Å velge en botanisk hudpleieingrediens bør innebære mer enn å finne en tiltalende plantehistorie. For et hudpleiemerke, kontraktsprodusent eller ingrediensdistributør er de mer nyttige spørsmålene:

Hvilke forbindelser er tilstede i ekstraktet?

Hvor konsekvent kan produsenten kontrollere konsentrasjonene deres?

Hvilke eksperimenter støtter den foreslåtte søknaden?

Gjelder bevisene den faktiske ingrediensen som kjøpes?

Hvilken ekstra testing er nødvendig før du lanserer et ferdig produkt?

Det tekniske dokumentet som undersøkes i denne artikkelen fokuserer påverbascoside avledet fra Cistancheog dens foreslåtte anvendelser innen hudlipidproduksjon, hydrering og barriererelatert forskning.

Den beskriver både en renseprosess og laboratorieeksperimenter som sammenligner renset verbascoside med flere Cistanche-ekstrakter og andre ingredienser.

 

 

16 % verbascoside cistanche ekstrakt

Den sentrale kommersielle leksjonen er enkel: et generelt Cistanche-ekstrakt og en høyrenset Cistanche-avledet forbindelse bør ikke behandles som utskiftbare ingredienser.

Bevisnotat:Forskningsfunnene nedenfor er rapportert i den kinesiske patentteksten som er levert for oversettelse. Det medfølgende materialet inkluderer ikke de originale figurene, komplette numeriske datasett, patentpublikasjonsdetaljer eller kliniske studier på mennesker. Den bør derfor leses som en teknisk avsløring, ikke som en uavhengig bekreftelse på effekt av ferdige produkter eller myndighetsgodkjenning.

 

1. Hva er Verbascoside?

Verbascoside er også kjent somakteosid. Dette er navn på det samme kjemiske stoffet, i stedet for to forskjellige aktive ingredienser. FDA-stoffregisteret viser begge navnene under samme stoffidentitet. (precision.fda.gov)

 

 

I den medfølgende beskrivelsen er verbascoside beskrevet som et fenyletanoidglykosid oppnådd fra de tørkede kjøttfulle stilkene til Cistanche-arter. De viktigste botaniske kildene som er navngitt er:

Cistanche deserticola

Cistanche tubulosa

Cistanche sinensis

Cistanche salsa

Dokumentet undersøker verbascoside som en potensiell botanisk aktiv for aktuelle formuleringer, med spesiell oppmerksomhet på lipidmetabolisme, hyaluronsyreproduksjon, stramme proteiner og cellemigrasjon.

Hvorfor navnet er viktig når du kjøper ingredienser

Når du sammenligner leverandørtilbud, be om bekreftelse på:

Den botaniske arten og plantedelen.

Om materialet er et helt ekstrakt, standardisert ekstrakt eller renset forbindelse.

Det målte verbascoside-innholdet.

Analysemetoden og referansestandarden som er brukt.

Om den oppgitte prosentandelen representerer en analyse etter masse eller en kromatografisk arealprosent.

Et sitat for "Cistanche-ekstrakt" alene gir ikke nok informasjon til å avgjøre om det samsvarer med materialet som er evaluert i et bestemt eksperiment.

2. Hvorfor fokuserer avsløringen på hudbarrieren?

Dokumentet presenterer et forskningskonsept med flere endepunkter i stedet for en enkel overflatefuktende påstand.

Den foreslåtte sekvensen er:

Epidermal cellefornyelse → sterkere celle-til-celle-forbindelser → lipidstøtte → hyaluronsyreproduksjon → reparasjonsrelatert aktivitet

For å undersøke dette konseptet brukte forskerne HaCaT-celler. HaCaT er en udødeliggjort human keratinocyttcellelinje etablert som en laboratoriemodell for å studere epidermal biologi og keratinisering. Det er ikke en celletype naturlig kalt "HaCaT" i en persons hud. (pmc.ncbi.nlm.nih.gov)

For ingredienskjøpere er denne forskjellen viktig:resultater i dyrkede celler er et forskningsmessig utgangspunkt, ikke en erstatning for å teste et ferdig produkt på menneskelig hud.

Hovedendepunktene rapportert

Forskningsområde	Mål beskrevet i det medfølgende dokumentet	Praktisk tolkning
Cellerespons	CCK-8 analyse	Et screeningendepunkt; ytterligere metoder vil styrke et spredningskrav
Lipid-relatert aktivitet	Fettsyresyntaseaktivitet; ACC , FASN og N-SMase uttrykk	Støtter videre undersøkelse av lipidmetabolisme, men kvantifiserer ikke direkte den komplette hudbarriere lipidprofilen
Hyaluronsyre	HA innhold; HAS2-, HAS3- og CD44-uttrykk	Støtter videre undersøkelse av HA-relaterte veier
Celle-til-celle-forbindelser	Claudin-1 og okcludinnivåer	Måler utvalgte tight-junction-proteiner i stedet for fullstendig barrierefunksjon
Reparasjonsrelatert aktivitet	Celleskrapeanalyse	Et in vitro endepunkt for gap-lukking, ikke en klinisk sårhelingsstudie
Fuktighetsbevaring	Formuleringsmasseretensjon på glassplater	En laboratorietest på formuleringsnivå, ikke en hydreringsstudie på huden

Disse tolkningene følger av de eksperimentelle metodene beskrevet i den medfølgende teksten.

 

3. Hva gjør denne forskningen nyttig for hudpleiebedrifter?

Avsløringen sammenligner flere materialer i stedet for å anta at hver Cistanche-avledet ingrediens gir samme respons.

De testede materialene inkluderer:

Et Cistanche-polysakkaridekstrakt.

Flere fenyletanoid-glykosidholdige ekstrakter.

Et totalt fenylethanoid glykosidekstrakt.

Echinacoside.

Renset verbascoside.

I følge det vedlagte dokumentet viste renset verbascoside aktivitet på tvers av flere av de målte endepunktene. Noen blandede ekstrakter viste aktivitet i visse analyser, men ikke andre.

The Purchasing Takeaway

Kjøp spesifikasjonen som samsvarer med utviklingsmålet ditt - ikke bare plantenavnet.

For eksempel:

Hvis prosjektet ditt er basert på rensede verbascoside-eksperimenter, be om data for det rensede materialet.

Hvis formuleringen din bruker et standardisert helekstrakt, be om testing på det utdraget.

Hvis en leverandør siterer forskning på en annen utvinningsprosess, spør om den testede sammensetningen er sammenlignbar med materialet som tilbys.

Bevis for én ingrediensklasse bør ikke automatisk overføres til en annen.

4. Hvordan er Verbascoside utarbeidet i avsløringen?

Den beskrevne prosessen har fire hovedstadier:

Botanisk forberedelse:Forbehandle og pulveriser tørkede Cistanche kjøttfulle stilker.

Utvinning:Bruk 50–80 % vandig etanol.

Berikelse:Skill fraksjoner med en AB-8 makroporøs adsorpsjonsharpiks.

Rensing:Bruk silikagelkromatografi, etterfulgt av konsentrering og frysetørking.

Den oppgitte endelige renheten erminst 98 %, selv om den medfølgende teksten ikke inkluderer analytisk validering eller batchdata som er nødvendig for uavhengig bekreftelse av denne spesifikasjonen.

Et kritisk produksjonsspørsmål: Resterende løsemidler

Det beskrevne kromatografitrinnet benytterkloroform og metanol.

For et kommersielt innkjøpsprosjekt, spør produsenten om den faktiske produksjonsløsningsmiddellisten, kontroller for fjerning av løsemidler og batchspesifikke gjenværende løsningsmiddelresultater. ICH Q3C gir et farmasøytisk rammeverk for evaluering av gjenværende løsningsmiddelrisiko; det bør ikke representeres som en universell kosmetisk akseptstandard. (ema.europa.eu)

Ikke anta at "planteavledet" betyr "laget bare med vann og etanol."

 

5. Hva viser faktisk fuktighetsretensjonstesten?

Det medfølgende dokumentet beskriver en sammenligning av:

Et serum som inneholder2 % verbascoside.

Et serum som inneholder2 % echinacoside.

Et serum med positiv kontroll5 % glyserin.

Prøvene ble plassert kl25 grader og 50 % relativ fuktighet, og deres masse ble målt over tid.

Avsløringen rapporterer at prøven som inneholder verbascoside beholdt mer masse under disse forholdene.

Det er en potensielt nyttig observasjon for formuleringsscreening. Den beskrevne metoden fastslår imidlertid ikke:

Overlegen fuktighet på menneskelig hud.

Lavere transepidermalt vanntap.

Klinisk overlegenhet over glyserin.

Bedre ytelse i hver formulering.

At den observerte forskjellen kun var et resultat av den navngitte aktive, uten en fullstendig avslørt samsvarende kjøretøysammenligning.

For en merkevare som planlegger en sammenlignende påstand, test de ferdige formuleringene ved hjelp av en passende utformet studie.

 

6. En praktisk sjekkliste for innkjøp av Cistanche-ingredienser

Bruk følgende spørsmål når du vurderer en Cistanche-ekstraktleverandør eller produsent av renset verbascoside.

Kjøpsspørsmål	Dokumentasjon å be om
Hva er den botaniske kilden?	Artsidentifikasjon, plantedelsdeklarasjon og sporbarhetsinformasjon
Hva er det egentlig som leveres?	Full sammensetning, inkludert bærere, prosesshjelpemidler og hjelpestoffer der det er aktuelt
Hvor mye verbascoside er tilstede?	Batch-spesifikt sertifikat for analyse og analysemetode
Hvordan bekreftes identiteten?	Kromatografisk identifikasjon og referansestandardinformasjon
Hvilke løsemidler brukes?	Faktisk produksjonsløsningsmiddeldeklarasjon og testresultater for gjenværende løsemiddel
Hvor konsekvent er produksjonen?	Representative resultater fra flere batcher
Er materialet egnet for tiltenkt bruk?	Dokumentasjon for tiltenkt bruk og passende sikkerhetsdokumentasjon
Vil det fungere i den valgte formelen?	Løselighet, kompatibilitet, stabilitet og emballasje-utviklingsdata
Hva støtter de foreslåtte påstandene?	Studierapporter for samme ingrediensklasse og helst den ferdige formuleringen

 

Ikke bruk "naturlig" som en sikkerhetskonklusjon

Den medfølgende patentteksten gir en gunstig sikkerhetserklæring basert på ingrediensens botaniske opprinnelse. Denne uttalelsen krever kvalifikasjoner for kommersiell publisering.

FDA forklarer at kilden til en ingrediens ikke bestemmer sikkerheten: planteavledede materialer kan også inneholde giftige eller allergifremkallende stoffer. Sikkerheten må vurderes for de tiltenkte bruksforholdene. (fda.gov)

Av denne grunn, be om sikkerhetsdokumentasjon i stedet for å stole på "naturlig", "urte" eller "høy renhet" som frittstående forsikringer.

 

7. Hvordan bør en merkevare diskutere forskningen?

Hold tre lag adskilt:

Hva avsløringen hevder.

Hva de rapporterte eksperimentene målte.

Hva det ferdige produktet har vist seg å gjøre.

For eksempel er "undersøkt i HaCaT-celler for lipid-relatert aktivitet" vesentlig forskjellig fra "klinisk bevist å reparere hudbarrieren."

På samme måte bør referanser til behandling av eksem, behandling av atopisk dermatitt eller helbredende sår ikke kopieres direkte inn i vanlige kosmetiske produktkrav. I USA kan påstander om å behandle sykdom eller påvirke kroppens struktur eller funksjon føre til at et produkt blir regulert som et medikament. (fda.gov)

En forskningsartikkel eller patentreferanse er ikke i seg selv tillatelse til å fremsette et terapeutisk markedsføringskrav.

8. Anbefalt utviklingsvei

For en bedrift som vurderer Cistanche-avledet verbascoside, er en nyttig utviklingssekvens:

Definer den tiltenkte produktkategorien og målmarkedet.

Velg ingredienskvalitet og analytisk spesifikasjon.

Gjennomgå sammensetning, forurensninger, gjenværende løsningsmidler og sikkerhetsdokumentasjon.

Utvikle en prototype og vurder ingredienskompatibilitet.

Vurder formulering og emballasjestabilitet.

Gjennomfør passende mikrobiologiske og sikkerhetsvurderinger.

Test det ferdige produktet mot de tiltenkte ytelseskravene.

Gjennomgå det endelige nettstedet, etiketten og annonseringsspråket før lansering.

Konsentrasjonsområdet i avsløringen-0.01%–5.0%-bør behandles som et avslørt område, ikke som en universelt validert formuleringsanbefaling.

 

Bunnlinje for ingredienskjøpere

Den medfølgende forskningen gjør Cistanche-avledet verbascoside til en kandidat for videre hudpleieutvikling, spesielt for prosjekter som utforsker hydrering og barriererelaterte laboratorieendepunkter.

 

Cistanche acteoside innholdsliste

 

Klikk for å besøke et annet innhold i listen over akteosidcistancheekstrakter

 

 

 

Den mest nyttige leksjonen er ikke bare at "Cistanche er bra for huden." Det er detekstraksjonsmetode, innhold av aktive stoffer, ingrediensidentitet og beviskvalitet påvirker alle om en botanisk ingrediens er egnet for et spesifikt kommersielt prosjekt.

Når du henvender deg til en Cistanche-produsent, start med en presis forespørsel:

"Vennligst oppgi den botaniske identiteten, verbascoside-spesifikasjonen, analysemetoden, representative analysesertifikater, restløsningsmiddelresultater, sikkerhetsdokumentasjon og formuleringsveiledning for ingredienskvaliteten som er foreslått for prosjektet vårt."

Den forespørselen skaper et mye sterkere grunnlag for produktutvikling enn en generisk forespørsel om urteekstraktpulver.

 

(54) Tittel på oppfinnelsen

Metode for fremstilling av Verbascoside og metode for dets anvendelse for å fremme hudlipidproduksjon

(57) Sammendrag

Oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av verbascosid og en fremgangsmåte for dens anvendelse for å fremme hudlipidproduksjon, som tilhører det tekniske området hudpleie og topiske produkter.

Metoden omfatter følgende trinn:

Velge de tørkede kjøttfulle stilkene til Orobanchaceae-planteneCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, ellerCistanche salsa; pulverisere stilkene etter forbehandling; ekstrahere dem under tilbakeløp med en 50%–80% vandig etanolløsning to til fire ganger i en til tre timer hver gang; kombinere ekstraktene; og konsentrere dem under redusert trykk inntil ingen etanollukt gjenstår, for derved å oppnå en konsentrert løsning.

Den konsentrerte løsningen føres gjennom en AB-8 makroporøs adsorpsjonsharpikskolonne; sekvensiell eluering med avionisert vann og en 30 %–50 % vandig etanolløsning for å fjerne urenheter; deretter eluere målbestanddelene med en 60 %–90 % vandig etanolløsning; samle eluatet og konsentrere det under redusert trykk; rensing av det ved silikagel-kolonnekromatografi ved bruk av kloroform-metanol i et volumforhold fra 5:1 til 2:1 som elueringsmiddel; samle målfraksjonene; og konsentrere dem under redusert trykk, etterfulgt av frysetørking, for å oppnå renset verbascoside.

De fordelaktige effektene angitt for oppfinnelsen er at verbascoside beskytter huden og viser forbedret hudpleieaktivitet når det inkorporeres i produkter.

 

Krav

Krav 1

Fremgangsmåte for fremstilling av verbascoside, karakterisert ved å omfatte følgende trinn:

Velge de tørkede kjøttfulle stilkene til Orobanchaceae-planteneCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, ellerCistanche salsa; pulverisere dem etter forbehandling; ekstrahere dem under tilbakeløp med en 50%–80% vandig etanolløsning to til fire ganger i en til tre timer hver gang; kombinere ekstraktene; og konsentrere dem under redusert trykk inntil ingen etanollukt gjenstår, for derved å oppnå en konsentrert løsning.

Den konsentrerte løsningen føres gjennom en AB-8 makroporøs adsorpsjonsharpikskolonne; sekvensiell eluering med avionisert vann og en 30 %–50 % vandig etanolløsning for å fjerne urenheter; deretter eluere målbestanddelene med en 60 %–90 % vandig etanolløsning; samle eluatet og konsentrere det under redusert trykk; rensing av det ved silikagel-kolonnekromatografi ved bruk av kloroform-metanol i et volumforhold fra 5:1 til 2:1 som elueringsmiddel; samle målfraksjonene; konsentrere dem under redusert trykk; og frysetørking for å oppnå renset verbascoside med en renhet på minst 98 %.

 

Krav 2

Fremgangsmåten for fremstilling av verbascoside ifølge krav 1, hvori materiale-til-løsningsmiddel-forholdet under tilbakeløpsekstraksjon varierer fra 1:10 til 1:20, og ekstraksjonstemperaturen varierer fra 60 grader til 80 grader.

 

Krav 3

Fremgangsmåten for fremstilling av verbascoside ifølge krav 1, hvori diameter-til-høyde-forholdet til den AB-8 makroporøse adsorpsjonsharpikskolonnen varierer fra 1:8 til 1:15, og elueringsstrømningshastigheten varierer fra 1 til 3 BV/time.

 

Krav 4

Fremgangsmåten for fremstilling av verbascoside ifølge krav 1, hvori frysetørkebetingelsene omfatter en temperatur som varierer fra -40 grader til -50 grader, et vakuumtrykk som varierer fra 10 til 30 Pa, og en tørketid som varierer fra 12 til 24 timer.

 

Krav 5

5. Fremgangsmåte for å påføre verbascoside for å fremme hudlipidproduksjon, ved å bruke verbascoside fremstilt i henhold til hvilket som helst av kravene 1-4, karakterisert ved at påføringsmetoden omfatter:

Tilsetning av verbascoside til en aktuell produktbase ved en forhåndsbestemt massefraksjon og omrøring jevnt for å produsere et ferdig produkt; påføre det ferdige produktet på hudoverflaten en eller to ganger daglig; tillate verbascoside å penetrere og virke på epidermale HaCaT-celler for å oppregulere gen- og proteinekspresjonen av ACC, FASN og N-SMase og øke fettsyresyntaseaktiviteten; og fortsette bruken i én til fire uker for å forbedre hudens lipidsyntese.

Verbascoside fremmer HaCaT-celleproliferasjon, sårheling, tight-junction proteinekspresjon og lipid- og hyaluronsyreproduksjon, og gir derved multi-target barriere-reparasjonsfunksjoner.

Den brukes gjennom hele hudbarriere-vedlikeholdskjeden som omfatter epidermal cellefornyelse, forbedrede intercellulære forbindelser, påfyll av lipidmatrisen og syntese av hyaluronsyre som en naturlig fuktighetsgivende faktor.

 

Krav 6

6. Påføringsmetoden ifølge krav 5, hvori massefraksjonen av verbascoside i det topiske produktet varierer fra 0,01 % til 5,0 %.

 

Krav 7

Påføringsmetoden ifølge krav 5, hvori 0,1–0,5 g av det ferdige produktet brukes per påføring, etterfulgt av skånsom massasje i ett til tre minutter for å fremme absorpsjon.

 

Krav 8

Påføringsmetoden ifølge krav 5, hvori det aktuelle produktet er en medisinsk bandasje, et reparasjonsprodukt etter prosedyre, et tilleggsbehandlingsprodukt for atopisk dermatitt, et hudpleieprodukt spesielt beregnet på sensitiv hud, eller et intensivt fuktighetsgivende og reparerende hudpleieprodukt.

 

Krav 9

6. Påføringsmetode ifølge krav 5, karakterisert ved at hjelpestoffer i tillegg kan inkorporeres under påføringen av verbascoside.

 

Krav 10

10. Påføringsmetoden ifølge krav 9, hvori hjelpestoffet er valgt fra et fuktighetsbevarende middel, en emulgator, et konserveringsmiddel, en duft eller et beroligende middel, og doseringsformen av den hjelpestoffholdige sammensetningen er valgt fra en lotion, en krem, en gel, et serum eller en arkmaskeløsning.

 

Metode for fremstilling av Verbascoside og metode for dets anvendelse for å fremme hudlipidproduksjon

 

Teknisk felt

[0001]Oppfinnelsen tilhører det tekniske feltet hudpleie og aktuelle produkter. Spesielt angår den en fremgangsmåte for fremstilling av verbascoside og en fremgangsmåte for dens anvendelse for å fremme hudlipidproduksjon.

Mer spesifikt dreier det seg om en forberedelsesmetode for verbascoside beregnet på å utøve effekter over hele hudbarriere-reparasjonssekvensen av epidermal cellefornyelse → forbedrede intercellulære stramme koblinger → lipid-matrise-påfyll → hyaluronsyresyntese → sårheling, for bruk for å beskytte huden.

 

Bakgrunnskunst

[0002]Epidermal cellefornyelse, forbedrede intercellulære tight junctions, lipid-matrise-påfylling, hyaluronsyresyntese og sårheling spiller hver en uunnværlig rolle i å opprettholde hudbarriere-homeostase.

Epidermal cellefornyelse er grunnlaget for barrierekonstruksjon. Ved å akselerere spredningen og differensieringen av basale keratinocytter, sikrer det at tilstrekkelig antall celler beveger seg oppover på en ryddig måte, og tilfører tilstrekkelig cellemateriale for barrieredannelse.

Intercellulære koblingsstrukturer, inkludert tight junctions og desmosomer, forankrer nydannede celler sammen for å skape en tett, kontinuerlig fysisk barriere som effektivt motstår inntreden av ytre irritanter.

Lipidmatrisen som fyller mellomrommene mellom cellene danner en organisert lamellær struktur og er det viktigste middelet for å tette veier gjennom hvilke vann går tapt.

Hyaluronsyre syntetisert i epidermis og dermis danner et kraftig vannholdende nettverk, tilfører fuktighet til stratum corneum og opprettholder cellulær homeostase. Det kan også gi et passende fuktig miljø for disse fysiologiske prosessene og overføre cellulære signaler.

Sårheling avhenger sterkt av disse fire prosessene. For det første gir hyaluronsyre en provisorisk matrise og signalfunksjoner. Epidermal cellefornyelse er da nødvendig for å dekke såret. Nydannede celler må reetablere tette koblinger og fylle på lipidmatrisen for å fullføre gjenopprettingen av barrierefunksjonen.

Disse fem prosessene initieres sekvensielt under sårheling. Deres sammenkoblede, koordinerte handlinger – fra cellefornyelse og strukturell forsterkning til matrisefylling og vannlagring – fører kollektivt til en fullstendig stabilisert hudbarriere.

De gir ikke bare den fysiske styrken som trengs for å motstå ytre irritanter, men også den fuktighetsbevarende kapasiteten som er nødvendig for å forhindre internt vanntap, slik at huden kan opprettholde langsiktig helse i en tilstand av dynamisk likevekt.

Følgelig er flerdimensjonal, systematisk rekonstruksjon mer grunnleggende enn bare å forbedre overflatefuktigheten. Det kan forbedre hudens motstand og fuktighetsbevaring ved kilden, og støtte en mer holdbar og stabil sunn tilstand.

[0003]Hudens egen produksjon av lipider og hyaluronsyre er grunnleggende for å opprettholde hudhelsen, motstå miljøirritasjon og bevare en ungdommelig tilstand.

Gjennom fuktighetsbevaring og forsvar mot mikroorganismer og forurensninger bidrar disse stoffene til å sikre normal fysiologisk hudfunksjon.

Sammenlignet med eksternt tilskudd alene beskrives det å fremme hudens egen produksjon av lipider og hyaluronsyre som en mer grunnleggende og holdbar strategi som direkte styrker dens "selvreparasjonsevne" og "motstand".

For hudsykdommer som atopisk dermatitt og eksem beskrives styrking av lipid- og hyaluronsyreproduksjonen å ha sentral forebyggende og terapeutisk betydning.

Kilden forklarer at disse tilstandene ofte involverer genetiske defekter som svekker hudens "murstein-og-mørtel"-struktur, slik at allergener og irritanter kan trenge inn lettere og utløse en vedvarende immun-inflammatorisk syklus.

Derfor kan identifisering av aktive ingredienser som aktiverer viktige lipidsyntese-enzymer, som FASN og ACC, eller direkte induserer hyaluronsyreproduksjon proaktivt opprettholde og reparere cellulær lipid- og hyaluronsyreproduksjon.

I følge avsløringen kan denne strategien lindre tørrhet, kløe og inflammatoriske episoder samtidig som den reduserer eksterne triggere ved kilden, reduserer hyppigheten og alvorlighetsgraden av tilbakefall og hjelper til med å skifte sykdomsbehandling fra passiv behandling mot aktiv forebygging.

 

[0004]Verbascoside er et fenyletanoidglykosid og en av hovedbestanddelene i Orobanchaceae-plantene:

Cistanche deserticolaYC Ma;

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight;

Cistanche sinensisBeck; og

Cistanche salsa(CA Mey.) Beck.

 

Forskning har vist at verbascoside er en potent antioksidant og har farmakologiske aktiviteter inkludert antiinflammatoriske, nevrobeskyttende, leverbeskyttende og antialdringseffekter.

Under screening for hudbeskyttende midler fra en rekke planter fant oppfinnerne at verbascoside ikke bare fremmer HaCaT-celleproliferasjon og tight-junction proteinekspresjon, men også regulerer fettsyresyntaseaktivitet, og forbedrer derved hudens lipidsyntese.

Det aktiverer også veier involvert i produksjon av hyaluronsyre og fremmer deretter sårheling.

Disse handlingene omfatter den komplette hudbarrierevedlikeholds- og reparasjonssekvensen av epidermal cellefornyelse → forbedrede intercellulære forbindelser → lipid-matrise-påfylling → hyaluronsyresyntese → sårheling.

Verbascoside kan derfor brukes som et multi-target hudbeskyttende og fuktighetsgivende middel i funksjonell hudpleie og aktuelle produkter.

Eksempler inkluderer medisinske bandasjer og reparasjonsprodukter etter prosedyre; tilleggsprodukter for atopisk dermatitt eller eksem; hudpleieprodukter spesielt beregnet på sensitiv hud eller rosacea; og intensive fuktighetsgivende og reparasjonsprodukter for daglig bruk.

 

Sammendrag av oppfinnelsen

[0005]Oppfinnelsen tilveiebringer en fremgangsmåte for fremstilling av verbascoside og en fremgangsmåte for dens anvendelse for å fremme hudlipidproduksjon.

Forberedelsesmetoden gjelder verbascoside beregnet på å støtte den komplette hudbarriere-reparasjonssekvensen av epidermal cellefornyelse → forbedrede intercellulære forbindelser → lipid-matrise-påfyll → hyaluronsyresyntese → sårheling.

Den løser det tekniske problemet med å gi en ny kjerneaktiv ingrediens med multi-target-effekter for hudpleie eller aktuelle produkter.

Verbascoside er beskrevet som å ha fordelen av å virke på tvers av hele hudbarriere-reparasjonskjeden, med effekter som er overlegne i forhold til eksisterende enkeltmål-hudpleieingredienser, slik som ingredienser som kun fremmer hyaluronsyresyntese, fremmer kun celleproliferasjon eller gir fuktighet alene.

[0006]For å oppnå de foregående formål, bruker oppfinnelsen følgende tekniske løsning.

[0007]En fremgangsmåte for fremstilling av verbascoside omfatter følgende trinn.

[0008]Velg de tørkede kjøttfulle stilkene til Orobanchaceae-planteneCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, ellerCistanche salsa.

Etter blanchering, tørking og pulverisering, ekstraher materialet under tilbakeløp med en 50 %–80 % vandig etanolløsning to til fire ganger i en til tre timer hver gang.

Kombiner ekstraktene og konsentrer dem under redusert trykk til det ikke er etanollukt igjen, for derved å oppnå en konsentrert løsning.

[0009]Før den konsentrerte løsningen gjennom en AB-8 makroporøs adsorpsjonsharpikskolonne.

Eluer sekvensielt med avionisert vann og en 30 %–50 % vandig etanolløsning for å fjerne urenheter, etterfulgt av en 60 %–90 % vandig etanolløsning for å eluere målbestanddelene.

Samle opp eluatet og konsentrer det under redusert trykk.

Rens konsentratet ved silikagelkolonnekromatografi med kloroform-metanol i et volumforhold fra 5:1 til 2:1 som elueringsmiddel.

Samle målfraksjonene, konsentrer dem under redusert trykk og frysetørk dem for å oppnå renset verbascoside med en renhet på minst 98 %.

[0010]Eventuelt varierer forholdet mellom materiale og løsningsmiddel under tilbakeløpsekstraksjon fra 1:10 til 1:20, uttrykt i g/ml, og ekstraksjonstemperaturen varierer fra 60 grader til 80 grader.

Oversetterens notat: Kilden sier i tillegg at dette forholdet betyr "1 g råmateriale tilsettes 1 mL løsemiddel." Denne uttalelsen er i strid med det spesifiserte området 1:10–1:20, som tilsvarer 10–20 ml løsemiddel per gram råmateriale.

[0011]Valgfritt varierer diameter-til-høyde-forholdet til AB-8 makroporøs adsorpsjonsharpikskolonnen fra 1:8 til 1:15, der forholdet er kolonnediameteren, d, til kolonnehøyden, h. Elueringsstrømningshastigheten varierer fra 1 til 3 BV/t.

[0012]Eventuelt omfatter frysetørkingsforholdene en temperatur som varierer fra -40 grader til -50 grader, et vakuumtrykk som varierer fra 10 til 30 Pa, og en tørketid som varierer fra 12 til 24 timer.

[0013]En metode for å påføre verbascoside for å fremme hudlipidproduksjon er gitt som følger.

[0014]Tilsett verbascoside til en aktuell produktbase ved en forhåndsbestemt massefraksjon og rør jevnt for å produsere et ferdig produkt.

Påfør det ferdige produktet på hudoverflaten en eller to ganger daglig.

Gjennom penetrering virker verbascoside på epidermale HaCaT-celler for å fremme celleproliferasjon og styrke tette forbindelser.

Samtidig oppregulerer den gen- og proteinekspresjonen til ACC , FASN og N-SMase, øker fettsyresyntaseaktiviteten, oppregulerer HAS2, HAS3 og CD44 og øker hyaluronsyreinnholdet.

Fortsett bruken i én til fire uker for å oppnå generell forbedring av hudbarrieren.

[0015]Eventuelt varierer massefraksjonen av verbascoside i det aktuelle produktet fra 0,01 % til 5,0 %.

[0016]Bruk eventuelt 0,1–0,5 g av det ferdige produktet per påføring og masser forsiktig i ett til tre minutter etter påføring for å fremme absorpsjon.

[0017]Eventuelt er det aktuelle produktet en medisinsk bandasje, et reparasjonsprodukt etter prosedyren, et tilleggsbehandlingsprodukt for atopisk dermatitt, et hudpleieprodukt spesielt beregnet på sensitiv hud, eller et intensivt fuktighetsgivende og reparerende hudpleieprodukt.

[0018]Eventuelt kan hjelpestoffer også tilsettes under påføring av verbascoside.

[0019]Videre er hjelpestoffet valgt fra et fuktighetsbevarende middel, et emulgeringsmiddel, et konserveringsmiddel, en duft eller et beroligende middel.

Doseringsformen av den hjelpestoffholdige sammensetningen velges fra en lotion, en krem, en gel, et serum eller en arkmaskeløsning.

 

Fordelaktige effekter av oppfinnelsen

[0020]De fordelaktige virkningene av oppfinnelsen er som følger.

[0021]Oppfinnelsen viser at verbascoside har kjerneaktiviteter for å fremme hudlipid- og hyaluronsyreproduksjon.

Det kan også fremme hudcelleproliferasjon, styrke intercellulære stramme koblinger og akselerere sårheling, og danner en lukket sløyfemekanisme for å "fremme celleproliferasjon → stabilisere intercellulære forbindelser → forbedre lipid- og hyaluronsyreproduksjon → akselerere reparasjon og helbredelse."

Sammenlignet med kjent teknikk er oppfinnelsen beskrevet som å ha følgende fordeler.

[0022]Verbascoside er en naturlig planteavledet aktiv ingrediens med et høyt sikkerhetsnivå og klart definert farmakologisk aktivitet, som unngår potensiell hudirritasjonsrisiko forbundet med kjemisk syntetiserte ingredienser.

Redaksjonell kvalifikasjon: Dette er kildens sikkerhetspåstand, ikke en konklusjon som kun er etablert av botanisk opprinnelse.

[0023]Forberedelseseffektiviteten og utbyttet av verbascoside er forbedret.

[0024]Verbascoside virker på et omfattende utvalg av mål, og regulerer samtidig flere nøkkelprosesser, inkludert celleproliferasjon, tight-junction proteinekspresjon, lipidsyntese, hyaluronsyreproduksjon og sårheling.

Det forbedrer derved hudbarrierefunksjonen på en integrert måte, med effekter beskrevet som overlegne i forhold til enkeltmålingredienser.

[0025]Dens bruksområder er brede, inkludert medisinsk reparasjon, tilleggsbehandling av hudsykdommer, sensitiv hudpleie og daglig fuktighetsgivende og reparasjon, som møter hudhelsebehovene til forskjellige populasjoner.

 

Kort beskrivelse av tegningene

[0026]For å forklare de tekniske løsningene av utførelsesformene av oppfinnelsen eller tidligere kjent teknikk mer tydelig, er tegningene som kreves for å beskrive utførelsesformene eller kjent teknikk kort introdusert nedenfor.

Tegningene beskrevet nedenfor representerer kun visse utførelsesformer av oppfinnelsen. En person med vanlig fagkunnskap kan hente andre tegninger fra dem uten kreativ innsats.

[0027]Figur 1 er et skjematisk flytskjema over fremstillingsmetoden ifølge oppfinnelsen.

[0028]Figur 2 viser HaCaT-cellelevedyktighetsdata.

[0029]Figur 3 viser aktivitetsdata for fettsyresyntase.

[0030]Figur 4 viser hyaluronsyreinnholdsdata.

[0031]Figur 5 viser HaCaT-cellelevedyktighetsdata for oppfinnelsen.

[0032]Figur 6 viser fettsyresyntaseaktivitetsdata for oppfinnelsen.

[0033]Figur 7 viser uttrykket av gener assosiert med fettsyresyntese.

[0034]Figur 8 viser uttrykket av proteiner assosiert med fettsyresyntese.

[0035]Figur 9 viser Western blot-resultater assosiert med fettsyresyntese.

[0036]Figur 10 viser hyaluronsyreinnholdsdata.

[0037]Figur 11 viser ekspresjonen av gener assosiert med hyaluronsyresyntese.

[0038]Figur 12 viser uttrykket av proteiner assosiert med hyaluronsyresyntese.

[0039]Figur 13 viser Western blot-resultater assosiert med hyaluronsyre.

[0040]Figur 14 viser claudin-1 ekspresjonsnivåer.

[0041]Figur 15 viser okcludinekspresjonsnivåer.

[0042]Figur 16 viser sårlukkingsrater.

[0043]Figur 17 viser bilder fra celleskrapeanalysen.

[0044]Figur 18 viser en evaluering av den fuktighetsgivende ytelsen til forskjellige prøver.

 

Detaljert beskrivelse av utførelsesformene

[0045]Utførelsesformene av søknaden er beskrevet i detalj nedenfor med henvisning til de medfølgende tegninger.

Eksempel 1: Fremstilling av renset Verbascoside

[0046]Eksempel 1.

[0047]Som vist i figur 1, gir dette eksemplet en fremgangsmåte for fremstilling av verbascoside, forkortet som Ver, som omfatter følgende trinn.

[0048]Velg de tørkede kjøttfulle stilkene avCistanche deserticolaellerCistanche tubulosa, begge tilhører familien Orobanchaceae.

Skjær materialet i skiver, blancher det i kokende vann i 10–25 minutter, og ovnstørk det ved 40 grader –60 grader, og øker verbascoside-innholdet mer enn fire ganger.

 

 

Note:* kontra tom kontrollgruppe, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Etter pulverisering, ekstraher materialet under tilbakeløp med en 50 %–80 % vandig etanolløsning to til fire ganger i en til tre timer hver gang.

Kombiner ekstraktene og konsentrer dem under redusert trykk til det ikke er etanollukt igjen, for derved å oppnå en konsentrert løsning.

 

[0049]Før den konsentrerte løsningen gjennom en AB-8 makroporøs adsorpsjonsharpikskolonne.

Eluer sekvensielt med avionisert vann og en 30 %–50 % vandig etanolløsning for å fjerne urenheter, etterfulgt av en 60 %–90 % vandig etanolløsning for å eluere målbestanddelene.

Samle opp eluatet og konsentrer det under redusert trykk.

Rens den ved silikagel-kolonnekromatografi med kloroform-metanol i et volumforhold fra 5:1 til 2:1 som elueringsmiddel.

Samle målfraksjonene, konsentrer dem under redusert trykk og frysetørk dem for å oppnå renset verbascoside med en renhet på minst 98 %.

[0050]Nærmere bestemt varierer forholdet mellom materiale og løsningsmiddel under tilbakeløpsekstraksjon fra 1:10 til 1:20, og ekstraksjonstemperaturen varierer fra 60 grader til 80 grader.

[0051]Diameter-til-høydeforholdet til den makroporøse adsorpsjonsharpikskolonnen AB-8 varierer fra 1:8 til 1:15, og elueringsstrømningshastigheten varierer fra 1 til 3 BV/t.

[0052]Frysetørkingsforholdene omfatter en temperatur som varierer fra -40 grader til -50 grader, et vakuumtrykk som varierer fra 10 til 30 Pa, og en tørketid som varierer fra 12 til 24 timer.

 

Tabell 2. Sammendrag av bioaktivitet av ulike prøver

Indeks	Tom kontroll	Positiv kontroll	CTE	Ech	Ver
Cellelevedyktighet (%)	100 ± 8.347	/	122.052 ± 8.051*	117.868 ± 7.941*	128.894 ± 9.528*
FAS-aktivitet (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	2.069 ± 0.27	9.799 ± 1.356*	10.4 ± 0.697*
HA-innhold (ng/mL)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	21.644 ± 2.037*	13.517 ± 1.653*	18.486 ± 1.341*
Claudin-1 uttrykk (pg/ml)	414.58 ± 25.05	/	505.556 ± 20.518*	478.937 ± 12.419*	554.057 ± 22.106*
Okkludinuttrykk (pg/mL)	3.287 ± 0.683	/	4.285 ± 0.575	4.666 ± 0.582*	7.258 ± 0.774*
24 timers sårhelingshastighet (%)	30.581 ± 1.308	70.075 ± 1.781*	40.762 ± 9.68	37.102 ± 7.038	45.173 ± 5.508*
48 timers sårhelingshastighet (%)	55.458 ± 6.674	87.545 ± 3.155*	76.47 ± 2.684*	67.883 ± 5.678*	76.704 ± 4.8*

Note:* kontra tom kontrollgruppe, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Eksempel 2: Fremstilling av et Cistanche-polysakkaridekstrakt

[0053]Eksempel 2.

[0054]Ekstraher Cistanche to ganger under oppvarmet tilbakeløp med 20 ganger og 15 ganger vann i henholdsvis tre timer og to timer.

Filtrer, kombiner filtratene og konsentrer ved 80 grader –90 grader.

Tilsett 215 ml 95 % etanol for å oppnå en endelig etanolkonsentrasjon på 80 %, og la stå over natten ved 4 grader.

Samle bunnfallet enten ved filtrering, beholde filterkaken eller ved sentrifugering ved 4000 rpm i 10 minutter.

Vask bunnfallet tre ganger med absolutt etanol og tørk det ved 50 grader for å oppnå et Cistanche-polysakkaridekstrakt, betegnet POL.

 

Eksempel 3: Fremstilling av et fenyletanoidglykosidekstrakt

[0055]Eksempel 3.

[0056]Ekstraher Cistanche to ganger under oppvarmet tilbakeløp med 20 ganger og 15 ganger vann i henholdsvis tre timer og to timer.

Filtrer, kombiner filtratene og konsentrer ved 80 grader –90 grader.

Tilsett 215 ml 95 % etanol for å oppnå en endelig etanolkonsentrasjon på 80 %, og la stå over natten ved 4 grader.

Samle filtratet ved filtrering eller supernatanten ved sentrifugering ved 4000 rpm i 10 minutter.

Konsentrer og tørk den for å oppnå et Cistanche-fenyletanoidglykosidekstrakt, betegnet POLS.

Testing viste et echinakosidinnhold på 21,8 % og et verbascosidinnhold på 1,2 %.

 

Eksempel 4: Fremstilling av ekstrakt RE1

[0057]Eksempel 4.

[0058]BløtleggCistanche deserticolai seks ganger mengden av 52 % etanol ved romtemperatur i 10 dager.

Filtrer og behold planterestene.

Etter tørking ekstraheres resten én gang under tilbakeløp med seks ganger mengden av 95 % etanol i to timer.

Filtrer, kombiner filtratene, konsentrer ved 60 grader og tørk for å oppnå et ekstrakt av Cistanche-fenyletanoidglykosider og deres derivater, betegnet RE1.

Ekstraktet inneholder bestanddeler inkludert echinacoside, verbascoside, isoverbascoside og 2'-acetylverbascoside.

 

Eksempel 5: Fremstilling av ekstrakt RE2

[0059]Eksempel 5.

[0060]UtdragCistanche tubulosato ganger med 75 % etanol i én time hver gang.

Filtrer og behold resten.

Etter tørking ekstraheres resten én gang under tilbakeløp med seks ganger mengden av 95 % etanol i to timer.

Filtrer, kombiner filtratene, konsentrer ved 60 grader og tørk for å oppnå et ekstrakt av Cistanche-fenyletanoidglykosider og deres derivater, betegnet RE2.

Ekstraktet inneholder bestanddeler inkludert echinacoside, verbascoside, isoverbascoside og 2'-acetylverbascoside.

 

Eksempel 6: Fremstilling av et totalt fenyletanoidglykosidekstrakt

[0061]Eksempel 6.

[0062]Skjær Cistanche i skiver og ekstraher to ganger med en 75 % etanolløsning i 1,5 time hver gang.

Kombiner ekstraktene, konsentrer og tørk for å oppnå et Cistanche-fenyletanoidglykosidekstrakt, kalt CTE.

Testing viste et echinakosidinnhold på 22,6 % og et verbascosidinnhold på 4,5 %.

 

Eksempel 7: Påføringsmetode

[0063]Eksempel 7.

[0064]Basert på eksempel 1 gir dette eksemplet en påføringsmetode der verbascoside utøver effekter over hele hudbarriere-reparasjonssekvensen av epidermal cellefornyelse → forbedrede intercellulære forbindelser → lipid-matrise-påfyll → hyaluronsyresyntese → sårheling.

Den spesifikke påføringsmetoden er som følger.

[0065]Tilsett verbascoside til en aktuell produktbase ved en forhåndsbestemt massefraksjon og rør jevnt for å produsere et ferdig produkt.

Påfør det ferdige produktet på hudoverflaten en eller to ganger daglig.

Gjennom penetrering virker verbascoside på epidermale HaCaT-celler for å fremme celleproliferasjon og styrke tette forbindelser.

Samtidig oppregulerer den gen- og proteinekspresjonen til ACC , FASN og N-SMase, øker fettsyresyntaseaktiviteten, oppregulerer HAS2, HAS3 og CD44 og øker hyaluronsyreinnholdet.

Fortsett bruken i én til fire uker for å oppnå generell forbedring av hudbarrieren.

[0066]Nærmere bestemt varierer massefraksjonen av verbascoside i det aktuelle produktet fra 0,01 % til 5,0 %.

[0067]Bruk 0,1–0,5 g av det ferdige produktet per påføring og masser forsiktig i ett til tre minutter etter påføring for å fremme absorpsjon.

[0068]Det aktuelle produktet er en medisinsk bandasje, et reparasjonsprodukt etter prosedyre, et tilleggsbehandlingsprodukt for atopisk dermatitt, et hudpleieprodukt spesielt beregnet på sensitiv hud, eller et intensivt fuktighetsgivende og reparerende hudpleieprodukt.

[0069]Hjelpestoffer kan også tilsettes under påføring av verbascoside.

Videre er hjelpestoffet valgt fra et fuktighetsbevarende middel, et emulgeringsmiddel, et konserveringsmiddel, en duft eller et beroligende middel.

Doseringsformen av den hjelpestoffholdige sammensetningen velges fra en lotion, en krem, en gel, et serum eller en arkmaskeløsning.

 

Eksempel 8: Eksperimentelle materialer og utstyr

[0070]Eksempel 8.

[0071]Basert på eksemplene 1 og 7 er de eksperimentelle materialene brukt i oppfinnelsen som følger.

[0072]De eksperimentelle cellene var udødeliggjorte humane epidermale HaCaT-celler kjøpt fra Shanghai Yaji Biotechnology.

Cellene ble dyrket i DMEM med høy glukose supplert med 10 % føtalt bovint serum og 1 % penicillin-streptomycin ved 37 grader i en atmosfære som inneholder 5 % karbondioksid ved mettet fuktighet.

[0073]De eksperimentelle materialene var:

Echinacoside, forkortet Ech, fra National Institutes for Food and Drug Control, Kina.

Fetalt bovint serum, FBS, fra EXCELL.

Høyglukose DMEM fra Gibco.

0,25 % trypsin-EDTA fra Gibco.

Fosfatbufret saltvannspulver fra Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology.

CCK-8 Celleproliferasjons-/cytotoksisitetsanalysesett fra TransGen Biotech.

Human Occludin, OCLN, ELISA Kit fra Wuhan CUSABIO.

Human Claudin-1, CLDN1, ELISA Kit fra Wuhan CUSABIO.

Fatty Acid Synthase, FAS, Activity Assay Kit fra Solarbio.

Human Hyaluronic Acid ELISA Kit fra Wuhan CUSABIO.

Rekombinant humant EGF-protein, bærerfritt, fra R&D Systems.

DEPC fra Amresco.

M5 HiClear DL2000 DNA-markør fra Mei5 Biotechnology.

TRIzol-reagens fra Ambion.

5X Alt-i-ett RT MasterMix fra abm.

EvaGreen Express 2X qPCR MasterMix–Low ROX fra abm.

Easy II Protein Quantitative Kit, BCA, fra TransGen Biotech.

RIPA lyseringsbuffer fra Boster.

Proteasehemmer fra Boster.

Geit Anti-Rabbit IgG H&L, HRP, fra Abcam.

Goat Anti-Mouse IgG H&L, HRP, fra Abcam.

Forhåndsfarget proteinmarkør fra Solarbio.

-Mercaptoethanol fra Amresco.

PVDF-overføringsmembran, 0,45 μm, fra Millipore.

Glycin fra Sangon Biotech.

Glyserol fra Sangon Biotech.

SuperSignal West Pico PLUS fra Thermo Fisher.

Beta-Actin Loading Control Antibody, Mouse Monoclonal, fra Sino Biological.

ACC1 Antistoff fra Affinity.

FASN Antistoff fra Affinity.

SMPD2-antistoff fra Affinity.

Hyaluronan Synthase 2 Antibody, HAS2, fra Affinity.

HAS3-antistoff fra Affinity.

CD44-antistoff fra Affinity.

[0074]Det eksperimentelle utstyret besto av:

SmartCell HF-90 karbondioksidcellekulturinkubator, Shanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd. [上海力康仪器有限公司].

HF1200LC biologisk sikkerhetsskap fra samme produsent.

DK-80 benktopp lavhastighets sentrifuge, Shanghai Feige Instrument Co., Ltd.

Heraeus Multifuge X1R høyhastighets kjølt sentrifuge, Thermo Fisher Scientific.

xMark mikroplatespektrofotometer, Bio-Rad.

GL-88B virvelmikser, Haimen Qilin-Bell Instrument Manufacturing Co., Ltd.

Modell 2500 gel bildesystem, Shanghai Tianneng.

MyCycler Thermal Cycler PCR-instrument, Bio-Rad.

7500 Fast sanntids PCR-instrument, ABI.

Chemiscope 3000 kjemiluminescensbildesystem, Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd.

Mini-PROTEAN Tetra-system proteinoverføringsapparat, Bio-Rad.

DYCZ-24DN elektroforeseapparat, Beijing Liuyi.

Oversetterens merknad: Produsent- og instrumentbeskrivelsene ovenfor følger den medfølgende kilden; katalogdetaljer ble ikke uavhengig verifisert.

 

 

 

Eksempel 9: Eksperimentelle metoder

[0075]Eksempel 9.

[0076]Basert på eksemplene 1–8 var de eksperimentelle metodene brukt i oppfinnelsen som følger.

CCK-8 Assay for celleproliferasjon

[0077]Forbered en enkeltcellesuspensjon av HaCaT-celler i komplett kulturmedium med en tetthet på 5×1045 x 10^45×104 celler/ml.

Seed cellene i en 96-brønns plate med 100 μL per brønn.

Etter å ha latt cellene feste seg i 24 timer ved 37 grader under 5 % karbondioksid, kast kulturmediet og administrer de forskjellige teststoffene. Inkluder en tom kontrollgruppe, med n=5n=5n=5.

Etter 48 timers behandling, kast mediet og tilsett 100 μL nylaget 10 % CCK-8-løsning til hver brønn.

Fortsett inkubasjonen i cellekulturinkubatoren i én time, og mål deretter den optiske tettheten ved 450 nm ved hjelp av en mikroplateleser.

Fettsyresyntaseaktivitetsanalyse

[0078]Forbered en enkeltcellesuspensjon av HaCaT-celler i komplett kulturmedium med en tetthet på 5×1045 x 10^45×104 celler/mL og så cellene i kulturkolber.

Etter å ha latt cellene feste seg i 24 timer ved 37 grader under 5 % karbondioksid, kast kulturmediet og administrer de forskjellige teststoffene.

Inkluder en tom kontrollgruppe og en positiv kontrollgruppe behandlet med rekombinant human epidermal vekstfaktor, rhEGF, ved 20 ng/mL, med n=3n=3n=3.

Etter 48 timers behandling, samle cellene og mål fettsyresyntaseaktivitet i henhold til instruksjonene for analysesettet.

Hyaluronsyreinnholdsanalyse

[0079]Forbered en enkeltcellesuspensjon av HaCaT-celler i komplett kulturmedium med en tetthet på 5×1045 x 10^45×104 celler/mL og så cellene i kulturkolber.

Etter å ha latt cellene feste seg i 24 timer ved 37 grader under 5 % karbondioksid, kast kulturmediet og administrer de forskjellige teststoffene.

Inkluder en tom kontrollgruppe og en positiv kontrollgruppe behandlet med rhEGF ved 20 ng/mL, med n=3n=3n=3.

Etter 48 timers behandling, samle cellekultursupernatantene og mål hyaluronsyreinnholdet i henhold til instruksjonene for analysesettet.

Kvantitativ omvendt transkripsjon PCR

[0080]Forbered en enkeltcellesuspensjon av HaCaT-celler i komplett kulturmedium med en tetthet på 5×1045 x 10^45×104 celler/ml og så cellene i seks-brønns plater.

Etter å ha latt cellene feste seg i 24 timer ved 37 grader under 5 % karbondioksid, kast kulturmediet og administrer de forskjellige teststoffene.

Inkluder en tom kontrollgruppe og en positiv kontrollgruppe behandlet med rhEGF ved 20 ng/mL, med n=3n=3n=3.

Etter 48 timers behandling, kast supernatanten og tilsett 1 mL TRIzol til hver brønn for å løsne og lysere cellene, og sikre at reagensen dekker cellelaget.

Omrør kulturkaret gjentatte ganger til cellene frigjøres, og overfør materialet til et 1,5 ml mikrosentrifugerør.

Trekk ut totalt RNA og bruk qRT-PCR for å bestemme uttrykket av ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 og CD44.

Western Blotting

[0081]Forbered en enkeltcellesuspensjon av HaCaT-celler i komplett kulturmedium med en tetthet på 5×1045 x 10^45×104 celler/mL og så cellene i kulturkolber.

Etter å ha latt cellene feste seg i 24 timer ved 37 grader under 5 % karbondioksid, kast kulturmediet og administrer de forskjellige teststoffene.

Inkluder en tom kontrollgruppe og en positiv kontrollgruppe behandlet med rhEGF ved 20 ng/mL, med n=3n=3n=3.

Etter 48 timers behandling, samle cellene.

Trekk ut totalt protein og bruk Western blotting for å bestemme uttrykket av ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 og CD44.

Vurdering av Tight-Junction Protein Expression

[0082]Forbered en enkeltcellesuspensjon av HaCaT-celler i komplett kulturmedium med en tetthet på 5×1045 x 10^45×104 celler/mL og så cellene i kulturkolber.

Etter å ha latt cellene feste seg i 24 timer ved 37 grader under 5 % karbondioksid, kast kulturmediet og administrer de forskjellige teststoffene.

Ta med en tom kontrollgruppe med n=3n ​​= 3n=3.

Etter 48 timers behandling, samle cellelysatene og mål occludin og claudin-1 ved å bruke ELISA i henhold til settets instruksjoner.

Cell Scratch Assay

[0083]Forbered en enkeltcellesuspensjon av HaCaT-celler i komplett kulturmedium med en tetthet på 5×1055 x 10^55×105 celler/ml.

Seed 500 μL per brønn i en 24-brønns plate.

Etter cellefesting, administrer behandlingene, del cellene inn i en blank kontrollgruppe, en positiv kontrollgruppe behandlet med føtalt bovint serum og testsubstansgrupper.

Behandle i 48 timer.

Etter behandlingen lager du forsiktig en rett ripe med en pipettespiss.

Erstatt mediet med serumfritt medium i alle grupper unntatt den positive kontrollgruppen.

Fotografer de ripede områdene ved 0, 24 og 48 timer.

Bruk ImageJ til å beregne ripeområdet og vurdere cellemigrasjonskapasiteten.

 

Eksempel 10: Fuktighetsbevaringsvurdering

[0084]Eksempel 10.

[0085]En in vitro gravimetrisk metode ble brukt for å evaluere den fuktighetsgivende ytelsen til serum som inneholder Ver, Ech eller glyserin.

Vei opp spesifiserte mengder av forbehandlet prøve 1, som inneholder 2 % Ver; Prøve 2, inneholdende 2% Ech; og den positive kontrollen, inneholdende 5 % glyserin.

Oppbevar prøvene i et kammer med konstant temperatur og konstant fuktighet ved 25 grader og 50 % relativ fuktighet.

Vei prøvene på forskjellige tidspunkt og plott fuktighetsbevarende kurver.

[0086]Fuktighetsbevaringsgraden beregnes som:

Fuktighetsretensjon (%)=M2−M0M1−M0×100%\\text{Fuktighetsretensjonsgrad (\\%)}=\\frac{M_2-M_0}{M_1-M_0}\\ ganger100\\%fuktighetsretensjon (%)=M1​−M0​M2​−M0​​×100 %

[0087]Hvor:

[0088]M0M_0M0​ er massen til den tomme platen, i gram.

[0089]M1M_1M1​ er massen til glassplaten etter prøvetilsetning, i gram.

[0090]M2M_2M2​ er massen etter lagring i en eksikkator i flere timer, i gram.

Oversetterens notat: Avsnitt [0085] beskriver lagring i et kammer med kontrollert temperatur og kontrollert fuktighet, mens [0090] refererer til en ekssikkator. Begge beskrivelsene er beholdt fra kilden.

 

Eksperimentelle resultater

[0091]De eksperimentelle resultatene av dette eksemplet er som følger.

Effekter på HaCaT-celleproliferasjon

[0092]Som vist i figur 2, hadde forskjellige Cistanche-ekstrakter forskjellige effekter på HaCaT-cellelevedyktighet.

Ver og POL økte cellelevedyktigheten betydelig, med P<0.05P < 0.05P<0.05, and Ver produced the highest viability.

Effekter på fettsyresyntaseaktivitet

[0093]Som vist i figur 3 er intercellulære lipider i stratum corneum kjerne-"mørtel"-komponenten i hudens "murstein-og-mørtel"-struktur.

Ceramider, kolesterol og frie fettsyrer danner en tett lamellær tolagsstruktur i spesifikke proporsjoner.

Å opprettholde normal lipidsyntese kan forsterke denne strukturen, forhindre vanntap, motstå ytre skader, opprettholde balansen i hudmikrobiomet og fremme selvreparasjon.

Det kan dermed adressere tørrhet, følsomhet og redusert hudforsvarskapasitet ved kilden.

[0094]Fettsyresyntase er beskrevet som et kjernehastighetsbegrensende enzym og en sentral forsyningsmotor som regulerer hudens lipidsyntese.

Dens hovedfunksjon er å katalysere syntesen av palmitinsyre, C16:0, fra acetyl-CoA og malonyl-CoA. Palmitinsyre er beskrevet som den viktigste endogene langkjedede mettede fettsyren i huden.

Palmitinsyre har to funksjoner.

For det første, som en grunnleggende strukturell byggestein, brukes den direkte i syntesen av stratum-corneum-barrierelipider, inkludert ceramider og frie fettsyrer, og gir det materielle grunnlaget for lamellær tolagsdannelse.

For det andre, som et viktig forløper- og signalmolekyl, kan det videreprosesseres av nedstrøms elongaser, slik som ELOVL1, til svært langkjedede fettsyrer. Disse karakteristiske fettsyrene er nødvendige for barriereintegritet.

Følgelig bestemmer fettsyresyntaseaktivitet direkte tilgangen på råvarer tilgjengelig for hudens egen produksjon av barrierelipider.

Oppregulering av funksjonen er et første og kritisk skritt for å fremme epidermal lipidsyntese og derved reparere og styrke den fysiske hudbarrieren, og til slutt støtte oppbevaring av fuktighet og forsvar.

[0095]Dataene viste at den positive kontrollen rhEGF og Ver økte fettsyresyntaseaktiviteten signifikant, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS, RE1 og RE2 økte ikke fettsyresyntaseaktiviteten.

Although RE2 increased fatty acid synthase activity, the difference was not statistically significant, with P>0.05P > 0.05P>0.05.

Oversetterens notat: Kilden inkluderer først RE2 blant materialer som ikke økte aktiviteten, og rapporterer deretter en ikke-signifikant økning for RE2. Denne inkonsekvensen beholdes.

 

Effekter på hyaluronsyreinnholdet

[0096]Som vist i figur 4 er hyaluronsyre et naturlig forekommende polysakkarid i huden med en sterk vannbindende kapasitet, beskrevet i kilden som hovedsakelig tilstede i dermis og stratum corneum.

Økende hyaluronsyreinnhold kan holde på fuktighet på dypere nivåer, opprettholde sunn hudstruktur, gi antioksidanter og antiinflammatoriske effekter, fremme sårheling og reparasjon, og forbedre stratum-corneum-funksjonen.

Disse effektene beskrives som å produsere hydrering, fylde og spenst innenfra.

[0097]Dataene viste at den positive kontrollen rhEGF, Ver og RE2 økte hyaluronsyreinnholdet signifikant, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS, and RE1 did not increase hyaluronic acid content.

 

Sammenligning av ekstraktklasser og renset verbascoside

[0098]Cistanche inneholder hovedsakelig fenyletanoidglykosider og polysakkarider.

Aktivitetene til polysakkaridekstraktet, POL; fenyletanoidglykosidekstrakter, POLS, RE1 og RE2; og verbascoside, Ver, ble derfor sammenlignet.

Resultatene i figurene 2–4 indikerer at Cistanche-fenyletanoidglykosidekstrakter fremstilt ved forskjellige metoder og den individuelle forbindelsen viste forskjellige aktiviteter for å fremme HaCaT-celleproliferasjon, øke fettsyresyntaseaktiviteten og øke hyaluronsyreinnholdet.

Bare Ver viste aktivitet i alle tre områdene, som oppsummert i tabell 1.

[0099]–[0101] Disse avsnittsnumrene og innholdet i Tabell 1 var ikke til stede i den medfølgende kilden. Ingen oversettelse eller rekonstruksjon er mulig for det manglende materialet.

Tabell 1. Sammendrag av bioaktivitet av ulike prøver

Indeks	Tom kontroll	Positiv kontroll	POL	POLS	RE1	RE2	Ver
Cellelevedyktighet (%)	100 ± 7.008	/	119.008 ± 7.379*	105.312 ± 6.494	85.851 ± 8.381	95.234 ± 10.065	128.894 ± 9.528*
FAS-aktivitet (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	3.786 ± 1.715	2.399 ± 0.717	2.145 ± 0.889	9.34 ± 10.756	10.63 ± 2.228*
HA-innhold (ng/mL)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	6.881 ± 2.411	6.321 ± 1.021	6.53 ± 1.342	16 ± 2.531*	17.86 ± 3.27*

 

Ytterligere sammenligning av CTE, Echinacoside og Verbascoside

[0102]Som vist i figur 5 inkluderer de viktigste fenyletanoidglykosidene i Cistanche echinacoside og verbascoside.

Effektene av Cistanche total phenylethanoid glycoside ekstrakt, CTE, som inneholder 22,6% echinacoside og 4,5% verbascoside; echinacoside, Ech; og verbascoside, Ver, på HaCaT-celleproliferasjon ble derfor sammenlignet videre.

[0103]Dataene viste at CTE, Ech og Ver alle fremmet HaCaT-celleproliferasjon.

CTE og Ver ga de sterkeste effektene, noe som tyder på beskyttende effekter på hudceller.

Ytterligere effekter på fettsyresyntaseaktivitet

[0104]Som vist i figur 6 var effektene på fettsyresyntaseaktivitet som følger.

[0105]Dataene viste at den positive kontrollen rhEGF, Ech og Ver økte fettsyresyntaseaktiviteten signifikant, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

CTE økte ikke fettsyresyntaseaktiviteten.

 

Uttrykk av gener og proteiner assosiert med fettsyresyntese

[0106]Figurene 7–9 viser effektene på uttrykket av gener og proteiner knyttet til fettsyresyntese.

[0107]ACC og FASN er beskrevet som det hastighetsbegrensende enzymet og kjernemotoren til lipidanabolisme.

Sammen katalyserer de dannelsen av langkjedede fettsyrer, inkludert palmitinsyre, og gir essensielle råvarer for syntesen av viktige barrierelipider som ceramider.

N-SMase er en nøkkelinitiator for lipidnedbrytning og stresssignalering med en dobbel rolle.

Det aktiveres under skade og hydrolyserer sfingomyelin for å generere signalceramider, utløse betennelse og apoptose og undertrykke normal lipidsyntese.

I normale celler har den imidlertid en regulerende rolle i lipidmetabolismen.

[0108]Som vist i figur 7–9, indikerte qPCR- og Western blot-resultater at Ver, i likhet med rhEGF, signifikant oppregulerte genet og proteinekspresjonen til ACC , FASN og N-SMase, med P<0.05P < 0.05P<0.05, and the effects were comparable.

Resultatene indikerer at Ver oppregulerer ACC og FASN for å regulere cellulær lipidsyntese for membrankonstruksjon, energilagring eller sekresjon.

Samtidig kan oppregulering av N-SMase aktivere sfingolipid metabolsk syklus.

Ceramidene som produseres er ikke bare stresssignaler. Under normale fysiologiske forhold er de også viktige forløpere for syntesen av andre komplekse sfingolipider, slik som glykosfingolipider, eller for dynamisk membranremodellering.

Dermed forbedrer koordinert oppregulering av disse tre genene og proteinene den totale cellulær anabole aktiviteten og membranremodelleringskapasiteten.

 

Ytterligere effekter på hyaluronsyreinnholdet

[0109]Som vist i figur 10 indikerte dataene at rhEGF, CTE, Ech og Ver økte hyaluronsyreinnholdet betydelig, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

Effektrekkefølgen var CTE, etterfulgt av Ver, etterfulgt av Ech.

 

Uttrykk av gener og proteiner assosiert med hyaluronsyresyntese

[0110]Som vist i figur 11–13, danner HAS2, HAS3 og CD44 en "syntese–sensing–respons" tilbakemeldingssløyfe i hyaluronsyremetabolismen i HaCaT-celler.

HAS2 og HAS3 er de viktigste katalytiske syntesenzymene.

HAS2 produserer hovedsakelig hyaluronsyre med høy molekylvekt og er assosiert med å opprettholde hudens homeostase og anti-inflammatoriske effekter.

HAS3 har en tendens til å produsere hyaluronsyre med lavere molekylvekt og deltar mer direkte i prosesser inkludert cellemigrasjon og spredning.

CD44 er den viktigste celleoverflatereseptoren for hyaluronsyre.

Det medierer ikke bare intracellulær og ekstracellulær signaloverføring som involverer hyaluronsyre, men regulerer også dynamisk hyaluronsyre gjennom endocytose og resirkulering og regulerer i sin tur HAS2 og HAS3 uttrykk og aktivitet.

[0111]Som vist i figur 11–13, indikerte qPCR- og Western blot-resultater at Ver, i likhet med rhEGF, signifikant oppregulerte gen- og proteinekspresjonen til HAS2, HAS3 og CD44, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

De regulatoriske effektene av Ver på HAS2-, HAS3- og CD44-genuttrykk var større enn for rhEGF.

Resultatene indikerer at Ver regulerer HAS2, HAS3 og CD44 for å kontrollere den komplette hyaluronsyreprosessen "syntese–montering–signaloverføring", og bidrar til epidermal hydrering, reparasjon og barrierefunksjon.

Effekter på Tight-Junction Protein Expression

[0112]Å opprettholde hudlipid- og hyaluronsyreproduksjon er beskrevet som å gi grunnleggende, synergistisk støtte for og stabilisering av tight-junction-proteiner mellom HaCaT-celler.

Tilstrekkelige lipider lar keratinocytter danne komplette, organiserte intercellulære lipid-dobbeltlag.

Disse strukturene beskrives ikke bare som det fysiske rammeverket til barrieren, men også et stabilt, hydrofobt strukturelt miljø for sammenstilling og forankring av proteiner med tett kobling.

Samtidig bidrar den gunstige hydreringstilstanden som opprettholdes av hyaluronsyre til å sikre normal keratinocyttmetabolisme og signalering.

Gjennom veier som involverer reseptorer som CD44, regulerer hyaluronsyre også indirekte tight-junction proteinekspresjon og distribusjon.

Sammen gir lipider og hyaluronsyre det fysiske og biokjemiske grunnlaget som trengs for dannelse og vedlikehold av tette forbindelser fra de respektive perspektivene av strukturell stabilitet og mikromiljømessig homeostase.

De styrker dermed fysiske intercellulære forbindelser og generell barriereintegritet.

[0113]De foregående resultatene indikerte at Ver viste den sterkeste aktiviteten for å fremme hudlipid- og hyaluronsyreproduksjon.

Ytterligere undersøkelser av dens effekter på intercellulære tight junctions viste at CTE, Ech og Ver alle betydelig fremmet uttrykket av tight-junction proteinet claudin-1, med P<0.05P < 0.05P<0.05, as shown in Figure 14.

Som vist i figur 15, fremmet bare Ech og Ver signifikant okcludinekspresjon.

Effekten av Ver var betydelig større enn Ech, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

Dette var i samsvar med den sterkeste aktiviteten som tilskrives Ver for å fremme hudlipid- og hyaluronsyreproduksjon.

 

Effekter på sårheling

[0114]Som vist i figur 16–17, deltar HAS3 direkte i prosesser inkludert cellemigrasjon og spredning.

CD44 overfører informasjon fra hyaluronsyre til cellene og regulerer til slutt cellemigrasjon, proliferasjon og hydrering, og spiller en sentral rolle i sårheling, hudfuktighet og barrierehomeostase.

De foregående eksperimentene viste at verbascoside betydelig fremmet HAS3- og CD44-ekspresjon.

Dens evne til å fremme sårheling ble derfor undersøkt nærmere.

[0115]Som vist i figur 16–17 indikerte resultatene at CTE, Ech og Ver fremmet sårheling.

Imidlertid viste bare Ver en signifikant fremmende effekt etter 24 timer.

Den viste den sterkeste sårhelingsfremmende aktiviteten, i samsvar med dens betydelige promotering av HAS3-gen- og proteinuttrykk.

Redaksjonell kvalifikasjon: Den eksperimentelle metoden som leveres for dette resultatet er en celleskrapeanalyse. "Sårheling" er terminologien som brukes i kilden og skal ikke tolkes her som et demonstrert klinisk resultat.

 

Fuktighetsbevarende ytelse for formuleringene

[0116]Som vist i figur 18, ble prøvens fuktighetsbevarende kapasitet vurdert ut fra trendene i fuktighetsbevaringskurvene for å evaluere fuktighetsgivende ytelse for huden.

Dataene viste at fuktighetsretensjonskurven for prøve 1 var over den for prøve 2 og den positive kontrollen.

Under forhold på 25 grader og 50 % relativ fuktighet, hadde prøve 1 bedre fuktighetsgivende ytelse enn prøve 2 og 5 % glyserinkontroll, noe som indikerer den sterkeste fuktighetsgivende ytelsen.

Prøve 1 inneholdt Ver, og prøve 2 inneholdt Ech.

I følge kilden indikerer disse resultatene at, når den er inkorporert i produkter, har Ver bedre homogenitet og fuktighetsgivende aktivitet enn Ech, som oppsummert i tabell 2.

[0117]Tabell 2. Sammendrag av aktivitetene til ulike prøver.

Tabellinnholdet var ikke inkludert i den medfølgende kilden.

[0118]Merk: [Betydningssymbolet ble ikke gjengitt i den medfølgende teksten.] Sammenlignet med den tomme kontrollgruppen, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Overordnet tolkning presentert i avsløringen

[0119]De foregående resultatene indikerer at verbascoside viser enestående fuktighetsgivende aktivitet ved nøyaktig å aktivere en komplett, lukket sløyfe-reparasjonsmekanisme for hudbarriere.

Det virker først på basallaget for å akselerere epidermal cellefornyelse og ordnet differensiering betydelig, og gir tilstrekkelige cellulære byggeklosser for barrierekonstruksjon.

Det fremmer deretter styrkingen av tette koblinger og desmosomale strukturer mellom keratinocytter, forsterker fysisk forankring mellom celler og øker barrieretetthet og mekanisk styrke.

Samtidig aktiverer den effektivt nøkkelenzymer i lipidmetabolismen og fyller på den intercellulære lipidmatrisen, og fyller "mørtel"-mellomrommene mellom "klossene" for å forhindre vanntap.

Til slutt, ved å oppregulere uttrykket av hyaluronsyresyntase, øker det samtidig hyaluronsyreinnholdet i dermis og epidermis, og fanger opp og beholder betydelige mengder vann.

Dette danner en komplett funksjonell sløyfe som omfatter fornyelse ved kilden, strukturell forsterkning, matrisepåfylling og vannlagring.

Det kan derved oppnå en lukket sløyfesekvens av "fremme celleproliferasjon → styrke fysiske intercellulære forbindelser → fremme lipid- og hyaluronsyreproduksjon → fremme sårheling."

Kilden konkluderer med at det gir bedre påføringseffekter enn echinacoside fra Cistanche og det ofte brukte fuktighetsbevarende middelet glyserin og kan brukes som et hudbeskyttende middel i funksjonell hudpleie og aktuelle produkter.

[0120]De foregående beskrivelsene er kun spesifikke utførelsesformer av oppfinnelsen.

Oppfinnelsens beskyttelsesomfang er ikke begrenset til disse utførelsesformene.

Enhver endring eller erstatning som en fagmann på området lett kan tenke seg innenfor det tekniske omfanget som er beskrevet i oppfinnelsen, skal falle innenfor beskyttelsesomfanget til oppfinnelsen.

Følgelig skal beskyttelsesomfanget til oppfinnelsen bestemmes av kravene.