Effekter av Cistanche på antialdrings- og immunfunksjonen til aldrende modellrotter før og etter behandling

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrakt: Mål: Å utforske de forskjellige bearbeidede produktene avCistancherherba in D - galaktose antialdringsfunksjon hos rotter og effekten av immunorganfunksjon. Metoder: Vi tok ut de forskjellige bearbeidede produktene av Cistanches herba. SD-rotter ble tilfeldig delt inn i blank kontrollgruppe, aldringsmodellgruppe, vitamin E-gruppe, cistanche høy, middels og lav dose grupper, vin cistanche høy, medium og lav dose grupper. Med D - galaktosealdrende rottemodell ble etablert, etter behandling oppdaget vi innholdet av MDA, SOD og NO i serum fra hver gruppe rotter og telte miltindeksen og tymusindeksen; og observerte deretter de patologiske morfologiske endringene av miltvev og mtDNA i hjernen. Resultater: MDA og NO i serum fra aldrende modellrotter økte betydelig (P<0. 01)="" and="" sod="" decreased="" significantly="" (fvo.="" 01).="" the="" model="" group="" had="" a="" tendency="" to="" decrease,="" thymus="" and="" spleen="" coefficient="" had="" obvious="" pathological="" spleen="" injury,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" was="" missing.="" different="" processed="" products="" of="">Cistancherherba kan redusere MDA og NO(P<0. 01="" or="" p=""><0. 05).="" sod="" had="" a="" rising="" trend,="" improving="" the="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improving="" the="" pathological="" injury="" of="" the="" spleen.="" the="" mtdna="" in="" the="" brain="" of="" the="" high="" dose="" group="" and="" positive="" medicine="" group="" did="" not="" miss.="" and="" processing="" products="" were="" better="" than="" the="" raw="" cistanches="" herba.="" the="" high="" dose="" group="" was="" better="" than="" the="" low="" dose="" group.="" conclusion:="" different="" processing="" products="" of="" cistanches="" herbs="" have="" different="" anti-aging="" effects="" and="" immune="">

Nøkkelord: Cistanches herba; behandling; aldring; immun

Den tradisjonelle kinesiske medisinenCistanche deserticolaYC Ma ellerCistanche deserticolaYC Ma eller C. tubulosa (Schenk) Wight er den tørre, skjellete kjøttfulle stammen avCistanche deserticola(Schenk) Wight. Den er varm i naturen, søt og salt på smak, og er i nyre- og tykktarmsmeridianen. Det er essensielt for å styrke nyrene og styrke yang. Medisin kalles "ørkenginseng" (2). Cistanche ble først publisert i "Shen Nong's Materia Medica". Den er oppført som toppkarakter. Det har effekten av å fylle essens og nære marg, nære nyrene og styrke yang, behagelig farge og forlenge livet, nærende blod og fuktighetsgivende tørrhet, etc. Det kan behandle kvinnelig infertilitet, mannlig impotens, blodtørr forstoppelse, kalde midje og knær . Sykdommer som smerte, innestengning, blodkollaps osv.! 3_5]o 2010-utgaven av «The Pharmacopoeia of the People's Republic of China» inneholderCistanche tubulosaogCistanche E.

Etter hvert som kroppen eldes, vil det være en viss nedbrytning av både fysiologiske funksjoner og morfologisk struktur. Dette er det vi ofte kaller «aldring». Dens manifestasjoner er hovedsakelig forringelse av organer, vev og celler, slik som reduksjon av vevs elastisitet, atrofi av organer og reduksjon av antall celler, noe som vil føre til at kroppens mange funksjoner gradvis avtar. Eksperimenter har bekreftet detCistanchehar anti-aldringseffekter "I", men sammenlignende studier på anti-aldringseffektene avCistanchefør og etter behandling er ikke rapportert ennå. Dette eksperimentet studerer hovedsakeliganti-aldringseffekteravCistanchefør og etter prosessering og gir et vitenskapelig grunnlag for å studere mekanismen for aldring.

Echinacoside

1 Eksperimentelt materiale

1.1 Forsøksdyr

SD-rotter som veier 180-220 g. SPF ble levert av Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., lisensnummer: SCXK (Liao) 2015-0001.

1.2 Legemidler og reagenser

Cistancheble kjøpt fra Alashan villkjøttaske i indre Mongolia, og ble identifisert som den tørre kjøttfulle stilken med skjoldblader avCistanche deserticolaYC Ma av professor Zhai Yanjun ved sykehuset vårt; fremstillingsmetoden for hver gruppe teststoffer er som følger, rå cistanche: rå Cistanchen dampes i 2 timer, kuttes i 6 mm tykke skiver og tørkes ved 70°C. Ta Cistanche-skiver og ekstraher 3 ganger i vann, kombiner deretter avkoket og konsentrer til en viss konsentrasjon. Tilberedning av Cistanche: Ta rå Cistanche og bløtlegg i gulvin i 8 timer, tilsett 1:1, damp i 16 timer, skjær i 6 mm tykke skiver, og tørk ved 70 T. Ta Cistanche-skivene og ekstraher 3 ganger med vann, kombinere deretter avkoket og konsentrer det til en viss konsentrasjon. Vitamin E myke kapsler (batchnummer 1407061, Shenyang Hongqi Pharmaceutical Co., Ltd.); D-galaktose (batchnummer 710B055, Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.); Nitrogenoksid (NO) sett (batchnummer: BPE30262); Malondialdehyd (batchnummer: BPE30262) MDA) sett (batchnummer BPE30527); superoksiddismutase (SOD)-sett (batchnummer: BPE3O387); alt levert av Shanghai Langdon Biotechnology Co., Ltd.; kolonne-type dyremitokondriell DNA-ekstraksjonssett (kjøpt fra Beijing Lab Technology Co., Ltd.); PCR-sett (kjøpt fra TIANGEN Reagent Company); andre reagenser er innenlandsrene.

1.3 Eksperimentelt utstyr

Gene cycler (Hangzhou Longkey Scientific Instrument Co., Ltd.); Mikroplate-leser (Thermo Fisher Technology Co., Ltd., USA); Konstant temperatur og fuktighet kammer (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co, Ltd); TGL-16C-type forteller benchtop-sentrifugemaskinen (Shanghai Anting Scientific Instrument Factory); Vortex Mixer (Shanghai Qingpu Huxi Instrument Factory); Elektronisk balanse (Shanghai Yousheng Weighing Apparatus Co., Ltd.); Vortex Mixer (Shanghai Qingpu Huxi Instrument Factory).

2 Eksperimentell metode

2.1 Dyremodell og gruppering

Etter 1 uke med adaptiv fôring ble rottene tilfeldig delt inn i en blank gruppe, en modellgruppe, en kontrollgruppe, enCistanchehøy, middels og lav dose gruppe, og B. striata: høy, middels og lav dose grupper, som hver var 9 grupper 8 stykker. Bortsett fra den blanke gruppen ble de andre gruppene injisert med D-galaktose 167,5 mg/kg subkutant om morgenen; den blanke gruppen ble injisert med et likt volum av normalt saltvann; på ettermiddagen ble de høye, middels og lave dosene av kjøttaske og vin gitt henholdsvis 5,48 og 2. 74, 1,37 g/kg av testproduktløsningen, den positive kontrollgruppen ble gitt 2,75 mg/ml vitamin E, den blanke gruppen og modellgruppen fikk et likt volum av normalt saltvann ved intragastrisk administrering. I 6 påfølgende uker ble de til slutt drept og ulike indikatorer ble målt.

2.2 Bestemmelse av SOD-, MDA- og NO-innhold i rotteserum

Blod ble samlet fra abdominalaorta til rotten, sentrifugert ved 3000 r/min i 15 minutter for å skille blodserumet og lagret ved -20 Y for senere bruk. MDA.SOD.NO innholdsbestemmelse utføres i henhold til instruksjonene til testsettet.

2.3 Effekt på vekten av immunorganer hos aldrende modellrotter

Rottene i hver gruppe ble veid og avlivet etter at blodet ble tatt. Milten og thymus ble tatt, vasket med saltvann, tørket og veid, og milt- og thymus-koeffisientene ble beregnet.

2.4 Observasjon av miltvevsmorfologi

De veide miltene ble fiksert med 4 prosent paraformaldehyd, innebygd i parafin, seksjonert og farget med HE. Endringene i patologiske seksjoner av milten i hver gruppe ble observert under et mikroskop.

2.5 Statistiske metoder

Bruk SPSS-programvare til å utføre en enveis variansanalyse og LSD-t-test for parvis sammenligning.

2.6 Påvisning av mtDNA-mutasjoner i hjernen

Rottehjernevevet ble plassert i en morter med flytende nitrogen, raskt malt til pulver og deretter henvist til litteraturmetoden, i henhold til instruksjonene for mtDNA-ekstraksjon av hjernevev.

PCR-amplifisering detekterer delesjonen av mtDNA4834-fragmentet: primerne refererer til den komplette sekvensen av rotte-mtDNA-genom rapportert av Gada-leta et al. (1898), og primerne er syntetisert av Shanghai Shengang Industrial Co., Ltd. Pl: 5'-GCGAAGCTTAGAGCGTTAAC-3'P2: 5'AGTGAGATAAGGAAGCCTGC -3' P3: 5'-AG- GACTTAACCAGACCCAAAGACG{ {13}}, P4: 5'-CCTCTTTTCTGATAGGCGGG-3,

PCR-reaksjonssystem: DNA-template 1 |xL, 2 x Taq PCR MasterMix 25 |xL, ddH2O 20 jiL, 2 primere hver. Amplifikasjonsbetingelser: første 95 Y denaturering i 5 minutter; 95 T denaturering i 30 s, 56 T annealing i 30 s, 72 T forlengelse i 45 s, totalt 35 sykluser; siste 72 T forlengelse i 7 minutter. De amplifiserte produktene ble utsatt for 1,5% agarosegelelektroforese.

Acteosid

3 Resultater og analyse

3.1 Effekten avCistanchepå fysiske tegn på aldrende rotter

Sammenlignet med den blanke gruppen, viste de aldrende rottene mørk og gul pels, løs og mat hud, løs hud, hårtap, tap av appetitt, redusert spontan aktivitet, treg bevegelse, ryggutbuling, sløvhet, langsom respons og andre aldringsmanifestasjoner. Jo lengre injeksjonstiden er, desto tydeligere er symptomene. Sammenlignet med den aldrende gruppen ble rottenes mentale tilstand, pelsfarge, appetitt, kroppsform og reaksjonsfølsomhet forbedret med økningen av administreringstiden i hver administreringsgruppe avCistanche. Blant dem var det i utgangspunktet ingen forskjell mellom høydoseproduktgruppen og kontrollgruppen.

3.2 Effekten avCistanchepå innholdet av MDA, SOD og NO i serum fra aldrende modellrotter

Resultatene er vist i tabell I. Sammenlignet med blankgruppen var modellgruppen mda.no signifikant økt (P<0.01), and="" sod="" was="" significantly="" reduced="" (p=""><0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" each="" treatment="" group="" mda.no="" was="" significantly="" lower=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" but="" it="" is="" not="" statistically="" significant;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="">Cistanche, ble MDA.N0 av mellom- og lavdosegruppene av Cistanche betydelig redusert (F<0.05 ),="" sod="" tends="" to="" increase;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="" cistanche,="" the="" mda.no="" of="" the="" middle="" and="" low-dose="" groups="" of="" cistanche="" rose="" significantly="" (p=""><0.01 or="" p=""><0.05), and="" the="" sod="" tended="" to="" decrease;="" compared="" with="" the="" jiu="" nvrong="" gao="" dose="" group,="" the="" mda.no="" of="" the="" high-dose="" eggplant="" paste="" group="" increased="" significantly="" (p=""><0.01), and="" sod="" tended="" to="" decrease.="" this="" result="" shows="" that="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group="" compared="" with="" different="" dose="" groups,="" and="" the="" treatment="" effect="" of="" the="" product="" group="" is="" better="" than="" that="" of="" the="" raw="" product="" group="" compared="" with="" the="" same="" dose="" group.="">

3.3effekten av Cistancheom immunfunksjonen til aldrende modellrotter Chi

3.3.1 Effekten av Cistanche på miltindeks og thymusindeks hos aldrende modellrotter

Resultatene er vist i tabell 2. Sammenlignet med blankgruppen er koeffisienten for thymus og milt i modellgruppen g

Det er en synkende trend, men den er ikke statistisk signifikant. Sammenlignet med modellgruppen var thymus- og miltkoeffisientene for hver behandlingsgruppe signifikant økt (F<0.05); compared="" with="" the="" high-dose="" cistanche="">

Gruppesammenligning, thymus- og miltkoeffisientene til mellom- og lavdosegruppeneCistanchehar en tendens til å avta

Potensiell; sammenlignet med høy doseCistanche deserticolahøydosegruppe, thymus og milt i middels og lavdose vinjentepastagruppene

Visceral koeffisient har en synkende trend; sammenlignet med høy doseCistanche deserticolahøydosegruppe, thymus- og miltkoeffisientene til høydosencistanche deserticolahøydosegruppen har en synkende trend. Dette resultatet viser at høydosegruppen er bedre enn lavdosegruppen sammenlignet med ulike dosegrupper, og behandlingseffekten til produktgruppen er bedre enn råproduktgruppen sammenlignet med samme dosegruppe.

Tabell 1 Sammenligning av SOD.MDA.NO-innhold i blod fra rotter i hver gruppe (n. =8, x ±s)

Merk:. Sammenlignet med I modellgruppe, P<005.><001; j="" air-day="" group="" comparison.=""><[)01; tlilll="" high-dose="" ether="" group="" jqi="" [i_low-dose="" group="" comparison.=""><005.><(). ()1;="" the="" high-dose="" product="" group="" is="" compared="" with="" the="" product="" tl="" and="" ff="" [journal="" f="" group.="" })=""><0.05.1l><(1o1; product="" high="" yanlian="" group="" q.="" pindaoli="" {group="" comparison.=""><005.><>

3.3.2 Effekten av patologiske endringer i milten avCistanchealdrende modellrotter. Den blanke gruppen har en tynn og ensartet miltkapsel, klare milttrabeculae uten hevelse, tydelig separasjon av rød og hvit masse, flere miltknuter, og samme størrelse, i midten av milten Antall celler i lymfeskjeden rundt arteriolene er tette. I modellgruppen var milten fortykket, trabecula og cortex var hovne, den røde og hvite pulpa var uklar, den hvite pulpa ble betydelig redusert, antall lymfocytter ble redusert, et stort antall inflammatoriske celler ble infiltrert, og morfologisk struktur ble skadet. Selv om størrelsen på miltknutene i hver behandlingsgruppe var forskjellig, var de hvite og røde pulpagrensene klare. Antall celler i lymfeskjeden rundt den sentrale lille arterien i milten var tett, og morfologien og strukturen ble gjenopprettet. Videre var høydose-destillasjonsgruppen i stand til å forbedre de patologiske endringene. Det er bedre enn vitamin E-gruppen, derCistancheproduktet er bedre enn råvaregruppen, og høydosegruppen er bedre enn lavdosegruppen. Se innlegg X-XI innlegg.1-10 er mtDNA i hjernen til rotter i den tomme gruppen, modellgruppen, kontrollgruppen og forhøyet gruppe. mtDNA Figur 3 Elektroforeseresultater av mtDNA PCR-amplifikasjonsprodukter i rottehjerne (primer PI.P2)

3.4 Delesjon og mutasjon av mtDNA i hjernen

I henhold til primerne P3 og P4 kan et konservativt mtDNA-fragment på ca. 770 bp oppnås. Fra figur 2 kan vi se at målfragmentene ble amplifisert i alle 9 baner, noe som indikerer at alle 9 grupper av mtDNA ble ekstrahert.

Determination of mtDNA4834 bp deletion mutation: If there is a rat mtDNA4834 bp deletion, primers P1 and P2 will amplify the 4834 bp loss and break the fusion gene fragment with a length of 597 bp. As shown in Figure 3, there is a clear DNA band between 500 l>p og 750 bp i spor 2, 4, 5, 7, 9 og 10. Fragmentene ble gjenvunnet og sendt til Hangzhou Baocheng Biotechnology Company for sekvensering. Sammenlignet med sekvensen rapportert av Gadateta et al. (1989), viste det at det er en sletting av mtDNA-fragmenter på omtrent 4000-5000 bp. Derfor viser det at det er omtrent 4834 bp sletting av mtDNA i hjernen til modellgruppen. Bane 1, 3 og 8 har ingen fragmenter, noe som indikerer at det ikke er noen delesjoner av mitokondrielle fragmenter i 1, 3 og 8. Resultatene viste at det ikke var noen manglende fragmenter i gruppen med høydose destillasjonsgjær, den positive medikamentgruppen, og den tomme gruppen, noe som tyder på at høydose-destilleriets gjærgruppe kan ha anti-aldringseffekter. Se Figur 2~Figur 3.

1-10 er mtDNA i hjernen til rotter i den tomme gruppen, modellgruppen, kontrollgruppen og forhøyet gruppe. mtDNA Figur 3 Elektroforeseresultater av mtDNA PCR-amplifikasjonsprodukter i rottehjerne (primer PI.P2)

Cistanche: anti-aldring

4. Diskusjon

Aldringsmodellen forårsaket av intragastrisk administrering av D-galaktose er for tiden en mer vanlig aldringsmodell. Modellen reduserer hovedsakelig aktiviteten til en rekke antioksidantenzymer, slik at et stort antall frie radikaler genereres under metabolismen av kroppen, noe som fører til aldring av kroppen. Endringene i vevsmorfologi er lik endringene ved naturlig aldring ⑻. Et stort antall eksperimenter har vist at D-galaktose-indusert unormal økning i NO-innhold i hjernen og cerebellar cortex og blod fra aldrende mus. Resultatene av denne studien bekreftet at blodinnholdet i aldrende rotter var betydelig høyere enn for normalgruppen, som var lik resultatene rapportert i litteraturen "-m.

I dette eksperimentet, anti-aldringseffekten av aldringsmodellen av rotter før og etter behandlingen avCistancheble studert. Resultatene viste serum MDA og N i aldrende modellrotter. Betydelig økt (P<0.01), sod="" significantly="" decreased="" (p=""><0.01), the="" model="" group="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" have="" a="" tendency="" to="" decrease,="" the="" spleen="" has="" obvious="" pathological="" damage,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" is="" also="" missing.="" different="" processed="" meat="" ash="" can="" significantly="" reduce="" the="" levels="" of="" mda="" and="" no="" (/=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" increase="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improve="" spleen="" pathological="" damage,="" and="" high="" mtdna="" in="" the="" brain="" the="" dose="" group="" and="" the="" positive="" drug="" group="" also="" did="" not="" appear="" to="" be="" missing.="" and="" the="" prepared="" meat="" puree="" is="" better="" than="" the="" raw="" meat="" puree,="" and="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group.="" research="" in="" recent="" years="" believes="" that="" aging="" is="" also="" related="" to="" the="" lipid="" peroxidation="" of="" biological="" membranes="" caused="" by="" free="" radicals.="" sod="" "'-e="" is="" an="" enzyme="" that="" scavenges="" superoxide="" free="" radicals.="" the="" older="" the="" body,="" the="" weaker="" the="" body's="" sod="" activity="" and="" the="" fewer="" antioxidants.="" this="" will="" increase="" the="" free="" radical="" damage="" factor="" mda,,4~,7],="" and="" eventually="" accelerate="" aging.="" in="" addition,="" the="" results="" of="" the="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" of="" aging="" model="" rats="" indicate="" that="" roujing="" rong="" can="" delay="" aging="" by="" improving="" the="" immune="" function="" of="" the="" body.="" the="" results="" of="" the="" study="" hope="" to="" provide="" a="" scientific="" basis="" for="" the="" clinical="" application="" of="">Cistanche.