Effekt av cistanches Herba vandig ekstrakt på beintap hos ovariektomisert rotte

Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Haidong Liang 1,*, Fang Yu 2, Zhihong Tong 1 og Zaiguo Huang 3

1 Hands and feet microsurgery, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: tongzhih37@sina.cn

2 School of Medicine, Dalian University, Dalian 116033, China; E-Mail: yufangk7@sina.cn

3 Orthopedics Department, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: huangzg41@sina.com

Abstrakt:For å vurdere evnen til tradisjonell kinesisk medisin Cistanches Herba-ekstrakt (CHE) til å forhindre bentap i ovariektomisert (OVX) rotte, ble Cistanches Herba-ekstrakt (CHE) administrert intragastrisk til rottene. Hunnrotter ble bedøvet med pentobarbitalnatrium (40 mg kg-1, ip), og eggstokkene deres ble fjernet bilateralt. Rottene i den falske opererte gruppen ble bedøvet, laparotomier og suturert uten å fjerne eggstokkene. Etter 1 uke med restitusjon fra operasjonen ble OVX-rottene tilfeldig delt inn i tre grupper og oralt behandlet med H2O (OVX-gruppe) eller CHE (100 eller 200 mg kg-1 daglig) i 3 måneder. Den falske opererte gruppen (n=8) ble oralt behandlet med H2O. Etter 3 måneder ble den totale kroppens beinmineraltetthet (BMD), benmineralinnhold (BMC), benbiomekanisk indeks, blodmineralnivåer og antioksidantenzymer i blodet undersøkt i sham-opererte, ovariektomiserte og Cistanches Herba-ekstraktbehandlede rotter. Resultatene viste at Cistanches Herba-ekstraktbehandling signifikant doseavhengig forbedret beinmineraltetthet (BMD), benmineralinnhold (BMC), maksimal belastning, forskyvning ved maksimal belastning, stress ved maksimal belastning, belastning ved autopause, forskyvning ved automatisk pause , og stress ved automatisk pause, og aktivitet av antioksidantenzymer i blodet, reduserte Ca, Zn og Cu-nivåer i blodet sammenlignet med OVX-gruppen. Dette eksperimentet viser at administrering av Cistanches Herba-ekstrakt til ovariektomiserte rotter reverserer bentap og forhindrer osteoporose.

Nøkkelord:ovariektomi; rotte; bein; antioksidant; Cistanches Herba

Cistanches Herba

1. Introduksjon

Osteoporose er en aldringssykdom assosiert med bentap som ofte oppstår uten symptomer inntil mikroarkitektonisk forverring blir så betydelig at beinbrudd alltid oppstår på det punktet hvor en reduksjon i beinmassen er under det som kreves for beinintegritet. Osteoporose er av stor betydning i helsevesenet. Selv om de er redusert i masse, er beinene normale med hensyn til mineralisering, men histologisk er det en reduksjon i tykkelsen på cortex og antall og størrelse på trabeculae i det grove spongøse beinet [1–3].

Mange studier på denne sykdommen har blitt utført de siste årene. Akkumulerende data har indikert at tap av østrogen i overgangsalderen er en viktig bidragsyter til sykdommens patogenes fordi dette hormonet er en hovednegativ regulator av osteoklastaktivitet [4–6], og osteoklaster er hovedcellene som er ansvarlige for beinremodellering ved osteoporose. [7].

Postmenopausal osteoporose er den hyppigste metabolske beinsykdommen, den er karakterisert ved et raskt tap av mineralisert benvev, forstyrrelse av trabekulær arkitektur i beinet og endringer i de krystallinske egenskapene til mineralforekomster, som resulterer i strukturell svikt (fraktur) av steder rike på spongøst bein, som ryggvirvlene, hoften og distale underarmen [8–11]. Østrogenmangel regnes som den viktigste determinanten for bentap hos postmenopausale kvinner. Ovariektomiserte rotter og hunder har vært mye brukt i osteoporosemodeller. I 1996 ble effekten av ibandronat på ovariektomiserte hunder [12] rapportert.

Cistanches Herba (CH), holoparasitisk plante av Cistanche deserticola YC Ma, er klassifisert som et tonifiserende middel i orientalsk tradisjonell medisin og brukes ofte til å behandle glemsel, hørselstap, infertilitet og kronisk forstoppelse. CH har ulike farmakologiske aktiviteter, inkludert antinociceptive, anti-inflammatoriske og immunforsterkende effekter [13,14]. En tidligere studie har rapportert at Cistanches Herba kan lede benmesenkymale stamceller (BMSCs) til å differensiere seg til osteoblaster, noe som lover gunstige utsikter for behandling av osteoporose og benbruddsbrudd [15]. Chen et al. [16] rapporterte at Cistanches Herba-polysakkarider kan fremme benmargscellesyklusovergangen og gjenoppretting av hematopoietisk funksjon i benmargsdeprimerte anemiske mus, akselerere hematogenese i rubrum-stamme og makronukleus-stamme.

I denne studien ble beinmineraltetthet (BMD), benmineralinnhold (BMC), biomekanisk benindeks, blodmineralnivåer og antioksidantenzymer i blodet undersøkt i sham-opererte, ovariektomerte og Cistanches Herba-behandlede rotter for å studere effekten av behandling. med Cistanches Herba-ekstrakt på beinkvalitet.

Tradisjonell kinesisk medisin Cistanches Herba-ekstrakt (CHE)

2. Materialer og metoder

2.1. Fremstilling av Cistanches Herba vandige ekstrakter

Cistanches Herba ble samlet fra ørkenen i alxa-ligaen i Nei Monggol (Indre Mongolia) autonome region i 2010.

Den tørkede stilken til Cistanches Herba ble ekstrahert med destillert vann ved 100 grader i 2 timer. Løsningen ble sentrifugert ved 4000 r/min i 10 min. Rester ble fjernet ved filtrering og det kombinerte filtratet ble fordampet ved oppvarming for å oppnå en ønsket konsentrasjon (2,1 g tørr planteekvivalent ekstrakt/ml). Utbyttet av ekstraksjon var 13,7 prosent (vekt/vekt). Det vandige ekstraktet ble lagret ved 2–8 grader.

2.2. Dyr

32 Wistar hunnrotter på 3 måneder, som veide mellom 240 og 270 g ved begynnelsen av eksperimentet, ble brukt til studien. De ble holdt under standard laboratorieforhold med 12 timers lys og mørke syklus, med fri tilgang til standard laboratorierottemat og vann fra springen.

2.3. Dyreforsøk.

Hunnrotter ble bedøvet med pentobarbitalnatrium (40 mg kg-1, ip), og eggstokkene deres ble fjernet bilateralt. Rottene i den falske opererte gruppen ble bedøvet, laparotomier og suturert uten å fjerne eggstokkene. Etter 1 uke med restitusjon fra operasjonen ble OVX-rottene tilfeldig delt inn i tre grupper (n=8 i hver gruppe) og intragastrisk behandlet med H2O (OVX-gruppe), Cistanches Herba-ekstrakt (CHE) (100 eller 200 mg kg). -1 daglig) i 3 måneder. Den falske opererte gruppen (n=8) ble oralt behandlet med H2O.

På den siste dagen av studien ble dyrene veid og ofret, og blodprøver ble samlet inn samtidig. Lårbenene ble dissekert og fjernet fra bløtvev for måling av biomekanisk testing.

Alle eksperimenter ble utført i samsvar med forskningsprotokoller etablert av dyrepleiekomiteen i Kina.

2.4. Bendensitometri

Femoral benmineralinnhold (BMC) og benmineraltetthet (BMD) ble bestemt ved å bruke en Hologic QDR{{0}}W DXA. Instrumentet ble tilpasset for en ultrahøyoppløsningsmodus med linjeavstand på 0.0254 cm, oppløsning på 0,0127 cm og kollimator på 0,9 cm i diameter. Knoklene ble lagt i en petriskål. For å simulere bløtvevstetthet rundt knoklene, ble vann fra springen helt rundt knoklene for å oppnå en dybde på 1 cm. Det er gitt resultater for BMC og for det målte området. BMD for dette området beregnes som BMC dividert med areal. I tillegg til resultater for den totale femur, ble den distale og midtre delen av femur analysert som subregioner [17].

2.5. Benbiomekanisk testing

Femurbein ble holdt ved 4 grader inntil bestemmelsen av bruddstyrke ved bruk av en 5-kN Flexure Fixture, konfigurert for trepunkts-bøyetester og festet til en Instron Universal Testing Machine Model 4502 utstyrt med en 10- kN-lastcelle (Instron, Canton, MA, USA), som tidligere beskrevet [18]. Krysshodehastigheten var 50 mm/min, og datasamplingshastigheten var 10 prøver/s. Maksimal belastning, belastning ved maksimal belastning, belastning ved svikt og belastning ved svikt ble bestemt i lårbein ved bruk av Series IX, v 8.08.00 programvare (Instron).

2.6. Biokjemisk analyse

Blod Ca, Zn og Cu-nivåer ble målt ved atomabsorpsjonsspektrofotometri.

Basert på metoden til King og Armstrong [19], ble alkalisk fosfatase (ALP) aktivitet analysert ved bruk av dinatriumfenylfosfat som et substrat. Fargen som ble utviklet ble avlest ved 510 nm i et UV-vis spektrofotometer etter 10 min. Aktiviteter av ALP ble uttrykt som IU/L.

Konsentrasjonen av malondialchehyche (MDA) i blodet ble bestemt ved å bruke metoden beskrevet av Jain et al. [20], basert på TBA-reaktivitet. Kort fortalt, 0,2 mL erytrocyttpellets eller supernatant hentet fra vev, 0,8 mL fosfatbuffer (pH 7,4), 0.025 mL BHT og { {19}},5 mL 30 prosent TCA ble tilsatt til rørene og blandet. Etter 2 timers inkubering ved -20 grader ble blandingen sentrifugert (4000 x g) i 15 minutter. Etter dette ble 1 mL supernatant tatt og tilsatt til hvert rør, og deretter 0,075 mL 0,1 M EDTA og

0.25 ml 1 prosent TBA ble tilsatt. Disse rørene med teflon-forede skrukorker ble inkubert ved 90 grader i vannbad i 15 minutter og avkjølt til romtemperatur. Den optiske tettheten ble målt til 532 for blod-MDA-konsentrasjon.

Aktiviteten til glutationperoksidase (GSH-Px) ble bestemt i henhold til metoden til Lawrence og Burk [21]. Analyseblandingen besto av 2,0 mL 75 mM fosfatbuffer (pH 7.0), 50 μL 60 mM glutation, {{15} },1 mL 30 enheter/ml glutationreduktase, 0,1 mL 15 mM EDTA, 0,1 mL 3 mM NADPH og passende mengde vevsupernatant til et sluttvolum på 3,0 mL . Reaksjonen ble startet ved tilsetning av 0,1 ml 7,5 mM H202. Hastigheten for endring av absorbans under konverteringen av NADPH til NADP pluss ble registrert spektrofotometrisk ved 340 nm i 3 minutter. GSH-Px-aktivitet for vev ble uttrykt som μmol NADPH oksidert til NADP pluss min-1 mg-1 protein.

Aktiviteten til superoksiddismutase (SOD) ble bestemt i blodet i henhold til metoden til Sun et al. [22]. Prinsippet for metoden er basert på inhibering av nitroblått tetrazolium (NBT) reduksjon ved å bruke xantin-xanthin oxidase-systemet som en superoksidgenerator. Aktiviteten ble vurdert i supernatantene av 10 000 g metanol/kloroform (5/3, v/v) ekstrakter av vevshomogenater (10 prosent). En enhet SOD ble definert som enzymmengden som forårsaket 50 prosent hemming i NBT-reduksjonshastigheten.

Katalase (CAT) aktiviteten ble målt ved bruk av Abeis [23] metode. Serum ble tilsatt til en kyvette som inneholdt 2,89 mL av en 50 mmol/L fosfatbuffer (pH 7.0). Reaksjonen ble initiert ved å tilsette 0,1 mL nylaget 30 mmol/L H2O2 for å lage et sluttvolum på 3,0 mL ved 25 grader. Nedbrytningshastigheten til H2O2 ble målt ved 240 nm i 5 minutter på et spektrofotometer. En enhet (U) CAT ble definert som mengden enzym som kreves for å dekomponere 1 nmol H2O2 per min, ved 25 grader og pH 7,8.

2.7. Statistisk analyse

De eksperimentelle resultatene ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD for åtte dyr i hver gruppe. De biokjemiske parametrene ble analysert statistisk ved bruk av en enveis variansanalyse ANOVA, etterfulgt av Dunnetts multiple comparison test (DMCT). P-verdi på<0.05 was="" considered="" statistically="">

3. Resultater

To dyr utløp i løpet av studien. Følgelig var tallene for gruppene ved studiens konklusjon: 8 i falsk kontroll; 7 i OVX-gruppen; 7 i CHE-behandlingsgruppen (100 mg kg−1 daglig), og 8 i CHE-behandlingsgruppen (200 mg kg−1 daglig). To dager etter operasjonen var rottenes mat- og vanninntak noe lavere enn før operasjonen. Ingen dyr led av infeksjon og anabiose. Ingen klinisk tydelige bivirkninger ble observert hos rotter.

Før operasjonen var det ingen signifikant (p > {{0}}.01) forskjell i rotters kroppsvekt mellom gruppene. Kroppsvekten til OVX-gruppen var signifikant (p < 0.01)="" lavere="" enn="" vekten="" til="" den="" falske="" gruppen="" (tabell="" 1).="" administrering="" av="" cistanches="" herba-ekstrakt="" i="" en="" dose="" på="" 100="" og="" 200="" mg/kg="" daglig="" økte="" rotternes="" kroppsvekt="" signifikant="" (p="">< 0,05)="" i="" den="" che-behandlede="" gruppen="" (100="" og="" 200="" mg/kg="" daglig).="" dataene="" innhentet="" fra="" dyr="" viste="" at="" det="" var="" statistisk="" signifikante="" forskjeller="" mellom="" bmd="" og="" bmc="" for="" ovx-gruppen="" og="" for="" falsk="" kontroll="" (p="">< 0,01).="" som="" forventet="" førte="" administrering="" av="" cistanches="" herba-ekstrakt="" i="" en="" dose="" på="" 200="" mg/kg="" til="" en="" signifikant="" økning="" i="" bmd="" og="" bmc="" for="" den="" che-behandlede="" gruppen="" (p="">< 0,05;="" p=""><>

4. Diskusjon

Osteoporose er en av de vanligste lidelsene forbundet med østrogenmangel og aldring. Menopause resulterer i økt beinomsetning, ubalanse mellom beindannelse og benresorpsjon, og netto bentap. Bentap forårsaket av østrogenmangel skyldes først og fremst en økning i osteoklastisk benresorpsjon hos både mennesker og forsøksdyr [24].

Selv om osteoporose rammer både eldre menn og kvinner, har postmenopausale kvinner vært hovedfokuset for osteoporose [25,26]. En dramatisk mangel på kvinnelige hormoner er den viktigste faktoren for postmenopausale kvinners osteoporose. OVX-rottemodellen er mest brukt i forskning på postmenopausal osteoporose [27,28], der ovariektomi resulterer i overflødig benresorpsjon i forhold til bendannelse initialt og forårsaker bentap. OVX-operasjon forårsaker en betydelig kroppsvektsøkning som kan være en guidepost for å evaluere suksessen til operasjonen [29]. På slutten av denne studien var kroppsvektene til OVX-gruppen markant redusert sammenlignet med kroppsvektene til den falske gruppen, og behandling med Cistanches Herba-ekstrakt forhindret fullt ut disse reduksjonene. Vi antar at OVX forårsaket alvorlig fysiologisk ubehag som påvirket rottenes matinntak. Deretter ble kroppsvekten til OVX-gruppen markant redusert.

Benmineraltetthet har blitt beskrevet som bare et surrogatmål på beinstyrke [30]; mikroarkitektoniske egenskaper er imidlertid en nylig fremkommet markør for evaluering av den sanne effekten av behandling på kvaliteten på trabekulært bein. Selv om lav benmasse er en viktig risikofaktor for brudd [31], bidrar bevaring av trabekulær benarkitektur betydelig til beinstyrke og kan redusere bruddrisiko utover BMD og BMC, som demonstrert av en rekke studier som har rapportert nære korrelasjoner mellom mikrostrukturelle egenskaper og den biomekaniske styrken til bein [32,33]. I dette arbeidet ble BMD og BMC funnet å være signifikant forskjellig mellom sham og ovariektomiserte grupper. Behandling med Cistanches Herba-ekstrakt forbedret BMD og BMC betydelig hos OVX-rotter. I tillegg har administrering av Cistanches Herba-ekstrakter fortsatt betydelig doseavhengig økt maksimal belastning, forskyvning ved maksimal belastning, stress ved maksimal belastning, belastning ved automatisk pause, forskyvning ved automatisk pause og stress ved automatisk innbrudd CHE-behandlede grupper sammenlignet med OVX-gruppen. Disse resultatene indikerte at lårbensbein fra rotter som ble matet med Cistanches Herba-ekstrakt hadde høyere belastning ved svikt og dermed kunne være mer motstandsdyktige mot stressfrakturer. I tillegg hadde rotter i OVX-gruppen høyere Ca-, Zn- og Cu-nivåer i blodet enn de i den falske gruppen. Administrering av Cistanches Herba-ekstrakt hadde reduserte Ca-, Zn- og Cu-nivåer i blodet hos OVX-rotter.

Forestillingen om at oksidativ status er viktig ved osteoporose stemmer overens med den sterke epidemiologiske assosiasjonen mellom osteoporose og aterosklerose, en sykdom der oksidant stress spiller en stor rolle. Dessuten ble det nylig observert at det er en assosiasjon hos kvinner mellom oksidant stress (målt ved en biomarkør for oksidativt stress, 8-iso-PGF2-) [34], antioksidantnivåer [35] og beinmineraltetthet. Kliniske studier som har undersøkt sammenhengen mellom kosttilskudd og/eller supplerende askorbat og benmasse hos mennesker antyder også en assosiasjon med økt benmasse [36].

Siden MDA har høy reaktivitet mot aminogrupper, hemmer det syntesen av nukleinsyrer og proteiner og deaktiverer også enzymene [37,38]. Dermed kan reduksjonen i femur-antioksidantenzymer observert etter OVX skyldes økt lipidperoksidasjon. Antioksidantenzymer er involvert i forsvarssystemet mot frie radikal-mediert vev eller cellulær skade. De metaboliserer enten frie radikaler eller reaktive oksygenmellomprodukter til ikke-radikale produkter. Disse enzymene inkluderer en familie av glutationavhengige enzymer [39]. I denne studien rapporterer vi en betydelig reduksjon i nivåene av antioksidantenzymer, dvs. SOD, GSH-Px, CAT i blodet til ovariektomiserte rotter. Disse funnene tyder på at mangel på eggstokkhormoner korrelerer med manglende evne til å bekjempe oksidativt stress. Administrering av Cistanches Herba ekstrakter betydelig doseavhengig forbedret blod SOD, GSH-Px og CAT aktiviteter hos OVX rotter. Disse resultatene ser ut til å indikere en bedre beskyttende effekt av Cistanches Herba-ekstrakt mot oksidativt stress-indusert under OVX.

Oppsummert er Cistanches Herba-ekstrakt effektivt for å forhindre bentap forårsaket av hormonmangel i eggstokkene sett fra lårbens BMD, BMC-verdier og blod Ca, Zn og Cu-nivåer. Siden osteoporose er assosiert med oksidativt stress, vitner studier av denne typen om viktigheten av de terapeutiske verdiene til antioksidanter. Vi antar at Cistanches Herba-ekstrakt forbedrer beinkvaliteten, muligens delvis gjennom å forbedre OVX-rotters antioksidantenzymer og redusere benmineralelementer.

Cistanches Herba-ekstrakt: forhindrer bentap

Referanser

1. Canalis, E.; Giustina, A.; Bilezikian, JP Mekanismer for anabole terapier for osteoporose. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 905–916.

2. Heaney, RP; Recker, RR; Saville, PD Menopausale endringer i beinremodellering. J. Lab. Clin. Med. 1978, 92, 964–970.

3. McNamara, LM; Ederveen, AGH; Lyons, CG; Pris, C.; Schaffer, MB; Weinans, H.; Prendergast, PJ Styrke av spongøst bentrabekulært vev fra normale, ovariektomiserte og medikamentbehandlede rotter i løpet av aldring. Bone 2006, 39, 392–400.

4. Compston, JE Hormonerstatningsterapi. Clin. Revmatol. 1997, 11, 583–596.

5. Meiner, SE En ekspanderende landskaps osteoporose: Behandlingsalternativer i dag. Adv. Nurse Practice.1999, 7, 26–31.

6. Aubin, JE; Bonnelye, E. Osteoprotegerin, og dets ligand: Et nytt paradigme for regulering av osteoklastogenese og benresorpsjon. Osteoporos. Int. 2000, 11, 905–913.

7. Roodman, GD Fremskritt i beinbiologi: Osteoklasten. Endokr. Rev. 1996, 17, 308–332.

8. Kastanje, CH, III. Medikamentell behandling: kalsitonin, bisfosfonater og anabole steroider. I osteoporose: Etiologi, diagnose og behandling; Riggs, BL, Melton, LJ, III, red.; Lippincott-Raven: Philadelphia, PA, USA, 1995.

9. Quan, Q.-M.; Wu, W.; Li, Y.-X.; Cai, Q.-R. Variasjon i innhold av icariin og flavonoider i barrenurt-arter. J. Med. Planter Res. 2010, 4, 1176–1181.

10. Du, XG; Pan, HZ; Zhang, CY; Zhang, HY; Liu, HM; Chen, ZY; Zeng, XY Zingiber officinale-ekstrakt modulerer g-stråle-indusert immunsuppresjon hos mus. J. Med. Planter Res. 2010, 4, 1647–1655.

11. Paschalis, EP; Betts, F.; DiCarlo, E.; Mendelsohn, R.; Boskey, AL FTIR mikrospektroskopisk analyse av humane iliac crest biopsier fra ubehandlet osteoporotisk bein. Calcif. Tissue Int. 1997, 61, 487–492.

12. Motoie, H.; Kanoh, H.; Ogata, S.; Kawamuki, K.; Shikama, H.; Fujikura, T. Forebygging av bentap ved bisfosfonat YM175 hos ovariektomiserte hunder med kalsiumbegrensning i kosten. Jpn. J. Pharmacol. 1996, 71, 239–246.

13. Lin, LW; Hsieh, MT; Tsai, FH; Wang, WH; Wu, CR Anti-nociceptiv og antiinflammatorisk aktivitet forårsaket av Cistanche deserticola hos gnagere. J. Ethnopharmacol. 2002, 83, 177–182.

14. Wu, XM; Gao, XM; Tsim, KW; Tu, PF En arabinogalaktan isolert fra stilkene til Cistanche deserticola induserer spredning av dyrkede lymfocytter. Int. J. Biol. Macromol. 2005, 37, 278–282.

15. Zeng, JC; Vifte, YG; Liu, JR; Zeng YR; Yi, CZ; Liang Y. Eksperimentell studie av retningsbestemt differensiering av benmesenkymale stamceller (BMSCs) til osteoblaster guidet av serumholdig cistanche deserticola. Zhongguo Gu Shang 2010, 23, 606–608.

16. Chen, Z.-W.; Zhu, B.-D.; Xu H.-Y. Eksperimentstudie av ørkenlevende cistanche-polysakkarider på regulert hematogenese i benmargsdeprimerte anemimus. Hake. Arch. Tradisjon. Hake. Med. 2007, 25, 1473–1474.

17. Prakasam, G.; Ja, JK; Chen, M.-M.; Castro-Magana, M.; Liang, CT; Aloia, JF Effekter av veksthormon og testosteron på kortikal beindannelse og bentetthet hos gamle ovariektomiserte rotter. Bone 1999, 24, 491–497.

18. McClung, JP; Stahl, CH; Marchitelli, LJ; Morales-Martinez, N.; Makin, KM; Young, AJ; Scrimgeour, AG Effekter av kostholdsfytase på kroppsvektøkning, kroppssammensetning og beinbiomekanikk hos voksende rotter som er matet med lav sink diett. J. Nutr. Biochem. 2006, 170, 190–196.

19. King, EJ; Armstrong, AR En praktisk metode for å bestemme serum- og gallefosfataseaktivitet. Kan. Med. Assoc. J. 1934, 31, 376–381.

20. Jain, SK; McVie, R.; Duett, J.; Herbst, JJ Erytrocyttmembranlipidperoksidasjon og glykosylert hemoglobin ved diabetes. Diabetes 1989, 38, 1539–1543.

21. Lawrence, RA; Burk, RF Glutationperoksidaseaktivitet i selen-mangelfull rottelever. Biochem. Biofys. Res. Commun. 1976, 71, 952–958.

22. Sun, Y.; Oberley, LW; Ying, L. En enkel metode for klinisk analyse av superoksiddismutase. Clin. Chem. 1988, 34, 497–500.

23. Abei, H. Catalase in vitro. Metoder Enzymol. 1988, 10, 121–126.

24. Mozaffari, Z.; Azarnia, M.; Abdolhamid Angaji, S. Evaluering av toksiske effekter av Trigonella foenum-graecum bladvannekstrakt på utviklingen av langt beinvev hos rottefosteret. J. Med. Planter Res. 2010, 4, 1148–1155.

25. Buencamino, MCA; Sikon, AL; Jain, A.; Thacker, HL En observasjonsstudie om overholdelse av behandlingsretningslinjer for osteopeni. J. Women's Health 2009, 18, 873–881.

26. Schmitt, MN; Schmitt, J.; Dören, M. Rollen til fysisk aktivitet i forebygging av osteoporose hos postmenopausale kvinner - en oppdatering. Maturitas 2009, 63, 34–38.

27. Lelovas, PP; Xanthos, TT; Thomas, SE; Tekster, GP; Dontasi, IA Laboratorierotten som en dyremodell for osteoporoseforskning. Comp. Med. 2008, 58, 424–430.

28. Ncango, DM; Pohl, CH; van Wyk, PWJ; Kock, JLF Ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler (NSAIDs) hemmer veksten av gjærpatogener. Afr. J. Microbiol. Res. 2011, 5, 1123–1125.

29. Fazliana, M.; Nazaimoon, WMW; Gu, HF; Ostenson, CG Labisia pumila-ekstrakt regulerer kroppsvekt og adipokiner hos ovariektomiserte rotter. Maturitas 2009, 62, 91–97.

30. Bourrin, S.; Ammann, P.; Bonjour, JP; Rizzoli, R. Gjenoppretting av proksimal tibia-benmineraltetthet og -styrke, men ikke spongøs benarkitektur, etter langvarig bisfosfonat- eller selektiv østrogenreseptormodulatorterapi hos eldre rotter. Bone 2002, 30, 195–200.

31. Borah, B.; Dufresne, TE; Chmielewski, PA; Gross, GJ; Prenger, MC; Phipps, RJ Risedronat bevarer den trabekulære arkitekturen og øker beinstyrken i ryggvirvelen til ovariektomiserte minigriser målt ved tredimensjonal mikrocomputertomografi. J. Bone Miner. Res. 2002, 17, 1139–1147.

32. Müller, R.; Hannan, M.; Smith, SY; Bauss, F. Intermitterende ibandronat bevarer beinkvalitet og beinstyrke i korsryggen etter 16 måneders behandling hos den ovariektomiserte cynomolgus-apen. J. Bone Miner. Res. 2004, 19, 1787–1796.

33. Lane, NE; Kumer, JL; Majumdar, S.; Khan, M.; Lotz, J.; Stevens, RE; Klein, R.; Phelps, KV Effektene av syntetiske konjugerte østrogener, a (Cenestin) på trabekulær beinstruktur og styrke i den ovariektomiserte rottemodellen. Osteoporose Int. 2002, 13, 816–823.

34. Basu, S.; Michaelsson, K.; Olofsson, H.; Johansson, S.; Melhus, H. Sammenheng mellom oksidativt stress og beinmineraltetthet. Biochem. Biofys. Res. Commun. 2001, 288, 275–279.

35. Maggio, D.; Barabani, M.; Pierandrei, M.; Cristina Polidori, M.; Catani, M.; Mecocci, P.; Senin, U.; Pacifici, R.; Cherubini, A. Markert reduksjon i plasmaantioksidanter hos eldre osteoporotiske kvinner: Resultater av en tverrsnittsstudie. J. Clin. Endokrinol. Metab. 2003, 88, 1523–1527.

36. Morton, DJ; Barrett-Connor, EL; Schneider, DL Vitamin C-supplementbruk og beinmineraltetthet hos postmenopausale kvinner. J. Bone Miner. Res. 2001, 16, 135–140.

37. Fugl, RP; Draper, HH Effekt av malonaldehyd og acetaldehyd på dyrkede pattedyrceller: vekstmorfologi og syntese av makromolekyler. J. Environ. Helse 1980, 6, 811–823.

38. Abdelhalim, MAK Den potensielle påvirkningen av høykolesterol diett-indusert oksidativt stress på sammensetningen og egenskapene til røde blodceller hos kaniner. Afr. J. Microbiol. Res. 2010, 4, 836–843.

39. Chaudiere, J.; Ferrari-Illiou, R. Intracellulære antioksidanter fra kjemiske til biokjemiske mekanismer. Food Chem. Toxicol. 1999, 37, 949–962.