Aktivitetsguidet isolering av fenoliske komposisjoner fra Anneslea Fragrans vegg. Og deres cytobeskyttende effekt mot hydrogenperoksidindusert oksidativt stress i HepG2-celler del 2

Vær så snill og kontaktoscar.xiao@wecistanche.comfor mer informasjon

2.7. Hemmende effekt på intracellulær ROS-generering

Oksidativt stress er en slags ubalanse mellom oksidasjon og antioksidasjon i kroppen [28]. Overdreven akkumulering av ROS kan føre til oksidativt stress som kan forårsake skade på celler og vev som lipider, membraner og DNA [29]. Antioksidanter inkludert polyfenoler og flavonoider kan hjelpe kroppen med å redusere disse skadene forårsaket av ROS. Generelt er H, O, mye brukt for å indusere intracellulær ROS forstyrret produksjon og svekke antioksidantforsvaret til celler [30]. I vår nåværende studie ble H2O2 valgt for å indusere unormal akkumulering av intracellulær ROS og svekke antioksidantforsvaret til cellene. For å evaluere den hemmende effekten på generering av intracellulær ROS i H, O2--induserte HepG2-celler, ble nivåene av intracellulær ROS testet ved hjelp av flowcytometri. Kort fortalt ble HepG2-celler dyrket i en 6-brønnplate (1 × 10 graders celler/brønn). Etter inkubasjon i 24 timer med 50 ug/ml av forskjellige ekstrakter eller 8 ug/ml Vc (positiv gruppe), ble alle gruppene bortsett fra kontrollgruppen indusert av H2O i 6 timer. De intracellulære ROS-nivåene til hver forbindelse ble testet (figur 3). ROS-generasjonsforholdet økte signifikant til 215,64±9,80 prosent i H2O,-den behandlede gruppen sammenlignet med kontrollgruppen (100 prosent). Sammenlignet med den H, O,-behandlede gruppen, undertrykte forbindelsene 2, 5 og 6 bemerkelsesverdig intracellulær ROS-produksjon (p<0.05), and="" their="" inhibitory="" effect="" was="" equal="" to="" the="" vc="" group="" (figure="" 3).="" many="" phenolics="" have="" been="" proven="" to="" have="" a="" protective="" effect="" against="" intracellular="" ros="" by="" h2o2="" induction[31].="" additionally,="" compound="" 6="" displayed="" the="" strongest="" suppressive="" effect="" on="" intracellular="" ros="" production,="" which="" suggests="" that="" flavonoid="" compounds="" play="" a="" crucial="" role="" in="" inhibiting="" intracellular="" ros="">

2.8. Cytobeskyttende effekt mot H2O2-indusert celleapoptose

Apoptose er et grunnleggende biologisk fenomen av celler, som spiller en viktig rolle i reguleringsmekanismen for celles spredning, vekst og mutasjon, og stabiliteten til det indre miljøet. Apoptose, forskjellig fra nekrose, er en spesiell type celledød. Forstyrrelsen i den apoptotiske prosessen har dårlige effekter på kroppen og forårsaker mange sykdommer [32]. H2O2, som et viktig signalmolekyl, regulerer prosessen med celleproliferasjon, vekst og apoptose [5]. Denne studien målte apoptosen til H, O,-induserte HepG2-celler og evaluerte de cytobeskyttende effektene av forbindelsene 2, 5 og 6. Etter å ha behandlet HepG2-celler med 1.0 mM H2O2, ble apoptoseforholdet bemerkelsesverdig økt ( 57,20±1,97 prosent ), sammenlignet med kontrollgruppen (9,10±0,62 prosent ,p<0.05)(figure 4).="" the="" ratios="" of="" apoptotic="" cells="" in="" the="" treated="" groups="" of="" compounds="" 2,="" 5,="" and="" 6="" significantly="" decreased="" compared="" with="" the="" h2o2-treated="" group="" (model="" group,=""><0.05)(figure 4).="" moreover,="" compound="" 6="" had="" significant="" efficiency="" in="" protecting="" hepa-2="" cells="" from="" h2o2="" toxicity,="" and="" the="" cell="" apoptosis="" ratio="" of="" 6(10.56±1.15%)was="" lower="" than="" that="" of="" the="" vc="" group="" (positive="" control),="" which="" was="" equal="" to="" that="" of="" the="" control="" group(figure="" 4).="" meanwhile,="" compounds="" 2="" and="" 5="" showed="" a="" moderate="" cytoprotective="" effect="" with="" cell="" apoptosis="" ratios="" of="" 2(26.76±2.60%)="" and="" 5(27.64±0.83%).="" the="" differences="" in="" antioxidant="" capacity="" may="" be="" attributed="" to="" the="" number="" of="" phenolic="" hydroxyl="" moieties="" and="" the="" link="">

3. Materialer og metoder

3.1. Kjemikalier og reagenser

Metanol, acetonitril og maursyre for høyytelses væskekromatografi (HPLC) var av HPLC-kvalitet og kjøpt fra Merck (Darmstadt, Tyskland). Løsemidler for prøveekstraksjon inkludert etanol, diklormetan og n-butanol var av analytisk kvalitet. Avionisert vann ble renset ved bruk av et Milli-Q ultrarent vannsystem (Millipore, Bedford, Massachusetts, MA, USA) og brukt i alle eksperimentene. Fenoliske standardforbindelser av gallussyre, rutin, Trolox og vitamin C ble kjøpt fra Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd. (Chengdu, Kina). Metyltiazol-2-yl-25-difenyltetrazoliumbromid (MTT), Folin-Ciocalteu-reagens, 2,2'-og-bis(3-etylbenzen-tiazolin-6-sulfonsyre)( ABTS),2,2-difenyl-1-pikrylhydrazylradikal (DPPH), 1,3,5-tri(2-pyridyl)-2,4,{{23 }}triazin (TPTZ),2',7'-diklorfluoresceindiacetat (DCFH-DA) og FeSO4-7HOble kjøpt fra Sigma-Aldrich (Shanghai, Kina). NMR-spektrene ble oppnådd ved bruk av Bruker AV-400- og/eller DRX-500-spektrometre. ESIMS-spektra ble registrert på An Agilent 1290 UPLC/6540 Q-TOF-spektrometer.

Klikk her for å vite mer

3.2. Prøveforberedelse

Anneslea fragrans Wall. blader ble samlet inn fra byen Lincang i Kina 2. juli020. Bladene ble tørket i et skyggelagt rom til konstant vekt og ble deretter pulverisert med en elektrisk kvern. Ekstraksjonen og fraksjoneringen ble utført som vår tidligere rapporterte metode med liten modifikasjon [33]. Den pulveriserte prøven (100 g) ble blandet med 1000 ml 80 prosent vandig etanolløsningsmiddel og ultralydbehandlet i et ultralydrensebad ved 200 W tre ganger (0,5 timer per gang). Deretter ble den sonikerte slurryen samlet og sentrifugert ved 1500×g i 10 minutter med Eppendorf-sentrifuge (TGL-20B, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, Shanghai, Kina). Den kombinerte supernatanten ble konsentrert ved 50 grader ved hjelp av en rotasjonsfordamper (Hei-VAP, Heidolph, Tyskland) og ytterligere tørket med en vakuumtørkende frysetørking (Alpha 1-2 LD plus, Christ, Tyskland). Det urene etanolekstraktet (CE, 30 g) ble resuspendert med vann og sekvensielt fordelt med diklormetan, etylacetat og n-butanol-løsningsmidler tre ganger. Etter konsentrering og lyofilisering ble diklormetanfraksjonen (DF), etylacetatfraksjonen (EAF), en n-butanolfraksjon (BF) og gjenværende vannfraksjon (RWF) som veide 3,2 g, 6,3 g, 7,2 g og 8,2 g oppnådd. , henholdsvis. I henhold til antioksidantaktivitetene til forskjellige fraksjoner ble BF kromatografert på glasskolonner (30 mm × 400 mm) våtpakket med 20 g (tørr harpiks) av den valgte hydratiserte harpiksen D101. Sengvolumet (BV) av harpiksen var ca. 40 ml. Etter å ha nådd den adsorptive metningen, ble kolonnen først vasket med destillert vann med 4×BV og deretter eluert med etanol-vann (0:100,20:80,50:50,80:20,100:0,v/y, hver 4× BV), for å gi fem underfraksjoner (BF-A til E). Hver del av desorpsjonsløsningene ble konsentrert til tørrhet under vakuum. CE, fire fraksjoner (DF, EAF, BF og RWF), og fem underfraksjoner (BF-A til E) ble lagret i kjøleskap (-20 grad ) for videre eksperimentering.

3.3. Bio-veiledet isolering av aktive bestanddeler

Under veiledning av antioksidantanalyser og HPLC-analyse ble den antioksidative fraksjonen ytterligere kromatografert for isolering av rene forbindelser. Kort fortalt ble BF utsatt for en hydratisert harpiks D101-kolonne for å gi fem underfraksjoner (BF-A til E). BF-C (1,5 g) ble utsatt for en silikagelkolonne, eluert med DCM/MeOH (15:1), og ble deretter separert ved bruk av preparativ TLC (DCM/MeOH, 10:1) for å oppnå forbindelsene 6 (118 mg) ) og 7 (10 mg). BF-D (1,1 g) ble utsatt for silikagelkolonne (CHCl3/MeOH 10:1, 5:1) for å gi forbindelsene 1 (129 mg) og 4 (15 mg). BF-E (1,2 g) ble utsatt for silikagelkolonne (CHCl3/MeOH, 30:1, 10:1, 5:1) for å gi forbindelsene 1(216 mg),2(135mg) og en blanding. Sistnevnte ble renset med silikagelkolonne (CHCl3/MeOH) 12:1) for å gi forbindelsene 3 (19 mg) og 5 (15 mg) (figur 5).

3.4. Strukturbelysning av forbindelser 1-7

I henhold til antioksidantaktivitetene til forskjellige fraksjoner ble tre underfraksjoner, BF-C til E underkastet kolonnekromatografi. På denne måten førte den bioaktivitetsstyrte fraksjoneringen av BF-C til E til isolering av syv individuelle fenoliske forbindelser. Strukturene deres ble identifisert som confusoside(1)[34], vaksinifolin (2)[34],1-[4-(-D-glucopyranosyloksy)-2-hydroksyfenyl]-3- (4-hydroksy-3-metoksyfenyl)-1-propanon (3) [35], (S)-naringenin-7-O- -D-glukopyranosid (4)[ 22],2',3,4,4'-tetrahydroksydihydrochalcone(5)[26], (epi)-catechin (6)[26], og cornoside (7)[36](Figur 1B) ved analyse av 1D -NMR og ESI-MS data og sammenligning med de tidligere rapporterte forbindelsene i litteraturen. Blant dem ble forbindelsene 3, 4 og 7 isolert fra denne planten for første gang.

Cistanche kan forbedre immuniteten

Confusoside (1). Molekylformelen ble tildelt C21H24O, og separasjonen ga 129 mg blekgule nåler. 'IH NMR (500 MHz, DMSO-d6) og ESI-MS(m/z 421 [M pluss H])-data var identiske med den tidligere rapporterte forbindelsen i litteraturen [34]. Identifikasjonen ble videre støttet av 13C NMR（125 MHz, DMSO-dg）∶δ204.4（s,C=O),163.5(s,C-2'),163.3(s,C -4'),155.5(s,C-4),132.6(d,C-6'),130.9(s,C-1),129.2(d, C -2, 6),115.0(d,C-3/C-5),114.4(s, C-1'),108.3(d, C{{45} }'),103.4(d,C-1"),99.6(d,C-3'),77.1(d, C-5"),76.4(d, C{{ 57}}"),73.1(d,C-2"),69.5(d, C4'),60.5(t,C-6'),39.8(t,C- ),28.9( t, C-6).

Vacciniifolin (2) ble oppnådd som gult amorft pulver (153 mg) og tildelt en molekylformel C2H24O1o.'H NMR(500 MHz, DMSO-dg) og ESI-MS (m/z 437 [M pluss H]) data var de samme som tidligere rapporterte data [34]. Identifikasjonen ble ytterligere støttet av 13CNMR (125 MHz, DMSO-de)∶δ204.4 （s, C=O）,163.5（s, C-2'）,163.3 (s, C{ {21}}),145.0(s, C-3),143.3(s, C-4),132.6(d, C-6),131.7(s, C{{33 }}),118,9(d, C-6),115,8(d, C-2),115,4(d, C-5),114,4(s, C-1 '), 108.3(d, C-5'),103.4(d, C-1'),99.6(d,C-3'),77.1(d, C{{57 }}"),76.4(d,C-3'),73.1(d,C-2"),69.5(d,C-4'),60.5(t,C{ {69}}'),39.4(t,Ca),29.1(t, C-6).

{{0}}[4-( -D-Glucopyranosyloksy)-2-hydroksyfenyl]-3-(4-hydroksy-3-metoksyfenyl){{8 }}propanon (3). Forbindelsen ble oppnådd som fargeløse nåler (19 mg), og molekylformelen ble tildelt som C22H2O10.'H NMR(400 MHz, DMSO-d6) og ESI-MS (m/z451 [M pluss H]* ) data stemte overens med litteraturen [35]. Identifikasjonen ble videre støttet av 13CNMR（100 MHz,DMSO-d）∶δ204.5（s,C=O）,163.5（s,C-2'）,163.3（s,C{ {31}}'）,147.4（s,C-3),144.6(s,C-4),132.6(d,C-6),131.6(s,C{{ 43}}),120,4(d,C-6),115,2 (d, C-5),114,5(s,C-1'), 112,6(d,C{{55 }}),108,3(d,C-5'), 103,3 (d,C-1"),99,5 (d, C-3'),77,0(d,C{{ 67}}'),76,3(d, C-3"), 73,0(d,C-2"),69,5(d,C-4'),60,5(t,C -6'),55,5(q,C-OCH3),39,5(t, C-),29,4(t,C-6).

(S)-Naringenin-7-O- -D-glukopyranosid (4) hadde molekylformelen C21H2.O10, som ble oppnådd som 15 mg hvitt pulver. IH NMR (500 MHz, DMSO-dg) og ESI-MS (m/z 435 [M pluss H] pluss) data var i samsvar med det forrige arbeidet[22]. Identifikasjonen ble ytterligere støttet av 13C NMR (125 MHz, DMSO-d)∶δ197.2 (s, C-4), 165.3（s, C-7), 165.2 (s, C{{25 }}), 162,9(s, C-9), 157,9(s, C-4'),128,6(s, C-1'), 128,4(d, C{{37 }}',6'),115.2 (d, C-3'/C-5'),1{{110}}3.2 (s,C-10 ),99.6(d,C-1'),96.5(d,C-6),95.4(d,C-8),78.7(d,C-2) ,77.0(d, C{{6{{240}}}}"),76.3 (d,C-3'),73.0(d,C{{ 66}}"), 69,5 (d,C-4'),60,5(t,C-6'),42,0(t,C-3). 2'3,4,A'-tetrahydroksydihydrochalcon (5) hadde molekylformelen som C15H4O5 og separert (15 mg) som hvitt pulver.'H NMR(400 MHz, DMSO-dg) og ESI-MS (m/z 275 [ M pluss H] pluss) data var i samsvar med det som ble rapportert i litteraturen [26]. Identifikasjonen ble videre støttet av 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6)∶δ203.9 （s, C=O),164.7(s,C-2'),164.2(s,C -4'),144,9(s, C-3),143,3(s, C-4),133,0(d,C-6),131,8(s,C{ {114}}),118,9 (d,C-6),115,7(d,C-2),115,4(d,C-5),112,5 (s,C{{126 }}),108.2(d,C-5'),102.4(d,C-3'),39.5(t, C-a2),29.2(t, CB). (Epi)-katechin(6) ble isolert som hvitt pulver (118 mg) og etablerte molekylformelen som CHO4.1H NMR (400 MHz, DMSO-dg) og ESI-MS (m/z 291 [M pluss H] pluss )data stemte godt overens med det som ble rapportert i litteraturen [26]. Identifikasjonen ble videre støttet av13C NMR (125 MHz, DMSO-d6)∶δ156.4（s,C-7）,156.1（s, C-5）,155.3（s,C{{162 }}）,144,8(s,C-3'),144,8(s,C-4'),130,5(s,C-1'),118,4(d,C{{ 174}}'),115.0(d,C-5'),114.4(d,C-2'), 99.0(s,C-10),95.1(d,C{ {186}}),93,8(d, C-8),80,9(d, C-2),66,2 (d,C-3),27,8(t, C{{198 }}). Kornosid (7) ble oppnådd som amorft fast stoff (10 mg) og bestemte molekylformelen som C1H20O8. 'H NMR (500 MHz, DMSO-dg) og ESI-MS (m/z317 [M pluss H] pluss) data samsvarte med publiserte data [36]. Identifikasjonen ble ytterligere støttet av 13CNMR（100 MHz, DMSO-dg）∶δ185.3（s, C-4）,153.3（d,C-2）,153.2（d,C{{220 }}）,126.4（d, C-3）,126.4(d,C-5),102.8(d,C-1'),76.8(d,C{{232} }'),76.6(d,C-3'),73.3(d,C-2'),70.0(d,C-4),67.3(s, C{{244 }}), 63,8(t, C-8), 61,0(t, C-6'), 39,7(t, C-7).

3.5. Bestemmelse av totalt fenol (TPC) og totalt flavonoidinnhold (TFC)

TPC og TFC av fire fraksjoner (DF, EAE, BF og RWF) og fem underfraksjoner (BF-A til E) ble målt i henhold til vår tidligere rapporterte metode [37]. For TFC ble 1.0 mL av hver prøve (med konsentrasjonen på 1.0 mg/mL) oppløst i metanol blandet med 0,5 mL Folin-Ciocalteu-reagens i et sentrifugerør og inkubert i 1 min. Deretter ble 20 prosent Na2CO3-løsning (m/o) (1,5 ml) og avionisert vann (7,0 ml) tilsatt til røret og holdt ved 70 grader i vannbad i 10 minutter. Etter å ha blitt avkjølt til romtemperatur, ble 200 ul av løsningen overført til en 96-brønn mikroplate og absorbansen ble bestemt ved 765 nm med en SpectraMax M5 mikroplateleser (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA).

For TFC ble 1,2 mL prøveløsninger (med konsentrasjonen på 1,0mg/mL) blandet med 0,3 mL NaNO, (5 prosent m/o) og 3,8 mL av 7 0 prosent vandig etanol og inkubert i 8 min. Deretter ble0,3 ml 10 prosent vandig Al(NO3),4 ml4 prosent vandig NaOH og 0,4 ml 70 prosent vandig etanol tilsatt til blandingen og fikk reagere ved romtemperatur i 30 min. Deretter ble 200 μL av løsningen overført til en 96-brønnmikroplate, hvor absorbansen ble målt ved 510 nm ved å bruke en mikroplateleser. TFC og TPC ble uttrykt som milligram gallussyreekvivalenter (mg GAE/geekstrakt) og rutinekvivalenter per gram ekstrakt (mg RE/g ekstrakt).

3.6. Bestemmelse av antioksidantaktivitet

Antioksidantaktiviteten til fire fraksjoner (DF, EAF, BF og RWF) og fem underfraksjoner (BF-A til E) ble evaluert i en kombinasjon av DPPH- og ABTS-radikalfangende analyser og FRAP-analyse basert på metoden beskrevet i vår forrige studie [33]. For DPPH-analyse ble 50μL av prøveløsningen (50,100,200 ug/mL) blandet med 0,2 mL DPPH-løsning (0,1 mmol/ L) i en 96-brønnplate og inkubert i 30 min. Absorbansen ble målt ved 517 nm med SpectraMax M5 mikroplateleser (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). For ABTS ble 25 μL av prøveløsningen (50, 100, 200 ug/mL) tilsatt til 0,2 mmol-løsning (7 mmol) /L). Blandingen ble holdt i mørket i 6 minutter, og deretter ble absorbansen registrert ved 734 nm. For FRAP ble 20 μL prøveløsning (50 100 200 ug/mL) blandet med 0,18 mL FRAP-reagens (7 mmol/ L) Etter inkubering i 10 minutter i mørket ved 37 grader, ble absorbansen bestemt ved 593 nm. Alle testene ble utført i tre eksemplarer. Resultatene av DPPH-, ABTS- og FRAP-verdier ble uttrykt som umol Trolox-ekvivalenter per gram av ekstrakt (μmol TE/g ekstrakt).

3.7.HPLC-analyse

BF og forbindelsene {{0}} ble analysert på et Agilent 1260 HPLC-system koblet med en diodearray-detektor. Før analyse ble den nylagde prøveløsningen filtrert gjennom en 0.45 um nylonmembran. Separasjonen ble utført ved bruk av en Reprosil-Pur Basic C18 kolonne (5 μm, 4,6 × 25 0 mm, Tyskland) holdt ved 35 grader. Injeksjonsvolumet var 5,0 μL, strømningshastigheten var 1,0 ml/min, og deteksjonsbølgelengden ble satt til 280 nm. De mobile fasene var surgjort vann med 0,1 prosent maursyre (fase A) og acetonitril (fase B), den lineære gradientelueringen ble utført som følger:0-3 min, 20 prosent B;3-10 min, 40 prosent B;10-15 min, 60 prosent B;15-20 min, 100 prosent B.

3.8. Cellekultur og cellelevedyktighet

Human leverkreft HepG2-celler ble kjøpt fra Kunming Cell Bank (Kunming, Kina). HepG2-celler ble dyrket i DME supplert med 1 prosent penicillin-streptomycin og 10 prosent føtalt bovint serum i en atmosfære av 5 prosent CO,/95 prosent luft ved 37 grader. Når cellene ble inkubert til en passende tetthet (omtrent 80 prosent), de ble behandlet med den positive kontrollen (Vc) og de isolerte forbindelsene for ytterligere eksperimenter.

Cellelevedyktighet ble bestemt ved MTT-analyse for å evaluere cytotoksisiteten til hver prøve [29]. Cellene med en tetthet på 1×104 celler per brønn ble sådd i en 96-brønnplate og fikk inkubere i 24 timer. Hver forbindelse (fremstilt som fire doser fra 50 til 200 ug/mL) ble tilsatt til hver brønn i 20 timer. Deretter ble cellene behandlet med MTT-løsning med en sluttkonsentrasjon på 4 timer. Mediet med MTT ble fjernet, og 200 μL av DMSO ble tilsatt for å løse opp formazan. Absorbansen ble registrert ved 570 nm av en mikroplateleser. Resultatene viste at hver forbindelse var ikke-toksisk for HepG2-celler ved de testede konsentrasjonene.

3.9. Hemming av ROS-generering i H2O2-induserte HepG2-celler

H,O,-induserte HepG2-celler ble brukt for å bestemme den hemmende effekten på ROS-produksjon [3]. HepG2-celler (1,0×10 graders celler per brønn) ble sådd i en 6-brønnplate og samdyrket med isolerte forbindelser med 50 ug/mL og Vc (8 ug/ ml). Etter inkubering i 20 timer ble mediet fjernet, og 2 μL H, O, (0,5 mM) ble tilsatt til hver brønn i ytterligere 6 timer. På slutten av eksperimentet ble cellene merket med 2 μL DCFH-DA (10 mM) i mørket ved 37 grader i 20 minutter. Absorbansen ble registrert ved flowcytometri (Guava easy yet 6-2L, Millipore, Billerica, Massachusetts, MA, USA).

3.10. Bestemmelse av celleapoptose

Den beskyttende effekten av hver forbindelse på H2O2-indusert apoptose av HepG2-celler ble bestemt ved bruk av et humant annexin VFITC/PI-apoptosesett [38]. HepG2-celler ble forhåndsbehandlet med eller uten isolerte forbindelser i 48 timer. Etter inkubering ble 100 μL av bindingsbufferen tilsatt til cellene, og cellene reagerte i mørket med 10 μL annexin V-FITC i 5 minutter ved romtemperatur og med 10 μL propidiumjodid (PI) i et isbad i 5 minutter. min, suksessivt. Celleapoptose ble umiddelbart analysert ved bruk av flowcytometri.

3.11.Statistisk analyse

Alle forsøkene ble utført i tre eksemplarer. Alle verdiene er uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik (SD). Forskjellene innenfor og mellom gruppene ble analysert ved hjelp av en enveis variansanalyse (ANOVA) etterfulgt av Tukeys test. Forskjellen ble ansett som statistisk signifikant på s<0.05. all="" analyses="" were="" performed="" using="" origin="" 2019b="" software="" (originlab,="" northampton,="" ma,="">

4. Konklusjoner

I denne studien ble forskjellige fraksjoner fra A.fragrans-bladene fraksjonert, og deres TPC og TFC ble analysert. Under antioksidantaktivitetsstyrt isolasjon ble forbindelser 1-7, inkludert fire flavonoidglykosider (1-4) og to flavonoider (5 og 6), isolert og identifisert fra A. fragrans-blader, noe som antydet at denne arten er rik i flavonoidforbindelser. Forbindelsene 2, 5 og 6 viste signifikant antioksidantaktivitet i DPPH, ABTS-radikalfanging og FRAP-analyser. Videre forhindret de synlig oksidativ stressskade gjennom en reduksjon i ROS-innhold og celleapoptose i H2O2-induserte HepG2-celler. Ifølge disse resultatene har polyfenolforbindelser, spesielt flavonoider, betydelig antioksidantkapasitet på grunn av deres fenoliske hydroksylgrupper. Videre var forbindelse 2, som inneholdt glykosiddelen og tre fenoliske hydroksylgrupper, den viktigste antioksidantkomponenten med høyest innhold fra A. fragrans-blader. Forbindelse 6 viste den beste antioksidantaktiviteten, som kan være et viktig bidrag til aktiviteten til A.fragrans. Videre kan ekstraktene av A.fragrans brukes som en mulig naturlig kilde til antioksidanter i lovende helsedrikker. Studien på forbindelsene fra A. fragrans-blader antyder at disse kan brukes som en antioksidant sunn te for behandling av oksidativt stress-indusert celleskade og kan tjene som kosttilskudd brukt i mat- og helseindustrien.

Denne artikkelen er hentet fra Molecules 2021, 26, 3690. https://doi.org/10.3390/molecules26123690 https://www.mdpi.com/journal/molecules