Studie om utvinning og antioksidantegenskaper til flavonoider i Cistanche

For mer informasjon:ali.ma@wecistanche.com

Sang Yang

(Anshan Product Quality Supervision and Inspection Institute, Anshan 114006, Liaoning)

Abstrakt: TotalenflavonoideriCistancheble ekstrahert ved "ultrasonisk vibrasjonsmetode" og "Soxhlet-ekstraksjonsmetode", og deres innhold ogantioksidantegenskaper ble analysert. Bestemmelsesresultatene viste at innholdet av totaltflavonoideriCistancheekstrahert ved ultralydsvibrasjonsmetoden var høyere enn det som ble ekstrahert ved Soxhlet-ekstraksjonsmetoden. Gjenvinningshastigheten bestemt av eksperimenter er 96,85 prosent -99,46 prosent , presisjonen er høy, og prøveløsningen er meget stabil innen 2 timer, noe som indikerer at UV-Vis-spektrofotometrien har høy nøyaktighet, lite avvik og enkel kontroll av eksperimentelle forhold. Analysere og bestemmeantioksidantaktivitet avflavonoideriCistancheved fluorescensmetoden var klaringsraten 91,5 prosent, noe som indikerer atflavonoideriCistanchehar sterkantioksidanteiendommer. I eksperimentet ble det funnet at bruk av fluorescensanalyse for å bestemmeantioksidantkapasitet på totaltflavonoideri ekstraktet har fordelene av hurtighet, enkelhet, høy følsomhet og god reproduserbarhet.

Nøkkelord: Cistanche; Flavonoider; Ultralyd; Antioksidant

Klassifikasjonsnummer for kinesisk bibliotek: TQ028 Dokumentidentifikasjonskode: Et artikkelnummer: 1004-0935 (2013) 01-0013-03

Cistanche

Klikk til organisk Cistanche for anti-aldring

Cistancheer mye brukt som styrkende medisin. Forskningen på farmakologiske effekter og kjemiske komponenter avCistanchehar gjort store fremskritt de siste årene. Indre Mongolia AlxaCistancheGroup har utviklet en serie Cistanche som nærer yin og nærer yang, fukter tarmene, forbedrer menneskelig immunfunksjon, regulerer endokrine faktorer og forsinker aldring. Brennevin,cistanchehelse væske. I Japan brukes kjøttbrokk som et lindrende eller terapeutisk middel for seksuell dysfunksjon og hukommelsestap. I USA gjøres echinacea også til helseprodukter for å forbedre kroppens immunitet. På dette grunnlaget bør vi foreta dyptgående forskning på de aktive ingrediensene i dens farmakologiske effekter og deres virkningsmekanisme. Under forutsetningen om å sikre effektivitet, bør vi forbedre tradisjonelle kinesiske medisinpreparater, forbedre nivået på kvalitetskontroll og utvikle klare helbredende effekter, sikker bruk og kontrollerbar kvalitet. Nye produkter av tradisjonell kinesisk medisin; på den annen side bør vi også styrke forskningen på Cistanche-dyrkingsteknologi, realisere standardisert planting og industrialisert produksjon av Cistanche, kunstig plante cistanche og etablere en industrialisert dyrkingsbase av cistanche og dens vertsplanter, og løse problemet med ressursmangel. Samtidig skal miljøstyringen i det vestlige ørkenområdet realiseres ytterligere. Med den kontinuerlige dybdeforskningen i ulike aspekter, vil denne tradisjonelle kinesiske medisinen i landet vårt sikkert bli forfremmet til det internasjonale markedet og akselerere moderniseringen av kinesisk medisin.

1 Eksperimentell del

1.1 Eksperimentelt instrument

H, H, S, 21-type elektrisk oppvarming konstant temperatur vannbad (Shanghai No. 5 Medical Instrument Factory); TG328A elektro-optisk analytisk balanse (Shanghai Tianping Instrument Factory); 40 mesh sikt (Zhejiang Hongxing Instrument Factory) KQ-250B ultralydekstraktor (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); Soxhlet Extractor (Zhejiang Hongxing Instrument Factory); Modell 766-2 Far Infrared Radiation Drying (Shanghai Sunshine Instrument Co., Ltd.); Modell HX-200En høyhastighetsknuser for kinesisk medisin (Xi'an Hardware, Zhejiang Yongkang) Medisinfabrikk); TU-1201 UV-spektrofotometer (Beijing Puxi General Instrument Co., Ltd.); PHS-3C presisjons digital surhetsmåler (produsert av Shanghai Tianda Instrument Co., Ltd.); Fluorescensspektrofotometer (VARIAN)

1.2 Eksperimentelle reagenser og medikamenter

Cistanche(leveres i laboratoriet); absolutt etanol (analytisk renhet) (Shenyang Xinhua Reagent Factory); rutin (standard) (leveres i laboratoriet); 50 g/L natriumnitrittløsning (hjemmelaget); 100g/L aluminiumnitratløsning (hjemmelaget); 40 g/L natriumhydroksidløsning (hjemmelaget); PH=6.5 blandet fosfatløsning: 0.1mol/L dinatriumhydrogenfosfat, 0.1mol/L kaliumdihydrogenfosfat; benzosyreløsning: 0,400 0 g benzosyre (AR Shenyang Reagent Factory), oppløst i en blandet fosfatløsning med pH=9.5, fortynn med vann til 100 ml, og oppbevar i mørke i senere bruk; Cu*-løsning: 1,0 x IO"g/mL; Hydrogenperoksid (AR, Shenyang No. 1 Reagent Factory): 30 prosent ; 0,1 MoVL blandet fosfat (dinatriumhydrogenfosfat, AR, Shenyang Xincheng Chemical Plant; kaliumdihydrogenfosfat, AR, Shenyang Hefu Chemical Reagent Distribution ) Løsning; Vannet er to ganger destillert vann.

1.3 Ekstraksjon av totale flavonoider i Cistanche

1.3.1 Ekstraksjon av flavonoider fra Cistanche deserticola (ultralydmetode)

Vei nøyaktig 2,000 g (passer en 40-nettsikt) avCistanchei en 100 ml konisk kolbe, tilsett 95 prosent etanolreagens ved romtemperatur ved et fast-til-væske-forhold på 1:15, og utfør ultralydekstraksjon hver gang. Etter 30 minutter, utfør sugefiltrering, gjenvinn filterresten, tilsett 95 prosent etanolreagens for ultralydristing, sugefiltrering, ultralydekstraksjon 3 ganger, kombiner de 3 filtratene for å oppnå ønsket ekstrakt, tilsett 95 prosent etanolreagens for å gjøre volumet konstant Ha det i en 100 ml målekolbe og sett til side.

1.3.2 Ekstraksjon av flavonoider fra Cistanche (Soxhlet-ekstraksjonsmetode) P]

Vei nøyaktig 10.000 Og (ført gjennom en 40-nettsikt) med auberginepuré, pakk den inn med avfettet filterpapir, bind den ene enden og legg den inn i ekstraksjonsrøret til Soxhlet-ekstraktoren. Tilsett 95 prosent etanolreagens av ekstraksjonsmidlet til ekstraksjonsflasken i ca. Det er 1/2 av volumet, installer deretter Soxhlet-ekstraktoren, bruk et vannbad med konstant temperatur som er litt høyere enn kokepunktet til ekstraksjonsmidlet (etanol) for Soxhlet-ekstraksjon i 4 timer, avkjøl deretter, utfør rotasjonsfordampning, konsentrasjon og bruk 95 prosent etanolreagens for å bestemme. Sett det i en 100 ml målekolbe og sett til side.

Anti-aldring

1.3 Bestemmelse av utvunnet materialinnhold og gjenvinningsgrad eksperiment

1.3.1 Innholdsbestemmelse og gjenopprettingseksperiment

Ta seks 25 mL målekolber, trekk 0.10, 0.20 og 0,30 mL fra kjøttet Shuangrong-prøvevæsken ekstrahert med ultralydmetoden inn i den første 3 målekolber, tilsett samme mengde prøvevæske til de siste 3 målekolber, og tilsett deretter 1,0 ml av standardløsningen av rutin, tilsett 1 ml 50 g/L natriumnitrittløsning til de 6 målekolbene, rist godt , og la stå i 7 minutter; tilsett 1 mL 100 g/L aluminiumnitratløsning, rist godt og la stå i 7 minutter; tilsett 10 mL 40 g/L natriumhydroksidløsning, og rist godt og la stå i 7 minutter; fortynn til merket med 95 prosent etanolløsning, rist godt og la stå i 15 minutter; Blindløsningen av toneren er en referanse, absorbansen A måles ved 503 nm, og konsentrasjonen beregnes fra standardkurven

Tabell 1 Innholdet iflavonoider in Cistanche

Ta seks 25 mL målekolber, trekk 15 mL fra Soxhlet-ekstraksjonsmetoden for striata: puré prøveløsning, og fyll volumet på nytt i en 100 mL målekolbe, og pipetter 0 .40, 0,50 og 0,60 ml fra den. I 3 målekolber, tilsett samme mengde prøveløsning til de siste 3 målekolber, tilsett deretter 1,0 mL standardløsning, tilsett 1 mL 50 g/L natriumnitrittløsning, rist godt og la stå i 7 minutter; Tilsett deretter 1 mL 100 g/L aluminiumnitratløsning, rist godt og la stå i 7 minutter; tilsett deretter 10 mL 40 g/L natriumhydroksidløsning, rist godt og la stå i 7 minutter; Fortynn til merket med 95 prosent etanolløsning, Rist godt, stå i 15 minutter, bruk blindløsningen som referanse, mål absorbansen A ved 503 nm, og beregn konsentrasjonen C fra standardkurven.

1.3.2 Bestemmelse av stabilitetsforsøk

Pipetter 0.2 mL prøveløsning, tilsett 1 mL natriumnitrittløsning med 50 g/L fargereagens, rist godt og la stå i 7 minutter; tilsett 1 mL 100 g/L aluminiumnitratløsning, rist godt og la stå i 7 minutter; tilsett 10 mL 40 g/L natriumhydroksidløsning, og rist godt og la stå i 7 minutter; fortynn til merket med 95 prosent etanolløsning, rist godt og stå i 15 minutter; ta blindløsningen med fremkalleren som referanse, Og deretter målt med et ultrafiolett-synlig spektrofotometer, tiden ble satt til 2 timer, og det ble funnet at absorbansen til prøveløsningen var stabil innen 2 timer og forble i hovedsak uendret.

Tabell 2 Innholdet iflavonoideri Cistanche

1.4 Analyse av antioksidantaktiviteten til flavonoider i Cistanche cistanche, katalytisk kinetisk fluorimetrisk bestemmelse av rensehastigheten til kinesisk urtemedisin på frie hydroksylradikaler

1.4.1 Eksperimentell metode

Tilsett benzosyreløsning i en serie med 25 mL kolorimetriske rør, og tilsett deretter en viss mengde Co? pluss og hydrogenperoksid fortynnes i sin tur med en blandet fosfatløsning med pH =6.5 til et konstant volum på 25 ml, rist godt og plasser i kokende vann Etter å ha stått i badekaret i 45 minutter, vil fluorescensen intensiteten til hver løsning ble målt.

1.4.2 Bestemmelse av rensehastigheten for prøven til hydroksylradikaler

Klargjøring av prøveløsning: Vei nøyaktig 1.000 Og av en prøve med en partikkelstørrelse på 450 μm, og ved romtemperatur, ekstraher ultralyd 3 ganger med 60 mL absolutt etanol, med 20 mL reagens hver gang, med et tidsintervall på 10 min. Kombiner de 3 ekstraksjonsfiltrene og fortynn filtratet med absolutt etanol i en 100 ml målekolbe.

Reagensfremstilling: Vei 7,16 g dinatriumhydrogenfosfat og tilsett 200 mL vann for å oppnå en 0.1 mol/L løsning; vei 2,72 g kaliumdihydrogenfosfat og tilsett 200 mL vann for å oppnå en 0,1 mol/L løsning. Bland de to løsningene og bruk et pH-meter for å tilberede et blandet fosfat med pH=6.5; vei 0,400 0 g benzosyre (AR Shenyang Reagent Factory), løs den opp med en blandet fosfatløsning med pH=9.5, og fortynn til volum med vann WOmL, lagret i mørket for senere bruk; Vei 0,1547 g Ci/ og løs den med] mol/L saltsyre for å fremstille 100 mL 1 mol/L Cu*-løsning. Forbered 30 prosent hydrogenperoksidløsning.

Ta 0,2 ml av prøveløsningen i et 25 ml kolorimetrisk rør, tilsett benzosyre, hydrogenperoksid og Cu-øyne i rekkefølge, fortynn til 25 ml med en blandet fosfatløsning med pH=6. 5, rist godt og mål i henhold til klaringshastighetsformelen. Få prøvens rensehastighet for hydroksylradikaler.

1.4.3 Beregningsresultater

Tabell 3 Beregningsresultater

Konklusjon: Flavonoidene i Cistanche har sterke antioksidantegenskaper.

flavonoider i cistanche har en anti-aldringseffekt

2 Resultater og diskusjon

(1) Bruk av "ultralydmetode" og "Soxhlet-ekstraksjonsmetode" for å trekke ut totalenflavonoideriCistanche deserticola, viser sammenligningen av disse to metodene at ultralydmetoden i stor grad forkorter ekstraksjonstiden og forbedrer ekstraksjonshastigheten til effektive ingredienser. Utnyttelsesgraden sparer dermed råvarer. Tvert imot er Soxhlet-ekstraksjonsmetoden tidkrevende og arbeidskrevende, og ekstraksjonseffekten er ikke god. Derfor ultralyd utvinning av totaltflavonoiderer den beste utvinningsprosessen, som har sterk praktisk betydning.

(2) Den kvalitative analysen av totalflavonoiderved UV-spektroskopi viste at rutin er et meget egnet standardprodukt. Den eksperimentelle beregningen viser at innholdet av totaltflavonoideriCistancheer veldig høy, med høy presisjon, og utvinningsgraden er 96,85 prosent ~ 99,46 prosent, prøven forble stabil innen 2 timer.

(3) Antioksidantanalyse og bestemmelse av totalenflavonoideriCistancheørkenen ble utført ved fluorescensmetoden. Konklusjon: Den beregnede oppklaringsprosenten var 91,5 prosent, noe som indikerer atcistancheselve pastaen har en sterk antioksidanteffekt, som kan rense frie radikaler og hemme lipider. Oksidasjon, etc., er av stor verdi i forskning på antialdring, karsinogenese, betennelse, strålingsvevsiskemi og andre sykdommer innen det medisinske feltet.

Referanser:

[1] Cheng Xiyu, Guo Bin, Ni Wen, Liu Chunchao. Forskningsfremgang avCistanche[J]. Research and Development of Natural Products, 2005, 17 (2): 235-240.

[2] Hou Dongyan, Hui Ruihua, et al. Spektralanalyse av totalflavonoideri kaprifol og bestemmelse av antioksidantaktivitet [J]. Analytical Test, 2004, 23 (11): 52-55.

[3] Zhou Gui, Deng Guanghui, Liang Dawen.'Studie om utvinning avflavonoiderfra hagtornblader ved ultralydmetode[J]. Journal of Southwest Agricultural University, 2005, 27 (5): 605-607.