Cistanche Deserticola-polysakkarider har en nevroprotektiv effekt

for mer informasjon:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu, et al

Abstrakt:

Iskemi hjerneslag er en sykdom med høy sykelighet og dødelighet.Cistanchedeserticolapolysakkarider(CDP) har et bredt spekter av gunstige effekter, inkludert hepatobeskyttelse og immunhomeostase. Så vidt vi vet, den beskyttende effekten av CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)på nevroner skadet av oksygen-glukosemangel/reperfusjon (OGD/RP) har ikke blitt undersøkt. I denne studien skadet OGD/RP en PC12-cellemodell. Kort fortalt, CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)({{0}}.05, 0.5 og 5 ug/ml) ble administrert før reperfusjon. Den beskyttende effekten av CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)ble deretter evaluert på grunnlag av cellelevedyktighet, laktatdehydrogenase (LDH) lekkasje, [Ca2 pluss] I, mitokondriell membranpotensial (MMP) og celleapoptose, andredoksstatus etter reperfusjon ble evaluert ved å analysere reaktive oksygenarter (ROS), katalase ( CAT), glutationperoksidase (GSH-Px) og total antioksidantkapasitet. Basert på det faktum at Parkinsons sykdom-assosiert protein DJ-1 deltar i endogen antioksidasjon og utførernevrobeskyttendeeffekter etter ischemiastroke, undersøkte vi interaksjonen mellom CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)og DJ{{0}}. DJ-1-ekspresjon ble påvist gjennom ELISA og Western blot-analyse, og translokasjonen av DJ-1 ble evaluert gjennom immunfluorescens. Resultatene viste at CDP (0.05, 0.5 og 5 ug/ml) svekket PC12-celledød, bevarte MMP og kalsiumhomeostase; hemmet oksidativt stress og redusert celleapoptose. Dessuten stimulerte CDP (5 ug/ml) markant DJ-{10}}-sekresjon og -uttrykk. Samlet sett antydet resultatene at CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)utøver ennevrobeskyttendeeffekt mot OGD/RP-indusert skade ved å hemme oksidativt stress og regulere DJ-1-banen

Nøkkelord:Cistanche deserticola, polysakkarider, nevrobeskyttende, oksygenglukosemangel/reperfusjon, oksidativt stressDJ-1

Klikk for å Cistanche UK-produkter

1. Introduksjon

Iskemisk hjerneslag er den nest største årsaken til dødelighet og den primære årsaken til langvarig funksjonshemming globalt [1]. Dødsfall på grunn av hjerneslag forventes å stige til 7,8 millioner i 2030 [2]. I Kina dør 58 til 142 per 100000 mennesker av hjerneslag hvert år. Effektive strategier som reverserer iskemi-reperfusjonsskade må derfor utvikles. Omfattende bevis støtter at oksidativt stress er en viktig faktor som fremmer utviklingen og progresjonen av hjerneinfarkt under reperfusjon [3,4]. Derfor oppdager effektivenevrobeskyttendemidler som er i stand til å redusere ROS og undertrykke oksidativt stress har tiltrukket seg betydelig interesse for forskning. Parkinsons sykdom-assosiert proteinDJ-1 medierer nevrobeskyttelse ved å stimulere anti-apoptotisk og antioksidativt genuttrykk [4,5]. DJ-1 kan translokeres inn i mitokondriene ved oksidativt stress og mitogenstimulering og kan skilles ut til den ekstracellulære matrisen under patologiske forhold, som brystkreft, melanom og OGD/RP-skade [6]. Dessuten er DJ-1 nyttig i terapeutisk målretting for iskemisk nevrodegenerasjon på grunn av sin kritiske rolle i antioksidasjon [4,7]. I løpet av de siste 10 årene har flere grupper bekreftet at DJ-1 harnevrobeskyttendeeffekter på in vivofokale cerebral iskemimodeller og in vitro OGD/RP-modeller [6–9]. I mellomtiden opphever noen medikamenter, inkludert ciklosporin A og natriumfenylbutyrat, nevronal celledød via DJ-1 oppregulering iniskemislag [9,10 ].

Cistanchedeserticola, den integrerte tørkede planten avCistanchedeserticolaYCMa og Cistanche tubulosa Wight, produseres hovedsakelig i ørkenområdene nord og nordvest i Kina [11]. C. deserticola er spiselig og har blitt hedret som 'ørkenenes ginseng'. Ved resept på akupunktur brukes det som behandling for kronisk nyresykdom, seksuell impotens, kvinnelig infertilitet, leukorrhea, metrorrhagia og senil obstipasjon [12].C. deserticola polysakkarider, en viktig aktiv komponent isolert fraCistanche deserticola. CDP, modulerer immunfunksjon og lipidbalanse og gir beskyttelse mot aldring, oksidasjon og leverskade. Dessuten CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)forhindrer iskemi-reperfusjonsskade i hjertet og leveren [13,14]. Nyere studier rapporterte at CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)er ikke-toksiske[12,15,16], og andre fytokjemikalier ekstrahert fra C. Deserticola, inkludert echinacosid, isoacteosid, acteosid og salidroside, visernevrobeskyttendeeffekter [11,12]. Potensiell bruk av CDP for å lindre iskemisk slagskade er imidlertid ikke rapportert.

I denne studien antar vi at CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)hemmer oksidativ stress for nevrobeskyttelse. De potensielle beskyttende effektene av CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)iniskemi slagskade ble undersøkt ved bruk av OGD/RP-skadde PC12-celler. Underliggende interaksjoner knyttet til DJ-1 ble deretter utforsket.

2. Metoder

2.1. Cellekultur og OGD/RP-modell

PC12-celler ble dyrket i RPMI 1640-medium inneholdende 10 prosent FBS ved 37 grader i en normoksisk inkubator som inneholdt 5 prosent CO2. Mediet ble byttet ut hver 48. time. OGD/RP-modell ble utarbeidet. PC12-cellene ble vasket og utsatt for Earles balanserte saltløsning. Deretter ble cellene overført til et anaerobt kammer inneholdende 5 prosent CO2 og 95 prosent N2 ved 37 grader i 4 timer og deretter tillatt å gjennomgå reoksygenering. I løpet av dette trinnet ble det samme volumet av kulturmedium tilsatt til cellene. Etter reoksygenering ble cellene plassert på en normoksisk inkubator i 24 timer.

2.2. Legemiddeladministrasjon

CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)ble kjøpt fra Yuanye Biological Technology Co., Shanghai, Kina (C23J7Y18405, > 98 prosent renhet). Nimodipin, et førstelinjeforebyggende legemiddel for iskemislag, ble brukt som en positiv kontrollforbindelse [17–19]. Nimodipin-injeksjon var fra Bayer Company. Celler ble tilfeldig delt inn i seks grupper, nemlig kontroll, bærer (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)(0.05 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)(0,5 ug/ml) og CDP (5 ug/ml). Nimodipin og CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)ble tilsatt før reperfusjon. Kontrollgruppen ble dyrket i et normalt medium og inkubert under en normoksisk tilstand.

2.3. Cellelevedyktighet: MTT- og NRU-analyser

PC12-celler (6 × 103 per brønn) ble sådd i en 96-brønnkulturplate. Cellene ble behandlet i samsvar med kravene til hver gruppe. MTT (Solarbio, Kina) ble tilsatt til cellene i en konsentrasjon på 5 mg/ml og inkubert i 4 timer ved 37 grader. Formazan er reduksjonsproduktet av succinatdehydrogenase i levende celler [20]. DMSO ble tilsatt for oppløsning av generert blå formazan. Absorbans ved bølgelengde på 490 nm ble detektert med Microplate Reader (Thermo, USA) etter at cellene ble ristet i 10 minutter ved 25 grader. Cellelevedyktighetsresultater ble manifestert som en prosentandel av kontrollgruppen [21].

Nøytral rød opptaksanalyse (NRU) ble utført i henhold til tidligere publisert protokoll [22]. Når reperfusjonsperioder var fullført, ble nøytral rød (Solarbio, Kina) tilsatt til cellene i en konsentrasjon på 5 0 ug/ml. Blandingen ble inkubert i 3 timer. Deretter ble cellene vasket av raskt med en løsning inneholdende 0,5 prosent formaldehyd og 1 prosent kalsiumklorid. Cellene ble deretter tilsatt til en blanding inneholdende 1 prosent etylsyre og 50 prosent vannfri etanol. Platene ble avlest ved 540 nm absorbans etter at cellene ble ristet i 20 minutter ved 37 grader. Resultatene av cellelevedyktighet ble manifestert som en prosentandel av kontrollgruppen.

Cistanche deserticola polysakkariderha enNevrobeskyttende effekt

2.4. Vurdering av cytotoksisitet

LDH er et cytoplasmatisk enzym som katalyserer oksidasjonen av laktattopyruvat. LDH frigjøres raskt i den ekstracellulære væsken når cellemembranen er skadet. Derfor utføres LDH-deteksjon vanligvis for cytotoksisitetsevaluering. [23]. Den eksperimentelle prosedyren fulgte kommersielle settinstruksjoner levert av LDH-analysesettet (Jiancheng, Kina). Absorbansen til hver prøve ble detektert ved 440 nm med en mikroplateleser. Prosent av celledød ble beregnet ved å bruke følgende formel: Viabilitet (prosent)=(OD-behandling - ODT-behandling blank)/(OD Maks LDH-aktivitet - OD Maks LDH-aktivitet blank) × 100 prosent .

2.5. Påvisning av intracellulær Ca2 pluss konsentrasjon

Den intracellulære konsentrasjonen av Ca2 pluss ble målt med Fluo-3/AM [15]. PC12-cellene ble vasket med PBS tre ganger og deretter inkubert med 2 μM Fluo-3/AM (Beyotime, Kina) i 30 minutter ved 37 grader i mørket. Cellene ble deretter vasket med PBS tre ganger for rensing av ekstracellulært fargestoff. Fluorescensintensiteten til Fluo-3/AM ble bestemt på et laserskannende konfokalmikroskop (Olympus, Japan). Programvarepakke Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer og ImageJ ble brukt til beregning av gråskalaverdier

2.6. Måling av MMP

JC-1 (5,5',6,6'-Tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethyl-imidacarbocyanine; Beyotime, Kina) er en praktisk spenningsfølsom sonde som vanligvis brukes til farging celler og evaluere MMP [24]. PC12-cellene ble vasket to ganger med kald PBS og deretter inkubert med en blanding inneholdende 50 prosent medium og 50 prosent arbeidsvæske i 15 minutter ved 37 grader i mørket. Deretter ble blandingen kastet og erstattet med et friskt medium. Røde og grønne fluorescensbilder ble tatt gjennom laserskanningskonfokalmikroskopi. Den relative andelen av røde og grønne fluorescenssignaler ble brukt for MMP-måling [25]. ProgramvarepakkeOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer og ImageJ ble brukt til beregning av gråskalaverdier.

2.7. Apoptosedeteksjonsanalyse, Hoechest33342, og flowcytometrianalyse

Hoechst33342, et DNA-bindende fargestoff, ble brukt for undersøkelse av celleapoptose [26]. Etter reperfusjon ble PC12-cellene vasket med PBS tre ganger og inkubert med Hoechst33342 (Beyotime, Kina) i en konsentrasjon på 5 ug/ml i 15 minutter ved 37 grader i mørket. Deretter ble cellene observert under et laserskannende konfokalmikroskop. Theapoptotiske celler viste intens blå fluorescens og kjernekondensasjon. For hvert fargeeksperiment ble tre tilfeldige felt fanget og kvantifisert. Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer og ImageJ ble brukt til beregning av gråskalaverdier. Prosentandelen av de apoptotiske cellene ble beregnet gjennom følgende formel: apoptotisk mengde/total mengde × 100 prosent [27].

2.8. Måling av ROS-generering

Den fluorescerende sonden 2',7'-diklorfluoresceindiacetat (DCFH-DA; Jiancheng, Kina) kan penetrere cellemembraner og kan hydrolyseres til ikke-fluorescerende DCFH. DCFH oksideres av intracellulær ROS til fluorescerende DCF [29]. Etter reperfusjon ble cellene vasket to ganger med PBS og deretter inkubert med DCFH-DA ved en sluttkonsentrasjon på 10 μM i 45 minutter ved 37 grader i mørket. Fluorescens ble observert med et fluorescensspektrofotometer med en eksitasjonsbølgelengde på 485 nm og en emisjonsbølgelengde på 535 nm.

Cistanche deserticola polysakkariderha enNevrobeskyttende effekt

2.9. Bestemmelse av oksidativt stressindikatorer: CAT-, GSH-Px- og T-AOC-nivåer

Cellene ble skrapet og resuspendert i PBS. De oppnådde cellesuspensjonene ble sonikert 45 ganger på is og sentrifugert ved 1000 r/min i 10 minutter ved 4 grader. Supernatantene ble beholdt og brukt for deteksjon [24]. Det totale proteininnholdet i cellesupernatanten ble målt med et BCA-proteinanalysereagenssett (KeyGEN, Kina). Aktivitetene til CAT-, GSH-Px- og T-AOC-nivåene ble målt i henhold til produsentens instruksjoner (Jiancheng, Kina). Absorbansen til hver prøve ble detektert med en mikroplateleser.

2.10. Måling av ekstracellulær DJ-1-konsentrasjon

PC12-celler (6 × 103 per brønn) ble sådd i 96-brønnkulturplater. Etter reperfusjon ble cellesupernatanten samlet og analysert av DJ-1/PARK-7 ELISA Kit (Raybio, USA ) i henhold til produsentens instruksjoner [9]. Absorbansen til hver prøve ble detektert med Microplate Reader ved en dobbel bølgelengde på 450 nm eller 540 nm.

2.11. Western blot-analyse

Cellulære proteiner ble ekstrahert med iskald lyseringsbuffer i henhold til produsentens instruksjoner (KeyGEN, Kina). Proteinkonsentrasjonen ble bestemt med et BCA-proteinanalysereagenssett. Like mengder proteinlysater (20 ug) fra hver gruppe ble oppløst i 12 prosent natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektroforese og deretter overført til en nitrocellulosemembran. Membranen ble inkubert med PBS som inneholdt 5 prosent skummet melk i 2 timer ved romtemperatur og deretter probet med anti-PARK7/DJ-1 antistoffer (ab76008, Abcam; fortynning 1:1000) over natten ved 4 grader. Deretter ble membranen vasket tre ganger med PBST og inkubert med sekundært antistoff geit-anti-kanin IgG (SA00001-2, Proteintech Group; fortynning 1:5000) ved romtemperatur i 2 timer. Antistoff-anti- -Tubulin(10759-1-AP, Proteintech Group; fortynning 1:1000) ble ansett som kontroll. Proteinbånd ble visualisert med forsterket kjemiluminescens (ECL) reaksjonsreagenser. Båndtettheter ble målt med QuantityOne Analysis programvare v.4.6.9.

2.12. Immunocytokjemi analyse

PC12-cellene ble fiksert i 4 prosent paraformaldehyd i 15 minutter ved romtemperatur etter reperfusjonsbehandlingen [9]. Etter at overflødig paraformaldehyd var fjernet, ble cellene inkubert i PBS inneholdende 0,3 prosent Triton X-100 i 10 minutter ved romtemperatur. Deretter ble cellene vasket med PBS tre ganger før de ble inkubert med 5 prosent normalt geiteserum i 1 time. Cellene ble deretter inkubert med kaninmus monoklonal anti-ATP syntase-kjede (MABS1304, EMD Millipore, fortynning 1:200) for farging av mitokondrier og deretter inkubert med anti-PARK7/DJ-1 antistoff (fortynning 1: 100) for sondering av protein DJ-1. Cellene ble vasket og inkubert med geit anti-kanin IgG-Alexa 488 (grønn; A11034, Invitrogen; fortynning 1:1000) og geit anti-mus IgG-Alexa 594 (rød; A11032; Invitrogen; fortynning 1:1000) for 90000 min. Til slutt ble cellene vasket tre ganger med PBS og montert på glassplater med et monteringsmedium inneholdende DAPI. Immunofluorescerende bilder ble visualisert ved å bruke et Laser Scanning Confocal Microscope.

Cistanche deserticola polysakkariderha enNevrobeskyttende effekt

2.13. Data/statistisk analyse

Alle verdier ble vist som gjennomsnitt ± SD. Signifikans ble bestemt ved en enveis variansanalyse (ANOVA), etterfulgt av Dunnetts multi-sammenligningstest. p < .05="" ble="" betraktet="" som="" statistisk="" signifikans.="" eksperimentelle="" data="" ble="" analysert="" ved="" bruk="" av="" spss="" 17.0="" statistisk="">

3. Resultater

3.1. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)hemmet OGD/RP-indusert celleskade

PC12-cellene eksponert for OGD/RP viste en betydelig reduksjon i antall. Celleformen ble endret og cellemembranen ble ødelagt. I MTT-analysen, cellelevedyktigheten i CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)gruppene ({{0}},05, 0,5 og 5 ug/ml) var henholdsvis 58,91 prosent ± 5,40 prosent, 61,13 prosent ± 3,81 prosent og 68,57 prosent ± 3,24 prosent, p < 0,05="" (fig.="" 1a)="" ,="" og="" det="" med="" kjøretøy="" hadde="" 51,68="" prosent="" ±="" 3,89="" prosent.="" disse="" verdiene="" indikerte="" at="">(Cistanchedeserticolapolysakkarider)beskyttet cellene mot OGD/RP-skade og redusert celledød. Videre var cellelevedyktigheten i Nimo-gruppen 77,02 prosent ± 5,22 prosent, som er nesten lik den i 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)behandlet gruppe.

I NRU-analysen, celleviabilitetene i CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)gruppene ({{0}},05, 0,5 og 5 ug/ml) var henholdsvis 52,03 prosent ± 4,72 prosent, 58,49 prosent ± 2,50 prosent og 69,17 prosent ± 3,91 prosent (fig. 1B) og at med kjøretøy hadde 47,14 prosent ± 2,88 prosent. Verdiene indikerte den konsentrasjonsavhengige beskyttende effekten av CDP.

I motsetning til en bærer (44,73 prosent ± 3,30 prosent), ble LDH-frigjøring betydelig redusert i CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)grupper. I CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)grupper ({{0}},05, 0,5 og 5 ug/ml), LDH-lekkasjerater var henholdsvis 32,41 prosent ± 3,70 prosent, 27,13 ± 2,79 prosent og 23,13 prosent ± 4,59 prosent, p < 0,01="" (fig.="" 1c).="" dessuten="" var="" ldh-lekkasjeraten="" i="" nimo-gruppen="" 21,99="" prosent="" ±="" 4,02="" prosent,="" som="" var="" nesten="" lik="" den="" i="" den="" 5="" ug/ml="" cdp-behandlede="">

3.2. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)svekket OGD/RP-indusert økning av [Ca2 pluss]i

De intracellulære Ca2 pluss-nivåene i PC12-cellene ble økt til 4146,60 ± 195,97 etter OGD/RP-skade i motsetning til kontrollgruppen (373,62 ± 75,69). CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)grupper ({{0}}.05, 0.5 og 5 ug/ml) kan doseavhengig redusere det intracellulære Ca2 pluss-nivået til 2921.25 ± 222.19, 2015.85 ± 230.53 og 1768.43 ± 426.12 (henholdsvis A og Fig. ). Dessuten sank Ca2 pluss-nivået i den 5 ug/ml CDP-behandlede gruppen til et nivå som var sammenlignbart med Nimo-gruppen (1591,19 ± 213,21).

3.3. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)svekket OGD/RP-indusert spredning av MMP

Sammenlignet med kontrollgruppen (1,67 ± 0.89), viste bærergruppen (0.48 ± 0.10) mer grønn FL-fluorescens enn rød FL fluorescens (fig. 2B og D). Forholdet mellom rød og grønn FL-fluorescens ble redusert til 1,11 ± 0,26 og 1,18 ± 0,16 i 0,5 og 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)henholdsvis behandlede grupper, p < 0,01.="" grønn="" fl-fluorescens="" ble="" signifikant="">

3.4. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)forhindret OGD/RP-indusert celleapoptose

Celler som viste kondenserte kromatiner eller fragmenterte kjerner ble skåret som apoptotiske celler [30]. Hoechst33342-analyseresultater avslørte utseendet av kondenserte kjerner etter OGD/RP (fig. 3A og C). En høy FL-fluorescensintensitet ble observert i kjernene i bærergruppen. FL-fluorescensintensiteten til kjerner ble svekket i 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)behandlet gruppe. Vi analyserte apoptotisk hastighet i PC12-cellene ved hjelp av andre cytometri ved bruk av FITC-Annexin V/PI dobbel farging (fig. 3B og D). Kontrollgruppen hadde en celleapoptotisk rate på 4,16 prosent ± 0.24 prosent, mens bærergruppen hadde 22.98 prosent ± 0.66 prosent. I den 5 ug/ml CDP-behandlede gruppen var celleapoptosefrekvensen 7,86 prosent ± 1,16 prosent.

3.5. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)svekket OGD/RP-indusert intracellulær ROS-akkumulering og bevart redoksstatus

Effektene av CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)på oksidativt stress ble demonstrert på grunnlag av ROS-generering, GSH-Px, CAT-aktiviteter og T-AOC-nivåer. ROS-nivåene i de OGD/RP-skadde PC12-cellene økte og ble signifikant høyere enn i kontrollgruppen (p < 0,01).="" i="" mellomtiden="" er="" ros-nivåene="" i="">(Cistanchedeserticolapolysakkarider)grupper ({{0}},05, 0,5 og 5 ug/ml) reduserte på en doseavhengig måte (p < 0,01;="" fig.="" 4a).="" videre="" økte="" cdp="" også="" signifikant="" t-aoc="" (p="">< 0,05;="" fig.="" 4b),="" cat="" (p="">< 0,05;="" fig.="" 4c)="" og="" gsh-px="" (p="">< 0,05;="" fig.="" 4d)-nivåer="" sammenlignet="" med="" kjøretøy="" gruppe.="" aktivitetene="" til="" endogene="" antioksidanter="" i="">(Cistanchedeserticolapolysakkarider)grupper økte.

3.6. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)stimulerte utskillelsen av DJ-1 og forbedret uttrykket til DJ-1

DJ-1 konsentrasjonsendringer i cellesupernatanten ble oppdaget og avslørte det mulige forholdet mellom DJ-1 og CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider). DJ-1-frigjøring ble observert fra OGD/RP-skadde PC12-celler (fig. 5). DJ-1 ble betraktelig oppregulert i 5 ug/ml CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)-behandlet gruppe (38,66 ± 8,44 pg/ml) og ble signifikant økning enn i bærergruppen (18,33 ± 3,80 pg/ml, p < 0,01) og kontrollgruppen (9,67 ± 3,96 pg/ml, p < 0,01) .

For å undersøke effekten av CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)på det intracellulære uttrykket til DJ-1 målte vi DJ-1-proteinnivåene ved hjelp av Western blotting. DJ-1 proteinekspresjonsnivåer ble betydelig økt 24 timer etter reperfusjon. Derimot forbedret 5 ug/ml CDP etterbehandlingen signifikant overekspresjonen av DJ-1 sammenlignet med bærergruppen (p < 0,01,="" fig.="">

3.7. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)forbedret DJ-1-translokasjon til mitokondriene

PC12-cellene ble farget med anti-PARK7/DJ-1 og anti-ATP-syntase-kjede-antistoffer (fig. 7 og 8). Anti-ATP-syntase-kjede-antistoffet kobles til mitokondrielt kompleks I, og bindingsantigenet ble lokalisert i mitokondriell indre membran. Resultatene viste at DJ-1 translokerte til den mitokondrielle indre membranen etter OGD/RP-fornærmelse (fig. 8). I mellomtiden avslørte DJ-1 og mitokondrier doble fargingsresultater at CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)tilrettelagt DJ- 1 mitokondriell translokasjon og samlokalisering (fig. 8). Disse resultatene indikerte direkte interaksjon mellom DJ-1 ognevrobeskyttendeeffekt av CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)(Fig. 9).

4. Diskusjon

I denne studien rapporterte vi førstehånds at CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)reduserer effektivt OGD/RP-indusert PC12-celleskade via oppregulering av DJ-1-protein. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)forbedret cellelevedyktighet, redusert cellemembranskade, opprettholdt intracellulær Ca2 pluss homeostase, forhindret MMP-tap, redusert celleapoptose, undertrykt oksidativt stress, fremmet ekspresjon av DJ-1 og forbedret DJ-1-translokasjon til mitokondriene. DJ-1 har nylig blitt involvert i reguleringen avnevrobeskyttendeeffekt og mitokondriell integritet. Disse resultatene ga overbevisende bevis pånevrobeskyttendeeffekter av CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)mot iskemi. Videre spiller samspillet mellom CDP og DJ-1 ennevrobeskyttenderolle i OGD/RP-indusert PC12-celleskade. Resultatene ovenfor kan utvikle vår forståelse av den gunstige effekten av CDP og kan gi nyttig informasjon for behandling av hjerneslag i fremtiden.

Iskemi-slag har blitt tilskrevet en kompleks serie av biokjemiske og molekylære mekanismer, inkludert eksitotoksisitet, kalsiumoverbelastning og oksidativt stress [31]. OGD/RP er mye brukt som en in vitro-modell for iskemi-reperfusjon og brukes til utforskning av nevrologiske og biokjemiske endringer. PC12-cellelinjen er følsom for OGD/RP-skade [2]. Den viser en rekke egenskaper og karakteristikker av sympatiske nevroner [32] og dermed mye brukte nevroncellelinjer for forskning relatert til mekanismene for nevrologisk skade på grunn av hjerneslag [33,34]. Tallrike studier har indikert at oksidativt stress spiller en viktig rolle i hjerneslag og hjerneiskemiskader [35–37]. Parkinsons sykdom-assosiert protein DJ-1 kan hemme iskemisk nevrodegenerasjon og atferdsdysfunksjon ved å redusere ROS-mediert nevronal skade [7]. Derfor brukte vi OGD/RP-skade PC12-cellemodellen for å undersøkenevrobeskyttendeeffekt av CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider).

Graden av skade i PC12-celler indusert av OGD/RP ble evaluert ved MTT, NRU og LDH frigjøringsanalyser. Administrasjon av CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)({{0}}.05, 0.5 og 5 ug/ml) forbedret celleoverlevelse og redusert LDH-frigjøring. Gunstige effekter av CDP-behandling inkluderte også en reduksjon av intracellulær kalsiumoverbelastning og bevaring av MMP. Abnormiteter av intracellulær Ca2 pluss konsentrasjon, spesielt mitokondriell kalsiumoverbelastning, har vært knyttet til neuronal apoptose og død indusert av iskemislag [38]. MMP kan reflektere effektiviteten til elektrontransportkjeden og har blitt indikert som en patologisk lidelsesindeks for dette systemet [39]. Både forhøyelser av intracellulær Ca2 pluss-konsentrasjon og MMP-tap kan føre til destabilisering av nevronstrukturen og til slutt resultere i celleskade eller celledød [21,40]. I denne studien viste resultatene at CDP signifikant hemmet den intracellulære Ca2 pluss overbelastning og økte MMP-nivåer i OGD/RP-skade PC12-celler. Apoptose spiller en viktig rolle i den komplekse patofysiologien til cerebral iskemi-reperfusjonsskade. Økende data antydet at apoptose har vært involvert i mitokondriell dysfunksjon; spredning av MMP er en tidlig hendelse som resulterer i celleapoptose [8,39]. Apoptose er en prosess med energiavhengig programmert celledød for å kvitte seg med overflødige celler. Mange nevroner i det iskemiske hjerneslaget vil gjennomgå apoptose [41]. I denne studien utførte vi Hoechst33342 og Annexin V-FITC/PI-farging for å undersøke effekten av CDP på ​​apoptose [23,28]. Resultatene viste at CDP opprettholder integriteten til kjernen og reduserer celleapoptosehastigheten. Alle disse resultatene indikerte at den anti-apoptotiske aktiviteten til CDP bidro til den gunstige effekten ved nevronal skade i PC12-celler.

Celler som gjennomgår iskemiskade forårsaket av overdreven ROS-akkumulering, som kan føre til lipidperoksidasjon, cellemembranskade, kalsiumoverbelastning og mitokondriell dysfunksjon, som til slutt resulterer i celleapoptose og død [42]. Forbruket av endogene antioksidanter, som SOD, CAT og GSH-Px, indikerte også forekomsten. Fig. 9. Mulige mekanismer for de beskyttende effektene av CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)mot OGD/RP-indusert PC12-celleskade. Behandling av CDP undertrykker oksidativt stress, stabiliserer Ca2 pluss konsentrasjon og MMP, forbedrer DJ-1 uttrykk og lokalisering i mitokondriene. Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 678av oksidativt stress under iskemi-reperfusjon. I denne studien viste OGD/RP-gruppen en signifikant økning i ROS og en reduksjon i CAT, GSH-Px og T-AOC sammenlignet med den 5 ug/ml CDP-behandlede gruppen. Imidlertid observerte vi betydelige reduksjoner i ROS-generering og forbruk av endogene antioksidanter (CAT, GSH-Px og T-AOC) i CDP-gruppene. De gunstige effektene i 5 ug/ml CDP-gruppen var nær de i Nimo-gruppen. Resultatene antydet at CDP hemmer dannelsen av ROS og gjenoppretter enzymatisk antioksidantforsvar.

DJ-1 er en nøkkelredoksreaktivnevrobeskyttendeprotein involvert i reguleringen av oksidativt stress ved hjerneslag. De gunstige effektene av DJ-1-overuttrykk inkluderer celleoverlevelse fra iskemi-reperfusjon og bevaring av mitokondriell funksjon og morfologi, for eksempel utfelling av mitokondrierpermeabilitetsovergang poreåpning [39,43]. Tidligere studier har indikert at den beskyttende effekten av DJ-1 i celler eksponert for OGD/RP er relatert til dens antioksidantegenskaper og mitokondriertranslokasjon [43–45]. DJ-1 utfører effektiv endogen nevrobeskyttelse for å dempe mitokondriedefekter via translokasjon [46]. Flere studier har indikert at DJ-1-translokasjon kan ha en effekt på mitokondriell bevegelse, forbedre celle-celle-interaksjon og fremme andre cellepro-overlevelsesprosesser.

DJ-1 påvirker flere prosesser, som cellemigrasjon og adhesjon, kjemotaksi, proliferasjon og apoptose, både i in vitro og in vivo-modeller [6,9,47,48]. Ved å bruke OGD/RP-skadde PC12-cellers slagmodell, utforsket vi et potensielt forhold mellom CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)og DJ-1. DJ- 1-overuttrykk ble identifisert ved ELISA og Western blotting. Sammen med denne funksjonen viste et viktig funn i eksperimentene at det betydelige overuttrykket av DJ-1 skjedde når CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)(5 ug/ml) ble administrert før reperfusjon. Dette antydet en mulignevrobeskyttendeeffekt i forholdet mellom CDP og DJ-1. Dessuten har vi observert at DJ-1 lokalisert i mitokondriene under forhold med OGD/RP og rikelig uttrykk for DJ-1 reduserte cellulær følsomhet for ROS og hemmet oksidativt stress [45]. Resultatene antydet at CDP regulerer og forbedrer DJ-1, som fungerer som en molekylær kobling mellom mitokondriedysfunksjon og oksidativt stress og gir en progresjon av sekundær celledød som er iboende i hjerneslag [5,47,49–51]. I takt med stabilisering av DJ-1 i mitokondriene, CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)behandling økte celleoverlevelse, stabilisert Ca2 pluss homeostase, forbedret MMP-spredning og forhindrer mitokondrie-relatert apoptose [43]. Samlet sett indikerte resultatene våre at CDP utøver en romannevrobeskyttendemekanisme i behandlingen av iskemisk slag.

5. Konklusjon

Resultatene våre indikerte at CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)beskytter PC12-celler mot OGD/RP-indusert skade gjennom dens antioksidanteffekter, som delvis tilskrives den DJ-1-medierte veien. Disse effektene inkluderer en reduksjon i frekvensen av cellemembranskade, bevaring av [Ca2 pluss] I-homeostase, forbedring av MMP-spredning, hemming av celleapoptose, demping av intracellulær ROS og modulering av DJ-1-nivåer. Resultatene indikerte også at interaksjonene mellom CDP og DJ-1 forsterker nevrobeskyttelse og opprettholder mitokondriell integritet. Derfor kan sårbare nevroner beskyttes av CDP(Cistanchedeserticolapolysakkarider)via forbedring av DJ-1-uttrykk under iskemislag.

Anerkjennelser

Denne studien ble støttet av National Natural Science Foundation of China (tilskudd 81360649), National Science and Technology Key Program (stipend 2015BAK45B01), og Ningxia Hui Autonomous Region Science and Technology Support Program (tilskudd 2016BZ07).

Cistanche deserticola polysakkariderha en Nevrobeskyttende effekt

Referanser

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans beskytter kortikale nevroner mot hypoksi-indusert toksisitet ved å nedregulere HDAC1/6, Neuromol. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Stroke 1-2-0: et hurtigresponsprogram for hjerneslag i Kina, Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Novel stroke therapeutics: unraveling stroke pathophysiology and its impact on clinical treatments, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, NADPH oksidase-relatert patofysiologi i eksperimentelle modeller av hjerneslag, Int. J. Mol. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, Oksydasjonstilstandene til DJ{{ 1}} diktere celleskjebnen som svar på oksidativt stress utløst av 4-hpr: autofagi eller apoptose? Antioxid Redox-skilt. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 forbedrer iskemisk celledød in vitro, muligens via mitokondriebanen, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira, et al., DJ{{ 1}} beskytter mot nevrodegenerasjon forårsaket av fokal cerebral iskemi og reperfusjon hos rotter, J. Cereb. Blodstrøm. Met. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, Oksygen-glukose-depriverte rotte primære nevrale celler viser DJ-1 translokasjon til sunne mitokondrier: et potent slagterapeutisk mål, CNS Neurosci. Ther. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Cyclosporine A behandling opphever iskemi-indusert nevronal celledød ved å bevare mitokondriell integritet gjennom oppregulering av Parkinsons sykdom-assosiert protein DJ-1, CNS Neurosci. Ther. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu, et al., Forbehandling med natrium Phenylbutyrate Lindrer cerebral iskemi/ reperfusjonsskade ved å oppregulere DJ-1-protein, Front. Neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. En nevrofarmakologisk gjennomgang, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): En av de beste farmasøytiske gaver innen tradisjonell kinesisk medisin, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Effekter og mekanismer av kinesisk urtemedisin for å lindre myokardiskemi-reperfusjonsskade, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches stimulerer cellulær glutationredoks-syklus av reaktive oksygenarter generert fra mitokondriell respirasjon i H9c2-kardiomyocytter, Pharm. Biol. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert ginseng": en anmeldelse, Am. J. Chin. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticolaavkok lindrer testikkeltoksisiteten indusert av hydroksyurea hos hannmus, asiatiske J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Investigation of thenevrobeskyttendevirkningen av nimodipin på Neuro2a-celler ved hjelp av en kirurgisk stressmodell, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Nevrobeskyttendeeffekt av noskapin på cerebral oksygen-glukosemangelskade, Pharmacol. Rep. 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A beskytter mot iskemisk svekkelse i primærkultur av rottekortikale nevroner etter at oksygen-glukosemangel fulgte ved reperfusjon, J. Neurosci. Res. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, Trans-cinnamaldehyd beskyttet PC12-celler mot oksygen- og glukosemangel /reperfusjon (OGD/R)-indusert skade via anti-apoptose og antioksidativt stress, Mol. Cell Biochem. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Protective effects of aloin on oxygen and glukosemangel-indusert skade i PC12-celler, Brain Res. Okse. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrol beskytter iskemiske PC12-celler ved å hemme de hypoksi-assosierte transkripsjonsfaktorene og øke nivåene av antioksidantforsvarsenzymer, ACS Chem. Neurosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B beskytter PC12-celler mot oksygen-glukosedeprivasjon-indusert nevronal død ved å opprettholde mitokondriell homeostase via induksjon av ubiquitin-avhengig p53-proteinnedbrytning, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu, et al., Protective effffects of aloperine on neonatal rat primary dyrkede hippocampale nevroner skadet av oksygen-glukosemangel og reperfusjon, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parecoxib beskytter musekortikale nevroner mot OGD/R-indusert nevrotoksisitet ved å oppregulere Bcl-2, Neurochem. Res. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 stabiliserer HER2-ekspresjon og opprettholder kreftstamcellepopulasjonen i eggstokkreftceller, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, Beskytter RGC-5-celler fra H(2)O( 2)-indusert oksidativt stressfornærmelse ved å aktivere PI3K/Akt/eNOS-signalvei, Int. J. Mol. Sci. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, Dichloromethane-ekstrakter av propolis beskytter cellen mot oksygen-glukosemangel-indusert oksidativt stress Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679via reduksjon av apoptose, Food Nutr. Res. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Nevrobeskyttendeeffekt av neuroserpin i oksygenglukosedeprivasjon- og reoksygeneringsbehandlede rotteastrocytter in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Litiumioner svekker serum-deprivasjon-indusert apoptose i PC12-celler gjennom regulering av Akt/FoxO1-signaleringen pathways, Psychopharmacology (Berl) 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et al., Sammendrag hjertesykdom og slagstatistikk 2016-oppdatering. En rapport fra American Heart Association, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Regulering av muskariniske ligandbindingssteder ved hjelp av nervevekstfaktor i PC12 feokromocytomceller, Nature 297 (1982) 152–154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Nevrosteroid allopregnanolone demper høy glukose-indusert apoptose og forhindrer eksperimentell diabetisk nevropatisk smerte: in vitro og in vivo studier, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrol beskytter PC12-celler mot OGD/R-indusert apoptose via den mitokondriemedierte signalveien, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oxidases as a source of oxidative stress and molecular target in ischemi/reperfusion skade, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Organ-beskyttende effekter av rødvinsekstrakt, resveratrol, i oksidativ stress-mediert reperfusjonsskade, Oksyd. Med. Cell Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Distinct mPTP activation mechanisms in ischemi-reperfusion: bidrag av Ca2 pluss pluss , ROS, pH, og uorganisk polyfosfat, Cardiovasc. Res. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, Lavdose etanol-prekondisjonering beskytter mot oksygenglukosemangel/ reoksygeneringsindusert nevronal skade ved å aktivere storkonduktans , Ca2 pluss pluss -aktiverte K pluss pluss-kanaler In Vitro, Neurosci. Okse. 33 (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Effekt av inhibering av mitokondriell fisjon på energimetabolisme i rotte hippocampale nevroner under iskemi/reperfusjonsskade, Neurol. Res. (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun, et al., Protective effffects of Lycium barbarum polysakkarid på neonatal rotte primære dyrkede hippocampale nevroner skadet av oksygen-glukose deprivasjon og reperfusjon, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Apoptotiske mekanismer etter cerebral ischemi, Stroke 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin beskytter astrocytter mot hypoksi in vitro, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, Kalsium/calmodulin-avhengig proteinkinase regulerer PINK1/Parkin og DJ{{3} } veier for mitofagi under sepsis, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 er en viktig mediator av hypoksi-induserte cellulære responser, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Calcium/calmodulin-dependent protein kinase regulates PINK1/ Parkin- og DJ-1-veier for mitofagi under sepsis, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, Transnitrosylation from DJ-1 to PTEN demper neuronal celledød i Parkinsons sykdomsmodeller, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 beskytter mot celledød etter akutt hjerteiskemi-reperfusjonsskade, Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} er en pålitelig serumbiomarkør for å diskriminere høyrisiko endometriekreft, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan, et al., DJ-1 beskytter nigrostriatal akse fra neurotoksinet MPTP ved modulering av AKT-banen, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, The Parkinsons disease protein DJ-1 ernevrobeskyttendepå grunn av cystein-sulfinsyre-drevet mitokondriell lokalisering, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, Hyperglykemi-indusert hemming av DJ-1 uttrykk kompromitterte effektiviteten av iskemisk postkondisjonering kardiobeskyttelse hos rotter, Oxid. Med. Cell Longev. (2013) (2013) 564902.