Etanolisk bukkehornkløverekstrakt: dens molekylære mekanismer mot hudaldring og de forbedrede funksjonene ved nanoinnkapsling 2
Oct 10, 2022
Vær så snill og kontaktoscar.xiao@wecistanche.comfor mer informasjon
2.5. Effekt av LNF og Bukkehornkløverekstrakt på cellelevedyktighet og kollagenproduksjon i humane dermale fibroblastceller
For å undersøke cytotoksisiteten til formulert LNF, ble cellene behandlet med blind-, LNF- og bukkehornkløverekstrakter ved {{0}} ug/ml (dobbelt fortynning) i 24 timer. Cellelevedyktighet ble målt ved å bruke en MTT-analyse. Som vist i figur 6a, sank cellelevedyktigheten i ekstraktbehandlede celler, mens ingen effekt ble observert i blanke og LNF-behandlede celler. Dataene indikerte at LNF viste lavere toksisitet enn ekstrakt. Vi undersøkte videre evnen til LNF på induksjon av kollagenproduksjon i humane dermale fibroblastceller. Celler ble behandlet med 7 ug/mL ekstrakt og 1 {{20}}0 ug/mL LNF (7 ug/mL ekstraktekvivalens), sammen med blanke partikler som kontroll, for 7 og 14 dager. Som vist i figur 6b, for behandling med LNF, ble mengden farget kollagen økt med 30 prosent og 50 prosent ved henholdsvis 7 og 14 dager sammenlignet med ekstraktbehandling. I tillegg, i figur 2a, forbedret den formulerte LNF anti-kollagenaseaktiviteten, ettersom IC5o ble signifikant redusert til 0,21±0,03 mg/ml sammenlignet med bukkehornkløverekstrakt (0,57±0,02mg/ml). Disse resultatene viste at formuleringen av LNF kunne potensere en induksjon av kollagenproduksjon i humane dermale fibroblastceller og øke anti-kollagenaseaktiviteten til bukkehornkløverekstrakt. Det er mulig at nanoformuleringen av bukkehornkløverekstrakt forbedrer styrken betydelig som en aktiv ingrediens i antialdringsprodukter.
2.6. Rollen til formulert LNF på MMP1, MMP9, IL-6 og IL-8 hemming etter UV-eksponering
Vi undersøkte deretter noen mulige mekanismer for LNF på antialdringsaktivitet. UV-eksponering er en av de viktigste regulatorene for aldring av huden, siden det er rapportert å indusere ekspresjonen av visse medlemmer av matrix metalloproteinase (MP)-familien, som forårsaker kollagenkollaps, inkludert MMP1, MMP3 og MMP9 [34,35] . Vi observerte at UV-eksponering var svært giftig for samdyrkede hud-cceller (Figur 7a) og økte produksjonen av MMP1- og MMP9-cytokiner (Figur 7b). I tillegg var behandlingene av bukkehornkløverekstrakt og formulert LNF i stand til å redusere sekresjonene betydelig. av MMP1 og MP9 sammenlignet med kontrollceller etter UV-bestråling. Disse resultatene stemte overens med behandlingen av rutin og resveratrol som en antialdringsmiddelkontroll. Spesielt var reduksjonen av MMP1- og MMP9-uttrykk i LNF-behandlede celler betydelig lavere enn i ekstraktbehandlingen. Derfor kan LNF redusere sekresjonene av MPI og MMP9 ved UV-eksponering, og deretter forhindre fotoindusert hudaldring.
I tillegg kan eksponering av UVR på menneskelig hud også mediere induksjon av betennelse og pro-inflammatorisk cytokinaktivering, slik som TNF- og interleukiner, inkludert IL-1,IL-2, IL{{4} },og IL-8 [36]. Vi undersøkte deretter funksjonen til LNF på hemming av UV-stimulert inflammatorisk cytokinproduksjon, inkludert IL-6 og IL-8. I figur 7c observerte vi at UV-bestråling betydelig forbedret produksjonen av IL{{ 11}} og IL-8 cytokiner i samdyrkede hudceller. En signifikant reduksjon i IL-6- og IL-8-uttrykk ble observert med bukkehornkløverekstraktbehandling sammenlignet med kontrollen. Interessant nok viste behandlingen av bukkehornkløverekstrakt betydelig høyere IL-6- og IL-8-hemminger sammenlignet med rutin, der disse hemmende aktivitetene lignet på resveratrol-behandlede grupper. Spesielt var uttrykkene av IL-6 og IL-8 i LNF-behandlede celler signifikant lavere sammenlignet med bukkehornkløverekstraktgruppen etter UV-eksponering. Sammen indikerte disse resultatene at LNF potensielt kunne hemme UV-mediert IL-6- og IL-8-produksjon, og deretter forhindre fotostimulert hudbetennelse og hudaldring.Som en konsekvens antyder disse resultatene at det etanoliske ekstraktet av bukkehornkløver og dets nano-formulering potensielt kan brukes som aktive ingredienser for å forhindre aldring.
3. Diskusjon
Bukkehornkløverekstrakt har vist seg å ha antioksidant, antiradikal og anti-inflammatorisk aktivitet i flere studier [29,37], selv om dens anti-rynke egenskap fortsatt ikke har blitt utnyttet. Denne forskningen var den første som identifiserte en antialdringsaktivitet av bukkehornkløverekstrakt ved å bruke in vitro kollagenasehemmende analyse. Tidligere studier har antydet bruk av planteekstrakter med anti-kollagenaseaktivitet som en aktiv ingrediens i kosmetiske produkter som drueekstrakt [38], grønn teekstrakt [39] og soppekstrakt [40]. Dessuten er effekten av bukkehornkløverekstrakt på kollagenproduksjon i humane dermale fibroblastceller aldri blitt rapportert. Tamara et al. (2006) har demonstrert effekten av flavonoider på kollagensyntese i humane fibroblaster ved å bruke rutin, som en aktiv forbindelse av bukkehornkløverekstrakt, som bidrar til å øke kollagen [41]. Denne studien av bukkehornkløver viste sin lovende anti-aldringsevne og representerte rutin som en biologisk markør.
Rutin (3),4',5.7-tetrahydroksy-flavon-3-rutinosid) ble brukt i denne studien da det er et flavonolglykosid som er rapportert i flere planter, inkludert Fagopyrum esculentum Moench, Ruta graveolens L, Sophora japonica L., Eucalyptus spp. [37l, og bukkehornkløver[17] Rutin har antioksidant, cytobeskyttende, anti-kreftfremkallende, nevrobeskyttende og kardiobeskyttende aktiviteter, og foreslår dens anvendelse i forebygging av aldring og aldringsrelaterte sykdommer. Resultatene våre viste at det tilberedte ekstraktet viste en høy mengde rutininnhold, som knapt ble funnet eller oppdaget som en komponent av bukkehornkløverekstrakt i andre studier. De fleste andre studier har rapportert trigonellin som en viktig kjemisk bestanddel av bukkehornkløverekstrakt [18,37,38,42-47].
Selv bukkehornkløverekstrakt har en potensiell aktivitet som antialdringsmiddel. Fargen og stabiliteten er fortsatt en utfordring for denne applikasjonen. Nanoinnkapsling har blitt rapportert som en spesifikk teknologi som er i stand til å stabilisere, maskere lukten, forbedre vannløseligheten, kontrollere frigjøringen av biologiske forbindelser [48,49] og forbedre det fysiske utseendet til naturlige produkter. Liponisom har blitt brukt i denne studien på grunn av dets unike egenskaper, som er sammensatt av hydrofile og hydrofobe deler, som kan innkapsle et bredt spekter av stoffer med forskjellige løseligheter [50]. Vi formulerte bukkehornkløverekstrakt innkapslede liposomer (LNF), som er en hybridbærer som omfatter liposomer og niosomeregenskaper. Hybridkomponentene til den utviklede LNF ble bekreftet av smeltetemperaturen ved bruk av DSC, noe som gjenspeiler både de termiske egenskapene til liposomer og niosomer.
cistanche kan anti-aldring
Stratum corneum er et ytre hudlag som fungerer som en effektiv barriere mot skadelige stoffer ved å begrense deres transport over huden. Imidlertid har bruk av nanobærere vist seg å forbedre transdermal levering ved å øke penetrasjonen av medisiner eller stoffer gjennom denne barrieren [51]. For å undersøke styrken til LNF ved transdermal levering, har ex vivo porcin hudpenetrasjon blitt brukt, da dens anatomiske egenskaper stort sett ligner på menneskelig hud, når det gjelder hudtykkelse, follikulær struktur og hårtetthet [52]. Våre resultater viser at permeabiliteten til LNF var større og dypere enn bukkehornkløverekstrakt og rutin, og frigjøringsprofilen til LNF hadde en langsommere frigjøring enn bukkehornkløverekstrakt, noe som tyder på at den formulerte LNF var merkbart overlegen til ekstrakt ved hudpenetrering. I tillegg forbedret den formulerte LNF anti-kollagenaseaktiviteten, ettersom IC-A ble betydelig redusert til 0.205±0.03mg/ml sammenlignet med bukkehornkløver ekstrakt (0,567±0,02 mg/ml). Disse resultatene viste at formuleringen av LNF kunne potensere en induksjon av kollagenproduksjon i humane dermale fibroblastceller og øke anti-kollagenaseaktiviteten til bukkehornkløverekstrakt. Nano-formulering av bukkehornkløverekstrakt bidrar potensielt til å forbedre styrken ved å bruke den som en aktiv ingrediens for å forhindre aldring.
Eksponering for UV-stråling er hovedfaktoren for ytre hudaldring, kjent som for tidlig aldring eller fotoaldring [53.54]. Strålingen forårsaker aktivering av celleoverflatereseptorer av hudkeratinocytter og fibroblaster, noe som fører til en induksjon av dermale ekstracellulære matriseuttrykk, spesielt matrisemetalloproteinasefamilien (MPs). Det er påvist at kronisk eksponering for lave doser UVA forårsaker en oppregulering av mRNA-nivåer av kollagenase-1 (MMP1),stromelysin-1 (MMP3) og gelatinase A (MMP2)[55]. Som en konsekvens oppstår nedbrytningen av hudens kollagenelastiske fibre, samt en stans av ny kollagensyntese. Dette fenomenet påvirker hudens integritet, elastisitet og strukturer, etter deregulering av hudens beskyttende funksjoner, og står for rynkedannelse og tegn på aldring av huden [54,56]. I tillegg medierer eksponering av UVR på menneskelig hud et uttrykk for TNF-alfa, som er en viktig regulator av inflammatorisk kaskade i huden. UV-bestråling initierer også aktivering av både inflammasjon og pro-inflammatoriske cytokinsekresjoner, som interleukin-2 (IL-2) og interleukin-6 (1L-6) [36] . Som et resultat har denne UVR-induserte inflammatoriske responsen en viktig rolle på induksjonen av brent hud med tegn på rødhet, irritasjon og erytem [35.59].
Derfor, for å forhindre årsaken til for tidlig aldring, ville funnet av noen nye aktive midler med disse forebyggende funksjonene være ideelt. Resultatene våre viste at formuleringen av LNF kunne potensere en induksjon av kollagenproduksjon i humane dermale fibroblastceller, kunne redusere sekresjonene av MP1, MP9, IL-6 og IL-8 ved UV-eksponering, og kunne forbedre anti-kollagenase-aktiviteten til bukkehornkløverekstrakt. Derfor kan et etanolisk bukkehornkløverekstrakt og dets nano-formulering være av potensiell bruk som en ny aktiv ingrediens i kosmetiske produkter, og at nanoinnkapsling er i stand til å forbedre funksjonen og aktiviteten til bukkehornkløverekstrakt som et antialdringsmiddel. 4. Materialer og metoder
4.1.Plantematerialer og kjemiske reagenser
Fenugreek seed powder was received from Herbal Acharn'sHome Co.,Ltd. (Bangkok, Thailand). Rutin trihydrate (>98 prosent renhet), tricinbuffer, kollagenase fra clostridium histolyticum og FALGPA (N-[3(2-furyl) akryl)-Leu-Gly-Pro-Ala), direkte rød 80, pikrinsyre og dimetylsulfoksid ble kjøpt fra Sigma-Aldrich (St.Louis, MO, USA) Acetonitril, etylacetat, absolutt etanol, maursyre, natriumdehydratfosfat, dinatriumhydrogenfosfat, saltsyre og natriumhydroksid ble kjøpt fra Carlo Erba (Emmendingen, Tyskland). Etanol av kommersiell kvalitet ble kjøpt fra Italmar Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Kolesterol ble kjøpt fra Cosmeplus Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Propylenglykol og oppløseliggjørende blanding ble kjøpt fra S.Tong Chemicals Co,Ltd. (Nonthaburi, Thailand). Sorbitanoleat ble kjøpt fra Croda Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Fosfolipid (Phospholipon 90G) ble kjøpt fra Cargill Siam Ltd. (Bangkok, Thailand). Tokoferolacetat ble kjøpt fra Namsiang Co, Ltd. (Bangkok, Thailand). Konserveringsmidlet ble kjøpt fra Forecus Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Paraformaldehyd ble kjøpt fra Himadia Laboratories (Mumbai, India) og 3-(4,5-dimetyltiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromid ble kjøpt fra Calbiochem (Burlington, MA, USA).
4.2.Utvinning
Bukkehornkløverfrøpulver (500 g) ble maserert med 95 prosent etanol (1:5) i 3 dager. Ekstraksjonen ble gjentatt tre ganger (3×2500 ml). Hele ekstraktløsningen ble filtrert, med etanol fordampet under 100 mbar ved 40 grader ved bruk av en rotasjonsfordamper (Heidolph, Schwabach, Tyskland). Det oppnådde ekstraktet var den oljeaktige gulbrune pastaen med 5 prosent utbytte (vekt/vekt) og den ble holdt ved 4 grader inntil bruk.
4.3. UHPLC-validering og identifisering av rutin i bukkehornkløverekstrakt
Rutintrihydrat, som standardmarkør, ble brukt til å analysere bukkehornkløverekstrakt. UHPLC-metoden ble utviklet og validert når det gjelder linearitet, nøyaktighet, presisjon og sensitivitet[31,32] av et Shimadzu LC-30 AD UHPLC-system som består av en diodearray-detektor SPD-M20A og en autosampler SIL-30AC. Metoden brukte en SUPLECO Titan C18-kolonne (5 cm ×2,1 mm, 1,9 um, SUPLECO, Burlington, VT, USA) ved 30 grader og oppdaget en bølgelengde på 26{{ 19}} nm. Den mobile fasen ble tilpasset fra Kenny et al. [45]. Kort fortalt, 0.05 prosent v/v maursyreløsning i ultrarent vann(A) og 0.05 prosent v/v maursyre i acetonitril (B) ble fremstilt med en strømning på 0,25 ml/min i gradientmodus: startbetingelsen var 10 prosent B i 1,0 min, økt til 75 prosent B i 3,5 min, redusert til 10 prosent B i 0,75 min, og holdt i 0,25 min.
4.4. Kollagenaseanalyse
En kollagenaseanalyse ble utført for å bestemme anti-kollagenaseaktivitet [60]. Blandingsløsningen, inneholdende 25 μL 50 mM tricinbufferløsning (pH7,5), 25 μL 2 enheter/ml kollagenase (clostridium histolyticum type IA), og 25 μL av prøven, ble forberedt og inkubert ved romtemperatur i 15 min. For å starte reaksjonen ble 10 uL av det syntetiske substratet og 2 mM N-[3-(2-Furyl) akryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala(FALGPA) tilsatt i blandingsløsningen og inkubert i 20 min. Endringen i absorbansen til hver supernatant ble målt ved 340 nm (Synergy H1 mikroplateleser) og ICso-verdiene ble beregnet ved å plotte en lineær regresjonskurve som viser prøvekonsentrasjoner på x-aksen og prosentvis hemming på y-aksen. Den prosentvise inhiberingen ble beregnet ved å bruke følgende ligning:
4.5.Cellekultur
Humane dermale fibroblastceller ble kjøpt fra American Type Culture Collection: ATCC (PCS-201-010) og immortaliserte humane keratinocytter (HaCaT) ble kjøpt fra Cell Lines Service, Tyskland (kat.nr. 300493). Celler ble dyrket i Dulbeccos modifiserte Eagle's media (DMEM) (Gibco, Storbritannia) supplert med 10 prosent FBS (Gibco, Storbritannia), 1 prosent penicillin (100 enheter/mL) og streptomycin (100 ug/ml) (Gibco, St. Louis) , MO, USA). Celler ble inkubert ved 37 grader under et miljø med 5 prosent karbondioksid.
4.6. Kollageninnhold og Picrosirius rødfarging
Humane dermale fibroblastceller ble sådd ved 2,5 × 1 04 celler/brønn i 48-brønners plater og inkubert i 24 timer. Cellene ble deretter behandlet med ulike konsentrasjoner av liponio-som uten ekstrakter (angitt som blank), liponiosom-innkapslende bukkehornkløverekstrakt (LNF) og bukkehornkløverekstrakt i 7 og 14 dager, med 005 prosent DMSO brukt som kjøretøykontroll. Media ble skiftet annenhver dag. Cellene ble deretter vasket med PBS og fiksert med 100 ul 4 prosent PFA i 10 minutter. Celler ble vasket med PBS (to ganger) og farget med 100 ul av 0,1 prosent direkte rød 80-løsninger i 10 minutter. Etter farging ble 0,01 NHCl i 70% etanol tilsatt for å vaske overskuddet av fargestoff. Farget kollagen ble oppløst med 10 uL 0,5 N NaOH og absorbansen ble målt ved 540 nm ved bruk av en mikroplateleser (Synergy H1 mikroplateleser). Prosentandelen av kollageninnhold ble beregnet ved å bruke følgende ligning:
4.7. Cellelevedyktighetsanalyse
Humane dermale fibroblastceller ble sådd med 2 x 104 celler/brønn i 96-brønners plater og inkubert i 24 timer. Etter inkubering ble forskjellige konsentrasjoner (0-100 ug/mL) av liposomene uten ekstrakter (blank), LNF og bukkehornkløverekstrakt tilsatt og dyrket i 24 timer. Deretter ble 100 μL MTT (1 mg/mL) tilsatt i hver brønn og inkubert i 4 timer. DMSO ble tilsatt for å oppløse formazanproduktet. Absorbansen ble målt ved 570 nm ved bruk av en mikroplateleser (Synergy Hl mikroplateleser). Prosentandelen av cellelevedyktighet ble beregnet ved å bruke følgende ligning:
4.8.Liponiosomformulering
Pre-emulgering etter homogenisering ble anvendt for liposomformulering. En blanding av fosfolipid og emulgator ble brukt for å danne et sfærisk lipid-dobbeltlag og kolesterol ble brukt for å øke stivheten til partikler [15]. Kort fortalt ble soyabønnelecitin, kolesterol og emulgator dispergert i propylenglykol og oppvarmet til 70-80 grad (oljefase), som vist i tabell 2. Bukkehornkløverekstrakt ble oppløst i propylenglykol/vann (vannfase) og oppvarmet i samme vannbad. Den vandige løsningen av ekstraktet ble tilsatt kontinuerlig til lipidkomponenter og homogenisert ved 8000-100 rpm i 5-10 min ved bruk av høyhastighets omrøring (Heidolph Silent Crusher M, Kenilworth, N, USA). Blandingen ble avkjølt til 50 grader og tokoferolacetat ble tilsatt og homogenisert i ytterligere 10 min for å oppnå LNF. Morfologien til LNF ble observert ved transmisjonselektronmikroskopi (TEM, JEOL, Peabody, MA, USA), med den hydrodynamiske størrelsen, polydispersitetsindeksen Pdl og zetapotensialet undersøkt ved bruk av dynamisk lysspredning (DLS, Nanosizer ZS, Malvern Instruments, Worcestershire, Storbritannia). Bekreftelsen av liposomsmeltende atferd ble undersøkt ved bruk av differensiell skanningskalorimetri (DSC,Mettler Toledo DSC1). Viskositeten til prøven ble målt med et digitalt Brookfield viskosimeter (modell HBDV-IIIU CP). Kort fortalt ble 0,5 g prøver brukt, og viskositeten ble undersøkt ved bruk av en CP-40-spindel, med den kontrollerte hastigheten ved 0,5 rpm i 20 minutter ved omgivelsestemperatur.
For å evaluere stabiliteten til LNF ble partiklene holdt ved 4 grader, 25 grader og 40 grader i 3 måneder, og endringene i partikkelstørrelse og morfologi ble undersøkt.
Liposom- og støyinnkapslingsbukkehornekstrakt (LF og NF) ble formulert ved å bruke en lignende metode som LNF. LF ble fremstilt uten tilsetning av sorbitanoleat i oljefasen, mens niosom (NF) ble fremstilt uten tilsetning av fosfolipidkomponenten. Deres fysisk-kjemiske karakteriseringer ble rapportert i tilleggstabell S1.
4.9. Prosentandeler av innkapslingseffektivitet og bioaktiv belastning
Innkapslingseffektivitet (prosent EE) og bioaktiv belastning (prosent BL) av LNF ble beregnet ved å bestemme mengden innkapslet medikament ved bruk av en ultrafiltreringsteknikk. Mengden rutin ble brukt som standard markør. Etter at 20 mg/ml LNF var oppløst i DI-vann, ble den sentrifugert ved 80,000 rpm i 4 timer. Supernatanten ble samlet og deretter det uinnkapslede rutinet ble evaluert ved bruk av en ultra-høyytelses væskekromatografiteknikk (UHPLC) [61]. Prosentandelen EE og prosent BL ble beregnet ved hjelp av følgende ligninger:
4.10.Franz diffusjonscelle
En in vitro permeabel studie av 7mg/mL bukkehornkløverekstrakt og LNF ble undersøkt i et Franz diffusjonscellesystem [62]. Den syntetiske membranen (Biomax 500 kDa ultrafiltreringsskive, Merck, MA, USA) ble plassert mellom en donor og et reseptorrom. Fosfatbuffer saltvann (PBS) med en pH på 5,5 ble omrørt ved 50 rpm (37 grader) og brukt som et reseptormedium. Bukkehornkløverekstrakt og LNF ble påført membranen i donorcellehetten. Prøver ble permeert gjennom membranen og samlet fra reseptorrommet ved 0,2,4,6,8,12 og 24 timer. Den kumulative permeerte rutinen ble evaluert og beregnet ved UHPLC-teknikken.
4.11. Permeabilisering av svinehud
Gjennomtrengningen av LNF gjennom svinehud ble visualisert ved bildedannende massemikroskop (IMS, SHIMADZU, modell: iMScopoe TRIO, Kyoto, Japan). Svinehuden ble kuttet i 1,5 × 1,5 cm2. Rutin, bukkehornkløverekstrakt og LNF ble påført den kuttede svinehuden og lagret ved 4 grader i 24 timer. Prøvene ble kuttet ved hjelp av en kryostat, plassert på et indiumtinnoksidbelagt glassglass og sprayet med en 9-aminoakridinmatrisesubstans (9-AA). Prøvene ble lagret ved-20 grad før analysen. Et overlegg av de optiske bildene av rutin ble analysert ved 609,15 m/z.
4.12. Karakterisering av differensielle skanningskalorimetre (DSC).
Differensiell skanningkalorimetri (DSC)-analyse ble utført for å bestemme smeltepunktet til LNF ved bruk av et differensialskanningkalorimeter (DSC,Mettler Toledo DSC1)[63]. Etter nøyaktig veiing ble prøvene plassert i aluminiumspanner og forseglet med lokk. I skanningsprosessen ble en oppvarmingshastighet på 10 grader påført i temperaturområdet fra 25 til 350 grader under en nitrogengass spylt med 40 ml/min. 4.13.Konstruksjon av menneskelige samdyrkede hudceller
Humane dermale fibroblastceller ble sådd ved 8,5 × 104 celler/brønn i 12-brønners kulturinnsatser (Corning, Corning, NY, USA) og dyrket i 24 timer. Det andre og tredje laget av dermal fibroblast ble gjentatte ganger tilsatt det første laget på påfølgende dager. Etter 24 timer med tilsetning av det tredje laget, ble HaCaT deretter sådd ved 8,5 × 10 graders celler/brønn på de dannede fibroblastlagene og dyrket i ytterligere 24 timer før eksperimentet.
4.14. Undersøkelse av cellelevedyktighet og MMP-sekresjon etter UV-eksponering i samdyrkede hudceller
Humane samdyrkede hudceller ble forbehandlet med 7 ug/mL ekstrakt og 100 ug/mL LNF (7 ug/mL ekstraktekvivalens), sammen med 100 ug/ml blank og 10 ug/ml resveratrol som en positiv kontroll , i 24 timer. Samdyrkede hudceller ble deretter vasket to ganger med PBS og utsatt for 5J/cm2 UVA og 30mJ/cm2 UVB-bestråling (Solar Simulators, NY, USA). Etter UV-bestråling ble co-dyrkede hudceller videre inkubert med testede prøver i 24 timer. Supernatanten ble deretter samlet for MMP1- og MP9-kvantifiseringer. Nivåene av UV-indusert MMP1- og MMP9-sekresjoner i humane samdyrkede hudceller ble målt ved hjelp av enzymkoblede immunosorbentanalysesett (MMP1: ab215083 og MMP9: ab100610, abcam, Cambridge, Storbritannia) i henhold til produksjonsprotokoller.
Levedyktigheten til humane samdyrkede hudceller etter UV-eksponering ble evaluert ved å bruke et CellTiter-Glo luminescerende cellelevedyktighetsanalysesett (Promega, Madison, WI, USA). Etter 24 timers UV-eksponering ble co-dyrkede hudceller vasket to ganger med PBS og 100 μL Glo Lysis Buffer (Promega, Madison, WI, USA) ble tilsatt i hver brønn. Etter inkubering i 10 minutter ble 50 ul CellTiter-Glo-reagens tilsatt og inkubert ved romtemperatur i 10 minutter. Det luminescerende signalet ble deretter målt ved å bruke et mikroplate-luminometer (SpectraMax L, Molecular Devices).
4.15.Statistisk analyse
Resultatene ble representert som gjennomsnitt ± standardavvik (SD). Signifikante forskjeller ble analysert ved en Students-test eller enveis eller toveis variansanalyse (ANOVA) etterfulgt av Tukeys post hoc-test (GraphPad Prism 9), med p-verdier<0.05 considered="" statistically="">
5. Konklusjoner
Samlet ga denne forskningen to alternative forslag. For det første ble rutin ikke bare observert i form av beskyttelse mot ultrafiolett stråling og antioksidativ substans, men ble også brukt som en standardmarkør for kromatogramfingeravtrykk og en nøkkelreferanse for antialdringsaktivitet fra ekstrakt av bukkehornkløverfrø. For det andre ble molekylære mekanismer som ligger til grunn for etanolisk ekstrakt mot aldring demonstrert. Ekstraktet viste nye biologiske egenskaper, som anti-kollagenase-aktivitet, induserer kollagenproduksjon og inhiberer kollagennedbrytning, som refererer til et potensielt alternativ naturlig anti-aldringsmiddel for antialdringsprodukter. Innkapslingsteknikker kan brukes for å beskytte de bioaktive forbindelsene og kjemiske og fysiske nedbrytningsprosesser, og forlenge deres biologiske aktivitet frem til bruk. Denne teknikken reduserer også toksisiteten til urteekstrakter. I denne studien er formulerte liposomer svært stabile og har en forlenget frigjøring. Nano-formulering kan også øke styrken til bukkehornkløverekstrakt på antialdringsegenskaper. På grunnlag av denne studien foreslår vi at LNF potensielt kan brukes som en lovende aktiv ingrediens i forebygging av hudaldring.
Denne artikkelen er hentet fra Pharmaceuticals 2022, 15, 254. https://doi.org/10.3390/ph15020254 https://www.mdpi.com/journal/pharmaceuticals
