CrossRef]

61. Dwivedi, D.; Mega, K.; Mishra, R.; Mandal, PK Glutation i hjernen: Oversikt over dens konformasjoner, funksjoner, biokjemiske egenskaper, kvantifisering og potensiell terapeutisk rolle i hjernesykdommer. Neurochem. Res. 2020, 45, 1461–1480. [CrossRef] [PubMed]

62. Rossner, S.; Sastre, M.; Bourne, K.; Lichtenthaler, SF Transkripsjons- og translasjonsregulering av BACE1-uttrykk - implikasjoner for Alzheimers sykdom. Prog. Neurobiol. 2006, 79, 95–111. [CrossRef] [PubMed]

63. Westerman, MA; Cooper-Blacketer, D.; Mariash, A.; Kotilinek, L.; Kawarabayashi, T.; Younkin, LH; Carlson, GA; Younkin, SG; Ashe, KH Forholdet mellom Abeta og hukommelse i Tg2576-musemodellen for Alzheimers sykdom. J. Neurosci. 2002, 22, 1858–1867. [CrossRef] [PubMed]

64. Irizarry, MC; Locascio, JJ; Hyman, BT Beta-site APP-spaltende enzym-mRNA-ekspresjon i APP-transgene mus: Anatomisk overlapping med transgenekspresjon og statiske nivåer med aldring. Er. J. Pathol. 2001, 158, 173–177. [CrossRef] [PubMed]

65. Hsiao, K.; Chapman, P.; Nilsen, S.; Eckman, C.; Harigaya, Y.; Younkin, S.; Yang, F.; Cole, G. Korrelative hukommelsesmangler, Abeta-høyde og amyloidplakk hos transgene mus. Science 1996, 274, 99–102. [CrossRef] [PubMed]

66. Hsiao, K. Transgene mus som uttrykker Alzheimer-amyloid-forløperproteiner. Exp. Gerontol. 1998, 33, 883–889. [CrossRef]

67. Simon, AM; Schiaparelli, L.; Salazar-Colocho, P.; Cuadrado-Tejedor, M.; Escribano, L.; López de Maturana, R.; Del Río, J.; Pérez-Mediavilla, A.; Frechilla, D. Overuttrykk av villtype human APP i mus forårsaker kognitive mangler og patologiske trekk som ikke er relatert til Abeta-nivåer. Neurobiol. Dis. 2009, 33, 369–378. [CrossRef]

68. Senft, AP; Dalton, TP; Shertzer, HG Bestemmelse av glutation og glutationdisulfid ved bruk av fluorescensproben oftalaldehyd. Anal. Biochem. 2000, 280, 80–86. [CrossRef]

69. Marklund, S.; Marklund, G. Involvering av superoksidanionradikal i autooksidasjon av pyrogallol og en praktisk analyse for superoksiddismutase. Eur. J. Biochem. 1974, 47, 469–474. [CrossRef]

70. Aebi, H. Catalase in vitro. Metoder Enzymol. 1984, 105, 121–126.

71. Barja de Quiroga, G.; Perez-Campo, R.; Lopez Torres, M. Antioksidantforsvar og peroksidasjon i lever og hjerne hos eldre rotter. Biochem. J. 1990, 272, 247-250. [CrossRef] [PubMed]

72. Massey, V.; Williams, CH, Jr. Om reaksjonsmekanismen til gjærglutationreduktase. J. Biol. Chem. 1965, 240, 4470–4480. [CrossRef]

73. Jash, K.; Gondaliya, P.; Sunkaria, A.; Kalia, K. MicroRNA-29b modulerer -sekretaseaktivitet i SH-SY5Y-cellelinje og diabetisk musehjerne. Cell Mol. Neurobiol. 2020, 40, 1367–1381. [CrossRef] [PubMed]

74. Jimenez-Aliaga, K.; Bermejo-Bescos, P.; Benedi, J.; Martin-Aragon, S. Quercetin og rutin viser anti-amyloidogene og fibril-disaggregerende effekter in vitro og potent antioksidantaktivitet i APPswe-celler. Life Sci. 2011, 89, 939–945. [CrossRef] [PubMed]

75. Ramos, CA; Bowman, TA; Boles, NC; selger, AA; Zheng, Y.; Parra, I.; Fuqua, SA; Shaw, CA; Goodell, MA Bevis for mangfold i transkripsjonsprofiler av enkelt hematopoietiske stamceller. PLoS Genet. 2006, 2, e159.

76. Schmued, LC; Stowers, CC; Scallet, AC; Xu, L. Fluoro-Jade C resulterer i ultrahøy oppløsning og kontrastmerking av degenererende nevroner. Brain Res. 2005, 1035, 24–31. [CrossRef] [PubMed]

Ansvarsfraskrivelse/utgivers merknad:Uttalelsene, meningene og dataene i alle publikasjoner er utelukkende de fra den enkelte forfatter(e) og bidragsyter(e) og ikke fra MDPI og/eller redaktøren(e). MDPI og/eller redaktøren(e) fraskriver seg ansvar for enhver skade på personer eller eiendom som følge av ideer, metoder, instruksjoner eller produkter som refereres til i innholdet.

【For mer informasjon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】