BCG-indusert trent immunitet forbedrer acellulær pertussis-vaksinasjonsrespons i en eksplorativ randomisert klinisk studie

INTRODUKSJON

Pertussis er en svært overførbar akutt luftveissykdom forårsaket av bakterien Bordetella pertussis og har dukket opp igjen som et alvorlig folkehelseproblem til tross for høy vaksinedekning1. I årevis ble sykdommen kontrollert i industrialiserte land gjennom vaksinasjon med helcelle-kikhostevaksiner (wPs) som ble implementert på 1940-tallet-1950. Disse vaksinene var svært effektive og induserte langtidsbeskyttelse.

Imidlertid førte høy reaktogenisitet og sikkerhetsbekymringer til at de ble erstattet på 1990-2000-tallet med acellulære kikhostevaksiner (aPs). aP booster-vaksiner, inkludert kombinasjonsvaksiner som inneholder tetanus og difteritoksoid (Tdap) enten med eller uten inaktivert poliovirus (IPV) (Tdap-IPV), ble introdusert kort tid etter. aP-vaksiner er nå mye brukt for å øke immuniteten hos førskolebarn, ungdom og voksne. Til tross for disse tiltakene og deres forbedrede sikkerhetsprofil, har flere studier vist at indusert immunitet forblir suboptimal2 og avtar over tid3. Videre forkortes beskyttelsesvarigheten etter gjentatte aP-doser gradvis4–6. Det økende behovet for nye og forbedrede vaksinasjonsstrategier har ført til utforskning av nye adjuvanser som retter seg mot medfødt immunitet og forbedrer spesifikk immunitet mot aPs7–9.

Kombinasjonsvaksiner kan øke immuniteten. Kombinasjonsvaksiner er en kombinasjon av flere forskjellige sykdomsforebyggende vaksiner som gir flere beskyttelser til pasienter samtidig, og reduserer stresset og smerten ved å få flere injeksjoner. Samtidig kan kombinasjonsvaksinen også forbedre immuniteten til de vaksinerte, fordi den kan stimulere flere immunresponser og produsere flere antistoffer og immunceller, og effektivt forbedre evnen til å forebygge mange ulike sykdommer. Forbedring av immunitet er svært viktig i vårt daglige liv. Cistanche kan forbedre immuniteten. Polysakkaridene i kjøtt kan regulere immunresponsen til det menneskelige immunsystemet, forbedre stressevnen til immunceller og forbedre effekten av sterilisering av immunceller.

Klikk for å lære hva cistanche er

Bacille Calmette-Guérin (BCG)-vaksinen beskytter mot mykobakterielle infeksjoner som tuberkulose10, samt beskyttelse mot sekundære infeksjoner med urelaterte patogener i musemodeller1. Hos mennesker har disse ikke-spesifikke fordelaktige effektene vært knyttet til redusert spedbarnsdødelighet11,12 og har blitt validert i randomiserte kliniske studier10,13. BCG induserer langsiktige endringer i medfødte immunceller som forbedrer deres respons på stimulering med urelaterte patogener. Denne prosessen kalt trent immunitet, involverer epigenetisk omprogrammering av monocytter og vedvarer i opptil ett år etter BCG-vaksinasjon14. Den kliniske relevansen av trent immunitet har blitt demonstrert hos mennesker gjennom studier som bruker BCG som prototype for induksjon av trent immunitet og vaksinasjon eller eksperimentell menneskelig infeksjon som sekundær immunforstyrrelse15–17. Det er akkumulerende bevis for at BCG-vaksinasjon modulerer adaptive immunresponser på vaksiner. Blant åtte studier som ble evaluert i en nylig gjennomgang, viste fem forbedrede vaksinespesifikke humorale responser18.

Forsøk på å avgrense de samvirkende effektene av BCG- og kikhostevaksiner antyder at BCG-indusert trent immunitet kan ha en positiv effekt på immunresponsen på kikhoste. Hos mus forbedret tidligere vaksinasjon med BCG Th1 og humorale immunresponser etter aP, men ikke wP-vaksinasjon19. Hos mennesker viste en populasjonsskalastudie at samtidig administrering av BCG med kikhostevaksinasjon reduserte dødeligheten hos spedbarn20 sammenlignet med å få vaksinene sekvensielt. Så vidt vi vet, har ingen studie til dags dato undersøkt i en randomisert kontrollert studie om trent immunitet modulerer immunresponser mot kikhostevaksiner eller har sammenlignet tidspunktet for administrering av BCG-vaksinasjon i forhold til en andre vaksinasjon eller utfordring.

Her testet vi om BCG-vaksinasjon påvirker den adaptive immunresponsen til en vaksinasjon, og om trent immunitet er assosiert med disse responsene. Vi viser at BCG-indusert trent immunitet forbedrer aP-spesifikt antistoff, aP-spesifikke Th1-celleresponser og totale minne B-celleresponser 2 uker etter Tdap-IPV-immunisering. Disse økningene var positivt korrelert med økte trente immunitetsbiomarkører, inkludert IL-1 og IL-6. Funnene våre fremhever en rolle for trent immunitet indusert av BCG-vaksinasjon i å potensere immunitet mot kikhostevaksiner.

RESULTATER

Studere design

Seventy-five healthy female volunteers were randomized to one of three cohorts to receive BCG and Tdap-IPV vaccines in different orders21. We chose to enroll only women since gender-specific effects of pertussis vaccines have been reported 22. The median age of the volunteers was 23, with no significant difference in age between cohorts (Kruskal–Wallis test; P = 0.6), as previously reported21. Two subjects were excluded from analysis for having a high anti-pertussis toxin IgG concentration before Tdap-IPV vaccination (>100 IE/ml), indikerer nylig infeksjon med kikhoste23,24 (fig. 1a).

For å identifisere endringer i TdapIPV-vaksineresponsen som er assosiert med trent immunitet, mottok den "BCG-trente" kohorten BCG 3 måneder før TdapIPV. Vi inkluderte også to kontrollkohorter for å ta hensyn til tidspunktet for BCG-vaksinasjonen. "BCG pluss Tdap"-kohorten mottok begge vaksinasjonene i motsatte lemmer samtidig, og "Tdap-IPV"-kohorten fikk Tdap-IPV først og BCG 3 måneder senere (fig. 1b). Blod ble samlet på flere tidspunkt før og etter vaksinasjonene. Tidsstempler er definert i forhold til grunnlinjen for Tdap-IPV-vaksinasjon (-M3=3 måneder før, -M3 pluss W2 = 3 måneder før pluss 2 uker, D0=grunnlinje for Tdap-IPV eller samtidige BCG- og Tdap-IPV-vaksinasjoner, W2=2 uker deretter, M3 pluss W2=3 måneder pluss 2 uker deretter, Y1=1 år etterpå). Primære utfall ble spesifisert som økning i adaptiv immunrespons 2 uker eller 1 år etter Tdap-IPV-vaksinasjon.

Totalt vurderte vi 31 immunologiske utfall på tvers av tre vaksinasjonskohorter. Vi brukte en perlebasert multipleks immunoassay for å måle antistoffkonsentrasjoner av IgG mot pertussis-antigener pertussis-toksin (PT), filamentøst hemagglutinin (FHA), pertactin (PRN), samt difteritoksoid (DIPH) og tetanustoksin (TET)25. Totale B-celle- og PRN-spesifikke B-celler ble målt direkte i helblod ved flowcytometri ved bruk av fluorescensmerket PRN (tilleggsfig. 1). Th1 og Th17 T-celleresponser mot kikhosteantigener ble målt ved å stimulere mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) med enten PRN, PT eller FHA i 7 dager og måle utskilt IFN, IL22 og IL-17 ved ELISA26.

BCG-vaksinasjon forsterker immuncellecytokinresponser på ikke-relaterte stimuli, et fenomen som har blitt forklart av to forskjellige biologiske mekanismer. Den første prosessen kalles heterolog immunitet og avhenger av den uspesifikke aktiveringen av T-celler27,28. Den andre prosessen kalt trent immunitet, resulterer i økt proinflammatorisk cytokinproduksjon av medfødte immunceller14. Vi definerte sekundære utfall for den BCG-trente kohorten som endringer i cytokinproduksjon av PBMC etter stimulering med varmedrepte Candida albicans (C_alb), Staphylococcus aureus (S_aur), Bordetella pertussis (Bp) eller lipopolysakkarid (LPS). Som i tidligere studier16,21, kvantifiserte vi Th1/17 cytokiner IFN, IL-22 eller IL-17 etter 7 dager som en avlesning for heterolog immunitet, eller monocyttavledede cytokiner IL-10 , IL-6, IL-1 eller TNF etter 24 timer som en avlesning for trent immunitet (fig. 1b). Cytokinproduksjon som respons på sonikert Mycobacterium tuberculosis (Mtb) ble målt for å kvantifisere antimykobakteriell immunitet.

Tidligere BCG-vaksinasjon forbedrer Tdap-IPV-indusert adaptiv immunrespons

For å kvantifisere effekten av trent immunitet på Tdap-IPV-vaksinasjon, for hvert primært endepunkt, konstruerte vi en lineær blandede effekter-modell med prøvetid, kohortmedlemskap, samt interaksjonen av tid og kohort som kovariater. Vi undersøkte to kontraster: (i) forskjeller sammenlignet med baseline (D0) innenfor hver kohort (effekter etter vaksinasjon, tilleggstabell 1), og (ii) forskjeller mellom kohorter i størrelsen på disse endringene (differensiell effekter, tilleggstabell 2). Alle kohorter ga signifikante økninger i antistoffresponser mot de fem antigenene etter Tdap-IPV-immunisering. Antistoffkonsentrasjoner forble høyere enn baseline opp til et år etter vaksinasjon (Y1), bortsett fra TET, som hadde avtatt i BCGtrained og BCG pluss Tdap-kohortene (tillegg Fig. 2a).

Alle kohorter hadde signifikant økt antall sirkulerende PRN pluss B-celler 2 uker etter immunisering, som hovedsakelig var minne B-celler (MBC) (tilleggsfigur 3a). Vi observerte ikke forskjeller mellom kohorter (tilleggstabell 2 og tilleggsfigur 3b). Sammenlignet med Tdap-IPV-kohorten, viste den BCG-trente kohorten forbedrede baseline-normaliserte log1{{10}}-foldsendringer (W2/D0) for IgG-responser for PT, FHA og PRN. Et lignende mønster ble observert når disse responsene ble sammenlignet med BCG pluss Tdap-kohorten (fig. 2a). Vi observerte også forhøyede pertussis-spesifikke IgG-konsentrasjoner i den BCG-trente kohorten 2 uker etter vaksinasjon (Supplerende Fig. 2b), selv om forskjellen i absolutte verdier var mindre uttalt enn forskjellen i økningene som er i forhold til baseline kl. D0.

Videre viste forsøkspersoner i den BCG-trente kohorten signifikant økte totale MBC-responser, inkludert IgG-klassebyttede MBCer (fig. 2b og tilleggsfig. 4). Forsøkspersoner i den BCG-trente kohorten viste også forhøyet IFN-sekresjon som respons på stimulering med alle tre pertussis-antigener. Motsatt ble det observert signifikante økninger for et enkelt pertussis-antigen i Tdap-IPV-kohorten (PT) og to pertussis-antigener i BCG pluss Tdap-kohorten (PT og FHA, fig. 2c og tilleggsfig. 5). Vi observerte også en trend der økninger i IFNg-produksjonen var høyere i den BCG-trente kohorten enn i de andre kohortene, selv om denne ikke nådde statistisk signifikans (tilleggstabell 2 og tilleggsfigur 5b). Pertussis-spesifikke IL-22- og IL-17-svar var svake for alle kohorter (tilleggstabell 1). Til sammen peker disse funnene på forbedrede pertussis-spesifikke antistoffresponser, forbedrede totale IgG-svitsjede MBC-responser og bredere pertussis-spesifikke IFN-responser i den BCG-trente kohorten sammenlignet med de to andre kohortene.

Vi undersøkte sammenhengene mellom økningene i primære utfall som ble forbedret i den BCG-trente kohorten. For denne utforskende analysen ble korrelasjoner mellom antistoffer, B-celler og cytokiner beregnet for hver kohort. Den BCG-trente kohorten viste mange signifikante og kvantitativt sterkere positive korrelasjoner mellom disse responsene, mens Tdap-IPV- og BCG pluss Tdap-kohortene viste svakere eller inverse korrelasjoner, med det sterkeste mønsteret som tilsvarer endringer i IFN-responser (fig. 3a). Korrelasjonskoeffisientene mellom responsene i de BCG-trente var betydelig større enn de i kontrollkohortene, noe som totalt peker mot induksjon av en mer høyt koordinert pertussis-spesifikk adaptiv immunrespons i den BCG-trente kohorten (fig. 3b).

IL-1 og IL-6 cytokinproduksjon er assosiert med pertussisspesifikke adaptive immunresponser

Den BCG-trente kohorten viste forbedret total IgG-svitsjet MBC og pertussis-spesifikke IFN-responser. I tillegg, sammenlignet med Tdap-IPV og BCG pluss Tdap-kohortene, viste den BCG-trente kohorten også høyere kikhosteantistoffresponser. Siden BCG-vaksinasjon hos mennesker kan øke cytokinproduksjonen av sirkulerende immunceller som respons på heterolog stimulering, uker til måneder etter vaksinasjon27, evaluerte vi om disse BCG-induserte cytokinresponsene var assosiert med endringer i pertussis-spesifikke immunresponser etter Tdap-IPV-vaksinasjon. To uker og 3 måneder etter BCG-vaksinasjon var det en signifikant forbedret antimykobakteriell respons karakterisert ved økt IL-22- og IFN-produksjon sammenlignet med BCG-vaksinasjonsbaseline (tilleggsfigur 6a, b).

Totalt sett viste ikke den BCG-trente kohorten økt produksjon av heterolog immunitet eller trente immunitetsassosierte cytokiner, som tidligere observert (Supplerende figurer 6 og 8)21. Siden induksjonen av cytokinproduksjon varierte mellom individer, beregnet vi imidlertid endringer mellom 2 uker etter BCG og 3 måneder etter BCG sammenlignet med BCG-baseline (supplerende figurer 7 og 9). Pearson-korrelasjoner ble beregnet for å bestemme styrken til assosiasjonen mellom disse målingene på hvert tidspunkt. Tre måneder etter BCG-vaksinasjon, dvs. ved Tdap-IPV baseline, var cytokinresponser på in vitro-stimulering sterkt korrelert. Heterologe immunitetsassosierte cytokinresponser var negativt korrelert med trente immunitetsassosierte cytokinresponser, og blant disse var korrelasjonene mellom IL-6 og IL-1 sterkest (fig. 4), som tidligere beskrevet16. Korrelasjonsmønstre 2 uker etter BCG-vaksinasjon var like for heterologe immunitetsassosierte cytokiner, men korrelasjonene mellom trente immunitetsassosierte cytokiner var mye svakere, bortsett fra IL-10-responser. Til sammen peker disse resultatene på koordinert medfødt immunaktivering 3 måneder, men ikke 2 uker etter BCG-immunisering i den BCG-trente kohorten.

Deretter undersøkte vi om variasjoner i cytokinresponsene til den BCG-trente kohorten var assosiert med endringer i TdapIPV adaptive immune endepunkter. Vi undersøkte endringer i cytokinproduksjon 2 uker og 3 måneder etter BCG-vaksinasjon. Vi fant at økninger i heterologe immunitetsassosierte cytokiner hadde en tendens til å være svakt og negativt korrelert med de primære endepunktene både 2 uker (tilleggsfig. 10) og 3 måneder etter BCG-vaksinasjon (fig. 5a). Derimot var økninger i trente immunitetsassosierte cytokiner 3 måneder etter BCG-vaksinasjon, spesielt IL-1 /IL-6 som respons på LPS-stimulering, signifikant positivt korrelert med PRN- og FHA-antistoffresponser, IFN-produksjon i respons på PT-stimulering, og totale IgG-svitsjede MBC-responser (fig. 5b, c).

I tråd med dette observerte vi ikke endringer i den relative mengden av perifere blodcelletall (Supplerende Fig. 11a), og heller ikke endringer i cellulær overflod 3 måneder etter BCG-vaksinasjon var positivt korrelert med pertussis-endepunkter (Supplerende Fig. 11b). Økning i IL-1-produksjon som respons på LPS-stimulering (IL1b. LPS) 3 måneder etter BCG-vaksinasjon viste en sterk assosiasjon med flere Tdap-IPV-responser og ble valgt for å bestemme hvor mye av variasjonen til hver respons de kunne forklare . Den totale variansen som ble forklart (anslått Rsq) for hvert utfall ble beregnet og endringer i IL-1 kunne forklare opptil 60 prosent av responsvariasjonen (fig. 5d). Samlet sett fremhever disse resultatene at trente immunitetsassosierte cytokinresponser 3 måneder etter BCG-vaksinasjon er korrelert med økninger i kikhostespesifikke antistoffresponser og IFN-produksjon, så vel som totale IgG-svitsjede MBC-responser.

DISKUSJON

Induksjon av trent immunitet hos mennesker skjer uker til måneder etter BCG-vaksinasjon14 og kan påvirke responsen på påfølgende immunisering hos mennesker16,17. Her viser vi at trent immunitet som induseres av BCG-vaksinasjon 3 måneder før, men ikke samtidig med, en boosterdose av Tdap-IPV, forsterker pertussis IgG-responser og modulerer pertussis-spesifikke cellulære responser. Flere studier har undersøkt de samvirkende effektene av BCG og andre vaksiner, med de fleste av disse studiene som rapporterer en positiv effekt av BCG på kikhoste immunrespons20,21,29,30. Så vidt vi vet, har imidlertid ingen studier hittil undersøkt tidspunktet for BCG-vaksinasjon på responsen på kikhoste eller studert hvilke trekk ved den BCG-induserte trente immunitetsresponsen som er korrelert med forbedret vaksinerespons.

Forsøkspersoner i alle tre kohorter hadde anti-kikhoste humoral og PRN pluss B-cellerespons 2 uker etter vaksinasjon med TdapIPV. Selv om PRN-antistoffresponser var mye høyere i den BCG-trente kohorten, observerte vi ikke et lignende mønster i PRN-spesifikke B-celleresponser. Dette kan forklares med en raskere induksjon av antistoffer i den BCG-trente kohorten, som akkumuleres over tid på grunn av deres lange halveringstid.

Men siden antistoffkonsentrasjoner ikke ble målt før 2 uker etter vaksinasjon, var det ikke mulig å estimere forskjeller i kinetikken mellom kohorter. Ved siden av økte PRN-antistoffresponser fant vi også at FHA- og PT-antistoffresponser var høyere i den BCG-trente kohorten. Vi var dessverre ikke i stand til å måle PT- og FHA-spesifikke B-celleresponser på grunn av den høye ikke-spesifikke bindingen av FHA og PT til B-celler. Likevel er det lovende at totale IgG MBC-responser ble økt i den BCG-trente kohorten og at disse økningene var korrelert med økninger i antistoffresponser. Vi fant også at IFN-responser som respons på re-stimulering av pertussis-antigen ble forbedret i den BCG-trente kohorten. Selv om disse endringene var relativt små, observerte vi en trend der W2–D0 endringer var høyere enn i de andre kohortene. Ytterligere studier med flere forsøkspersoner kan bidra til å validere dette mønsteret, som har blitt bekreftet i en musestudie19. Tilsvarende har neonatal BCG-vaksinasjon også vist seg å potensere Th1-responser på tetanustoksoid31.

Økninger i pertussis-antistoffer, totale IgG MBC-responser og pertussis IFNg-responser var sterkt korrelert med hverandre i den BCG-trente kohorten, noe som tyder på koordinert aktivering av effektor- og minnefunksjoner. Videre var økninger i pertussis-antistoffer, totale IgG-svitsjede MBC-responser og IFN som respons på PT-restimulering i den BCG-trente kohorten assosiert med medfødte responser, spesielt IL-1 og IL-6. Disse resultatene er i tråd med en tidligere menneskelig studie fra vår gruppe hvor vi studerte effekten av BCG på influensavaksinasjon17. Betydningen av IL-1 /IL-6-veien som en biomarkør for trent immunitet har også blitt fremhevet i en modell av eksperimentell virusinfeksjon etter gulfebervaksinasjon16. Totalt sett observerte vi ikke korrelasjoner mellom bestemte mikrobielle stimuli og de primære resultatene, noe som tyder på at generelle endringer i cytokinresponsveier og ikke noen spesiell stimuleringstilstand er knyttet til økt respons på kikhostevaksinasjon. Selv om vi forventer at den dominerende IL-6- og IL{10}}-responsen på mikrobiell stimulering kommer fra monocytter og dendrittiske celler16, kan B-celler også bidra til cytokinproduksjon32, og vi kan ikke utelukke deres potensielle bidrag.
Et sentralt spørsmål har vært hvor lenge BCG-indusert trent immunitet vedvarer etter vaksinasjon. In vitro har signaturer av BCG-indusert trent immunitet hos mennesker blitt identifisert så tidlig som 2 uker og opp til 1-år etter vaksinasjon14. Kliniske studier på mennesker som har som mål å oversette disse funnene til in vivo-respons har begrenset observasjonsvinduet til opptil 5 uker etter BCG-vaksinasjon15–17. Vi observerte en svakere induksjon av de trente immunitetsassosierte cytokinene IL-6 og IL-1 enn i tidligere studier16, som tidligere rapportert21. Batch-til-batch-variasjoner i produksjonen av BCG-vaksinen kan påvirke induksjonen av trent immunitet og kan forklare effekten som vi observerte i denne studien 33.

Videre er det også observert variasjoner mellom BCG-stammer som påvirker deres immunogenisitet og kliniske effekt34–36. Til tross for dette viser vi likevel at heterologe IL-1 og IL-6-responser 3 måneder etter BCG-vaksinasjon, dvs. ved tidspunktet for Tdap-IPV-vaksinasjon, men ikke 2 uker etter BCG-vaksinasjon er assosiert med forsterket kikhoste humoral og cellulær immunitet. Disse funnene antyder at trent immunitet fortsetter å utvikle seg de siste 2 ukene etter BCG-vaksinasjon, og understreker at den grunnleggende funksjonelle "responsen" til sirkulerende medfødte immunceller kan være avgjørende for utviklingen av en mer potent vaksinerespons.

Denne studien viser at tidligere BCG-vaksinasjon kan øke responsen på aP-vaksineantigener. Overraskende nok så vi ikke denne effekten for TET og DIPH. Dette kan forklares med at alle voksne tidligere hadde fått boostervaksinasjon med Td-IPV, men ikke med aP i en alder av 9 år, som anbefalt i det nasjonale vaksinasjonsprogrammet. I tråd med dette fant vi at basislinjeantistoffkonsentrasjonene av aP-antigener var sterkt korrelert på tvers av forsøkspersonene i vår studie, men var ikke korrelert med DIPH og TET, noe som tyder på at humoral immunitet mot disse komponentene ikke er synkronisert med aP-antigenene (Supplerende Fig. 12). Baseline DIPH- og TET-antistoffnivåer var sterkt interkorrelerte, noe som stemmer overens med deres samtidige administrering i vaksiner. Således kan variasjoner i eksisterende immunitet mot forskjellige vaksinekomponenter spille en rolle i kapasiteten til BCG-vaksinasjon og trent immunitet til å påvirke responsen på en Tdap-IPV.

Although our study was not designed to investigate vaccine efficacy, a major question is whether the enhanced antibody response that we observed in the BCG-trained cohort may translate into better clinical protection. There is much debate about the correlates of protection against pertussis37. Nonetheless, PT antibodies have previously been used to correlate with clinical protection against disease (>25 IE/ml)29. Ved å bruke denne terskelen ble nesten fullstendig serobeskyttelse oppnådd 2 uker etter TdapIPV i de BCG-trente og BCG pluss Tdap-kohortene, mens en brøkdel av forsøkspersonene i Tdap-IPV-kohorten ikke ble seroprotert (tilleggsfig. 13).

Foruten antistoffer har T-celleimmunitet og spesielt Th1- og Th17-responser også blitt fremhevet som viktige for beskyttelse mot kikhoste i dyremodeller2,38. Vi fant at den BCG-trente kohorten viste forsterket IFN som respons på re-stimulering av kikhosteantigen, som er en avlesning for Th1-immunitet og kan derfor foreslå forbedret klinisk beskyttelse mot kikhoste. Til slutt, nåværende immunologiske endepunkter som tar sikte på å kvantifisere pertussis-spesifikk adaptiv immunitet, slik som T-celle-, B-celle- eller humorale responser, har ennå ikke blitt validert som immunologiske beskyttelseskorrelater. Det er flere muligheter for å tette dette kunnskapsgapet, for eksempel ved å gjennomføre epidemiologiske studier eller ved bruk av den nylig etablerte kontrollerte humane infeksjonsmodellen for B. pertussis39.

En begrensning ved vår eksplorative studie er at studiepopulasjonen besto av voksne som ble primet i spedbarnsalderen med helcelle-DTP-vaksinen, som er kjent for å påvirke den adaptive responsen på kikhoste tiår etter priming og påvirker induksjonen av T-celleimmunitet i respons på en boostervaksinasjon40. Derfor vil det være viktig å avgjøre om funnene våre oversettes til barn født i en tid med rutinemessig pediatrisk aP-vaksinasjon. I tillegg, siden vi bare inkluderte kvinner, vil det være viktig å finne ut om det er forskjeller med menn. I denne eksplorative studien målte vi anti-kikhoste immunogenisitetsendepunkter inkludert antistoffresponser, total- og PRN pluss B-celleresponser og antigenspesifikke T-celleresponser. P-verdier ble ikke korrigert for flere tester på grunn av den målrettede naturen til de vurderte immunresponsene. Det er viktig at denne studien ble utført på frivillige av vesteuropeisk (nederlandsk) avstamning, og fremtidige studier bør undersøke om lignende effekter kan finnes i populasjoner med ulik genetisk bakgrunn. En annen begrensning er at bare en undergruppe av cytokiner ble målt. Selv om dette var passende for de spesifikke hypotesene vi hadde som mål å teste, kan en mer omfattende, objektiv profilering av cytokin og andre responser gi ny innsikt.

Som konklusjon, i denne studien rapporterer vi at BCG-vaksinasjon administrert 3 måneder før Tdap-IPV-vaksinasjon forbedrer anti-kikhoste-immuniteten betydelig, og at biomarkører for trent immunitet er de mest pålitelige korrelatene til disse forbedrede vaksinasjonsresponsene. Ytterligere valideringsstudier vil være nødvendige for å evaluere disse funnene på tvers av ulike studiepopulasjoner, og ytterligere immunologiske og genetiske studier er nødvendig for å mekanistisk validere rollen til IL-1- og IL-6-banene. Til sammen vil avgrensningen av baseline medfødt immunfunksjon, som kan moduleres av BCG, være avgjørende for å forstå hvordan man kan lede vaksineinduserte adaptive immunresponser mot overlegen immunogenisitet og beskyttelse mot sykdom.

METODER

Klinisk utprøving

Denne enkeltsenter, randomiserte åpne studien ble utført ved Radboud University Medical Center (Nijmegen, Nederland) fra 2.015. mars til 2. juli01621. Studieprotokollen er registrert ved kliniske studier. gov (NCT02771782) og ble godkjent av Arnhem-Nijmegen Medical Ethical Committee. Frivillige ble rekruttert ved hjelp av oppslagstavler og ved Radboud-universitetet i Nijmegen og fikk moderat kompensasjon. Frivillige som ikke tidligere var vaksinert med BCG eller nylig med kikhostevaksiner ble inkludert. Eksklusjonskriterier var (i) tidligere BCG-vaksinasjon eller nylig vaksinasjon med vaksiner som inneholder kikhoste, (ii) allergi mot neomycin, polymyxin eller allergisk reaksjon på tidligere vaksinasjon med difteri, stivkrampe, kikhoste eller poliovaksiner, (iii) bruk av systemiske vaksiner. andre medisiner enn p-piller, og (iv) graviditet eller historie med sykdommer som følge av immunsvikt. Kohortstørrelsen ble bestemt basert på tidligere studier utført av gruppen vår der vi undersøkte effekten av BCG-vaksinasjon på medfødte immunresponser16. Randomisering på tvers av studiearmene ble utført med en programvarebasert algoritme. Alle forsøkspersonene hadde en historie med priming med helcellet pertussis i det første leveåret. Syttifem kvinnelige frivillige ble inkludert. Etter at skriftlig informert samtykke ble innhentet, ble blod samlet i etylendiamintetraeddiksyre (EDTA) eller litiumheparin (LiHep) rør, og vaksinasjoner ble administrert. Fullstendige blodtellinger ble oppnådd med en Sysmex XN-450 hematologianalysator. Forsøkspersonene fikk BCG Danish 1331 (Staten Serum Institut, København, Danmark; 0,1 ml intradermalt) og Tdap-IPV (Boostrix Polio, GlaxoSmithKline; 0,5 ml intramuskulært). Sera ble lagret ved -20 grader frem til analyse, og fullblod ble behandlet for videre analyse som beskrevet nedenfor. Retningslinjene for Consolidated Standards of Reporting Trials (CONSORT) ble brukt til å utarbeide dette manuskriptet (tilleggsfig. 14).

Serologisk analyse

Sera ble analysert for PT-, FHA-, PRN-, TET- og DIPH-spesifikke IgG-antistoffkonsentrasjoner ved å bruke en fluorescerende perlebasert multipleks immunoassay25. Antigener ble kovalent koblet til distinkte fargekodede aktiverte karboksylerte MicroPlex Microspheres (perler) (Luminex, Austin, Texas, USA). Følgende antigener ble brukt for kobling: høyt renset PT (Netherlands Vaccine Institute), FHA (Kaketsuken, Kumamoto, Japan), P.69 PRN uttrykt og renset fra en E. coli-konstruksjon41, difteritoksoid (Netherlands Vaccine Institute) og tetanus toksin (T3194, Sigma-Aldrich, Saint Louis, Missouri, USA). Etter et vasketrinn i PBS ble 12,5 × 106 karboksylerte perler/ml aktivert i PBS som inneholdt 2,5 mg 1-etyl3-({{20}} dimetylaminopropyl)-karbodiimidhydroklorid (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA) og 2,5 mg N-hydroksysulfosuccinimid (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA). Antigenene for kobling ble fortynnet i PBS til en konsentrasjon på 10 ug PT, FHA eller PRN, 100 ug DT eller 25 ug TET per 12,5 × 106 aktiverte perler og inkubert i 2 timer ved romtemperatur i mørket under konstant rotasjon. Etter tre vasketrinn ble de antigenkoblede kulene lagret i mørke i PBS inneholdende 0,03 prosent (vekt/volum) natriumazid og 1 prosent (vekt/volum) bovint serumalbumin ved 4 grader inntil bruk. Sera fortynnet 1/200 og 1/4000 i PBS inneholdende 0,1 prosent (vol/vol) Tween 20 og 3 prosent (vekt/vol) BSA ble inkubert med antigenkoblede kuler i en 96-brønnfilterplate i 45 minutter ved romtemperatur kl. 750 i mørket. Referansesera i en fortynningsserie, kvalitetskontrollsera og emner ble inkludert på hver plate.

Den interne referansestandarden for kikhoste ble kalibrert mot WHO 1st IS Part 06/140 og seriefortynnet 4-fold over 6 brønner (1/200 til 1/204800). Den interne referansestandarden for DIPH og TET ble kalibrert mot WHO NIBSC DI-3 og TE-3 og seriefortynnet 4-fold over 8 brønner (1/50 til 1/819200). Etter inkubering ble brønnene vasket 3 ganger med PBS, inkubert med R-phycoerythrin-merket geit-anti-humant IgG-antistoff (Jackson Immunoresearch Laboratories, West-Grove, PA, USA) i 30 minutter og vasket. Perler ble inkludert i PBS og median fluorescensintensitet (MFI) ble anskaffet på en Bio-Plex LX200. MFI ble konvertert til IU/mL ved interpolering fra en 5-parameterlogistisk standardkurve ved bruk av Bioplex Manager 6.2-programvare (Bio-Rad Laboratories, Hercules, California, USA) og eksportert til Microsoft Excel.

PBMC Isolering, stimulering og cytokindeteksjon

PBMC-er ble isolert ved Ficoll-densitetsgradientsentrifugering og resuspendert ved 5 × 106 /ml i RPMI-kulturmedium (Roswell Park Memorial Institute-medium; Invitrogen, CA, USA) supplert med gentamycin, Glutamax (GIBCO) og pyruvat. I alt ble 100 ul alikvotert per brønn i rundbunnede 96-brønnplater (Corning) og stimulert med en av RPMI (negativ kontroll), Escherichia coli lipopolysakkarid (LPS; 10 ng/ml, Sigma-Aldrich), sonikert Mycobacterium tuberculosis H37Rv (5 ug/ml), varmedrept Staphylococcus aureus (1 × 106 /ml, klinisk isolat), varmedrept Candida albicans (1 × 106 /ml, UC820-stamme) og varmedrept Bordetella pertussis ( 1 ug/ml, B1917-stamme), PT (2 ug/ml), PRN (4 ug/ml, ReagentProteins, PFE-031) og FHA (2 ug/ml). PT og FHA ble vennligst levert av AM Buisman ved National Institute for Public Health and Environment (RIVM, Bilthoven, Nederland). Celler ble inkubert ved 37 grader og 5 prosent CO2 i 24 timer for påvisning av IL-1, IL-6, IL-10 og TNF eller 7 dager for IFN, IL{{31} } og IL-17. Supernatanter ble lagret ved -20 grader. Cytokiner ble målt i PBMC kultursupernatanter ved bruk av enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA) sett fra FoU-systemer (IL-1, TNF, IL17, IL-22) eller Sanquin (IL-6, IL -10, IFN ) i henhold til produsentens instruksjoner.

B-celle flowcytometri

B-cellefarging ble utført direkte på fullblod med et antistofffargepanel (tilleggstabell 3) inkludert fluorescensmerket PRN for påvisning av antigenspesifikke B-celler. For å merke PRN-spesifikke B-celler ble PRN (ReagentProteins, PFE-031) konjugert til fluorescein (FITC Antibody labeling kit, Pierce) i henhold til produsentens protokoll (PRN-FITC). Totalt ble 1–2 ml nytrukket fullblod samlet i LiHep-rør fortynnet i FACS-buffer (PBS pluss 0.{{10}}9 prosent NaN3 pluss 0,2 prosent bovint serumalbumin, Calbiochem) og cellene ble pelletert og deretter vasket to ganger med FACS-buffer. Celler ble resuspendert i FACS-buffer og deretter farget med B-celle-fenotyping-antistoffcocktailen i 15 minutter, fiksert (FACSlysing, BD Biosciences), og etter en ny vask med FACS-buffer ble analysert innen 1 time etter farging. Flowcytometri av PRN-antigenspesifikke B-celler i fullblod ble utført på et LSRII (BD Biosciences) flowcytometer med standardiserte instrumentinnstillinger42. Strømningscytometridata ble analysert med Infinicyte (versjon 2.0, Cytognos). Per prøve ble 2 × 106 celler ervervet i lymfocyttporten (Supplerende Fig. 1a). Lymfocytter ble lukket etter fjerning av dubletter og rusk. B-celler ble identifisert som CD45 pluss CD19 pluss og PRN-FITC-spesifikke B-celler ble identifisert. B-celleundersett ble identifisert ved hjelp av en tilpasset gatingstrategi43. Vi forsøkte å oppdage PT-spesifikke B-celler ved flowcytometri, men vi lyktes ikke på grunn av den høye bakgrunnen forårsaket av uspesifikk farging.

Statistikk

Cytokin- og antistoffverdier ble logg10-transformert for å ta hensyn til skjevfordelingen deres. Analyse av primære eller sekundære utfallsresponser ble analysert i en regresjonsmodell med blandede effekter ved bruk av 'lme4' 44 R-pakken. For hvert utfall er formelen for modellen (i R-notasjon):

Sammenligninger ble beregnet med "betyr" 45 R-pakken og vi undersøkte to kontraster. Først undersøkte vi om primære endepunkter var signifikant forskjellige sammenlignet med Tdap-IPV-vaksinasjonsbaseline innenfor hver kohort (effekter etter vaksinasjon ble definert som W2–D0 innenfor hver kohort, tilleggstabell 1). Deretter undersøkte vi forskjeller mellom kohorter i størrelsen på disse endringene (differensielle effekter, tilleggstabell 2, definert som (W2c1 – D{{10}}c1) – ​​(W2c2 – D0 c2) hvor c1 og c2 refererer til forskjellige kohorter for en gitt sammenligning). Endringer i heterologe eller trente immunitetscytokiner i den BCG-trente kohorten ble analysert på samme måte. P-verdiene rapporteres ved bruk av Kenward-Roger frihetsgradsmetoden. Statistiske parametere rapporteres direkte i figurer og figurforklaringer. På grunn av det eksplorative studiedesignet og de målrettede immunresponsene som ble vurdert, ble det ikke utført korreksjon av flere tester. Parvise korrelasjoner ble utført med logg10-fold endringsverdier over baseline. Estimeringen av variansen forklart av cytokinmålinger på primære utfallsvariabler ble utført ved bruk av R-pakken 'caret' 46. For å ta høyde for potensiell overtilpasning ble det utført 4-fold kryssvalidering 10 ganger gjentatte ganger. Vi analyserte seroprotektive antistofftitere mot PT, TET eller DIPH med en Fisher eksakt test. Assosiasjoner mellom serobeskyttelsesstatus og kohort ble bestemt ved å undersøke rester av en kjikvadrattest. Terskelverdier for serobeskyttelse mot PT var 25 IE/ml18 og 0,1 IE/ml for DIPH og TET37).

Rapporteringssammendrag

Ytterligere informasjon om forskningsdesign er tilgjengelig i Nature Research Reporting Summary koblet til denne artikkelen.

DATA TILGJENGELIGHET

Dataene som støtter funnene i denne studien er tilgjengelig fra den tilsvarende forfatteren på rimelig forespørsel.

KODE TILGJENGELIGHET

R-koden som støtter funnene i denne studien er tilgjengelig fra den tilsvarende forfatteren på rimelig forespørsel.

REFERANSER

1. Tan, T. et al. Pertussis over hele verden: nylige epidemiologiske trender fra 2000 til 2013. Pediatr. Infisere. Dis. J. 34, e222–e232 (2015).

2. Warfel, JM, Zimmerman, LI & Merkel, TJ Acellulære pertussis-vaksiner beskytter mot sykdom, men klarer ikke å forhindre infeksjon og overføring i en ikke-menneskelig primatmodell. Proc. Natl Acad. Sci. USA 111, 787–792 (2014).

3. Huang, LM et al. Respons på primær- og en boosterdose av acellulære, komponent- og helcelle kikhostevaksiner initiert ved 2 måneders alder. Vaksine 14, 916-922 (1996).

4. Klein, NP, Bartlett, J., Rowhani-Rahbar, A., Fireman, B. & Baxter, R. Avtagende beskyttelse etter femte dose av acellulær pertussis-vaksine hos barn. Ny Engl. J. Med. 367, 1012–1019 (2012).

5. Misegades, LK et al. Association of childhood pertussis med mottak av 5 doser pertussis-vaksine etter tid siden siste vaksinedose, California, 2010. JAMA 308, 2126–2132 (2012).

6. Hendrikx, LH, Berbers, GA, Veenhoven, RH, Sanders, EA & Buisman, AM IgG-responser etter boostervaksinasjon med forskjellige kikhostevaksiner hos nederlandske barn 4 år: effekt av vaksineantigeninnhold. Vaksine 27, 6530–6536 (2009).

7. Misiak, A. et al. Tilsetningen av en TLR7-agonist til en acellulær pertussis-vaksine forbedrer Th1- og Th17-responser og beskyttende immunitet i en musemodell. Vaksine 35, 5256–5263 (2017).

8. Dunne, A. et al. En ny TLR2-agonist fra Bordetella pertussis er en potent adjuvans som fremmer beskyttende immunitet med en acellulær pertussis-vaksine. Slimhinneimmunol. 8, 607–617 (2015).

9. Sugai, T. et al. Et CpG-holdig oligodeoksynukleotid som en effektiv adjuvans som motbalanserer Th1/Th2-immunresponsen i difteri-stivkrampe-kikhostevaksinen. Vaksine 23, 5450–5456 (2005).

10. Colditz, GA et al. Effekten av BCG-vaksine i forebygging av tuberkulose. Metaanalyse av publisert litteratur. JAMA 271, 698–702 (1994).

11. Kristensen, I., Aaby, P. & Jensen, H. Rutinevaksinasjoner og barneoverlevelse: en oppfølgingsstudie i Guinea-Bissau, Vest-Afrika. BMJ 321, 1435–1438 (2000).

12. Hirve, S. et al. Ikke-spesifikke og kjønnsdifferensielle effekter av vaksinasjoner på barns overlevelse i landlige vestlige India. Vaksine 30, 7300–7308 (2012).

13. Aaby, P. et al. Randomisert studie av BCG-vaksinasjon ved fødsel til barn med lav fødselsvekt: gunstige uspesifikke effekter i nyfødtperioden? J. Infect. Dis. 204, 245–252 (2011).

14. Netea, MG et al. Trenet immunitet: et program for medfødt immunminne i helse og sykdom. Science 352, aaf1098 (2016).

15. Walk, J. et al. Utfall av kontrollert human malariainfeksjon etter BCG-vaksinasjon. Nat. Commun. 10, 874 (2019).

16. Arts, RJW et al. BCG-vaksinasjon beskytter mot eksperimentell virusinfeksjon hos mennesker gjennom induksjon av cytokiner assosiert med kornet immunitet. Cell Host Microbe 23, 89–100 e105 (2018).

17. Leentjens, J. et al. BCG-vaksinasjon øker immunogenisiteten til påfølgende influensavaksinasjon hos friske frivillige: en randomisert, placebokontrollert pilotstudie. J. Infect. Dis. 212, 1930–1938 (2015).

18. Zimmermann, P. & Curtis, N. Påvirkningen av BCG på vaksineresponser - en systematisk oversikt. Expert Rev. Vaccines 17, 547–554 (2018).

19. Broset, E. et al. BCG-vaksinasjon forbedrer DTaP-immunresponser hos mus og er assosiert med lavere forekomst av pertussis i økologiske epidemiologiske studier. EBioMedicine 65, 103254 (2021).

20. Aaby, P., Andersen, A., Ravn, H. & Zaman, K. Samtidig administrering av BCG og difteri-stivkrampe-kikhoste (DTP) vaksinasjoner kan redusere spedbarnsdødeligheten mer enn WHO-planen for BCG først og deretter DTP. En re-analyse av demografiske overvåkingsdata fra landlige Bangladesh. EBioMedicine 22, 173–180 (2017).

21. Blok, BA et al. Interagerende, uspesifikke, immunologiske effekter av bacillus calmette-guerin og tetanus-difteri-kikhoste inaktiverte poliovaksinasjoner: en utforskende, randomisert studie. Clin. Infisere. Dis. 70, 455–463 (2020).

22. Aaby, P., Ravn, H., Fisker, AB, Rodrigues, A. & Benn, CS Er difteri-tetanus-pertussis (DTP) assosiert med økt kvinnedødelighet? En metaanalyse som tester hypotesene om kjønnsdifferensielle ikke-spesifikke effekter av DTP-vaksine. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 110, 570–581 (2016).

23. van der Lee, S. et al. Forbedret Bordetella pertussis-anskaffelsesrate hos ungdom under 2012-epidemien i Nederland og bevis for langvarig antistoffpersistens etter infeksjon. Euro Surveill. https://doi.org/10.2807/1560-7917. ES.2017.22.47.17-00011 (2017).

24. Berbers, G. et al. Sirkulasjon av pertussis og dårlig beskyttelse mot difteri blant middelaldrende voksne i 18 europeiske land. Nat. Commun. 12, 2871 (2021). 25. van Gageldonk, PG, van Schaijk, FG, van der Klis, FR & Berbers, GA Utvikling og validering av en multipleks immunoassay for samtidig bestemmelse av serumantistoffer mot Bordetella pertussis, difteri og tetanus. J. Immunol. Methods 335, 79–89 (2008).

26. Schure, RM et al. T-celleresponser før og etter den femte påfølgende acellulære pertussis-vaksinasjonen hos 4-år gamle nederlandske barn. Clin. Vaksine Immunol. 19, 1879–1886 (2012).

27. Mathurin, KS, Martens, GW, Kornfeld, H. & Welsh, RM CD4 T-celle-mediert heterolog immunitet mellom mykobakterier og poxvirus. J. Virol. 83, 3528–3539 (2009).

28. Lertmemongkolchai, G., Cai, G., Hunter, CA & Bancroft, GJ Bystander-aktivering av CD8 pluss T-celler bidrar til rask produksjon av IFN-gamma som respons på bakterielle patogener. J. Immunol. 166, 1097–1105 (2001).

29. Zimmermann, P. et al. Påvirkningen av neonatal Bacille Calmette-Guerin (BCG) immunisering på heterologe vaksineresponser hos spedbarn. Vaksine 37, 3735–3744 (2019).

30. Ritz, N., Mui, M., Balloch, A. & Curtis, N. Ikke-spesifikk effekt av Bacille CalmetteGuerin-vaksine på immunresponsen på rutineimmuniseringer. Vaksine 31, 3098–3103 (2013).

31. Libraty, DH et al. Neonatal BCG-vaksinasjon er assosiert med forbedret T-hjelper 1-immunrespons på heterologe spedbarnsvaksiner. Prøver Vaccinol. 3, 1–5 (2014). 32. du Plessis, WJ et al. Den funksjonelle responsen til B-celler på antigen stimulering: en foreløpig rapport om latent tuberkulose. PLoS ONE 11, e0152710 (2016).

33. Biering-Sorensen, S. et al. Variasjon av vekst i produksjonen av BCG-vaksinen og assosiasjonen med immunresponsen. En observasjonsstudie innenfor en randomisert studie. Vaksine 33, 2056–2065 (2015).

34. Ru, H. et al. Virkningen av Genome Region of Difference 4 (RD4) på ​​mykobakteriell virulens og BCG-effekt. Front. Celle. Infisere. Microbiol. 7, 239 (2017). 35. Cho, T. et al. En gjennomgang av BCG-vaksinen og andre tilnærminger mot tuberkuloseutryddelse. Nynne. Vaksine. Immunother. 17, 2454–2470 (2021).

36. Brosch, R. et al. Genomplastisitet av BCG og innvirkning på vaksineeffektivitet. Proc. Natl Acad. Sci. USA 104, 5596–5601 (2007).

37. Plotkin, SA Korrelater av beskyttelse indusert ved vaksinasjon. Clin. Vaksin. Immunol. 17, 1055–1065 (2010).

38. Ross, PJ et al. Det relative bidraget til Th1- og Th17-celler i adaptiv immunitet mot Bordetella pertussis: mot rasjonell utforming av en forbedret acellulær pertussis-vaksine. PLoS Pathog. 9, e1003264 (2013).

39. de Graaf, H. et al. Undersøker Bordetella pertussis kolonisering og immunitet: protokoll for en pasientkontrollert human infeksjonsmodell. BMJ Open 7, e018594 (2017).

40. da Silva Antunes, R. et al. Th1/Th17 polarisering vedvarer etter helcelle pertussis vaksinasjon til tross for gjentatte acellulære boostere. J. Clin. Undersøk. 128, 3853–3865 (2018).

41. Hijnen, M., van Gageldonk, PG, Berbers, GA, van Woerkom, T. & Mooi, FR Bordetella pertussis virulensfaktoren P.69 pertactin beholder sine immunologiske egenskaper etter overproduksjon i Escherichia coli. Protein Expr. Purif. 41, 106–112 (2005).

42. Kalina, T. et al. EuroFlow standardisering av flowcytometer instrumentinnstillinger og immunfenotyping protokoller. Leukemi 26, 1986–2010 (2012).

43. Blanco, E. et al. Aldersassosiert fordeling av normale B-celle- og plasmacelleundergrupper i perifert blod. J. Allergy Clin. Immunol. 141, 2208–2219. e2216 (2018).

44. Bates, D., Machler, M., Bolker, BM & Walker, SC Tilpasning av lineære modeller med blandede effekter ved bruk av lme4. J. Stat. Softw. 67, 1–48 (2015).

45. Lenth, R. Emmeans: estimerte marginale midler, aka minste-kvadrater, midler (2018).

46. ​​Kuhn, M. Bygge prediktive modeller i R ved å bruke caret-pakken. J. Stat. Softw. 28, 1–26 (2008).

TAKK

Vi vil takke Anne-Marie Buisman (RIVM) for å levere PT- og FHA-antigenene som ble brukt til PBMC-restimuleringseksperimenter. Vi takker alle frivillige som deltok i forsøket. Dette arbeidet ble støttet av National Institute of Public Health and Environment (RIVM), Nederland (SPR-prosjekt S112200). MGN ble støttet av et ERC Advanced Grant (#833247) og et Spinoza-stipend fra den nederlandske organisasjonen for vitenskapelig forskning.

FORFATTERBIDRAG

Konseptualisering: BAB, MGN, RvC og DAD; metodikk: ES, MJE, GAMB, PGMvG, BAB og LCJdB; undersøkelse: ES, MJE, GAMB, PGMvG, BAB, LCJdB og JG; formell analyse: JG; skrive-original utkast: JG og DAD; skrivegjennomgang og redigering: alle.

KONKURRERENDE INTERESSER

MGN har et patent innen nanobiologi for å hemme trent immunitet lisensiert til TTxD, og ​​et patent i nanobiologi for å stimulere trent immunitet lisensiert til TTxD. Alle andre forfattere rapporterer ingen potensielle konflikter. Alle forfattere har sendt inn ICMJE-skjemaet for offentliggjøring av potensielle interessekonflikter.

YTTERLIGERE INFORMASJON

Tilleggsinformasjon Nettversjonen inneholder tilleggsmateriale tilgjengelig på https://doi.org/10.1038/s41541-022-00438-4.

Korrespondanse og forespørsler om materiell skal rettes til Dimitri A. Diavatopoulos.

Opptrykk og informasjon om tillatelser er tilgjengelig på http://www.nature.com/reprints

Utgiverens notat Springer Nature forblir nøytral om jurisdiksjonskrav i publiserte kart og institusjonelle tilknytninger.

Åpen tilgang

Denne artikkelen er lisensiert under en Creative Commons Attribution 4.0 internasjonal lisens, som tillater bruk, deling, tilpasning, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium eller format, så lenge du gir passende kreditt til den(e) originale forfatteren(e) ) og kilden, oppgi en lenke til Creative Commons-lisensen, og angi om endringer ble gjort. Bildene eller annet tredjepartsmateriale i denne artikkelen er inkludert i artikkelens Creative Commons-lisens med mindre annet er angitt i en kredittgrense til materialet. Hvis materiale ikke er inkludert i artikkelens Creative Commons-lisens og din tiltenkte bruk ikke er tillatt av lovbestemt regulering eller overskrider tillatt bruk, må du innhente tillatelse direkte fra opphavsrettsinnehaveren.

For more information:1950477648nn@gmail.com